專利名稱：：一種用于治療痛經的中藥復方有效部位及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種中藥復方，具體涉及一種中藥復方的有效部位及其制備方法和其在制備治療痛經藥物中的應用。
背景技術：
：痛經為婦科最常見的癥狀之一，約有75%的婦女發(fā)生痛經。痛經分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類；原發(fā)性痛經是指月經前及行經期間，下腹及腰部痙攣性疼痛，嚴重時伴有惡心、嘔吐、肢冷，多由寒凝血瘀所致，尤其多見于未婚青年婦女。流行病學研究表原發(fā)性痛經是目前婦科最常見疾病，國外報道婦女原發(fā)性痛經的比例高達43%90%，國內報道痛經發(fā)病率為33.1%，其中原發(fā)性痛經占53.2%，中醫(yī)藥治療婦科疾病有悠久的歷史，其治則為發(fā)時攻邪治標，未發(fā)之時扶正治本，從目前臨床原發(fā)性痛經治療來看，以辨證辨病結合，中醫(yī)藥愈加顯現(xiàn)其獨特的治療優(yōu)勢，但目前治療痛經的復方藥物多存在使用不便、用藥量大、成分復雜、有效部位不明確，復方中起療效的物質基礎不清楚，并存在一定的不良反應等問題，因此很有必要在中醫(yī)藥理論的指導下開發(fā)出一種有效物質明確、療效確切，副作用小、服用方便的治療痛經的藥物。
發(fā)明內容發(fā)明目的本發(fā)明所要解決的技術問題是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種有效成分明確、療效好、副作用小、服用方便的中藥復方的有效部位，本發(fā)明另一個目的是提供該中藥復方的有效部位的制備方法和其在制備治療原發(fā)性痛經藥物中的應用。技術方案為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供的中藥復方的有效部位，它是通過以下方法制備得到的，取由1620份當歸、812份川芎、2226份熟地、812份白芍、812份香附、59份木香、812份延胡索組成的中藥復方，加入總藥材610倍量的水煎煮13次，合并水煎液在2070°C減壓濃縮得濃縮液，再加入乙醇，使乙醇的濃度達到5085%，沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物上大孔吸附樹脂柱，用濃度10%至60%的乙醇梯度洗脫，洗脫液回收溶劑，得有效部位。作為優(yōu)選方案，通過高效液相色譜測定，以上所述的有效部位中含有重量百分比520%的芍藥內酯苷，215%的芍藥苷和0.55%的阿魏酸。作為優(yōu)選方案，所述的中藥復方由18份當歸、9份川芎、24份熟地、9份白芍、9份香附、6份木香、9份延胡索組成。作為優(yōu)選方案，以上所述的大孔吸附樹脂優(yōu)選DlOl型大孔吸附樹脂。本發(fā)明在前期對古今治療痛經方劑進行篩選，在中醫(yī)藥理論的指導下，辨證施治，結合痛經的發(fā)病機理和發(fā)病癥狀，以活血化瘀為治療依據進行篩選處方，確定以當歸、川芎、白芍、熟地配伍活血祛瘀藥香附、木香、延胡索組成七味中藥進行組方，整方具有活血化瘀、養(yǎng)血補血的雙重功效，主用于婦科血虛血瘀病癥，方中當歸補血活血，調經止痛；熟地黃滋陰補血，益精填髓；白芍養(yǎng)血柔肝，緩急止痛；川芎活血祛瘀，行氣止痛，四藥相配，動靜結合，滋而不膩，溫而不燥，補而不滯，剛柔相濟，陰陽調和，營血得生，共奏補血和血之功，再配伍香附、木香、延胡索，使組方補血而不留瘀，行血而不傷血，增加補氣行氣之功，主治經脈氣血凝滯而痛脹者。本發(fā)明在中醫(yī)藥辨證施治的指導下組方，并根據組方藥味的理化性質特點，對整方的提取物通過現(xiàn)代分離純化手段進行去粗存精，根據藥理篩選結果表明，所得的有效部位活性成分更明確，活血化瘀作用強，不良反應更低。本發(fā)明提供的制備中藥復方的有效部位的方法，其包括以下步驟(1)取由1620份當歸、812份川芎、2226份熟地、812份白芍、812份香附、59份木香、812份延胡索組成的中藥復方，加入總藥材610倍量的水煎煮13次，合并水煎液在2070°C減壓濃縮得濃縮液；(2)取步驟(1)得到的濃縮液加入乙醇，使乙醇的濃度達到5085%，沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物；(3)取步驟⑵得到的濃縮物上大孔吸附樹脂柱，用濃度10%至60%的乙醇梯度洗脫，洗脫液回收溶劑，得有效部位。作為優(yōu)選方案，以上所述的中藥復方的有效部位的制備方法，步驟(1)濃縮后使?jié)饪s液的濃度為每HiL藥液含生藥lg。并且步驟(2)中加入高濃度的乙醇，使乙醇的濃度達到85%進行沉淀，此操作的目的是加入乙醇使溶液中乙醇的濃度達到85%，放置，進行沉淀，可以沉淀去除大量極性大的大分子化合物，有利于后續(xù)的分離純化工藝，提高純化效率。并且步驟(3)中所用到的大孔吸附樹脂優(yōu)選DlOl型大孔吸附樹脂，通過對不同極性和不同型號樹脂進行吸附和純化能力的篩選，確定低極性且型號為DlOl的大孔吸附樹脂吸附和純化效果做好，同時本發(fā)明對不同濃度乙醇的洗脫能力進行了優(yōu)選，以總洗脫物得率和芍藥內酯苷、芍藥苷和阿魏酸的含量作為指標，確定濃度為10%至60%的乙醇的洗脫物總含量高，且芍藥內酯苷、芍藥苷和阿魏酸等有效成分含量高、雜質少，確定濃度10%至60%的乙醇為最佳的梯度洗脫溶劑。本發(fā)明提供的中藥復方的有效部位在制備治療痛經藥物中的應用；作為優(yōu)選方案，把中藥復方的有效部位和藥學上可接受的載體制成膠囊劑、噴霧劑、注射劑、微囊、片劑、軟膏劑或透皮控釋貼劑劑型的藥物。本發(fā)明提供的中藥復方的有效部位在制成片劑時把中藥復方的有效部位和載體乳糖或玉米淀粉，需要時加入潤滑劑硬脂酸鎂，混合均勻，然后壓片制成片劑。本發(fā)明提供的中藥復方的有效部位制成膠囊劑時把中藥復方的有效部位和載體乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，然后裝膠囊制成膠囊劑。本發(fā)明提供的中藥復方的有效部位制成顆粒劑時，把中藥復方的有效部位和稀釋劑乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，干燥，制成顆粒劑。有益效果本發(fā)明提供的中藥復方的有效部位和現(xiàn)有技術相比具有以下優(yōu)點(1)本發(fā)明提供的中藥復方的有效部位，根據中醫(yī)藥理論和痛經的發(fā)病機制選取原料配伍組方，各組份配比科學合理，并根據組方各藥味化學成分的性質特點，對整方進行提取，并對提取物通過現(xiàn)代分離純化手段進行去粗存精，根據藥理篩選結果表明，所得的有效部位活性成分更明確、具有很好的活血化瘀、止痛作用，且長期使用無不良反應，且本發(fā)明提供的中藥復方的有效部位可以方便的和藥學上可接受的載體制備成各種劑型的藥物，方便臨床服用。(2)本發(fā)明提供的中藥復方的有效部位的制備方法，可操作性強，提取和分離純化效率高，且制備方法成本低、環(huán)保、可實現(xiàn)工業(yè)化大生產。具體實施例方式根據下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結果僅用于說明本發(fā)明，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本發(fā)明。實施例1中藥復方有效部位的制備取由90克當歸、45克川芎、120克熟地、45克白芍、45克香附、30克木香、45克延胡索組成的中藥復方共420克，浸泡2h后煎煮，第一次加入總藥材10倍量的水煎煮3小時，第二次加入總藥材8倍量的水煎煮2小時，合并水煎液在50°C減壓濃縮得濃度為Ig生藥/mL的濃縮液420ml，再加入濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中乙醇的濃度達到85%，靜置沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物上DlOl型大孔吸附樹脂柱，用濃度10%至60%的乙醇梯度洗脫，洗脫液回收溶劑，得有效部位5.5克，通過高效液相色譜確定其中有效部位中含有0.5克芍藥內酯苷、0.3克芍藥苷和0.15克阿魏酸。實施例2中藥復方有效部位的制備取由200克當歸、100克川芎、240克熟地、90克白芍、90克香附、60克木香、90克延胡索組成的中藥復方共870克，浸泡2h后煎煮，第一次加入總藥材8倍量的水煎煮3小時，第二次加入總藥材6倍量的水煎煮2小時，合并水煎液在60°C減壓濃縮得濃度為Ig生藥/mL的濃縮液870ml，再加入濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中乙醇的濃度達到80%，靜置沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物上DlOl型大孔吸附樹脂柱，用濃度10%至60%的乙醇梯度洗脫，洗脫液回收溶劑，得有效部位10.2克，通過高效液相色譜確定其中有效部位中含有1.8克芍藥內酯苷、0.6克芍藥苷和0.4克阿魏酸。取以上制備得到的有效部位10g，加入藥用淀粉16g，混合均勻，加水制成軟材，過20目篩制粒，干燥，制成顆粒，裝入膠囊，每粒0.2g，或者取有效部位IOg玉米淀粉20g，加入潤滑劑硬脂酸鎂5g，混合均勻，然后壓片制成片劑。實施例3中藥復方有效部位的制備取由200克當歸、120克川芎、260克熟地、120克白芍、120克香附、90克木香、120克延胡索組成的中藥復方共1030克，浸泡2h后煎煮，第一次加入總藥材8倍量的水煎煮3小時，第二次加入總藥材6倍量的水煎煮2小時，合并水煎液在50°C減壓濃縮得濃度為Ig生藥/mL的濃縮液1030ml，再加入濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中乙醇的濃度達到80%，靜置沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物上DlOl型大孔吸附樹脂柱，用濃度10%至60%的乙醇梯度洗脫，洗脫液回收溶劑，得有效部位16.8克，通過高效液相色譜確定其中有效部位中含有2.8克芍藥內酯苷、1.6克芍藥苷和0.8克阿魏酸。取以上制備得到的有效部位15g，加入藥用淀粉30g，混合均勻，加水制成軟材，過20目篩制粒，干燥，制成顆粒，裝入膠囊，每粒0.2g，或者取有效部位15g玉米淀粉30g，加入潤滑劑硬脂酸鎂6g，混合均勻，然后壓片制成片劑。實施例4中藥復方有效部位的制備取由180克當歸、90克川芎、240克熟地、90克白芍、90克香附、60克木香、90克延胡索組成的中藥復方共840克，浸泡2h后煎煮，第一次加入總藥材10倍量的水煎煮3小時，第二次加入總藥材6倍量的水煎煮2小時，合并水煎液在50°C減壓濃縮得濃度為Ig生藥/mL的濃縮液840ml，再加入濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中乙醇的濃度達到85%，靜置沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物上DlOl型大孔吸附樹脂柱，用濃度10%至60%的乙醇梯度洗脫，洗脫液回收溶劑，得有效部位11.5克，通過高效液相色譜確定其中有效部位中含有2.1克芍藥內酯苷、0.75克芍藥苷和0.51克阿魏酸。實施例5中藥復方有效部位對急性血瘀模型大鼠血液流變性及卵巢功能影響的實驗研究實驗方法選用健康清潔級SD雌性大鼠32只，適應性飼養(yǎng)1周后，按隨機數字表法將其分為正常對照組、模型對照組、中藥復方水煎液組、中藥復方有效部位組，每組8只。正常對照組常規(guī)飼養(yǎng)，中藥復方水煎液組和有效部位組每天按30.24g生藥·kg—1劑量(相當于臨床成人劑量的8倍)灌胃給藥4mL/只，模型對照組每天給予同體積生理鹽水，連續(xù)7天。于第7天皮下注射腎上腺素注射液0.08mL/100g體重共2次，兩次間隔4小時，在二次注射腎上腺素注射液之間(前后各間隔2小時)將大鼠浸入冰水(02°C)內5分鐘，處置后停食，制備成寒凝血瘀模型大鼠，第二天早晨取大鼠在10%水合氯醛麻醉下，頸動脈插管取血，以枸櫞酸鈉(109mmOl/L)19抗凝，使用LG-R80電腦血液黏度測試儀(北京世帝科學儀器公司)測定全血黏度和血漿黏度，用溫氏管法測定血沉、血球壓積。血漿凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)和纖維蛋白原(FIB)的測定按照試劑盒說明書嚴格進行。并采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，所有數據以(士s)表示，組間均數比較采用t檢驗，具體實驗結果如表1至表3所示。表1中藥復方有效部位對模型大鼠全血黏度的影響結果(士s，η=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注各組與模型對照組比較，***p<0.001，**p<0.01，*p<0.05。通過表1實驗結果表明，與模型組和中藥復方水煎液組相比本發(fā)明提供的中藥復方有效部位能夠顯著降低寒凝血瘀病理模型大鼠的全血黏度，從而可以起到防治血瘀形成的作用。表2中藥復方有效部位對模型大鼠血漿黏度、血沉、紅細胞壓積的影響結果(i±s，n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>通過表2實驗結果表明，與模型組和中藥復方水煎液組相比本發(fā)明提供的中藥復方有效部位能夠顯著降低寒凝血瘀病理模型大鼠的血漿黏度，并能夠有效使模型大鼠的血沉和紅細胞壓積值恢復到正常值，從而可以起到保持血流正常，防治血瘀形成的作用。表3中藥復方有效部位對對寒凝血瘀大鼠血漿凝血四項的影響(士s，η=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>通過表3實驗結果表明，與模型組相比本發(fā)明提供的中藥復方有效部位能夠顯著降低寒凝血瘀病理模型大鼠的血漿凝血因素中纖維蛋白原(FIB)的含量，并且中藥復方有效部位組的血漿凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)和凝血酶時間(TT)均低于模型組接近正常組，說明本發(fā)明提供的中藥復方有效部位的抗凝血、抗血栓作用強，同時通過比較發(fā)現(xiàn)中藥復方經過分離純化得到的有效部位和原來中藥復方水煎液相比具有更好的抗凝血、防治血瘀形成的作用，可以用于寒凝血瘀導致的痛經疾病的治療。實施例6中藥復方有效部位對家兔體外血漿凝血酶時間(TT)影響的實驗研究實驗方法取新西蘭白兔，雄性，5只，禁食8h后，用戊巴比妥鈉麻醉，頸動脈取血，用3.8%枸櫞酸鈉(血與抗凝劑體積比為91)抗凝收集于塑料離心管中，以3000r^irT1離心lOmin，吸取上層溶液，制備成待測血漿，以5%DMSO作為空白對照，以中藥復方水煎液作為對照組，在測試杯每個道中加入IOyL不同濃度的中藥復方有效部位提取物，空白對照組加入等量的溶解樣品的5%DMS0，再加待測血漿50μL，37°C預溫3min后，加入0.Imol·I^pH7.4Tris_HCl緩沖液稀釋的15UΓ1凝血酶溶液50μL。用LG-PABER-I型血小板聚集凝血因子分析儀測定凝血時間，并以[(給藥組凝血時間-對照組凝血時間)/對照組凝血時間]X100%計算藥物的凝血時間延長率。具體實驗結果如表4所示。表4中藥復方有效部位對家兔體外血漿凝血酶時間(TT)的影響(^±SD,η=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注*與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001通過表4實驗結果表明，本發(fā)明提供的中藥復方有效部位能夠顯著延長家兔體外血漿凝血酶時間，具有統(tǒng)計學意義，并且通過比較發(fā)現(xiàn)中藥復方經過分離純化得到的有效部位和原來中藥復方水煎液相比具有更好的延長家兔體外血漿凝血酶時間的作用，進一步表明本發(fā)明提供的有效部位活性更強，臨床上用藥更少更安全。實施例7中藥復方有效部位鎮(zhèn)痛實驗1、小鼠原發(fā)性痛經試驗(1)小鼠原發(fā)性痛經模型的制備與實驗選用KM種雌性、體重18_22g的雌性小鼠，隨機分組，以雌激素和縮宮素聯(lián)合復制原發(fā)性痛經模型。以0.Olmg.g-1.d-1給小鼠連續(xù)sc苯甲酸雌二醇8d，使小鼠子宮同步化，第8天，ip縮宮素0.OlmL·制造小鼠原發(fā)性痛經動物模型。檢測指標扭體反應。給藥方法將小鼠隨機分成模型對照組、陽性藥物對照組(西樂葆)、原中藥復方水煎液組，有效部位組。正常對照組、模型對照組給予等容積生理鹽水，陽性藥物對照組給予西樂葆0.0411mgi—1^cT1,原中藥復方水煎液組和有效部位組給藥37.Og生藥/kg，各組小鼠每組10只。按上述方法復制原發(fā)性痛經模型。從第6天起，每日上午腹腔注射苯甲酸雌二醇，下午正常對照組給予生理鹽水0.4mL/只，其余各組灌胃相應藥物。連續(xù)3d，于末次給藥后60min，ip縮宮素0.2mL/只，記錄注射后20min內小鼠扭體次數及扭體反應抑制率。(2)實驗結果與分析由表5實驗結果表明，和模型組和原中藥復方水煎液組相比，本發(fā)明提供的中藥復方有效部位具有顯著的抑制小鼠扭體反應的作用(P<0.05或P<0.01)；抑制率均在50%以上，結果表明本發(fā)明提供的中藥復方有效部位具有很好的鎮(zhèn)痛作用。表5中藥復方有效部位對原發(fā)性痛經模型小鼠扭體的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與模型組相比較，*Ρ<0.05**P<0.01本發(fā)明根據中醫(yī)藥理論辨證施治，根據痛經的發(fā)病機理，進行科學組方，并采用優(yōu)選的提取純化方法制備得到有效部位，經實驗結果表明本發(fā)明提供的中藥復方的有效部位具有很好的抗凝血、抗血栓作用，能夠有效抑制血瘀形成，從而起到很好的防治痛經的作用，并且由于去掉了大量非活性物質，有效部位中有效成分更清楚，含量更高，臨床上用藥更少更安全，不良反應更低，因此本發(fā)明提供的中藥復方的有效部位有望開發(fā)成為新一代防治痛經的藥物。以上實施方式只為說明本發(fā)明的技術構思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術的人了解本
發(fā)明內容并加以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍，凡根據本發(fā)明精神實質所做的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍內。權利要求一種中藥復方的有效部位，其特征在于，它是通過以下方法制備得到的，取由16～20份當歸、8～12份川芎、22～26份熟地、8～12份白芍、8～12份香附、5～9份木香、8～12份延胡索組成的中藥復方，加入總藥材6～10倍量的水煎煮1～3次，合并水煎液在20～70℃減壓濃縮得濃縮液，再加入乙醇，使乙醇的濃度達到50～85％，沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物上大孔吸附樹脂柱，用濃度10％至60％的乙醇梯度洗脫，洗脫液回收溶劑，得有效部位。2.根據權利要求1所述的中藥復方的有效部位，其特征在于，所述的有效部位中含有重量百分比520%的芍藥內酯苷，215%的芍藥苷和0.55%的阿魏酸。3.根據權利要求1或2所述的中藥復方的有效部位，其特征在于，所述的中藥復方由18份當歸、9份川芎、24份熟地、9份白芍、9份香附、6份木香、9份延胡索組成。4.根據權利要求3所述的中藥復方的有效部位，其特征在于，所述的大孔吸附樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂。5.一種制備權利要求1所述的中藥復方的有效部位的方法，其特征在于包括以下步驟(1)取由1620份當歸、812份川芎、2226份熟地、812份白芍、812份香附、59份木香、812份延胡索組成的中藥復方，加入總藥材610倍量的水煎煮13次，合并水煎液在2070°C減壓濃縮得濃縮液；(2)取步驟(1)得到的濃縮液加入乙醇，使乙醇的濃度達到5085%，沉淀，分離上清液，濃縮，得濃縮物；(3)取步驟(2)得到的濃縮物上大孔吸附樹脂柱，用濃度10%至60%的乙醇梯度洗脫，洗脫液回收溶劑，得有效部位。6.根據權利要求5所述的中藥復方的有效部位的制備方法，其特征在于，步驟(1)中得到的濃縮液的濃度為每HiL藥液含生藥lg。7.根據權利要求5所述的中藥復方的有效部位的制備方法，其特征在于，步驟(2)中加入乙醇，使乙醇的濃度達到85%進行沉淀。8.根據權利要求5所述的中藥復方的有效部位的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的大孔吸附樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂。9.權利要求1或2所述的中藥復方的有效部位在制備治療痛經藥物中的應用。10.根據權利要求9所述的中藥復方的有效部位在制備治療痛經藥物中的應用，其特征在于把中藥復方有效部位和藥學上可接受的載體制成膠囊劑、噴霧劑、注射劑、微囊、片劑、軟膏劑或透皮控釋貼劑劑型的藥物。全文摘要本發(fā)明公開了一種中藥復方的有效部位及其制備方法和其應用，該有效部位是由當歸、川芎、熟地、白芍、香附、木香和延胡索組成的中藥復方的水煎液通過乙醇沉淀去雜，然后上大孔吸附樹脂柱，用乙醇梯度洗脫純化，洗脫液回收溶劑制備得到。本發(fā)明根據中醫(yī)藥理論和痛經發(fā)病機制選取原料配伍組方，通過藥理實驗表明，本發(fā)明提供的中藥復方有效部位具有很好的抗凝血，防治血瘀形成的作用，且成分更清楚，不良反應更低，有望開發(fā)成為新一代治療痛經的藥物。文檔編號A61K31/7048GK101822762SQ20101017717公開日2010年9月8日申請日期2010年5月20日優(yōu)先權日2010年5月20日發(fā)明者劉培,唐于平,宿樹蘭,段金廒,郭建明申請人:南京中醫(yī)藥大學