專利名稱：：葛根素衍生物的制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，主要涉及葛根素衍生物的制備方法及其在治療心腦血管疾病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：葛根素是一種天然的低毒有效的心腦血管系統(tǒng)疾病治療藥物，藥理作用廣泛，臨床上已應(yīng)用于治療冠心病、心絞痛、腦梗塞，缺血性腦血管病、改善血小板功能、減少糖尿病微量清蛋白、預(yù)防糖尿病腎病等。但是葛根素口服吸收生物利用度較差，使口服劑型的應(yīng)用受到限制，臨床主要使用葛根素的注射液劑型，為方便應(yīng)用，需要改善葛根素溶解性和生物利用度。目前相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道主要在于進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾或采用特殊劑型。楊若林等曾對(duì)葛根素進(jìn)行了一系列甲基化、甲氧基、異丙基、苯甲?；?、三苯甲基等的衍生化改造，進(jìn)行兔眼血流量試驗(yàn)表明所得結(jié)構(gòu)修飾后的化合物中三苯甲基化和乙?；唢@示可增加血流量。另外也有報(bào)導(dǎo)對(duì)其它黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)修飾，王曉莉嘗試將7-羥基黃酮分別與阿魏酸、煙酸、對(duì)氯苯氧異丁酸合成酯。閆炳雙等嘗試以B環(huán)帶不同取代基的7-羥基黃酮為母體，與對(duì)血栓素A2合成酶具有較強(qiáng)抑制作用的咪唑和乙酰水楊酸成酯。盡管在現(xiàn)有技術(shù)中有諸多對(duì)葛根素進(jìn)行了一系列衍生化改造，但是，我們發(fā)現(xiàn)目前尚未見將葛根素用棕櫚酸(十六烷基酸)進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，制備十六烷基?；鸶丶捌溲苌锏膱?bào)導(dǎo)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有葛根素藥品生物利用度較差的問題，提供一種葛根素結(jié)構(gòu)修飾衍生物——C12,烷基或烯基酰基葛根素及其衍生物。本發(fā)明所述的C12,烷基或烯基?；鸶丶捌溲苌镉孟率鐾ㄊ?I)表示OR6OR5'",^..OR411I13100^Sor9:14淵3κ。麵·3'^1(I)其中，Rl、R2、R3、R4、R5或R6為氫、乙?；12_30烷基?；駽12_3(1烯基?；?，且Rl、R2、R3、R4、R5、R6中至少一個(gè)為C12_3(1烷基?；?。其中Rl、R2或R3是指氫、乙酰基或C12_3(1烷基酰基或烯基?；?；R4、R5、或R6是指氫。其中R1，R2或R3是指乙酰基或C12_3(1烷基?；蛳┗；?；R4、R5、或R6是指氫。其中Rl或R2是指乙酰基或C12_3Q烷基?；蛳┗；?、14、15、或16是指氫。其中Rl或R3是指乙?；駽12,烷基?；蛳┗；籖2、R4、R5或R6是指氫。其中Rl是指C12_3Q烷基?；蛳┗；?；R2、R3、R4、R5或R6是指氫。其中C12,烷基酰基或C12,烯基?；x自十六烷基?；?、二十二碳六烯酸基、二十烷基酰基、優(yōu)選的，本發(fā)明所述的葛根素衍生物為7-十六烷基?；鸶?，7-十六烷基?；?4’-十六烷基?；鸶兀?’_十六烷基葛根素，7-二十二碳六烯酸基葛根素，7-二十二碳六烯酸基_4’-二十二碳六烯酸基葛根素，4’-二十二碳六烯酸基葛根素。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供所述葛根素衍生物的制備方法。本發(fā)明所述葛根素衍生物的制備方法，包括以下步驟將葛根素溶解于溶劑中，將C12,烷基?；駽12,烯基?；u加入到溶液中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，將溶液倒入適量水中，有白色固體析出，抽濾，將此固體晾干，得C12,烷基?；駽12,烯基?；鸶匮苌?；具體如十六烷基?；鸶氐闹苽浞椒ǎㄈ缦虏襟E(1)十六烷基酰氯的制備將十六烷基酰氯與二氯亞砜112的摩爾比混合，以吡啶為溶劑，在6070°C油浴中反應(yīng)23小時(shí)，減壓蒸除溶劑，得十六烷基酰氯，置于DMF中備用；(2)制備葛根素衍生物將葛根素溶解于DMF中，再加入無水碳酸鈉，室溫?cái)嚢?020min，在冰峪攪拌的條件下，將上述十六烷基酰氯加入到堿性溶液中，室溫?cái)嚢柽^夜，將溶液倒入適量水中，有白色固體析出，抽濾，將此固體晾干，得十六烷基?；鸶匮苌铮?3)葛根素衍生物的分離純化采用常規(guī)硅膠柱層析手段，將上述反應(yīng)得到的十六烷基?；鸶匮苌镞M(jìn)行分離純化。其中，步驟(2)所述的堿性溶劑優(yōu)選為無水碳酸鈉的DMF。其中，步驟(2)所述十六烷基酰基與葛根素的摩爾比優(yōu)選是231.本發(fā)明所述的葛根素及其衍生物對(duì)于治療心腦血管疾病有很好的效果。—種藥物組合物，包括本發(fā)明所述的葛根素衍生物。本發(fā)明的藥物組合物，根據(jù)需要可以加入藥學(xué)上接受的藥物載體。本發(fā)明的組合物可以制備成任何可藥用的劑型。優(yōu)選的，本發(fā)明的組合物制備成口服制劑或注射劑。通過試驗(yàn)，進(jìn)一步證明了本發(fā)明的葛根素衍生物對(duì)體外血小板聚集反應(yīng)具有非常顯著的劑量依賴性的抑制作用，在治療心腦血管疾病方面具有良好效果。本發(fā)明的葛根素衍生物解決了現(xiàn)有葛根素藥物產(chǎn)品的不足，克服了其口服吸收生物利用度較差，穩(wěn)定性差，臨床僅有注射劑等問題。另外，本發(fā)明的葛根素衍生物的制備方法簡(jiǎn)單，成本低，適合大規(guī)模生產(chǎn)。具體實(shí)施例方式通過以下具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但不作為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1十五烷基?；鸶匮苌锏闹苽鋵?.5g(約1.9mmol)的棕櫚酸與ImL的氯化亞砜混合，加入吡啶1滴，將油浴在50min內(nèi)緩慢升至65°C，恒溫反應(yīng)3h，減壓蒸除液體，加入2mLDMF待用。將0.3g(約0.7mmol)葛根素用適量DMF溶解，加入0.13g(約1.2mmol)無水碳酸鈉，室溫?cái)嚢鑜Omin。在冰浴攪拌條件下緩慢滴加十六烷基酰氯，室溫反應(yīng)過夜，將反應(yīng)液倒入適量水中，抽濾，得白色固體。固體經(jīng)常規(guī)硅膠柱層析，氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，硅膠薄層層析(CHCl3MeOH=101)檢測(cè)，收集合并&=0.3餾分，常規(guī)濃縮，得7-十六烷基?；鸶?0mg，如圖(A)。其中，Rl=H、R3=H、R4=H、R5=H、R6=H.<image>imageseeoriginaldocumentpage6</image>7-十六烷基?；鸶?HNMR(300MHz,CD3OD)δ8.21(s,1H)，8·03-8.Ol(d,J=7.87Hz,1H)，7·4-7.38(dd,J=7.88Hz，2H)，6·96-6.84(dd,J=8.28Hz，3H)，5·71(s,1H)，5.22(s，1H)，3.96-3.31(m,6H)，2.08(s,2H)，1.29-0.88(m,31H).實(shí)施例2二十烷基?；鸶匮苌锏闹苽鋵?.5g二十烷酸與ImL的氯化亞砜混合，加入吡啶1滴，將油浴在50min內(nèi)緩慢升至65°C，恒溫反應(yīng)3h，減壓蒸除液體，加入2mLDMF待用。將0.3g(約0.7mmol)葛根素用適量DMF溶解，加入0.13g(約1.2mmol)無水碳酸鈉，室溫?cái)嚢鑜Omin。在冰浴攪拌條件下緩慢滴加十六烷基酰氯，室溫反應(yīng)過夜，將反應(yīng)液倒入適量水中，抽濾，得白色固體。固體經(jīng)常規(guī)硅膠柱層析，氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，硅膠薄層層析(CHCl3MeOH=101)檢測(cè)，收集合并Rf=0.3餾分，減壓濃縮，得7-二十烷基?；鸶?0mg。實(shí)施例37-二十烷?；?4’-葛根素衍生物的制備將1.Og二十烷酸與ImL的氯化亞砜混合，加入吡啶1滴，將油浴在50min內(nèi)緩慢升至65°C，恒溫反應(yīng)3h，減壓蒸除液體，加入2mLDMF待用。將0.3g(約0.7mmol)葛根素用適量DMF溶解，加入0.13g(約1.2mmol)無水碳酸鈉，室溫?cái)嚢鑜Omin。在冰浴攪拌條件下緩慢滴加十六烷基酰氯，室溫反應(yīng)過夜，將反應(yīng)液倒入適量水中，抽濾，得白色固體。固體經(jīng)常規(guī)硅膠柱層析，氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，硅膠薄層層析(CHCl3MeOH=101)檢測(cè)，收集合并Rf=0.3餾分，減壓濃縮，得7-二十烷基?；鵢4’-二十烷基?；鸶?0mg。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ8·21(s，1H)，8·03-8.Ol(d，J=7.87Hz,1H),7.5-7.42(dd,J=7.88Hz,2H)，6.86-6.84(dd,J=8.28Hz,3H)，5.61(s，1H)，5.22(s,1H)，3.96-3.31(m,6H)，2.10(s，2H)，1.09-0.88(m,41H).實(shí)施例4二十二碳六烯酸基葛根素衍生物的制備將0.5g二十二碳六烯酸(DHA)與ImL的氯化亞砜混合，加入吡啶1滴，將油浴在50min內(nèi)緩慢升至65°C，恒溫反應(yīng)3h，減壓蒸除液體，加入2mLDMF待用。將0.3g(約0.7mmol)葛根素用適量DMF溶解，加入0.13g(約1.2mmol)無水碳酸鈉，室溫?cái)嚢鑜Omin。在冰浴攪拌條件下緩慢滴加二十二碳六烯酸酰氯，室溫反應(yīng)過夜，將反應(yīng)液倒入適量水中，抽濾，得白色固體。固體經(jīng)常規(guī)硅膠柱層析，氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，硅膠薄層層析(CHCl3MeOH=101)檢測(cè)，收集合并Rf=0.3餾分，常規(guī)濃縮，得7-二十二碳六烯酸基葛根素lOOmg。實(shí)施例5葛根素衍生物抑制血小板聚集活性實(shí)驗(yàn)(以7-十六燒基?；鸶貫槔?材料葛根素(四川省玉鑫藥業(yè)有限公司提供)、自制7-十六烷基酰基葛根素(純度>95%)，二磷酸腺苷(ADP，上海索萊寶生物科技有限公司)，生理鹽水。新西蘭大耳白家兔2只(第四軍醫(yī)大學(xué)提供)，體重2.O2.5kg，分籠飼養(yǎng)，食固體飼料，自由飲水。室溫1820°C，相對(duì)濕度65%70%。儀器RYXN_96B多功能智能血液凝集儀(上海通用機(jī)電技術(shù)研究所)方法(1)溶液的配制精密稱取7-十六烷基酰基葛根素，用0.5%DMSO溶液配成高、中、低三個(gè)濃度，摩爾濃度分別為40mmol.r\l5mmol.r\5mmol.L—1。同理精密稱取葛根素，用生理鹽水配成等摩爾的上述高、中、低三個(gè)濃度的溶液。以7-十六烷基酰基葛根素溶液為實(shí)驗(yàn)組，葛根素溶液為對(duì)照組，測(cè)定含一定量藥物血漿血小板的聚集率，以血小板聚集抑制率評(píng)價(jià)藥物的藥效作用。(2)血漿的準(zhǔn)備兔耳中央動(dòng)脈取血5ml，置入肝素鈉抗凝管。500r/min轉(zhuǎn)速離心5min，取上清液為富血小板血漿；然后以3000r/min轉(zhuǎn)速離心lOmin，分離血漿獲得貧血小板血漿。以貧血小板血漿作空白調(diào)試儀器。(3)藥物抗血小板聚集實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)分成兩組，7-十六烷基?；鸶貙?shí)驗(yàn)組和葛根素對(duì)照組，每組測(cè)試3個(gè)高中低濃度，每個(gè)濃度制備3個(gè)樣品。精確移取富血小板血漿200μ1與血液凝集儀的測(cè)試管中，分別加入實(shí)驗(yàn)溶液和對(duì)照溶液50μ1。電動(dòng)攪拌lmin，37°C恒溫孵化6min后，加入ADP血小板聚集誘導(dǎo)劑20μ1。按比濁法測(cè)定加入血小板聚集誘導(dǎo)劑ADP后，血漿在Smin內(nèi)的最大聚集率。所有血漿試驗(yàn)必須在2h內(nèi)完成聚集率的測(cè)定。將多測(cè)得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以血小板聚集抑制率(；士s)表示，相同濃度下實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組對(duì)血小板聚集抑制率數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的t檢驗(yàn)。結(jié)果葛根素衍生物對(duì)血小板聚集的抑制作用與相同實(shí)驗(yàn)條件下葛根素的抗血小板聚集作用的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行考察，以確定葛根素衍生物抗血小板聚集的效果。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表1。表1葛根素衍生物血小板聚集作用的影響(n=3J士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>**與相同濃度的葛根素相比的血小板聚集抑制率比較的t檢驗(yàn)Ρ<0.Ol結(jié)論葛根素衍生物對(duì)兔血小板聚集反應(yīng)具有非常顯著的抑制作用，藥效存在劑量依賴性。在相同條件下，葛根素衍生物抑制血小板聚集作用顯著強(qiáng)于葛根素。預(yù)示其在心腦血管疾病治療方面具有很好的應(yīng)用前景。本試驗(yàn)僅以實(shí)施例1制備得到的7-十六烷基?；鸶貫槔景l(fā)明的其他葛根素衍生物也具有同樣優(yōu)良的治療效果。實(shí)施例6-J-乙?；?4’-乙?；鸶貙?duì)制備于25mL燒瓶中依次加入0.3g(0.72mmol)葛根素，2mLDMF，攪拌使其完全溶解，再加入0.15g(1.44mmol)無水碳酸鈉，然后在冰浴攪拌下，用恒壓滴液漏斗緩慢加入0.ISg(LSmmol)乙酸酐，加完后室溫?cái)嚢柽^夜。將反應(yīng)液倒入適量水中，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得粗7-乙?；?4’-乙?；鸶兀ㄟ^常規(guī)柱層析(氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫)分離，硅膠薄層層析(CHCl3MeOH=101)檢測(cè)，收集合并Rf=0.3餾分，減壓濃縮，得純品7-乙?；?4，-乙酰基葛根素0.15g。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ8.44(s，1H)，8.22-8.19(d，J=8.45Hz，1H)，7.64-7.61(dd，J=8·20Ηζ，2Η)，7.29-7.18(dd,J=14.80Ηζ,3Η)，5.68(s,1Η)，3.95-3.50(m,6Η)，2.41-2.04(s,6H)，1.78-1.29(s,4H).實(shí)施例7全乙酰基葛根素的制備于25mL燒瓶中依次加入0.3g(0.72mmol)葛根素，2mL吡啶，攪拌使其完全溶解，在冰浴攪拌下用恒壓滴液漏斗緩慢加入0.74g(7.2mmol)乙酸酐，加完后室溫?cái)嚢柽^夜。將反應(yīng)液倒入適量水中，有白色固體析出，抽濾，晾干，固體經(jīng)常規(guī)柱層析(氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫)分離，硅膠薄層層析(CHCl3MeOH=101)檢測(cè)，收集合并Rf=0.3餾分，減壓濃縮，得純品全乙?；鸶?.2g。乙?；鸶?Hnmr(SOOMHzAD3OD)δ8.55-8.24(s，1H)，7.90(s，1H)，7.65-7.62(dd，J=8.29Hz，2H)，7.48-7.18(dd，J=7.35Hz，2H)，5.86-5.13(m,3H)，4.44-4.07(m,2H)，2.46-0.29(m,12H).實(shí)施例8葛根素衍生物的制備根據(jù)本發(fā)明的制備方法還可以制備成下列化學(xué)式所述的葛根素衍生物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>以葛根素衍生物為活性成分的藥物組合物實(shí)施例9、顆粒劑取實(shí)施例1-7任意一個(gè)葛根素衍生物100g，加入1.5倍量的糊精，0.5%蔗糖，1.5%微晶纖維素，用適量乙醇溶解制成軟材，制粒，60°C鼓風(fēng)干燥，制粒，整粒，得顆粒劑。實(shí)施例10、滴丸取實(shí)施例1-7任意一個(gè)葛根素衍生物100g，加入IOOOg的聚乙二醇，混合均勻，熔融，上滴丸機(jī)，制成滴丸。實(shí)施例11、口腔崩解片取實(shí)施例1-7任意一個(gè)葛根素衍生物100g，加入5%交聯(lián)聚維酮，0.的硬脂酸鎂，50%的微晶纖維素，用適量乙醇溶液制成軟材，制粒，60°C鼓風(fēng)干燥，制粒，整粒，壓制成片，即得口腔崩解片。實(shí)施例12、粉針劑取實(shí)施例1-7任意一項(xiàng)葛根素衍生物0.5g，葡萄糖4.5g、硫代硫酸鈉0.9g和蒸餾水1ml，上述組分混合均勻后，冷凍干燥，分裝500支，即得粉針劑。實(shí)施例13、膠囊劑取實(shí)施例1-7任意一項(xiàng)葛根素衍生物100g，加入等量淀粉，蔗糖和硬脂酸鎂，制粒，裝入膠囊，即得膠囊劑。實(shí)施例14、片劑取實(shí)施例1-7任意一項(xiàng)葛根素衍生物100g，與淀粉，羧甲基纖維素鈉、滑石粉混合均勻，制粒，壓片即得片劑。實(shí)施例15、口服液取實(shí)施例1-7任意一項(xiàng)葛根素衍生物2g，與糖漿4g、溶于IOOml的純凈水中，均質(zhì)，過濾，經(jīng)過高溫瞬時(shí)滅菌(135°C，4s)。無菌灌裝、分裝，制得口服液。上述實(shí)施例內(nèi)的組分量可以根據(jù)生產(chǎn)需要同時(shí)擴(kuò)大或縮小比例。所選用藥物的活性成分不限于實(shí)施例1-7所述的葛根素衍生物，還可以為7-十六烷基?；鸶?，7-十六烷基?；?4’-十六烷基酰基葛根素，4’-十六烷基葛根素，7-二十二碳六烯酸基葛根素，7-二十二碳六烯酸基_4’-二十二碳六烯酸基葛根素，4’_二十二碳六烯酸基葛根素或其通式(I)所述的葛根素衍生物。權(quán)利要求葛根素衍生物，其結(jié)構(gòu)通式(I)其中，R1、R2、R3、R4、R5或R6為氫、乙?；?、C12-30烷基?；駽12-30烯基?；襌1、R2、R3、R4、R5、R6中至少一個(gè)為C12-30烷基?；?。FSA00000086586100011.tif2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葛根素衍生物，其特征在于，所述的RpR2或R3為氫、乙酰基、C12,烷基?；蛳┗；琑4、R5、或R6為氫。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葛根素衍生物，其特征在于，所述的禮、&或13為乙?；12,烷基酰基或烯基?；?；R4、R5、或R6是為氫。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葛根素衍生物，其特征在于，所述的R1或R2為乙?；?、C12,烷基酰基或烯基?；?；R3、R4、R5、或R6為氫。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葛根素衍生物，其特征在于，所述的R1或R3為乙酰基、C12,烷基?；蛳┗；?；r2、R4、R5或R6為氫。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葛根素衍生物，其特征在于，所述的R1為C12,烷基?；蛳┗；籖2、R3>R4>R5或R6是指氫。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葛根素衍生物，其特征在于，C12,烷基酰基或烯基?；x自十六烷基酰基、二十二碳六烯酸基、二十烷基?；?。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葛根素衍生物，其特征在于，選自7-十六烷基?；鸶?；7-十六烷基?；?4’-十六烷基?；鸶兀?’-十六烷基葛根素；7-二十二碳六烯酸基葛根素；7-二十二碳六烯酸基_4’-二十二碳六烯酸基葛根素；4’-二十二碳六烯酸基葛根素。9.權(quán)利要求8所述的葛根素衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)十六烷基酰氯的制備將十六烷基酰氯與二氯亞砜112的摩爾比混合，以吡啶為溶劑，在6070°C油浴中反應(yīng)23小時(shí)，減壓蒸除溶劑，得十六烷基酰氯，置于DMF中備用；(2)制備葛根素衍生物將葛根素溶解于DMF中，再加入無水碳酸鈉，室溫?cái)嚢?020min,在冰峪攪拌的條件下，將上述十六烷基酰氯加入到堿性溶液中，室溫?cái)嚢柽^夜，將溶液倒入適量水中，有白色固體析出，抽濾，將此固體晾干，得十六烷基?；鸶匮苌?；(3)葛根素衍生物的分離純化采用常規(guī)硅膠柱層析手段，將上述反應(yīng)得到的十六烷基?；鸶匮苌镞M(jìn)行分離純化；其中，步驟(2)所述的堿性無水溶液為無水碳酸鉀的DMF溶液，所述十六烷基酰氯與葛根素的摩爾比是231。10.一種藥物組合物，其特征在于，含有權(quán)利要求1-8所述的任一葛根素衍生物或兩種及以上葛根素衍生物。11.權(quán)利要求9所述的藥物組合物在制備治療心腦血管疾病中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及結(jié)構(gòu)如通式(I)所示的葛根素衍生物及其制備方法。本發(fā)明所述葛根素衍生物對(duì)于治療心腦血管疾病有良好的效果。文檔編號(hào)A61P7/02GK101805332SQ20101016004公開日2010年8月18日申請(qǐng)日期2010年4月30日優(yōu)先權(quán)日2010年4月30日發(fā)明者張陽,王惟嬌,王汝濤,胡惠靜,陳濤申請(qǐng)人:西安力邦制藥有限公司