專利名稱：一種提取分離桔梗皂苷有效成分的新方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥有效成分提取分離方法，確切地說是一種桔梗皂苷的提取分 離方法。
背景技術：
桔梗為桔梗科植物桔梗的干燥Platyodon grandiflorum(Jacq. ) A. DC.的干燥根。 桔梗為多年生草本植物。文獻報道桔梗有紫花、白花和黃花類型，目前種植的主要是紫花類 型。可藥、食、賞多用，是我國銷量最大的40種傳統中藥材之一。桔梗分布廣泛，全國除西 北外均有產。東北及內蒙古野生產量較大，安徽、河南、湖北、河北、江蘇、四川、浙江、山東則 栽培產量較大，全國以東北、華北產量大，華東地區所產質量較好。桔梗味苦、辛，性平，歸肺經，有開宣肺氣，祛痰排膿之功效。用于治療外感咳嗽，咽 喉腫痛，肺癰吐痰，胸滿脅痛，痢疾腹痛等病。近年來，桔梗在免疫調節、抗炎、祛痰、保肝、降 血脂等方面的藥理作用引起了廣泛天注。其主要成分為齊蹲果酸型五環三萜皂苷，還含有 黃銅、聚炔、留體、酚酸、脂肪酸等類型的化合物。目前，研究較多的單體化合物為桔梗皂苷。考慮到桔梗皂苷具有專屬功效，有必要進行提取分離。國內對桔梗皂苷的主要提 取方法有冷浸法、熱提法、醇提法(例如，徐麗萍.桔梗皂苷提取方法的比較，《食品工業科 技》，2007，28(4) :133-134)，提取分離方法有水提醇沉-樹脂吸附脫糖脫色法(例如，徐寶 軍，鄭毅男.桔梗總皂苷制備工藝研究，《大連大學學報》，2000，21 (2) :77-79)，或采用乙醇 提取_溶劑萃取_大孔樹脂吸附分離_硅膠柱層析_高效液相色譜法，進行單體組分的微量 制備與結構鑒定(例如，付文衛，竇德強，侯文彬，程保輝，劉菲，陳英杰，裴月湖，竹田忠.桔 梗中三萜皂苷的分離與結構鑒定，《中國藥物化學雜志》，2005，15 (5) 297-301)。經由國家知識產權局網站檢索，截至2010年6月16日，與桔梗皂苷提取分離方法 直接相關的授權發明專利或申請主要有(1) ZL02132764. 5 (《從桔梗中提取桔梗總皂苷和單體桔梗皂苷D的方法及其醫藥 新用途和中藥制劑》)該發明公開了一種從桔梗中提取桔梗總皂苷和單體桔梗皂苷D的方 法及其醫藥用途和中藥制劑。將中藥桔梗用乙醇提取，或用水提取乙醇沉淀純化，再經D101 大孔樹脂柱純化干燥得桔梗總皂苷。上述得到的桔梗總皂苷在中低壓柱層析上分離，用硅 膠薄層鑒定，相同Rf值斑點的流份合并(其中最大斑點為桔梗皂苷D)，揮去溶劑，得單體桔 梗皂苷D。(2)CN1566137A(申請號03139761. 1，《桔梗總皂苷生產工藝》)該發明公開了一 種桔梗總皂苷相關技術。本技術步驟為①桔梗粗顆粒加水煮沸提取三次，合并提取液濃 縮；②上吸附樹脂床分離；③用去離子水水洗樹脂床；④用70%乙醇醇洗樹脂床；⑤收集乙 醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮、噴霧干燥的桔梗總皂苷提取物。(3)CN101084971A(申請號200610014212. 0，《一種桔梗總皂苷的制備方法》)該 發明公開了一種桔梗總皂苷的制備方法，按順序包括如下步驟(1)取桔梗藥材，加入溶 劑，將溶液調至堿性后再進行提取，得提取液；(2)提取液上大孔型堿性陰離子交換柱，先用堿水和純水沖洗，沖洗液棄去，再用含水乙醇洗脫，洗脫液濃縮，即得桔梗總皂苷。
發明內容
本發明旨在為開發中藥新藥或保健食品提供優質原料-桔梗提取物，所要解決的 技術問題桔梗皂苷有效成分的提取、分離問題。本發明的技術方案是以桔梗為原料，包括粉碎、提取、分離、萃取、濃縮和純化，其 特征是將粉碎過100 150目篩的桔梗用PH8 9的質量百分濃度30 60%乙醇水溶液 攪拌提取(動態提取)至少兩次，分離后合并提取液，濃縮至原體積的1/2 1/3，調pH4 5，用丁醇萃取至少兩次，分離后合并萃取液，脫溶后用配位色譜柱分離純化，固定相為硅膠 或聚酰胺中添加0.5 1.5% (質量百分比)配位劑硼酸鈉或硫酸銅等，流動相(即洗脫 劑)為丁醇-乙酸乙酯按25 75 80 20的體積比混合的混合溶劑，收集洗脫液、脫溶、 干燥后得到桔梗皂苷含量80 90%的桔梗提取物。備注測定桔梗總皂苷含量方法為《中華人民共和國藥典》(2005年版)規定的稱重法。具體操作步驟是(1)首先將桔梗通過粉碎機進行破碎，過100 150目篩子，置于8 20倍體積 的30-60%乙醇水(采用5% NaOH溶液調pH8 9)中，動態攪拌提取，轉速60r/min，時間 120min左右，提取至少2次；(2)將提取液合并，真空濃縮至原體積的1/2 1/3，再采用HC1將其調pH至4 5 ；(3)添加2 3倍體積的丁醇進行萃取，萃取至少2次，合并萃取液，真空濃縮至 干，再溶于3倍以上體積乙酸乙酯，用于上柱；(4)進行柱層析分離，固定相為分離介質硅膠、聚酰胺中添加0. 5 1. 5%配位劑 硼酸鈉或硫酸銅等構成的填料，流動相為丁醇-乙酸乙酯(25 75 80 20，V/V)，進行 洗脫；(5)收集洗脫液，真空濃縮、干燥，可制得桔梗皂苷純度80 90%的桔梗提取物。本發明提供了一種集成廉價乙醇水(堿化)浸提-溶劑萃取-柱層析分離純化的 方法，制備出桔梗皂苷含量80 90%桔梗提取物。總收率> 20%。
具體實施例方式實施例1 ①稱取lkg桔梗(桔梗總皂苷含量6.5%)，通過粉碎機進行破碎，過120目篩子， 溶于15倍體積的pH = 8的40%乙醇水中，動態攪拌，轉速60r/min，時間120min左右，提 取2次；②將提取液合并，真空濃縮至原體積的1/2，再添加HC1調pH至4 ；③添加2倍體積的丁醇進行萃取，萃取3次，合并萃取液，真空濃縮至干，再溶于3 倍體積乙酸乙酯，用于上柱④進行柱層析分離，分離介質為添加硼酸鈉的硅膠填料，流動相為丁醇_乙酸 乙酯(70 30，V/V)，進行洗脫;
⑤收集洗脫液，真空濃縮、干燥，得16. 5g桔梗總皂苷純度為86. 7 %的桔梗提取 物，總收率22.0%。實施例2 ①稱取lkg桔梗(桔梗總皂苷含量6.5%)，通過粉碎機進行破碎，過100目篩子， 溶于20倍體積的pH = 9的50%乙醇水中，動態攪拌，轉速60r/min，時間120min左右，提 取2次；②將提取液合并，真空濃縮至原體積的1/3，再添加HC1調pH至4 ；③添加3倍體積的丁醇進行萃取，萃取2次，合并萃取液，真空濃縮至干，再溶于4 倍體積乙酸乙酯，用于上柱④進行柱層析分離，分離介質為添加硫酸銅的聚酰胺填料，流動相為丁醇_乙 酸乙酯(55 45，V/V)，進行洗脫;⑤收集洗脫液，真空濃縮、干燥，得17. 2g桔梗總皂苷純度為81. 7%的桔梗提取 物，總收率21.6%。
權利要求
一種提取分離桔梗皂苷有效成分的新方法，以桔梗為起始原料，包括粉碎、提取、分離、萃取、濃縮和純化，其特征在于所述的提取是將粉碎過100～150目篩的桔梗用pH8～9、濃度30～60％的乙醇水溶液進行動態攪拌提取至少兩次，提取液濃縮至原體積的1/2～1/3后調pH4～5，用丁醇萃取至少兩次，萃取液脫溶后上配位色譜柱，收集丁醇-乙酸乙酯混合洗脫液，濃縮、干燥，可獲得桔梗皂苷含量80～90％的桔梗提取物。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于配位色譜中固定相為硅膠或聚酰胺中添 加0. 5 1. 5%配位劑硼酸鈉或硫酸銅。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于混合洗脫液丁醇_乙酸乙酯的體積比為 25 75 80 20。
全文摘要
一種提取分離桔梗皂苷有效成分的新方法，是一種集堿性乙醇水溶液浸提-溶劑萃取-柱層析分離方法。用該方法對桔梗進行深加工，制備較高純度的桔梗皂苷提取物。用pH＝8～9、30～60％乙醇水浸提；丁醇萃取；柱層析分離填料為硅膠、聚酰胺等，配位劑為硼酸鈉、硫酸銅等，流動相為丁醇-乙酸乙酯(25∶75～80∶20，V/V)。制得桔梗皂苷提取物中早皂苷純度80～90％，總收率≥20％。該提取分離工藝，方法簡便、成本低、易于工業生產應用。
文檔編號A61P3/06GK101856382SQ20101021653
公開日2010年10月13日 申請日期2010年7月2日 優先權日2010年7月2日
發明者曹勇, 朱月信, 李文軍, 楊春杰, 楊景生, 馬凱 申請人:安徽濟人藥業有限公司