專利名稱：基于炮制原理的梔子飲片個性特色的質(zhì)量評價方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及中藥桅子臨床常用飲片的質(zhì)量評價方法，該方法是基于桅子炒制原理研究而確定。
背景技術(shù)：
飲片入藥，生熟異治是中藥的鮮明特色和一大優(yōu)勢。中藥飲片質(zhì)量的優(yōu)劣，直接關(guān)系到中醫(yī)的臨床療效。因此，以現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)方法探索建立科學(xué)合理、客觀實用、符合中藥飲片特點的質(zhì)量評價方法是穩(wěn)定飲片質(zhì)量和確保飲片臨床療效的關(guān)鍵問題。中藥飲片大多經(jīng)過炒、蒸、煮等不同炮制方法而來，飲片炮制前后的藥性和臨床功效發(fā)生了變化，相應(yīng)地其生、制飲片的質(zhì)量評價內(nèi)容、方法也應(yīng)有不同。但由于飲片炮制原理基礎(chǔ)研究薄弱，多數(shù)飲片的質(zhì)量僅靠外觀如色、形、味等或一、二個成分的含量來判斷，對于同一個來源不同飲片品種缺乏有針對性的、科學(xué)合理的的質(zhì)量評判標(biāo)準(zhǔn)。因此在基本揭示飲片炮制原理的基礎(chǔ)上所制定的具有飲片個性特色的質(zhì)量評價方法更具有科學(xué)性和實用價值。桅子在臨床上常用的飲片有生桅子、炒桅子、焦桅子和桅子炭等，桅子生品苦寒之性甚強，易傷中氣；炒焦后苦寒之性得以緩和，且增加止血作用，達到?jīng)鲅寡康?。桅子的主要藥效成分為以京尼平?Geniposide)為代表的環(huán)烯醚萜類和以藏紅花素(藏紅花糖苷-1，Crocin 1)為代表的二萜色素類成分。桅子在炮制過程中上述2類成分在成分組成和量比關(guān)系上發(fā)生了明顯變化，尤以二帖色素類成分變化顯著?！吨袊幍洹?2005年版一部)桅子項下僅規(guī)定了桅子藥材中桅子苷的含量標(biāo)準(zhǔn)， 而收載的炒桅子、焦桅子等缺乏現(xiàn)代科學(xué)、專屬的質(zhì)量評價方法，不能有效控制飲片的質(zhì)量，影響了和制約了桅子不同飲片的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對桅子4種臨床常用飲片質(zhì)控方法的不健全，建立了將傳統(tǒng)經(jīng)驗鑒別與“多有效成分定量、指紋圖譜定性、結(jié)合與其主治、功能相關(guān)的藥效學(xué)研究”的現(xiàn)代科學(xué)方法相結(jié)合的飲片質(zhì)量評價模式，提供了一套針對桅子不同飲片的具有個性特色的質(zhì)量評價方法。該方法利用化學(xué)、色譜分析和藥效比較等方法，在初步揭示桅子炮制原理研究的基礎(chǔ)上，首次發(fā)現(xiàn)二萜色素類成分在桅子炮制過程中發(fā)生了明顯變化，并呈現(xiàn)出一定的規(guī)律性。以HPLC指紋圖譜和2類(環(huán)烯醚萜類、二萜色素類)共6個成分的不同量比關(guān)系為評價內(nèi)容來確定桅子不同飲片的個性特色的質(zhì)量評價方法。該發(fā)明在豐富、完善和區(qū)分桅子不同飲片質(zhì)量評價方法的同時，為桅子飲片的規(guī)范化生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，同時對于生、熟飲片制定具有個性特色的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供示范。為了達到本發(fā)明的目的，本方法采用溶劑提取、色譜分離等方法從桅子中分離、鑒定和純化環(huán)烯醚萜及二萜色素類成分，以HPLC指紋圖譜進行比較的同時，結(jié)合藥效學(xué)研究，建立HPLC法含量測定方法，通過多批次測定制定含量標(biāo)準(zhǔn)。綜合以上實驗研究建立桅子各飲片的專屬、特色質(zhì)量評價方法。本發(fā)明主要包括如下步驟1、桅子藥材應(yīng)至少為3個道地或主產(chǎn)區(qū)共10個批次的藥材樣品，藥材基源為茜草科植物桅子Gardeniajasminoides Ellis的干燥成熟果實，2、桅子以乙醇滲漉提取，滲漉液減壓回收乙醇至無乙醇味，經(jīng)過大孔吸附樹脂和反復(fù)柱層析分離，以NMR等方法鑒定化合物結(jié)構(gòu)，至少應(yīng)累積和純化2個環(huán)烯醚萜苷及4個二萜色素類成分，化合物純度符合相關(guān)規(guī)定，可供定性、定量分析及其藥效學(xué)實驗研究用。3、桅子不同飲片制備應(yīng)在有豐富炮制經(jīng)驗的一線相關(guān)技術(shù)人員的指導(dǎo)下，按照 《中國藥典》或《全國中藥炮制規(guī)范》相關(guān)項下的炮制方法，將果實整粒炮制也可碾碎后制備出桅子不同飲片，桅子不同飲片包括來源于桅子的所有飲片。4、將桅子樣品以大孔吸附樹脂法至少分30^^50%和95%等3個部位建立桅子不同飲片的HPLC指紋圖譜分析方法；Kromasil Cw色譜柱，流動相分別為甲醇-水，甲醇-水以及甲醇-乙腈-1%甲酸梯度洗脫，檢測波長至少分別為238nm，440nm，440nm。至少通過2 類成分的對照，對不同部位圖譜進行歸屬和比較，確定不同部位的成分分布情況，以中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版Q004)處理軟件得到的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜應(yīng)用于各飲片的定性鑒別。5、建立以2個HPLC色譜條件進行二萜色素和環(huán)烯醚萜苷等兩類至少共6個成分的含量測定方法。Kromasil C18色譜柱，流動相分別為甲醇-乙腈-1 %甲酸梯度洗脫和甲醇-水(12 88)等度洗脫，檢測波長分別為440nm，238nm。通過最少10批次測定確定含量標(biāo)準(zhǔn)。可根據(jù)各飲片中不同主要成分的含量為依據(jù)，進行其炒制工藝優(yōu)化及不同飲片的質(zhì)量評價。6、加熱炮制和HPLC分析實驗證明了桅子色素類成分在炒制過程中的變化規(guī)律， 隨著受熱強度的升高，藏紅花酸糖苷-1 (Crocin 1)逐步向藏紅花酸糖苷_2 (Crocin 2)、藏紅花酸糖苷-3 (Crocin 3)和藏紅花酸(Crocetin)轉(zhuǎn)變。7、藥效學(xué)實驗研究表明=Crocetin的止血作用強于Crocin 1。藥代動力學(xué)研究表明，口服藏紅花酸比藏紅花糖苷-1吸收好，且止血作用強于藏紅花酸糖苷-1。藏紅花酸和藏紅花糖苷-1對總膽紅素有降低作用(P < 0. 05)，而且藏紅花酸的作用較強于藏紅花糖苷-1 (P < 0. 05)。此結(jié)果與化學(xué)成分研究結(jié)果以及與桅子不同飲片的臨床功效相一致。8、通過以上實驗建立桅子各飲片的專屬、特色質(zhì)量評價方法，即桅子飲片質(zhì)量應(yīng)同時用環(huán)烯醚萜苷和二萜色素類成分的指紋圖譜以及代表化合物的含量和總量來進行評價。桅子4種飲片3個部位的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜有明顯差異，可從色譜峰個數(shù)及色譜峰面積直觀鑒別。桅子4種30%部位飲片生品、炒黃品、炒焦品的HPLC圖譜整體圖貌一致，均能檢出 10，10，9個色譜峰，且京尼平苷和京尼平龍膽雙糖苷的峰面積差異不大，炒炭品只檢出6個色譜峰，且色譜峰面積下降較大。桅子4種飲片50%部位生品、炒黃品、炒焦品的HPLC圖譜差異不大，均能檢出9， 9，8個色譜峰，炒焦品與生品相比，Crocin 1、Crocin 2、Crocin 3以及Crocetin色譜峰面積略有降低，但炒炭品中色譜峰個數(shù)和色譜峰面積均大幅減少，僅能檢出Crocetin色譜峰。桅子4種飲片95%部位生品、炒黃品的HPLC圖譜差異較小，均能檢出18，20個色譜峰，炒焦品可檢出25個色譜峰，與生品相比，保留時間15min以前的色譜峰消失殆盡，但 Crocetin以及19-25號色譜峰面積較生品增加明顯；炒炭品僅能檢出Crocetin等2個色譜峰，峰面積高于生品、炒黃品但大大低于炒焦品。同時桅子各飲片以6種不同主成分組成及其含量測定進行質(zhì)量評價桅子生品、炒黃品測定5個成分(3個色素苷和2個環(huán)稀醚萜苷)含量，炒焦品測定4個成分(1個色素苷、1個色素苷元和2個環(huán)稀醚萜苷)含量，炒炭品測定3個成分(1 個色素苷元和2個環(huán)稀醚萜苷)含量，桅子各飲片同時還制定了環(huán)烯醚萜苷總量和二萜色素總量標(biāo)準(zhǔn)，詳見表1。表1桅子不同飲片的含量標(biāo)準(zhǔn)(％ )
權(quán)利要求
1.一種用于桅子不同飲片的質(zhì)量評價方法，其特征在于在初步闡明桅子炮制原理的基礎(chǔ)上，利用HPLC指紋圖譜和多指標(biāo)定量以及藥效研究綜合評價桅子飲片的質(zhì)量，針對桅子不同飲片制定了具有個性特色的、專屬性的質(zhì)量評價方法。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述，桅子飲片可以為來源于桅子的所有飲片。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述，HPLC指紋圖譜至少分3個部位進行，可以是30%、50%以及 95%部位，也可以采用其它不同比例部位，但各部位能明確區(qū)分桅子不同飲片。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述，質(zhì)控指標(biāo)為從桅子中提取分離得到的2個環(huán)烯醚萜和4個二萜色素類成分，不僅限于此6個成分，純度達到含量測定要求，該2類成分可任意組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述，質(zhì)控指標(biāo)可以是環(huán)烯醚萜和和二萜色素類成分的同系物，或從桅子中分離得到的其它能達到含量測定的成分。
6.根據(jù)權(quán)利要求4和權(quán)利要求5所述，質(zhì)控指標(biāo)至少為環(huán)烯醚萜和二萜色素兩類成分， 也可以與其它成分任意組合綜合評價桅子飲片質(zhì)量。
7.根據(jù)權(quán)利要求1和權(quán)利要求6所述，該評價方法中不同的成分指標(biāo)及其含量標(biāo)準(zhǔn)可用于桅子飲片生產(chǎn)工藝控制指標(biāo)，或桅子藥材的資源、種植、育苗、采收加工、鑒定、桅子提取物以及含桅子復(fù)方制劑的原料、中間體以及成品的質(zhì)量控制。
全文摘要
本發(fā)明提供一種基于炮制原理的梔子飲片個性特色的質(zhì)量評價方法，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，該方法是在初步揭示梔子炮制原理的基礎(chǔ)上，以梔子炮制過程中變化明顯的二萜色素類成分以及環(huán)烯醚萜苷的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜以及代表化合物的含量同時來進行梔子不同飲片的質(zhì)量評價，該發(fā)明在豐富、完善和區(qū)分梔子不同飲片質(zhì)量評價方法的同時，為梔子飲片的規(guī)范化生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供依據(jù)，對于生、制飲片制定具有個性特色的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供示范，同時還可用于與梔子藥材相關(guān)的資源、種植、鑒定、制劑、藥效等方面的質(zhì)量控制和評價。
文檔編號A61K36/744GK102335260SQ201010227070
公開日2012年2月1日 申請日期2010年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月15日
發(fā)明者張村, 李麗, 李文, 肖永慶, 陳紅 申請人:中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所