一種用于抑制瘢痕促進(jìn)傷口快速愈合敷料組合物及應(yīng)用的制作方法

專利名稱：一種用于抑制瘢痕促進(jìn)傷口快速愈合敷料組合物及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥外科用敷料技術(shù)領(lǐng)域，涉及含有大分子有機(jī)化合物，具體涉及含 有多聚糖及中藥三七的外用敷料及其應(yīng)用方法。
背景技術(shù)：
皮膚是人體的重要器官，具有屏障保護(hù)、吸收與代謝、分泌與排泄、體溫調(diào)節(jié)、免疫 等各種功能。由于創(chuàng)傷、擦傷、皮膚潰爛和燒傷等原因，可能導(dǎo)致皮膚的大范圍傷害，并有可 能導(dǎo)致并發(fā)癥，危及人類生命。凡是涉及到真皮損傷的傷口，最終形成病理性瘢痕愈合是其 必然的結(jié)果。過度纖維化的瘢痕難以被機(jī)體吸收，給創(chuàng)傷后的功能恢復(fù)和重建帶來很大的 障礙。在傷口愈合過程分為四期(1)組織液滲出期由膠原纖維細(xì)胞分泌膠原蛋白填充傷 口，其中I型膠元蛋白為形成瘢痕的主要膠原。(2)炎癥期(清創(chuàng)期)發(fā)生在24-48小時(shí)， 并伴隨細(xì)菌感染，此時(shí)主要有免疫細(xì)胞清除受損組織和微生物。(3)增殖分化期首先是表 皮干細(xì)胞分化表皮，真皮干細(xì)胞分化表皮組織，成纖維細(xì)胞，以及毛發(fā)、汗腺和皮脂腺等皮 膚附屬器，造血干細(xì)胞中的內(nèi)皮祖細(xì)胞分化新生血管、淋巴管和神經(jīng)。(4)組織重朔過度 纖維化的瘢痕難以被機(jī)體吸收，造成血管以及毛發(fā)等皮膚附屬器的重建發(fā)生嚴(yán)重障礙，形 成終身病理性瘢痕。以往對(duì)于增生性瘢痕還沒很好的治療方法，還是以預(yù)防發(fā)生為主要手 段。如何有效地促進(jìn)傷口快速無瘢痕愈合一直是醫(yī)藥界不懈探索的領(lǐng)域。通常采用敷料對(duì)傷口進(jìn)行保護(hù)，防止傷口的感染和脫水。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，應(yīng)盡可能 的為傷口創(chuàng)造一個(gè)干燥的環(huán)境，減少感染機(jī)會(huì)，有利于傷口的愈合。但是，隨著傷口敷料研 究的進(jìn)展，濕潤的無感染的傷口愈合環(huán)境已被廣泛接受為最佳的愈合環(huán)境，對(duì)連續(xù)的組織 修復(fù)過程是最有利的。[Wound Repair andRegeneration，2009，17 :505 ;2010，31 :83]在 這種“濕潤傷口愈合”理論的指導(dǎo)下，隨著材料學(xué)及工業(yè)學(xué)的進(jìn)步，傷口敷料也發(fā)生了革命 性的變化。但是，目前市售的醫(yī)用傷口敷料大多功能單一，常需要配合化學(xué)抗菌藥物使用， 易導(dǎo)致傷口組織細(xì)胞進(jìn)一步損傷，引起組織液大量滲出，發(fā)炎，最終形成病理性瘢痕愈合 [Journal of pharmaceutical science，2008，97 :2892]。理想的功能性醫(yī)用傷口敷料應(yīng)具 有(1)迅速止血；(2)防止細(xì)菌感染；(3)減少組織液滲出和炎癥；(4)加速愈合；(5)良好 的生物相容性；(6)減輕瘢痕。[Acta DermatovenerolAlpPanonica Adriat，2006，15 :5]。傷口的愈合是多種細(xì)胞參與對(duì)多種組織進(jìn)行修復(fù)的一個(gè)復(fù)雜工程，涉及到多種細(xì) 胞的增生、移動(dòng)、分化等。干細(xì)胞作為具有多分化潛能的細(xì)胞，對(duì)組織修復(fù)具有重要意義。 當(dāng)組織受到創(chuàng)傷時(shí)，受傷細(xì)胞開始分泌的生長刺激因子，釋放到外周血中刺激骨髓分化造 血干細(xì)胞進(jìn)入血液中，這些生長刺激因子造血干細(xì)胞隨著血液的運(yùn)行，被引導(dǎo)“歸巢”到傷 口部位，再與組織間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合，開始增殖和分化成所需的組織。例如在傷口組織修 復(fù)中造血干細(xì)胞首先分化為淋巴細(xì)胞和吞噬細(xì)胞等清除受傷組織細(xì)胞；皮膚表皮干細(xì)胞 分化為表皮組織；造血干細(xì)胞分化為血管內(nèi)皮祖細(xì)胞，再繼續(xù)分化為新生血管和淋巴管和 神經(jīng)；真皮干細(xì)胞負(fù)責(zé)分化表皮組織，成纖維細(xì)胞，以及毛發(fā)，汗腺和皮脂腺等皮膚附屬器。 干細(xì)胞自身增殖與分化的速度以及調(diào)控并不能夠滿足快速修復(fù)創(chuàng)傷組織需要。因此，如何加速這些干細(xì)胞增殖和分化以及調(diào)控是加速組織修復(fù)與良好重塑的關(guān)鍵。[Cell，2000， 100 157,168 ；The new Englandjournal ofmedicine, 2003, 349 570 ；Wound Repair and Regeneration, 2007,15 18]。三七為中國云南特有的五加科植物Panax notoginseng (Burk. ) F. H. CSen的 根。具有消腫止痛，活血化淤，加速傷口愈合作用。用于治療跌打損傷，各種傷口，久不 愈合，以及燒傷等。近年來對(duì)三七藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)研究結(jié)果表明三七總皂苷(Panax notoginosides,簡稱PNS，下同)為主要活性成分(主要為人參皂苷Rgl和人參皂苷Rbl)。 PNS具有促進(jìn)皮膚干細(xì)胞和造血干細(xì)胞的增殖與誘導(dǎo)定向分化效應(yīng)，抑制增生性瘢痕成纖 維細(xì)胞增殖，可有效地防止過度增殖產(chǎn)生的病理性瘢痕。PNS對(duì)可通過上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞生 長因子等細(xì)胞因子的表達(dá)，促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖與分化，形成新生血管，淋巴管和神經(jīng)。 此外，三七還具有良好的鎮(zhèn)痛作用，是一種阿片樣受體激動(dòng)劑，但不具有成癮的不良反應(yīng)。 [中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2003，10 135 ；中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2003，11 120 ；第三軍醫(yī) 大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，25 1562 ；中國實(shí)用美容整形外科雜志，2005，16 :243]。殼聚糖(Chitosan，簡稱CS，下同)是由天然甲殼素水解產(chǎn)物天然氨基葡萄糖組成 的直鏈高分子聚合物，是一種具有良好的生物相溶性和生物可降解性的堿性糖胺聚糖。CS 具有選擇性促進(jìn)表皮細(xì)胞的生長，加快組織修復(fù)，抑制成纖維細(xì)胞的過度增殖，減少粘連和 瘢痕形成。由于CS在傷口處可抑制I型瘢痕膠原纖維蛋白的產(chǎn)生，加速III彈性膠原蛋 白的分泌從而促進(jìn)了肉芽組織和上皮組織的形成，減少傷口的過度收縮，在傷口愈合過程 中具有調(diào)控正常愈合與過度愈合之間的平衡的作用，從而起到減小疤痕的作用。CS還具有 良好的止血，廣譜抑菌，消炎，對(duì)傷口疼痛有很好的舒緩作用，減少組織液滲出，預(yù)防組織粘 連和術(shù)后感染，促進(jìn)組織修復(fù)，無毒，可降解，已被由于制造可降解的手術(shù)縫合線，也常用的 功能性傷口敷料的原料。羧甲基殼聚糖(Carboxymethyl CSitosan，簡稱CMCS，下同)為 CS經(jīng)過羧甲基化改性后的一種水溶性酸性糖胺聚糖，具有良好保濕性，透氣性，柔韌性，無 毒，可降解，可防止組織粘連，促進(jìn)傷口愈合和減少疤痕的優(yōu)異性能。[第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)， 1999，20 962 ；中國修復(fù)重建外科雜志，1993，7 :244 ；中國修復(fù)重建外科雜志，1994，8 81 ； 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，15 452 ；Pharmacy&Pharmaceutical Sciences, 2000, 3，303 ； J FoodBioteCSnol,1998,61,1124 ；Food Prot.，1999，62 239 ；Applied Biomaterials, 2004, 69 216 ；Science, 1992,258 1798 ；Carbohydr Polym, 1997,33 33 ；Biomaterials, 2002, 23 4609]。CS常與適當(dāng)酸性多聚糖組合使敷料的功能性得以改進(jìn)和優(yōu)化。如與透明質(zhì)酸，肝 素，海藻酸，羧甲基纖維素等組合敷料，但大多僅為敷料組合，與理想的功能性敷料比較還 有很大差距。目前尚未見有本發(fā)明提出的CS與適量酸性多聚糖復(fù)合PNS組成的全天然功 能性傷口敷料應(yīng)用于促進(jìn)傷口快速愈合并抑制瘢痕形成的文獻(xiàn)報(bào)道，也沒有任何其他有關(guān) 抑制瘢痕加速傷口愈合的功能性傷口敷料文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于抑制瘢痕促進(jìn)傷口快速愈合的功能性敷料。本發(fā) 明以CS添加適當(dāng)比例的酸性多聚糖為載體材料，再復(fù)合PNS，組成干凝膠或含水凝膠的全 天然功能性創(chuàng)傷敷料，用于抑制瘢痕加速傷口愈合。CS是一種含有游離氨基的陽離子多聚
4糖，具有良好的抗菌性和成膜性，但無保濕性，因此所成膜柔韌性較差。酸性多聚糖是含有 游離羧基的陰離子多聚糖，具有優(yōu)良的保濕性能，但是成膜性較差。CS和適量酸性多聚糖通 過靜電自組裝結(jié)合形成了網(wǎng)狀水凝膠，在缺損部位形成保護(hù)層。顯示出優(yōu)良的保濕性，透氣 性和柔韌性，抑制纖維膠原的分泌，為所復(fù)合的PNS促進(jìn)干細(xì)胞增殖，定向分化與調(diào)控提供 了優(yōu)良的場(chǎng)所。具有迅速止血、減少組織液滲出、抑菌消炎、防止粘連、加速傷口愈合作用。 本發(fā)明的功能性敷料組合，具有明顯的協(xié)同作用效果，有效地抑制瘢痕形成，使傷口愈合時(shí) 間明顯縮短，傷口愈合過程中無須更換敷料，基本達(dá)到理想功能性外用敷料要求。PNS中主要成分人參皂苷Rgl和人參皂苷Rbl的結(jié)構(gòu)如下 殼聚糖/透明質(zhì)酸靜電自組裝網(wǎng)狀纖維水凝膠具有如下結(jié)構(gòu) 本發(fā)明的用于促進(jìn)傷口無瘢痕快速愈合的輔料組合物由殼聚糖、酸性多聚糖和 三七總皂苷組成，其之間的重量比為殼聚糖酸性多聚糖三七總皂苷=100 10 50 10 100。其中所述的殼聚糖選自殼聚糖(簡稱CS，下同)，殼聚糖乳酸鹽，醋酸鹽，或鹽酸 鹽。所述的酸性多聚糖選自羧甲基殼聚糖鈉(簡稱CMCS，下同)，透明質(zhì)酸鈉(簡稱HA鈉， 下同)，透明質(zhì)酸鋅(簡稱HA鋅，下同)，海藻酸鈉，或羧甲基纖維素鈉。本發(fā)明的這種敷料可以制備成多種劑型，如干凝膠粉劑、干凝膠膠囊劑、凝膠薄膜 劑、水凝膠劑、纖維涂層等。所述的干凝膠粉劑和干凝膠膠囊劑是將殼聚糖，酸性多聚糖， 三七總皂苷組合混合均勻，分裝而制成。所述的凝膠膜劑是將殼聚糖，酸性多聚糖，三七總 皂苷組合混合均勻，加1 5倍組合物重量水制成軟材，壓成薄膜片置于聚乙烯膜上，70 90°C熱氣流烘干，使含水至10 100wt%，再復(fù)合上聚乙烯透氣膜，剪切，用鋁復(fù)合膜密封 包裝而制成。所述的水凝膠劑是將殼聚糖，酸性多聚糖，三七總皂苷混合均勻，加1 10倍組合 物重量水制成軟材，使含水至75 9 Iwt %，分裝于聚乙烯管中，密封而成。所述的纖維涂層 劑型，是將殼聚糖、酸性多聚糖、三七總皂苷分別加1 1000倍自身重量的水溶解，按組合 物的比例依次將其噴涂于脫脂棉或化纖紗布上，80 100°C減壓干燥，剪切成塊，用鋁復(fù)合 膜密封包裝，即得脫脂棉紗布或化纖紗布涂層。本發(fā)明所用原料均為市售，其中三七總皂苷(PNS)按人參皂苷Rgl和人參皂苷Rbl 總重量40 95wt%。本發(fā)明組合物中按干燥品計(jì)算含三七總皂苷以人參皂苷Rgl和人參 皂苷Rbl總重量計(jì)算為1.0 30.0%。一般傷口自然愈合過程，市從基層胚芽細(xì)胞向棘層細(xì)胞分化，達(dá)到初步愈合需要1 周時(shí)間，再分化到角質(zhì)細(xì)胞達(dá)到完全愈合還需要1周時(shí)間，再到角質(zhì)細(xì)胞脫落達(dá)到重塑還 需要2周，因此，傷口整個(gè)修復(fù)與重塑過程需要4周才會(huì)全部完成。在這個(gè)過程中，首先是 滲出期，炎癥期(或清創(chuàng)期)，表現(xiàn)為紅腫，奇癢等；愈合期，表現(xiàn)為傷口收縮結(jié)痂，首次脫痂 為初步愈合，二次脫痂為完全愈合；重塑期，表現(xiàn)為新生血管，以及毛發(fā)等附屬器的重建。凡 是涉及到真皮損傷的傷口，成纖維細(xì)胞大量分泌I型膠原纖維蛋白，最終形成病理性瘢痕 愈合是其必然的結(jié)果。其中成纖維細(xì)胞是瘢痕形成的效應(yīng)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞增殖和合成分 泌功能異常旺盛，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)尤其是I型瘢痕膠原纖維蛋白的大量沉積，并逐漸轉(zhuǎn)變 的結(jié)締組織，而成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，則進(jìn)一步為已經(jīng)過度纖維化的瘢痕發(fā)
6生攣縮提供了動(dòng)力。本發(fā)明組合是依據(jù)PNS具有誘導(dǎo)干細(xì)胞快速定向分化和抑制增生性瘢痕成纖維 細(xì)胞增殖效應(yīng)，而CS具有選擇性促進(jìn)表皮細(xì)胞的生長，抑制成纖維細(xì)胞的過度增殖，減少 傷口的過度收縮，減少粘連和瘢痕形成，也為骨髓造血干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖和定 向分化提供了優(yōu)良的場(chǎng)所，并具有明顯的調(diào)控正常愈合與過度愈合之間的平衡的作用，傷 口愈合時(shí)間明顯縮短。本發(fā)明的產(chǎn)品與市售產(chǎn)品進(jìn)行了一系列創(chuàng)傷傷口愈合的對(duì)比試驗(yàn)，其結(jié)果證明1.在促凝血作用對(duì)比試驗(yàn)中，本發(fā)明的敷料CS/CMCS/PNS(實(shí)施例)與正常凝血時(shí) 間比較提前36%，明顯優(yōu)于云南白藥(云南白藥與正常凝血時(shí)間比較僅提前5. 0% )。2.廣譜抑菌作用對(duì)比試驗(yàn)中，對(duì)金葡球菌、大腸桿菌和白色念珠菌，本發(fā)明敷料組 合物與CS相同，具有廣譜抑菌作用。3.促進(jìn)傷口愈合作用試驗(yàn)中，與敷料組CS/CMCS(100 25)、對(duì)照組0. 2%依沙丫 啶溶液和其他敷料組對(duì)比，本發(fā)明功能敷料組CS/CMCS/PNS (實(shí)施例1)給藥后傷口立即止 血，組織液滲出當(dāng)天停止，并形成黑色柔性結(jié)痂，面積收縮至56%，無粘連，無紅腫，無瘙癢。 第2天結(jié)痂逐漸變硬。第6天結(jié)痂脫落，傷口初步愈合。第10天表皮二次脫落，傷口完全 愈合，表面光滑平整，無瘢痕，皮膚彈性與周邊正常皮膚類似。組織切片結(jié)果真皮層細(xì)胞間 排列疏密均勻，毛囊和毛發(fā)以及血管已初步形成，真皮層，表皮層和角質(zhì)層分化清晰，與正 常皮膚切片均接近。I型膠原纖維蛋白和III型膠原纖維蛋白與正常皮接近，表現(xiàn)為無瘢痕 愈合。第28天愈合重塑情況與正常皮膚基本一致。而依沙丫啶對(duì)照組情況是給藥后傷口 止血緩慢，當(dāng)天面積收縮至73%，組織液滲出持續(xù)3天，邊緣有紅腫，瘙癢狀況出現(xiàn)，第3天 傷口面積腫脹至82%，此時(shí)炎癥更加嚴(yán)重。第4天傷口形成粉紅色硬痂，面積收縮至71 %， 炎癥減輕。第6天傷口出現(xiàn)過度性收縮至46%。第10天結(jié)痂脫落，傷口初步愈合，但中心 愈合不完全。第14天表皮二次脫落，傷口完全愈合，但是表面不平整；組織切片結(jié)果真皮 層細(xì)胞間排列過于緊密，真皮層和表皮層分化不清晰，表面不平整，有明顯隆起，尚未形成 角質(zhì)層，未見有毛囊和毛發(fā)形成。第28天愈合重塑情況與正常皮膚比較呈白色高于皮面， 邊緣毛發(fā)稀少，中間部分幾乎無毛。本發(fā)明功能敷料與現(xiàn)有技術(shù)相比有十分明顯的效果差
已4.促進(jìn)實(shí)驗(yàn)性胃腸損傷的愈合作用對(duì)比試驗(yàn)中，在大白鼠灌服100mg/kg灌服水 楊酸后用本發(fā)明功能敷料(CS/CMCS/PNS)與敷料組(CS/CMCS)治療和用水的對(duì)照組對(duì)比試 驗(yàn)，表明本發(fā)明功能敷料組合中CS與PNS顯示出良好的協(xié)同作用，使傷口愈合結(jié)果表現(xiàn)為 無瘢痕快速愈合。與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明突出的優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明首次提出以CS添加適量酸性多 聚糖為載體材料，復(fù)合PNS組合成功能性醫(yī)用傷口敷料，當(dāng)遇到水或體液時(shí)，酸性多聚糖和 部分CS經(jīng)過靜電自組裝相成凝膠，將剩余的CS和PNS網(wǎng)絡(luò)在其中，快速形成網(wǎng)狀纖維含水 凝膠保護(hù)層，替代傷口分泌膠原形成的纖維蛋白補(bǔ)充傷口缺損，有效地減少組織液滲出和 炎癥，為PNS促進(jìn)干細(xì)胞增殖與分化的組織重建提供了良好的場(chǎng)所，并調(diào)控正常愈合與過 度愈合之間的平衡，顯示出有效地抑制瘢痕，加速傷口愈合作用。本發(fā)明組合還具有能迅速 止血，減少滲出，保濕透氣，柔軟舒適，抑菌，消炎，止癢，不粘連，傷口愈合時(shí)間明顯縮短，也 無須更換敷料，基本達(dá)到理想功能性外用敷料要求。


圖1.傷口愈合過程曲線橫坐標(biāo)為傷口愈合時(shí)間(天數(shù))，縱坐標(biāo)為傷口相對(duì)(0 天)面積(％ )。(- -CS/HA/PNS ；- ■ -CS/HA ；- ▲-依沙丫啶)圖2.傷口愈合過程照片第1至4列分別為功能敷料組，單純敷料組，依沙呀啶對(duì) 照組，云南白藥對(duì)照組。第1至4行分別為第0，3，6，8，10，14天傷口愈合狀況。圖3.第14天傷口愈合組織切片與熒光免疫組化照片第1至4列分別為正常皮， 功能敷料組，單純敷料組，依沙丫啶對(duì)照組。第1至4行分別為未染色，HE染色，血管內(nèi)皮生 長因子受體_2抗體熒光染色，I型瘢痕膠原抗體熒光染色，III型彈性膠原抗體熒光染色。
具體實(shí)施例方式一 .敷料及制備實(shí)施例實(shí)施例1將CS乳酸鹽(醫(yī)用)，CMCS鈉(醫(yī)用)，PNS (按干燥品計(jì)含人參皂苷Rgl和人參 皂苷Rbl為43wt% )，按100 25 100 (重量比)混合均勻，用鋁復(fù)合膜密封包裝，即得 干凝膠粉劑，或分裝于膠囊中，用鋁復(fù)合膜密封包裝，得干凝膠膠囊劑(含人參皂苷Rgl和 人參皂苷Rbl為19. lwt% )0實(shí)施例2將CS乳酸鹽(醫(yī)用)，CMCS鈉(醫(yī)用)，PNS,按100 25 100 (重量比)混合均 勻混合均勻，噴2倍量水，揉搓制成軟材，壓成薄膜片置于聚乙烯膜上，80°C熱氣流烘干15 分鐘，含水至37.5%，再復(fù)合上聚乙烯透氣膜，剪切，用鋁復(fù)合膜密封包裝，即得凝膠膜劑。實(shí)施例3^ 1.0% CS乳酸鹽溶液(重量)，1. 0% PNS溶液(重量)，1. 0% CMCS鈉溶液(重 量)，按100 80 20 (重量)比例，依次噴涂于脫脂棉紗布上，80 100°C減壓干燥，剪切 成塊，用鋁復(fù)合膜密封包裝，即得到具有迅速止血，減少滲出，保濕透氣，柔軟舒適，抑菌，消 炎，止癢，不粘連，傷口愈合時(shí)間明顯縮短的敷料紗布。實(shí)施例4將CS乳酸鹽(醫(yī)用)，HA鈉(醫(yī)用)，PNS (含量75Wt^ )按100 20 2δ (重 量)配料，混合均勻，噴2倍量水，揉搓制成軟材，壓成薄膜片置于聚乙烯膜上，80°C熱氣流 烘干15分鐘，含水至39%，再復(fù)合上聚乙烯透氣膜，剪切，用鋁復(fù)合膜密封包裝，即得凝膠 膜劑。實(shí)施例5將CS乳酸鹽(醫(yī)用)，CMCS鈉(醫(yī)用)，PNS(含量43wt% )，按100 25 50 (重 量)比配料，混合均勻后加20倍重量的水，制成軟材，分裝于聚乙烯管中，密封即得水凝膠 劑。實(shí)施例6CS醋酸鹽-HA鈉-PNS，按4 1. 5 2 (重量比)混合均勻，用鋁復(fù)合膜密封包裝， 即得干凝膠粉劑。實(shí)施例7
CS鹽酸鹽-HA鋅-PNS，按4 2. 5 1. 2 (重量比)混合均勻，用鋁復(fù)合膜密封包 裝，即得干凝膠粉劑。實(shí)施例8CS乳酸鹽-海藻酸鈉(或羧甲基纖維素)_PNS，按4 1.5 1.6(重量比)混合 均勻，用鋁復(fù)合膜密封包裝，即得干凝膠粉劑。二.對(duì)創(chuàng)傷傷口愈合的對(duì)比試驗(yàn)供試品CS/CMCS(100 25), CS/HA/PNS (100 25 100)，CS/CMCS/ PNSdOO 25 100)(同上述一敷料及制備實(shí)施例的實(shí)施例1)，云南白藥(其中PNS含量 43% )。實(shí)施例1.促凝血作用凝血時(shí)間測(cè)定方法分別按下表加IOmg各組合供試品，加入新鮮血液1ml，搖勻， 記錄血液凝固時(shí)間。PNS或CMCS均顯示出抗凝血作用，而CS顯示出促凝血作用，與CS的各 種組合均顯示出不同程度的協(xié)同促凝血作用。其中CS/CMCS/PNS組合明顯優(yōu)于其它組合， 顯示出良好的協(xié)同促凝血作用。典型組合試驗(yàn)結(jié)果見表1。與正常凝血時(shí)間比較，CS/CMCS/ PNS凝血時(shí)間提前36%，明顯優(yōu)于云南白藥。表1.凝血時(shí)間測(cè)定結(jié)果(分鐘) 實(shí)施例2.廣譜抑菌作用按濁度法測(cè)定(《中國藥典》2005年版二部附錄XI A)。將純菌液用無菌生理鹽水 稀釋成3X108/ml濃度的菌液，每組試管中分別加入0.1ml，加入肉膏湯lml(l 2稀釋)， 加入不同濃度的CS或功能敷料組CS/CMCS/PNS的生理鹽水溶液1ml，充分搖勻后，37°C恒溫 培養(yǎng)18小時(shí)，觀察細(xì)菌生長情況，渾濁為有菌生長，澄清為無菌生長。能夠抑制細(xì)菌生長的 最大稀釋倍數(shù)(以CS計(jì)算)即為對(duì)該細(xì)菌的最小抑制濃度。試驗(yàn)結(jié)果見表2。結(jié)果表明 本發(fā)明敷料組合物與CS相同，具有廣譜抑菌作用，但未發(fā)現(xiàn)有殺菌作用。表2.最小抑菌濃度(％ )測(cè)定結(jié)果 實(shí)施例3.促進(jìn)傷口愈合作用試驗(yàn)方法本發(fā)明功能敷料組CS/CMCS/PNS ；敷料組CS/CMCS ；對(duì)照組0. 2 %依沙 丫啶溶液；其他敷料組。家兔皮膚傷口模型制備在家兔背部剪毛后(或再用硫化鈉溶液 脫毛48小時(shí)后)，每只家兔皮下注射0. 5%利多卡因注射液0. 5ml局麻，供3處，在局麻 部位旁用手術(shù)剪剪出直徑約為1.0cm的圓型全皮切口 3處，用70%酒精溶液消毒，分別將 供試敷料涂布在傷口處，用石蠟脫脂紗布覆蓋，再用繃帶包扎。對(duì)照組用0.2%依沙丫啶 (Ethacridine)溶液處理，包扎，每隔2天重新用0. 2%依沙丫啶溶液處理，包扎，連續(xù)處理 2次。其它組不做任何處理。在試驗(yàn)過程中各功能敷料組均未發(fā)生細(xì)菌感染現(xiàn)象。觀察指標(biāo)(1)炎癥期組織液滲出，紅腫，瘙癢。(2)愈合期傷口面積收縮與結(jié) 痂，第一次脫痂為初步愈合，第二次脫痂傷為全愈合，各皮層增殖與分化狀態(tài)。(3)重塑期 新生毛發(fā)和血管重建。(4)瘢痕指標(biāo)表面平整度，皮膚彈性，I型膠原多于是III型膠原的 2倍以上。組織切片第14天，每只家兔皮下注射0. 5%利多卡因注射液0. 5ml局麻，取下傷 口愈合組織，組織切片用乙醇固定，PBS溶液沖洗，直接光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞分化排列情 況。組織切片用乙醇固定，PBS溶液沖洗，再用HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞分化排列情 況。熒光免疫組化將組織切片先用乙醇固定，PBS溶液沖洗，加入一抗，37°C下孵化 1小時(shí)，用0. 2%吐溫20的PBS沖洗，再加入羅丹明標(biāo)記二抗，繼續(xù)孵化半小時(shí)，用0. 2% 吐溫20的PBS沖洗，在熒光顯微鏡下觀察熒光。一抗兔抗人血管內(nèi)皮生長因子受體_2 多抗[Vegfr-2]；兔抗人I型膠原多抗(Collagen I)；鼠抗人III型膠原單抗(Collagen III)。羅丹明標(biāo)記抗兔IgG抗體[a Rb IgG(H+L)/TRITC]；羅丹明標(biāo)記抗鼠IgG抗體[a Mob IgG(H+L)/TRITC]0 Vegfr-2是血管內(nèi)皮內(nèi)皮細(xì)胞的特異性標(biāo)志。Collagen I是瘢痕膠原 纖維蛋白的標(biāo)志，Collagen III是彈性膠原纖維蛋白的標(biāo)志。在正常皮中I型膠原含量與 III型膠原接近，而在瘢痕皮中I型膠原明顯多于III型膠原。試驗(yàn)結(jié)果(見附圖)(1)本發(fā)明功能敷料組CS/CMCS/PNS(4 1 5)給藥后傷口立即止血，組織液 滲出當(dāng)天停止，并形成黑色柔性結(jié)痂，面積收縮至56%，無粘連，無紅腫，無瘙癢。第2天結(jié) 痂逐漸變硬。第6天結(jié)痂脫落，傷口初步愈合，傷口未出現(xiàn)過度性收縮，中心皮下有少量血 絲狀。第10天表皮二次脫落，傷口完全愈合，表面光滑平整，無瘢痕，皮膚彈性與周邊正常 皮膚類似。第14天皮下有血管分布，皮膚顏色，表面平整度與正常皮膚均接近，重塑情況均 良好；組織切片結(jié)果真皮層細(xì)胞間排列疏密均勻，毛囊和毛發(fā)以及血管已初步形成，真皮 層，表皮層和角質(zhì)層分化清晰，與正常皮膚切片均接近。I型膠原纖維蛋白和III型膠原纖維蛋白與正常皮接近，表現(xiàn)為無瘢痕愈合。第28天愈合重塑情況與正常皮膚基本一致。(2)敷料組給藥后傷口立即止血，組織液滲出當(dāng)天停止，并形成黑色柔性結(jié)痂 (但是柔性不如實(shí)驗(yàn)組)，面積收縮至79%，無粘連，無紅腫，無瘙癢。第2天傷口面積收縮 至46%。之后結(jié)痂逐漸變硬。第6天傷口出現(xiàn)輕微過度性收縮至25%。第8天結(jié)痂脫落， 傷口初步愈合，但中心愈合不完全。第12天表皮二次脫落，傷口完全愈合，表面光滑平整， 無瘢痕，皮膚彈性與周邊正常皮膚均接近。第14天皮膚顏色，表面平整度，無有明顯瘢痕， 皮膚彈性與正常皮膚均接近，重塑情況一般；組織切片結(jié)果真皮層細(xì)胞間排列疏松，真皮 層和表皮層分化不清晰，但尚未形成角質(zhì)層，未見有毛囊和毛發(fā)形成，皮下血管分布較少， 與正常皮膚比較有明顯差異。I型膠原纖維蛋白和III型膠原纖維蛋白與正常皮接近，表現(xiàn) 為無病理性瘢痕愈合。顯示出對(duì)表皮干細(xì)胞分化具有明顯促進(jìn)作用，但是未發(fā)現(xiàn)對(duì)血管內(nèi) 皮祖細(xì)胞和真皮干細(xì)胞分化有明顯促進(jìn)作用。第28天愈合重塑情況與正常皮膚比較邊緣 毛發(fā)正常，中心部位稀少，介于功能敷料組與對(duì)照組之間，與正常皮膚比較有差異。(3)依沙丫啶對(duì)照組給藥后傷口止血緩慢，當(dāng)天面積收縮至73%，組織液滲出持 續(xù)3天，邊緣有紅腫，瘙癢狀況出現(xiàn)，第3天傷口面積腫脹至82%，此時(shí)炎癥更加嚴(yán)重。第4 天傷口形成粉紅色硬痂，面積收縮至71 %，炎癥減輕。第6天傷口出現(xiàn)過度性收縮至46 %。 第10天結(jié)痂脫落，傷口初步愈合，但中心愈合不完全。第14天表皮二次脫落，傷口完全愈 合，但是表面不平整，中心有明顯白色瘢痕，皮膚彈性較硬不如周邊正常皮膚柔軟；組織切 片結(jié)果真皮層細(xì)胞間排列過于緊密，真皮層和表皮層分化不清晰，表面不平整，有明顯隆 起，尚未形成角質(zhì)層，未見有毛囊和毛發(fā)形成，與正常皮膚比較有明顯差異。I型膠原纖維蛋 白明顯多于正常皮，而III型膠原纖維蛋白與正常皮接近，表明為病理性瘢痕愈合。第28 天愈合重塑情況與正常皮膚比較呈白色高于皮面，邊緣毛發(fā)稀少，中間部分幾乎無毛，遠(yuǎn)不 如敷料組，與正常皮膚比較有明顯差異。(4)其他組瘢痕皮膚組織切除后的再修復(fù)第14天將對(duì)照組麻醉后，剪下傷口瘢痕愈合組 織，再將功能敷料組CS/CMCS/PNS涂在傷口處，傷口愈合結(jié)果均同上述功能敷料組，第28天 均表現(xiàn)為快速無瘢痕性愈合。用透明質(zhì)酸(HA)鈉替換功能敷料組中的CMCS (實(shí)施例6，7)，作用效果略優(yōu)，但透 明質(zhì)酸價(jià)格昂貴；而用海藻酸鈉或羧甲基纖維素鈉代替上述CMCS制備敷料時(shí)(實(shí)施例8)， 試驗(yàn)效果不如功能敷料組。上述各組最終均表現(xiàn)為快速無瘢痕性愈合。單用PNS有明顯炎癥反應(yīng)，組織液滲出3天，第4天傷口由膠原形成黃色硬痂。第 8天結(jié)痂脫落，傷口初步愈合，中心皮下有少量血絲狀。第13天表皮二次脫落，傷口完全愈 合，但是表面四周輕微隆起，新生毛發(fā)和血管等皮膚附屬器形成以及柔韌性等與正常皮膚 基本接近，雖然最終均表現(xiàn)為快速無病理性瘢痕愈合，但是傷口愈合表面略微高于正常皮 膚。單用云南白藥(市售)幾乎無炎癥反應(yīng)，組織液滲出2天，第3天傷口由膠原和藥 粉混合形成黑色硬痂。第7天結(jié)痂脫落，傷口初步愈合，中心皮下有少量血絲狀。第13天 表皮二次脫落，傷口完全愈合，但是表面四周輕微隆起，四周新生毛發(fā)和血管等皮膚附屬器 形成以及柔韌性等與正常皮膚基本接近，但中心有白色無毛亮痕，雖然最終均表現(xiàn)為快速 無病理性瘢痕愈合，但是傷口愈合表面略微高于正常皮膚，中心有白色亮痕。第28天表面四周略微高于正常皮膚，四周毛發(fā)與正常皮接近，但中心仍少部分有白色亮痕毛發(fā)稀少。單用PNS未見有減少組織液滲出和其他消炎作用。云南白藥有一定的消炎作用， 可能與所含其他中藥成分有關(guān)，但與三七無關(guān)，促進(jìn)傷口愈合作用強(qiáng)度不如功能敷料組，可 能與云南白藥中所PNS含量低(人參皂苷Rgl和人參皂苷Rbl總量5 10mg/lg)有關(guān)。由 此可見PNS是促進(jìn)傷口愈合作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系。而CS不但具有明顯的消 炎作用，而且對(duì)PNS促進(jìn)正常愈合與過度愈合之間的平衡具有重要的調(diào)控作用。表3.傷口愈合時(shí)間與效果 表4.第14天愈合傷口組織切片結(jié)果 實(shí)施例4.促進(jìn)實(shí)驗(yàn)性胃腸損傷的愈合作用試驗(yàn)結(jié)果取昆明大白鼠30只，按100mg/kg灌服水楊酸，4小時(shí)開始每日灌服給藥。實(shí)驗(yàn)組 C/CMCS/PNS,50mg/lml ；敷料組CS/CMCS，25mg/lml，對(duì)照組水 /1ml。連續(xù)給藥 7 天，解剖 觀察胃腸損傷愈合，結(jié)果見表4。表4.實(shí)驗(yàn)性胃腸損傷的愈合結(jié)果 綜合評(píng)價(jià)(I)PNS具有促進(jìn)表皮干細(xì)胞快速分化，抑制增生性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖，促進(jìn)真 皮干細(xì)胞快速分化為表皮組織、毛發(fā)、汗腺、皮脂腺等皮膚附屬器，以及血管內(nèi)皮祖細(xì)胞快 速分化為血管、淋巴管和神經(jīng)，可有效地防止過度增殖病理性瘢痕，但未見有減少組織液滲 出和其他消炎作用。(2) CS具有迅速止血，快速形成網(wǎng)狀纖維含水凝膠保護(hù)層，替代傷口過量分泌膠原 形成的纖維蛋白補(bǔ)充傷口缺損，選擇性促進(jìn)表皮干細(xì)胞的生長，抑制I型瘢痕膠原纖維蛋 白過度分泌，有效地減少組織液滲出，抑菌消炎，減少粘連和瘢痕形成，為PNS促進(jìn)干細(xì)胞 增殖，分化與調(diào)控的組織重建提供了良好的濕潤場(chǎng)所，但未見對(duì)血管內(nèi)皮祖細(xì)胞和真皮干 細(xì)胞的增殖與分化有明顯的促進(jìn)作用。(3)本發(fā)明功能敷料組合中CS與PNS顯示出良好的協(xié)同作用，使傷口愈合結(jié)果表 現(xiàn)為無瘢痕快速愈合。
1權(quán)利要求
一種用于抑制瘢痕促進(jìn)傷口快速愈合敷料組合物，其特征在于由殼聚糖、酸性多聚糖和三七總皂苷組成，組合物中其重量配比為殼聚糖∶酸性多聚糖∶三七總皂苷＝100∶10～50∶10～100其中所述殼聚糖選自殼聚糖，殼聚糖乳酸鹽，醋酸鹽，或鹽酸鹽；酸性多聚糖選自羧甲基殼聚糖鈉，透明質(zhì)酸鈉，透明質(zhì)酸鋅，海藻酸鈉，或羧甲基纖維素鈉；三七總皂苷按干燥品計(jì)算含量以人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1總重量計(jì)算為40.0～95.0％，組合物按干燥品計(jì)算，含三七總皂苷以人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1總重量計(jì)算為1.0～30.0％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于抑制瘢痕促進(jìn)傷口快速愈合敷料組合物，其特征在于為干 凝膠粉劑；是將殼聚糖、酸性多聚糖、三七總皂苷組合物混合均勻，用鋁復(fù)合膜分裝。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于抑制瘢痕促進(jìn)傷口快速愈合敷料組合物，其特征在于為干 凝膠膠囊劑；是將殼聚糖、酸性多聚糖、三七總皂苷組合物混合均勻，分裝于膠囊內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于抑制瘢痕促進(jìn)傷口快速愈合敷料組合物，其特征在于為凝 膠膜劑；是將殼聚糖、酸性多聚糖、三七總皂苷組合物混合均勻，加1 5倍組合物重量的水 制成軟材，壓成薄膜片置于聚乙烯膜上，70 90°C氣流烘干，使含水至20 60wt %，再復(fù)合 上聚乙烯透氣膜，剪切，用鋁復(fù)合膜密封包裝而制成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于抑制瘢痕促進(jìn)傷口快速愈合敷料組合物，其特征在于為水 凝膠劑；是將殼聚糖、酸性多聚糖、三七總皂苷組合物混合均勻，加1 10倍組合物重量的 水制成軟材，使其含水量75 9 Iwt %，分裝于聚乙烯管中，密封而制成。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于抑制瘢痕促進(jìn)傷口快速愈合敷料組合物，其特征在于為纖 維涂層劑；是將殼聚糖、酸性多聚糖、三七總皂苷分別加1 1000倍自身重量的水溶解，按 組合物的比例依次將其噴涂于脫脂棉或化纖紗布上，80 100°C減壓干燥，剪切成塊，用鋁 復(fù)合膜密封包裝而成。
7.用于抑制瘢痕促進(jìn)傷口快速愈合敷料組合物的應(yīng)用，其特征在于在創(chuàng)傷、燒傷、燙 傷、壓傷、皮膚潰爛、胃腸潰瘍，以及傷口久不愈合中的應(yīng)用。
全文摘要
一種用于抑制瘢痕促進(jìn)傷口快速愈合敷料組合物及其應(yīng)用。由殼聚糖、酸性多聚糖和三七總皂苷組成，重量配比為100∶10～50∶10～100。殼聚糖選自殼聚糖，殼聚糖乳酸鹽，醋酸鹽，或鹽酸鹽；酸性多聚糖選自羧甲基殼聚糖鈉，透明質(zhì)酸鈉，透明質(zhì)酸鋅，海藻酸鈉，或羧甲基纖維素鈉；三七總皂苷以人參皂苷Rg1和Rb1總量計(jì)算不少于40.0％。其劑型為干凝膠粉劑、膠囊、凝膠膜、水凝膠、纖維涂層。用于創(chuàng)傷、燒傷、燙傷、壓傷、皮膚潰爛、胃腸潰瘍，以及傷口不愈合中，具有能迅速止血，減少滲出，保濕透氣，抑菌，消炎，止癢，不粘連，有效地抑制瘢痕形成，使傷口愈合時(shí)間明顯縮短，無須更換敷料，基本達(dá)到理想功能性外用敷料要求。
文檔編號(hào)A61L15/44GK101897990SQ20101022360
公開日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2010年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月6日
發(fā)明者周勝男, 宮珊珊, 張世軒, 王倩茹, 鞠秀蘭 申請(qǐng)人:大連理工大學(xué)