一種具有治療婦科疾病的中藥復方有效部位及其制備方法與應用的制作方法

專利名稱：一種具有治療婦科疾病的中藥復方有效部位及其制備方法與應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥復方有效部位，具體涉及一種具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位及其制備方法和其在制備治療婦科疾病藥物中的應用。

背景技術(shù)：
婦科疾病是婦女的常見病、多發(fā)病，其中多與炎癥及內(nèi)分泌紊亂密切相關(guān)。婦科炎癥中慢性盆腔炎、慢性宮頸炎、陰道炎等發(fā)病率較高；婦科內(nèi)分泌紊亂所通常以月經(jīng)的紊亂為主要表現(xiàn)，月經(jīng)正常與否決定于性甾體激素水平的高低，在性激素有序的波動變化下形成了規(guī)律月經(jīng)。
流行病學研究表明痛經(jīng)是目前婦科月經(jīng)病中最常見疾病，分為原發(fā)性痛經(jīng)和繼發(fā)性痛經(jīng)。主要表現(xiàn)為經(jīng)期或行經(jīng)前后出現(xiàn)下腹部、腰部疼痛，有時伴有頭暈或惡心嘔吐，嚴重者可出現(xiàn)面色蒼白、出冷汗、手足厥冷、劇痛昏倒現(xiàn)象。目前，痛經(jīng)的治療仍采用甾體激素及前列腺素拮抗劑，前者多不易被患者接受，后者因只能暫時緩解疼痛而不能徹底治愈，且有一定副作用，故不宜長期服用，不能視為理想的藥物及治療方法。而中藥市場上治療痛經(jīng)的藥物如月月舒、痛經(jīng)靈、益母草沖劑等，具有良好療效，且毒副作用甚小，受到廣大患者的歡迎。
子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生率近年呈現(xiàn)出上升趨勢，其并發(fā)癥表現(xiàn)多樣性，臨床上主要表現(xiàn)為進行性加重的痛經(jīng)、不孕、盆腔結(jié)節(jié)與包塊，臨床藥物治療中常用孕激素、丹那唑、內(nèi)美通、促性腺激素釋放激動劑和米非司酮等藥物，但這些藥物臨床效果并不理想，特別是現(xiàn)用的藥物是強力的生育抑制劑，具有明顯的副作用。手術(shù)治療有保守性手術(shù)和根治性手術(shù)?？梢妼τ谧訉m內(nèi)膜異位癥患者根治性手術(shù)是不合適的，而保守性手術(shù)長常配合藥物治療。
慢性盆腔炎常為急性盆腔炎未能徹底治愈或疾病遷延、患者體質(zhì)較弱所致。該病是婦女的常見病、多發(fā)病，在發(fā)展中國家，育齡期婦女盆腔炎的發(fā)病率高達40％，具有病程長、病情頑固、復發(fā)率高等特點。針對盆腔炎患者的治療主要是抗生素治療。在我國還有傳統(tǒng)的中醫(yī)療法和中西醫(yī)結(jié)合療法等輔助治療，療效肯定。治療盆腔炎的常用抗生素有青霉素類、頭孢菌素類、林可霉素類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類等；中醫(yī)治療盆腔炎的主要原則是活血祛瘀、清熱解毒。
西藥治療該類疾病的措施有效迅速，但停藥后易復發(fā)，且藥物多有副作用。如黃體酮、醋酸甲羥基孕酮、對乙酰氨基酚等，這些藥物均為針對婦科疾病的癥狀進行治療，且黃體酮和醋酸甲羥基孕酮可有頭暈、頭痛、惡心、乳房脹痛等副作用，長期應用可引起子宮內(nèi)膜萎縮，月經(jīng)量減少，易發(fā)生陰道霉菌感染。
而中藥在治療婦科疾病中發(fā)揮著一定的特色和優(yōu)勢，具有調(diào)節(jié)機體整體功能、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂、作用緩和、副作用小等一系列優(yōu)點?，F(xiàn)有針對婦科疾病專利僅對復方藥物組方配伍進行保護(如CN 136871A一種中藥復方；CN1895458A一種治療婦科疾病的重要復方提取物及其制備方法)；而有關(guān)中藥復方的專利未對其有效成分進行研究(如CN1651033A一種治療婦科疾病的中藥復方及其制備方法；CN1470273A治療婦科疾病的藥物及其應用制劑；CN1530126A一種藥物組合物、其制備方法及其在制備治療婦科疾病藥物中的應用)；中醫(yī)藥治療婦科疾病有悠久的歷史，其治則為發(fā)時攻邪治標，未發(fā)之時扶正治本，從目前臨床婦科疾病治療來看，以辨證辨病結(jié)合，中醫(yī)藥愈加顯現(xiàn)其獨特的治療優(yōu)勢，但目前治療婦科疾病的復方藥物多存在使用不便、用藥量大、成分復雜、有效部位不明確，復方中起療效的物質(zhì)基礎(chǔ)不清楚，并存在一定的不良反應等問題，因此很有必要在中醫(yī)藥理論的指導下開發(fā)出一種有效物質(zhì)明確、療效確切，副作用小、服用方便的治療婦科疾病的藥物。


發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種組方配比科學合理、有效成分明確、療效好、副作用小、服用方便的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位，本發(fā)明另一個目的是提供該具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的制備方法和其在制備治療婦科疾病藥物中的應用。
技術(shù)方案為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為 一種具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位，它由下列重量份數(shù)的原料制成 當歸10-50份、川芎3-20份、赤芍8-35份、蒲黃10-50份、五靈脂8-35份、沒藥3-20份、延胡索3-20份。
作為優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位由下列重量份數(shù)的原料制成 當歸30-50份、川芎5-15份、赤芍15-30份、蒲黃30-50份、五靈脂15-30份、沒藥5-15份、延胡索5-15份。
作為更優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位由下列重量份數(shù)的原料制成 當歸35-45份、川芎10-15份、赤芍15-25份、蒲黃30-45份、五靈脂15-25份、沒藥10-15份、延胡索10-15份。
本發(fā)明在對古今治療婦科疾病方劑進行篩選，在中醫(yī)藥理論的指導下，辨證施治，結(jié)合婦科疾病的發(fā)病機理和發(fā)病癥狀進行配比組方，確定以當歸、川芎、赤芍，配伍活血祛瘀止痛藥蒲黃、沒藥、延胡索和五靈脂組成七味中藥進行組方，整方具有活血化瘀止痛、養(yǎng)血補血，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的雙重功效，主用于婦科血虛血瘀、內(nèi)分泌混亂導致的痛經(jīng)、子宮內(nèi)膜異位癥或慢性盆腔炎等病癥；方中當歸補血活血，調(diào)經(jīng)止痛；赤芍涼血活血，具有行血，破瘀，散血塊，緩急止痛功效；川芎活血祛瘀，行氣止痛，三藥相配，動靜結(jié)合，滋而不膩，溫而不燥，補而不滯，剛?cè)嵯酀庩栒{(diào)和，營血得生，共奏補血活血之功，再配伍蒲黃、沒藥、延胡索和五靈脂，使組方補血而不留瘀，行血而不傷血，增加補氣行氣止痛、活血化瘀之功，主治經(jīng)脈氣血凝滯，內(nèi)分泌紊亂導致的婦科疾病。本發(fā)明在中醫(yī)藥辨證施治的指導下組方，并根據(jù)組方藥味的理化性質(zhì)特點，對整方的提取物通過現(xiàn)代分離純化手段進行去粗存精，根據(jù)現(xiàn)代分析儀器和藥理篩選結(jié)果表明，所得的有效部位活性成分更明確，活血化瘀、止痛抗炎作用強，不良反應更低。
本發(fā)明提供的制備具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的方法，具體包括以下步驟 (1)取由當歸10-50份、川芎3-20份、赤芍8-35份、蒲黃10-50份、五靈脂8-35份、沒藥3-20份、延胡索3-20份組成的中藥復方，加入總藥材5～10倍量的水或醇水煎煮，合并煎煮液在20～70℃減壓濃縮得濃縮液； (2)取步驟(1)得到的濃縮液加入乙醇，使乙醇的濃度達到70～90％，放置沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物； (3)取步驟(2)得到的濃縮物上大孔吸附樹脂柱，用濃度20％至70％的乙醇梯度洗脫，洗脫液回收溶劑，得中藥復方有效部位。
作為優(yōu)選方案，以上所述的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的制備方法，步驟(1)中煎煮溶劑醇水中乙醇濃度為0-80％，煎煮次數(shù)為1～3次。
作為優(yōu)選方案，以上所述的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的制備方法，步驟(2)中加入乙醇，使乙醇的濃度達到75～85％，放置沉淀，此操作的目的是加入乙醇使溶液中乙醇的濃度達到75～85％，放置，進行沉淀，可以沉淀去除提取液中大量極性大的大分子化合物，如多糖、鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)和果膠等，有利于后續(xù)的分離純化工藝，提高純化效率。
作為優(yōu)選方案，以上所述的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的制備方法，步驟(3)中所述的大孔吸附樹脂為D101、D102或AB-8型大孔吸附樹脂。本發(fā)明通過對不同極性和不同型號樹脂進行吸附和純化能力的篩選，確定型號為D101、D102或AB-8型的大孔吸附樹脂吸附和純化效果做好，同時本發(fā)明對5％～95％不同濃度乙醇的洗脫能力進行了優(yōu)選，以總洗脫物得率和機酸類、黃酮類、內(nèi)酯類和萜苷類的含量作為指標，確定濃度為20％至70％的乙醇的洗脫物總含量高，機酸類、黃酮類、內(nèi)酯類和萜苷類有效成分含量高，且雜質(zhì)少，因此確定濃度20％至70％的乙醇為梯度洗脫溶劑，作為進一步的優(yōu)選方案，濃度30％至40％的乙醇為最佳梯度洗脫溶劑。
由本發(fā)明提供的制備方法提取分離得到的中藥復方有效部位，經(jīng)HPLC/HPLC-MS分析，提取物中的有效成分由黃酮類、萜苷類、內(nèi)酯類、有機酸類等四類化合物所組成，且四類有效成分在提取物中的重量百分比為20～90％。
作為優(yōu)選方案，提取物中黃酮類、萜苷類、內(nèi)酯類、有機酸類四類化合物重量百分組成為1.5％～9.5％的機酸類；1％～30％的黃酮類；1％～40％的內(nèi)酯類；13％～40％的萜苷類化合物，具體包括下列重量百分比的成分芍藥苷3.0％～26％、芍藥內(nèi)酯苷1.2％～4.8％、阿魏酸0.35％～1.56％、咖啡酸0.12％～0.48％、香草酸0.64％～2.56％、原兒茶酸1％-2％、香蒲新苷1％～4％、異鼠李素-3-O-新橙皮苷1.49％～5.96％、槲皮素0.5％-2.1％、洋川芎內(nèi)酯I 3％-15％和洋川芎內(nèi)酯H 1％-5％等成分。
本發(fā)明提供的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位在制備治療婦科疾病藥物中的應用。
作為優(yōu)選方案，所述的婦科疾病為婦女痛經(jīng)、子宮內(nèi)膜異位癥或慢性盆腔炎疾病； 作為進一步的優(yōu)選方案，把具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位和藥學上可接受的載體制成膠囊劑、顆粒劑、片劑、噴霧劑、注射劑、微囊、軟膏劑或透皮控釋貼劑劑型的藥物。
本發(fā)明提供的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位在制成片劑時把具有治療婦科疾病作用的中藥復方和載體乳糖或玉米淀粉，需要時加入潤滑劑硬脂酸鎂，混合均勻，然后壓片制成片劑。本發(fā)明提供的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位制成膠囊劑時把具有治療婦科疾病作用的中藥復方和載體乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，然后裝膠囊制成膠囊劑。本發(fā)明提供的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位制成顆粒劑時，把具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位和稀釋劑乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，干燥，制成顆粒劑。
有益效果本發(fā)明提供的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點 (1)本發(fā)明提供的具有治療婦科疾病作用的中藥復方，根據(jù)中醫(yī)藥理論和婦科疾病的發(fā)病機制選取原料配伍組方，各組份配比科學合理，并根據(jù)組方各藥味化學成分的性質(zhì)特點，對整方進行提取，并對提取物通過現(xiàn)代分離純化手段進行去粗存精，根據(jù)現(xiàn)代分析方法和藥理篩選結(jié)果表明，所得的有效部位活性成分更明確，具有很好的活血化瘀、止痛、緩和婦科炎癥、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌紊亂的作用，且起效快、標本兼治、不易復發(fā)，長期使用無不良反應，且本發(fā)明提供的具有治療婦科疾病作用的中藥復方可以方便的和藥學上可接受的載體制備成各種劑型的藥物，方便臨床服用。
(2)本發(fā)明提供的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的制備方法，經(jīng)過實驗篩選確定最佳提取和分離工藝，可操作性強，提取、分離純化效率高，且制備方法成本低、環(huán)保、可實現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)。

具體實施例方式 根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本發(fā)明，而不應當也不會限制權(quán)利要求書中所詳細描述的本發(fā)明。
實施例1 一種具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的方法，其制備方法為 (1)按比例稱取處方藥材當歸10份、川芎3份、赤芍8份、蒲黃10份、五靈脂8份、沒藥5份、延胡索5份，經(jīng)粉碎至粒徑為40目，混合，用水煎煮提取2次，第一次加總藥材10倍量水煎煮1.5h，第二次加總藥材8倍量水煎煮1h，合并兩次煎出液，濃縮至1g生藥/ml，得濃縮液； (2)用濃度為95％乙醇調(diào)步驟(1)得到的濃縮液至乙醇濃度為80％，放置12h，過濾沉淀，取上清液，濃縮至5kg，得濃縮物； (3)取步驟(2)得到的濃縮物上D101大孔吸附樹脂柱，靜置12h后，分別用純水、濃度為10％～95％的乙醇進行梯度洗脫，收集濃度40％～50％乙醇洗脫部位，濃縮，即得具有治療婦科疾病的中藥復方有效部位。(批號001) 經(jīng)過HPLC/HPLC-MS分析，中藥復方有效部位中黃酮類、萜苷類、內(nèi)酯類、有機酸類四類化合物重量百分組成為9％的機酸類；28％的黃酮類；32％的內(nèi)酯類；20％的萜苷類化合物。
實施例2 一種具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的方法，其制備方法為 (1)取由當歸30份、川芎10份、赤芍15份、蒲黃50份、五靈脂15份、沒藥10份、延胡索10份組成的中藥復方，混合，經(jīng)粉碎至粒徑為40目，用濃度為30％乙醇回流提取3次，第一次加8倍量30％乙醇回流2h，第二次加6倍量30％乙醇回流2h，第三次加6倍量30％乙醇回流1.5h，合并提取液，在50～70℃減壓濃縮得濃縮液6kg； (2)取步驟(1)得到的濃縮液加入乙醇，使乙醇的濃度達到70％，放置沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物； (3)取步驟(2)得到的濃縮物上D102型大孔吸附樹脂柱，用濃度10％至95％的乙醇梯度洗脫，收集30％～40％乙醇洗脫部位，回收溶劑，即得具有治療婦科疾病的中藥復方有效部位。(批號002) 經(jīng)過HPLC/HPLC-MS分析，中藥復方有效部位中黃酮類、萜苷類、內(nèi)酯類、有機酸類四類化合物重量百分組成為7.6％的機酸類；26％的黃酮類；31％的內(nèi)酯類；30％的萜苷類化合物。
取以上制備得到的有效部位10g，加入藥用淀粉16g，混合均勻，加水制成軟材，過20目篩制粒，干燥，制成顆粒，裝入膠囊，每粒0.2g，或者取有效部位10g玉米淀粉20g，加入潤滑劑硬脂酸鎂5g，混合均勻，然后壓片制成片劑。
實施例3 一種具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的方法，其制備方法為 (1)取由當歸50份、川芎20份、赤芍25份、蒲黃50份、五靈脂20份、沒藥10份、延胡索10份組成的中藥復方，混合，經(jīng)粉碎至粒徑為40目，用濃度為70％乙醇回流提取2次，第一次加10倍量70％乙醇回流2h，第二次加8倍量70％乙醇回流1.5h，合并提取液，在50～70℃減壓濃縮得濃縮液7kg； (2)取步驟(1)得到的濃縮液加入乙醇，使乙醇的濃度達到90％，放置沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物； (3)取步驟(2)得到的濃縮物上AB-8型大孔吸附樹脂柱，靜置12h后，分別用純水、10％～95％的乙醇進行梯度洗脫，收集40％～60％乙醇洗脫部位，回收溶劑，即得具有治療婦科疾病的中藥復方有效部位。(批號003) 經(jīng)過HPLC/HPLC-MS分析，中藥復方有效部位中黃酮類、萜苷類、內(nèi)酯類、有機酸類四類化合物重量百分組成為8％的機酸類；23％的黃酮類；33％的內(nèi)酯類；35％的萜苷類化合物。
取以上制備得到的有效部位15g，加入藥用淀粉30g，混合均勻，加水制成軟材，過20目篩制粒，干燥，整粒，制成顆粒劑，或者取有效部位15g玉米淀粉30g，加入潤滑劑硬脂酸鎂6g，混合均勻，然后壓片制成片劑。
實施例4 一種具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的方法，其制備方法為 (1)取由當歸30份、川芎5份、赤芍15份、蒲黃30份、五靈脂15份、沒藥5份、延胡索5份組成的中藥復方，混合，經(jīng)粉碎至粒徑為40目，用水回流提取2次，第一次加10倍量水回流3h，第二次加8倍量水回流2h，合并提取液，在50～70℃減壓濃縮得濃縮液6kg； (2)取步驟(1)得到的濃縮液加入乙醇，使乙醇的濃度達到80％，放置沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物； (3)取步驟(2)得到的濃縮物上D101型大孔吸附樹脂柱，靜置12h后，分別用純水、10％～95％的乙醇進行梯度洗脫，收集20％～60％乙醇洗脫部位，回收溶劑，即得具有治療婦科疾病的中藥復方有效部位。(批號004) 經(jīng)過HPLC/HPLC-MS分析，中藥復方有效部位中黃酮類、萜苷類、內(nèi)酯類、有機酸類四類化合物重量百分組成為6％的機酸類；20％的黃酮類；21％的內(nèi)酯類；30％的萜苷類化合物。
實施例5 一種具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的方法，其制備方法為 (1)取由當歸40份、川芎10份、赤芍30份、蒲黃30份、五靈脂20份、沒藥10份、延胡索10份組成的中藥復方，混合，經(jīng)粉碎至粒徑為40目，用濃度30％乙醇回流提取2次，第一次加10倍量30％乙醇回流3h，第二次加8倍量30％乙醇回流2h，合并提取液，在50～70℃減壓濃縮得濃縮液7.5kg； (2)取步驟(1)得到的濃縮液加入乙醇，使乙醇的濃度達到90％，放置沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物； (3)取步驟(2)得到的濃縮物上D102型大孔吸附樹脂柱，靜置12h后，分別用純水、10％～95％的乙醇進行梯度洗脫，收集30％～70％乙醇洗脫部位，回收溶劑，即得具有治療婦科疾病的中藥復方有效部位。(批號005) 經(jīng)過HPLC/HPLC-MS分析，中藥復方有效部位中黃酮類、萜苷類、內(nèi)酯類、有機酸類四類化合物重量百分組成為7％的機酸類；21％的黃酮類；28％的內(nèi)酯類；26％的萜苷類化合物。
實施例6鎮(zhèn)痛抗炎試驗 1、小鼠原發(fā)性痛經(jīng)試驗 (1)小鼠原發(fā)性痛經(jīng)模型的制備與實驗 選用KM種雌性、體重18-22g的雌性小鼠，隨機分組，以雌激素和縮宮素聯(lián)合復制原發(fā)性痛經(jīng)模型。以0.01mg·g-1·d-1給小鼠連續(xù)sc苯甲酸雌二醇8d，使小鼠子宮同步化，第8天，ip縮宮素0.01mL·g-1，制造小鼠原發(fā)性痛經(jīng)動物模型。
檢測指標扭體反應。
給藥方法將小鼠隨機分成模型對照組、陽性藥物對照組(西樂葆)、實施例1制備得到的批號001有效部位的大、小劑量組；實施例2制備得到的批號002有效部位的大、小劑量組；實施例3制備得到的批號003有效部位的大、小劑量組。正常對照組、模型對照組給予等容積生理鹽水，陽性藥物對照組給予西樂葆0.0411mg·g-1·d-1，有效部位給藥37.0g生藥/kg、18.5g生藥/kg為大、小劑量組，各組小鼠每組10只。按上述方法復制原發(fā)性痛經(jīng)模型。從第6天起，每日上午腹腔注射苯甲酸雌二醇，下午正常對照組給予生理鹽水0.4mL/只，其余各組灌胃相應藥物。連續(xù)3d，于末次給藥后60min，ip縮宮素0.2mL/只，記錄注射后20min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)及扭體反應抑制率。
(2)實驗結(jié)果與分析 由表1實驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的中藥復方有效部位在大、小劑量下，均具有顯著的抑制小鼠扭體反應的作用(P＜0.05或P＜0.01)；抑制率均在50％以上，結(jié)果表明本發(fā)明提供的中藥復方有效部位具有很好的鎮(zhèn)痛作用，強于陽性對照藥西樂葆。
表1中藥復方有效部位對原發(fā)性痛經(jīng)模型小鼠扭體的抑制作用

與模型組相比較，*P＜0.05；**P＜0.01 2、對小鼠離體子宮收縮的抑制作用 (1)小鼠離體子宮收縮實驗 取未孕雌性小鼠，體重18-22g；實驗前連續(xù)3天腹腔注射苯甲酸雌二醇1mg·kg-1·d-1，以同步化子宮并增加子宮對縮宮素的敏感性。于第4日取出小鼠子宮，置于Locke’s溶液中清洗，用細線分別扎住子宮頸端及兩側(cè)卵巢端，一端固定于浴槽底部，另一端連接在張力換能器上。置于20ml Locke’s液恒溫浴槽中，溫度為(37±0.1)℃，持續(xù)供氧，pH 7.3，通過調(diào)節(jié)螺母加1g的負荷(10mN)，平衡40min，待子宮收縮穩(wěn)定，自發(fā)節(jié)律恢復后，開始進行實驗。
預先記錄5-10min正常收縮曲線，繼加入縮宮素注射劑10μl，終濃度為5ul/L，作用15min后再加入各受試藥物(實施例1至3制備得到的中藥復方有效部位，批號001、002和003)，各樣品受試藥物加入的初始濃度均為10mg/ml，1L浴槽中受試藥物的終濃度為0.01mg/ml，觀察藥物對縮宮素引起子宮痙攣性收縮的抑制作用，采用T檢驗方法統(tǒng)計給藥前及給藥后子宮的收縮頻率及收縮幅度，計算抑制子宮收縮的百分率(IR％)。計算公式IR(％)＝(給藥前參數(shù)-給藥后參數(shù))/給藥前參數(shù)×100。
(2)數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計 各組數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差(mean±SD)表示，組間相關(guān)指標采用兩兩比較t檢驗，P＜0.05為差異有顯著性。
(3)對小鼠離體子宮收縮實驗結(jié)果，具體實驗結(jié)果如表2所示 ①對小鼠離體子宮平滑肌收縮頻率的影響 由表2中可看出本發(fā)明提供的中藥復方有效部位對子宮平滑肌收縮頻率均具有顯著的抑制活性(P＜0.01或P＜0.05)。
②對小鼠離體子宮平滑肌收縮幅度的影響 由表2中可看出本發(fā)明提供的中藥復方有效部位對小鼠離體子宮平滑肌收縮幅度具有顯著的抑制活性(P＜0.01)。
③對小鼠離體子宮平滑肌肌張力的影響 由表2中可看出本發(fā)明提供的中藥復方有效部位對小鼠離體子宮平滑肌肌張力具有顯著的抑制活性(P＜0.05或P＜0.01)。
綜合分析離體子宮收縮的3個評價指標表明，本發(fā)明提供的中藥復方有效部位對抑制子宮收縮呈現(xiàn)顯著活性。其ED50為128.0μg/ml，95％可信區(qū)間為104.2μg/ml～165.9μg/ml。
表2中藥復方有效部位對小鼠離體子宮收縮的影響結(jié)果
3、小鼠甲醛致炎試驗 (1)甲醛致炎模型的制備 取80只小鼠隨機分成8組，每組10只，對照組、模型組、實施例1批號001有效部位大、小劑量組；實施例2批號002有效部位大、小劑量組；實施例3批號003有效部位大、小劑量組。對照組、模型對照組給予等容體生理鹽水，復方提取物組劑量分別為37.0g·Kg-1·d-1，為生藥量。給藥1h后在右后足墊皮下注射2.5％甲醛生理鹽水20μL，4h后，將小鼠斷頭處死，之后自膝關(guān)節(jié)切足，稱重，比較左右足差異，以此代表炎癥程度。
(2)抗小鼠足腫脹實驗結(jié)果與分析，具體實驗結(jié)果如表3所示 由表3可知，中藥復方有效部位的大劑量均具有顯著的抑制甲醛所致小鼠足腫脹作用(P＜0.05)，抑制率可達50％以上，效果強于陽性藥，表明所發(fā)明的中藥復方有效部位可顯著抑制皮下注射甲醛引起的水腫。
表3中藥復方有效部位抗足腫脹實驗結(jié)果
與模型組相比較，*P＜0.05；**P＜0.01 (3)對甲醛致小鼠足腫脹組織中PGE2含量的影響 將剪下的小鼠右足，剝皮后浸泡于1mL生理鹽水中1h，以2000r/min離心10min，吸取上清液0.2mL，加入0.5mol/L NaOH-CH3OH溶液1mL，在50℃水浴中異構(gòu)化20分鐘，加甲醇稀釋到10mL，于278nm處測定其吸收值，并按下述公式計算PGE2含量 PGE2含量(μg/g)＝(E278×13.13×Vt×D)/W 計算各組間差異[注Vt＝PGE2浸泡液總體積，D＝稀釋倍數(shù)，W＝右下肢重量(g)，E278＝278nm處的吸收值]。具體實驗結(jié)果見表4。
表4中藥復方有效部位對甲醛致小鼠足腫脹組織中PGE2含量的影響
與模型組相比較，*P＜0.05；**P＜0.01 由表4可知，所發(fā)明的中藥復方有效部位對致炎組織中所含PGE2具有非常顯著的抑制作用，表明可降低炎癥組織中的炎癥因子的合成與釋放，PGE2含量越低，其抗炎作用越顯著。
由以上鎮(zhèn)痛抗炎試驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的中藥復方有效部位具有很好的鎮(zhèn)痛和抗炎效果，且起效迅速，未見不良反應，可用于治療婦科慢性盆腔炎疾病。
實施例7改善血液流變學及調(diào)節(jié)內(nèi)分泌激素試驗 1、急性血瘀SD大鼠模型的制備與實驗 正常組常規(guī)飼養(yǎng)，模型組、治療組大鼠置于0℃～1℃冰水中5min，每日1次，連續(xù)七天。中藥復方有效部位治療組于造模的第1天開始，按大、小劑量中藥復方各樣品灌胃，每日1次，連用7天，正常組、模型組給予同體積的蒸餾水。于第8天皮下注射0.1％腎上腺素0.1ml/100g，共2次，兩次間隔時間4h。之后停食，于次晨采用全自動流變快測儀測定血流變學指標；采用放射免疫的方法測定血清中激素水平。
2、對大鼠急性血瘀模型全血粘度的影響 由表5可見，與模型組相比，本發(fā)明提供的中藥復方有效部位在高、低劑量均明顯降低全血粘度作用(P＜0.01或P＜0.05)。具體實驗結(jié)果如表5所示。
表5中藥復方有效部位對全血黏度的影響
與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.01 3、對急性血瘀模型大鼠血漿粘度、血沉、紅細胞壓積的影響 與模型組相比，本發(fā)明提供的中藥復方有效部位能明顯降低血漿黏度、血沉、紅細胞壓積(P＜0.01或P＜0.05)，但對纖維蛋白原含量未見明顯變化(P＞0.05)。高劑量組具有明顯改善血沉、紅細胞壓積的作用(P＜0.05)，具體實驗結(jié)果如表6所示。
表6中藥復方有效部位對大鼠血漿粘度、血沉及紅細胞壓積的影響
#P＜0.05與對照組相比；*P＜0.05，**P＜0.01與模型組相比 4、對急性血瘀模型大鼠血清中E2和P含量的影響 與模型組相比，本發(fā)明提供的中藥復方有效部位高、低劑量組均明顯或顯著降低血清中E2的升高(P＜0.001或P＜0.01)；而對孕酮含量均呈現(xiàn)升高作用(P＜0.05，P＜0.01)，具體實驗結(jié)果如表7所示。
表7中藥復方有效部位對寒凝血瘀型大鼠血清中內(nèi)分泌激素水平的影響 ##P＜0.01與對照組相比；*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與模型組相比 由以上實驗結(jié)果表明本發(fā)明提供的中藥復方有效部位具有很好的活血化瘀，改善血液循環(huán)，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌混亂，恢復內(nèi)分泌正常的作用，從而可以用于治療血瘀所致的痛經(jīng)或子宮內(nèi)膜異位癥等婦科疾病。
實施例8調(diào)節(jié)免疫功能試驗 1、對小鼠脾T淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗(MTT法) 各組動物連續(xù)灌胃30天，頸椎脫臼處死動物，無菌取脾，置于盛有適量無菌Hank’s液的平皿中，輕輕將脾磨碎，制成單細胞懸液，200目篩網(wǎng)過濾，用Hank’s液洗滌2次，每次離心10分鐘計數(shù)活細胞數(shù)(應在95％以上)，調(diào)整細胞濃度為3×106個/ml。將細胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1ml，一孔加75μl ConA液(相當于715μg/ml)，另一孔作對照。置37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時。培養(yǎng)結(jié)束前4小時，每孔輕輕吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，同時加入MTT(5mg/ml)50μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4小時。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1ml酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。將溶解液移入2ml比色杯中，在570nm波長處測定光密度值(OD)，實驗結(jié)果表明本發(fā)明提供的中藥復方有效部位具有很好的促進脾T淋巴細胞增殖的作用，從而可以起到提高免疫力的作用。
2、對小鼠靜息脾淋巴細胞的影響實驗結(jié)果 由表8實驗結(jié)果可看出，與空白對照組(生理鹽水)比較，本發(fā)明提供的中藥復方有效部位可明顯增強小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能(P＜0.01或P＜0.05或P＜0.001)，具有促進靜息皮細胞的增殖反應，提高免疫力的作用。
表8中藥復方有效部位對小鼠靜息脾淋巴細胞的影響
與空白組相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001. 3、對ConA誘導的活化脾T淋巴細胞增殖和ConA誘導的IFN-γ試驗 實驗結(jié)果表明本發(fā)明提供的中藥復方有效部位在200μg/ml時和DMSO對照組相比具有明顯抑制ConA誘導的活化T細胞的增殖作用(P＜0.01)，和具有明顯抑制ConA誘導的IFN-γ炎性因子的產(chǎn)生(P＜0.01)進一步表明本發(fā)明提供的中藥復方有效部位具有很好的調(diào)節(jié)免疫功能的活性。
本發(fā)明根據(jù)中醫(yī)藥理論辨證施治，根據(jù)婦科疾病的發(fā)病機理，進行科學組方，并采用優(yōu)選的提取純化方法制備得到中藥復方有效部位，經(jīng)實驗結(jié)果表明本發(fā)明提供的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位具有很好的抗子宮平滑肌痙攣、鎮(zhèn)痛、抗炎、調(diào)節(jié)雌激素、孕激素水平、調(diào)節(jié)免疫功能等活性，可用于治療多種婦科疾病，包括原發(fā)性痛經(jīng)、子宮內(nèi)膜異位癥、急慢性盆腔炎等婦科疾病，并且由于去掉了大量非活性物質(zhì)，有效部位中有效成分更清楚，含量更高，臨床上用藥更少、更安全，不良反應更低，因此本發(fā)明提供的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有望開發(fā)成為新一代防治婦科疾病的藥物。
權(quán)利要求
1.一種具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位，其特征在于，它由下列重量份數(shù)的原料制成
當歸10-50份、川芎3-20份、赤芍8-35份、蒲黃10-50份、五靈脂8-35份、沒藥3-20份、延胡索3-20份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位，其特征在于，它由下列重量份數(shù)的原料制成
當歸30-50份、川芎5-15份、赤芍15-30份、蒲黃30-50份、五靈脂15-30份、沒藥5-15份、延胡索5-15份。
3.一種制備權(quán)利要求1所述的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的方法，其特征在于包括以下步驟
(1)取由當歸10-50份、川芎3-20份、赤芍8-35份、蒲黃10-50份、五靈脂8-35份、沒藥3-20份、延胡索3-20份組成的中藥復方，加入總藥材5～10倍量的水或醇水提取，合并提取液在20～70℃減壓濃縮得濃縮液；
(2)取步驟(1)得到的濃縮液加入乙醇，使乙醇的濃度達到70～90％，放置沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物；
(3)取步驟(2)得到的濃縮物上大孔吸附樹脂柱，用濃度20％至70％的乙醇梯度洗脫，洗脫液回收溶劑，得中藥復方有效部位。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的制備方法，其特征在于，步驟(1)中提取溶劑醇水中乙醇濃度為0-80％，提取次數(shù)為1～3次。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的大孔吸附樹脂為D101、D102或AB-8型大孔吸附樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的制備方法，其特征在于，步驟(3)得到的中藥復方有效部位中包含有重量百分比20～90％的有機酸類、黃酮類、內(nèi)酯類和萜苷類四類化合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位的制備方法，其特征在于，步驟(3)得到的中藥復方有效部位中包含有重量百分比1.5％～9.5％的有機酸類；1％～30％的黃酮類；1％～40％的內(nèi)酯類；13％～40％的萜苷類化合物。
8.權(quán)利要求1或2所述的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位在制備治療婦科疾病藥物中的應用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位在制備治療婦科疾病藥物中的應用，其特征在于所述的婦科疾病為婦女痛經(jīng)、子宮內(nèi)膜異位癥或慢性盆腔炎疾病。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位在制備治療婦科疾病藥物中的應用，其特征在于把中藥復方有效部位和藥學上可接受的載體制成膠囊劑、顆粒劑、噴霧劑、注射劑、微囊、片劑、軟膏劑或透皮控釋貼劑劑型的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有治療婦科疾病作用的中藥復方有效部位及其制備方法和其應用，該有效部位是由當歸、川芎、赤芍、蒲黃、五靈脂、沒藥、延胡索組成的中藥復方的水或乙醇提取液，通過乙醇沉淀去雜，然后上大孔吸附樹脂柱，用優(yōu)化濃度的乙醇梯度洗脫純化，制備得到。本發(fā)明根據(jù)中醫(yī)藥理論和婦科疾病發(fā)病機制選取原料配伍組方，通過現(xiàn)代分析儀器和藥理實驗表明，本發(fā)明提供的中藥復方有效部位具有很好的抗子宮平滑肌痙攣、鎮(zhèn)痛、抗炎、調(diào)節(jié)雌激素、孕激素水平、調(diào)節(jié)免疫功能等活性，可用于治療原發(fā)性痛經(jīng)、子宮內(nèi)膜異位癥、急慢性盆腔炎等多種婦科疾病，且成分更清楚，不良反應更低，有望開發(fā)成為新一代治療婦科疾病的藥物。
文檔編號A61K35/24GK101829247SQ20101017717
公開日2010年9月15日 申請日期2010年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月20日
發(fā)明者宿樹蘭, 段金廒, 錢大瑋, 華永慶, 洪敏 , 周衛(wèi) 申請人:南京中醫(yī)藥大學