專利名稱:短指軟珊瑚中一種具有抗菌活性的開環甾體皂苷類化合物的制作方法
技術領域:
本發明涉及醫藥技術領域,是從海洋動物短指軟珊瑚中分離到的一種新的具有抗 菌活性的開環留體皂苷類化合物Sinularoside A和Sinularoside B。
背景技術:
我國南海海域遼闊,地處亞熱帶,軟珊瑚資源尤其豐富,是世界上軟珊瑚集中分布 的海域之一。短指軟珊瑚在南海海域內廣泛分布,數量眾多。短指軟珊瑚(Sinularia. sp) 屬腔腸動物門(Coelenterata)珊瑚蟲綱(Anthoaoa)八放珊瑚亞綱(Octocorallia)軟珊 瑚目(Alcy0nacea)軟珊瑚科(Alcyoniidae)動物。短指軟珊瑚化學成分研究始于1975年, 多年來對該屬軟珊瑚的研究一直非常活躍。到目前為止,已研究了該屬中42個的化學成 分。這些化學成分主要有萜類(尤其是西松烯二萜)、留醇類、含氮化臺物和一些長鏈脂肪 酸、酯、醇類等。已從該種珊瑚中分離得到開環留體類化合物,但未見有關從該種珊瑚甚至 整個珊瑚動物中提取分離得到開環留體苷成分的報道。
發明內容
本發明提供一種從短指軟珊瑚中提取分離到的兩個開環留體苷類化合物,化學式 分別為C36H58O8和C34H56O7,分別命名為Sinularoside A和Sinularoside B,它們的化學結
構通式如下 其 其中, Sinularoside A為無色油狀固體,由高分辨質譜(HR-ESI-MS+)中準分子離子峰 提供的精確分子量 m/z 641. 4026[M+Na]+, (Calcd. fOrC36H58O8Na, 6418. 4026),給出該化合 物的分子式 C36H58O8,分子量 618 ;紅外光譜3418 (OH),2956 ;2927 (CH3,CH2),1738 (C = 0), 1716 (C = 0),1671 (C = C) ;1H和13C核磁共振數據見表1。Sinularoside B為無色油狀固體,由高分辨質譜(HR-ESI-MS+)中準分子離子峰 提供的精確分子量 m/z599. 3929 [M+Na]+,(Calcd. forC34H56O7Na, 6418. 4026),給出該化合物 的分子式 C34H56O7,分子量 576. 3929 ;紅外光譜3359 (OH), 3192 (C = C),2923 ;2852(CH3, CH2),1633(C = 0),1658 (C = C) ;1H 禾口 13C 核磁共振數據見表 1。表1. Sinularoside A 和 Sinularoside B 的 1H 和 13C 核磁共振數據 (600MHz/125MHz)
COQCH3 20.8_2.17 s_J值偶合常數本發明Sinularoside A和Sinularoside B的制備方法如下1.制備總浸膏取新鮮的短指軟珊瑚洗凈剪碎,用重量比為5 10倍的丙酮超聲提取至提取液無 色,減壓回收丙酮至干,用等體積水分散,乙醚分次萃取,合并萃取液,減壓回收乙醚濃縮至 干,得總浸膏;2.分離純化將總浸膏用正相硅膠色譜(200 300目)分離,用石油醚/丙酮系統梯度洗脫, 根據薄層板檢測監測,分別收集、合并得部分1和部分2。部分1經過S印handex LH-20凝 膠柱色譜,流動相體積比為1 1的三氯甲烷/甲醇洗脫,根據薄層板檢測監測,分別收集、 合并得部分a和b。將a部分進行反相高效液相色譜分離,以甲醇水的體積比為90 10 的混合溶劑進行洗脫,根據示差檢測器監測,收集含Sinularoside A流份,減壓回收甲醇 并濃縮至干,得Sinularoside A。將部分2進行反相高效液相色譜分離,以甲醇水的體 積比為90 10的混合溶劑進行洗脫,根據示差檢測器監測,減壓回收甲醇并濃縮至干,得 Sinularoside B。對Sinularoside A和Sinularoside B進行的體外抗菌試驗表明,它們對于試驗 用真菌、細菌和藻類具有明顯的抑制效果,因此,可用于制備抗菌藥物。本發明為研制新的抗菌藥物提供了新的先導化合物,為開發利用中國的海洋藥用 生物資源具有重要意義。
具體實施例方式現結合實施例對本發明作詳細描述。實施例1.制備 Sinularoside A 和 Sinularoside B取中國廣西潿洲島海域的短指軟珊瑚(Sinularia. sp) 2600克,洗凈,剪碎,用6 倍重量的丙酮超聲提取,減壓回收丙酮至無丙酮味,用等體積水分散,乙醚萃取6次,每次 1000毫升,合并萃取液,回收乙醚并濃縮至干,得總浸膏14. 6g。將總浸膏經正相硅膠色譜 (200 300目)分離,以體積比為1 1 0 1的石油醚/丙酮梯度洗脫,根據薄層板監 測,收集并合得部分1 (0. 21g)和部分2 (0. 43g)。部分1經過Sephandex LH-20凝膠柱色 譜,流動相體積比為1 1的三氯甲烷/甲醇洗脫,根據薄層板監測,分別收集、合并,得部 分a和b。將a部分進行反相高效液相色譜分離,以甲醇水的體積比為90 10的混合 溶劑進行洗脫,根據示差檢測器監測,收集含Sinularoside A流份,減壓回收甲醇并濃縮至干,得Sinularoside A 6. 5毫克。將部分2進行反相高效液相色譜分離,以甲醇水的體 積比為90 10的混合溶劑進行洗脫,根據示差檢測器監測,收集含Sinularoside B流份, 減壓回收甲醇并濃縮至干,得Sinularoside B 4. 8毫克。體外抗菌試驗一、試驗用真菌、細菌和藻類1.試驗用真菌花藥黑粉菌(Microbotryum violaceum)、灰霉菌(Botrytis cinerea)禾口殼針孢葉枯病菌(Septoria tritici);2.試驗用細菌大腸桿菌(Escherichia coli)、巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium);3.試驗用藻類小球藻(Chlorella fusca)。二、實驗用藥1.陽性對照藥青霉素(Penicillin)、鏈霉素(Str印tomycin);2.陰性對照品丙酮(Acetone);3. Sinularoside A 和 Sinularoside B,由實施例 1 制備三.實驗方法1.配制藥物溶液將青霉素、鏈霉素、Sinularoside A和Sinularoside B分別用 丙酮配制成濃度為lmg/ml的溶液,單次測試用量50 μ 1。2.將上述3種真菌、2種細菌和1種藻類按無菌操作的要求分別用7ml滅菌水配制 成菌液,各用噴霧器取4ml菌液,分別均勻噴灑于各自培養皿的培養基表面,再在每個培養 皿內分別放置直徑約Icm滅菌濾紙兩塊,覆蓋于培養基表面,然后分別取上述配制的藥液 50 μ 1滴于濾紙上,蓋上培養基蓋子進行培養。各培養皿蓋子上均注明相應培養基種類、菌 種、化合物名稱、接種時間。花藥黑粉菌室溫4天,灰霉菌室溫5天,殼針孢葉枯病菌20°C 4 天,大腸桿菌37度24小時,巨大芽孢桿菌37°C 24小時,小球藻20°C 5天。按時觀察結果, 測量抑菌圈的大小(直徑),平行試驗3次,結果見表2。表2.瓊脂擴散實驗活性篩選(mm) 由表2可見,本發明inularoside A和Sinularoside B對花藥黑粉菌、殼針孢葉 枯病菌、巨大芽孢桿菌和小球藻均具有顯著的抑制作用,因此可用于制備抗菌藥物。
權利要求
一種開環甾體皂苷類化合物Sinularoside A和Sinularoside B,其特征在于它們的化學結構通式如下其R基團為其中,Sinularoside A的Sinularoside B的FSA00000168652100011.tif,FSA00000168652100012.tif,FSA00000168652100013.tif,FSA00000168652100014.tif
2.權利要求1所述的開環留體皂苷類化合物SinularosideA或Sinularoside B在制 備抗菌藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及醫藥技術領域,是從短指軟珊瑚中分離得到的具有抗菌作用的兩個開環甾體皂苷類化合物Sinularoside A和Sinularoside B,它們的化學結構通式如下其R基團為其中,Sinularoside A的Sinularoside B的對Sinularoside A和Sinularoside B進行的體外抗菌試驗表明,它們對于試驗用真菌、細菌和藻類具有明顯的抑制效果,因此,可用于制備抗菌藥物。本發明為研制新的抗菌藥物提供了新的先導化合物,為開發利用中國的海洋藥用生物資源具有重要意義。
文檔編號A61P31/04GK101863936SQ201010207938
公開日2010年10月20日 申請日期2010年6月23日 優先權日2010年6月23日
發明者劉寶姝, 孫鵬, 孟麗媛, 張文, 易楊華, 李玲, 湯華 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學