專利名稱：一種建立潰瘍性結腸炎化學誘癌動物模型的方法
技術領域：
本發明涉及生物醫學領域，具體涉及炎癥性腸病、結腸原位癌及動物模型制備領域，更具體涉及一種潰瘍性結腸炎化學誘癌的動物模型，以及建立該模型的方法及其用途。
背景技術：
潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)是一類病因未明的腸道非特異炎性疾病，本病具有難治性、易復發、癌變傾向的特點。調查發現，潰瘍性結腸炎患者結直腸癌的發生率10年為2%，20年為8%，30年之后達18%。在UC患者的死因中，癌癥占到 10% 15%的比例，UC致癌已成為當前研究的熱點之一。由于臨床研究中收集患者標本耗時長，且藥物干預受諸多條件限制，相對來說動物模型是較理想的替代研究途徑。目前報道的此類模型主要有自發型、基因工程型和化學誘變型，后者具有造模價格低、方法簡便的特點，且能在病理及分子機制方面較好模擬人類腸炎相關的結直腸癌，可應用于大部分相關研究。當前建立的該種動物模型要么造模時間較長，多在20周左右，要么死亡率高、致癌效果不穩定，目前尚無成熟穩定的動物模型出現，因此建立一種科學性、重復性、穩定性的動物模型具有重要意義，可以此為基礎深入探討非特異性腸炎癌變的分子機制，并進一步研究藥物治療UC化學致癌的療效及作用機制。
發明內容
本發明的目的一方面是建立一種潰瘍性結腸炎化學誘癌的動物模型，提供該模型的具體方法，另一目的是提供上述模型的用途。本發明第一方面是提供潰瘍性結腸炎化學誘癌的動物模型的方法，包括以下主要步驟(i)實驗前一天給以雌性Balb/c小鼠一次性腹腔注射偶氮氧甲烷 (azoxymethane, Α0Μ)作為致癌刺激，劑量為 100mg/kg。(ii)實驗第一天在飲水中加葡聚糖硫酸鈉(dextran sulfate sodium,DSS)飼喂， 濃度為3%和5 %，喂養一周，然后撤下藥水改正常飲水喂養2周。(iii)重復(ii)2 個循環。(iv)在第9周末處死小鼠，縱行剖開結腸，拍攝大體腫瘤，取腫瘤腸段福爾馬林固定，切片HE染色觀察腫瘤病理分期。另一方面，本發明的用途包括本實驗最終得到兩種濃度的癌變模型，3% DSS者病理為中度不典型增生，藥物治療可以逆轉，適用于研究比較藥物的療效及新藥抗癌治療觀察。5% DSS者病理為重度不典型增生或原位癌，對藥物治療不如3% DSS敏感，更適合于研究腸炎癌變的分子機制。本發明的主要優點在于造模時間縮短為9周，因此可縮短藥物實驗的時間。3% 和5%兩組死亡率低，僅有后組10% (1/10)的死亡率。實施方法簡單，僅實驗前腹腔注射一次致癌劑，后續采用DSS維持炎癥方便。最主要優點在于兩組的病理分期具有明顯差異，即 3%組均為中度不典型增生，而5%組為重度不典型增生或原位癌，說明本發明非常穩定、實用。
圖1為本發明結腸腫瘤大體觀，標尺11 13cm處可見遠端結腸腫瘤圖2為本發明正常結腸病理光鏡圖(HE，X 400)圖3為本發明3% DSS組結腸腫瘤病理光鏡圖(HE，X 400)圖4為本發明5% DSS組結腸腫瘤病理光鏡圖(HE，X 400)
具體實施例方式實施例1建立3 % DSS潰瘍性結腸炎AOM化學致癌動物模型1.1實施步驟1. 1. 1選取體重17 20g的4 6周齡雌性Balb/c小鼠20只，清潔級，由中科院上海實驗動物中心提供，生產許可證號“SCXK (滬)2007-0005",隨機分為正常組和實驗組， 每組10只。DSS選取分子量3. 6 5萬Da。全部小鼠每周稱量體重一次。正常組不做任何藥物干預。實驗組于實驗前一天腹腔注射AOM 10mg/kgo實驗第一天飲水換為3% DSS 溶液，喂養一周，然后換正常飲水2周，這樣3周算一個循環，如此總共進行3個循環共9周時間。1. 1.2 9周末全部小鼠眼球采血，離心分裝，ELISA法備測C-反應蛋白(CRP)含量反應炎癥活動度。全部小鼠處死，分離結腸，縱行剖開生理鹽水洗凈拍照。選取腫瘤部位 (正常組選取結腸中間部位)腸段中性甲醛固定M小時，脫水石蠟包埋切片，做HE染色觀察。1.2現象及結果1. 2. 1動物表現實驗組動物在喂養3% DSS第3天開始出現稀便，第5 7天出現血便，肛門口可見大便粘附，小鼠精神不振，毛色粗糙，失去原有白亮光澤。換正常飲水一周內恢復正常。第 2個循環換正常飲水2周內大便及毛色可恢復正常。在第3個循環，換正常飲水2周內大便及毛色不能恢復正常，至實驗結束時小鼠仍有肛口稀便粘附。本實施方法無動物死亡。1. 2. 2血CRP指標變化ELISA法檢測實驗組與正常組血漿CRP變化發現，CRP數值在實驗組明顯高于正常組，t-檢驗P < 0. 05,差異有統計學意義，如表1所示表 權利要求
1.一種建立潰瘍性結腸炎化學誘癌動物模型的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)小鼠隨機分為正常組和實驗組，每組10只。DSS選取分子量3.6 5萬Da。全部小鼠每周稱量體重一次。正常組不做任何藥物干預。實驗組于實驗前一天腹腔注射AOM 10mg/kgo實驗第一天飲水換為3%或5% DSS溶液，喂養一周，然后換正常飲水2周，這樣 3周算一個循環，如此總共進行3個循環共9周時間。(2)9周末全部小鼠眼球采血，離心分裝，ELISA法備測C-反應蛋白(CRP)含量反應炎癥活動度。全部小鼠處死，分離結腸，縱行剖開生理鹽水洗凈拍照。選取腫瘤部位(正常組選取結腸中間部位)腸段中性甲醛固定對小時，脫水石蠟包埋切片，做HE染色觀察。小鼠有精神不振、體型消瘦、毛色粗糙無光澤，血CRP升高，病理提示中度、重度不典型增生或原位癌，則該模型建立成功。
2.根據權利要求1所述的一種建立潰瘍性結腸炎化學誘癌動物模型的方法，其特征在于選取動物為體重17 20g的4 6周齡雌性Balb/c小鼠。
全文摘要
本發明涉及生物醫學領域，具體涉及一種潰瘍性結腸炎化學誘癌的動物模型，建立該模型的方法及其用途。本發明采用雌性Balb/c小鼠，一次性AOM腹腔注射聯合三循環DSS喂養，造模時間可縮短為9周，最終得到3％和5％DSS兩種模型，病理分期分別為中度不典型增生和重度不典型增生或原位癌，可分別適用于篩選預防藥物和研究分子機制。本發明縮短了常規造模時間，所述方法簡便，結果穩定、實用。本發明提供一種建立潰瘍性結腸炎化學誘癌模型的方法，本發明所提供方法建立的動物模型具有重要的實用價值和理論研究價值。
文檔編號A61K31/655GK102232963SQ20101015377
公開日2011年11月9日 申請日期2010年4月22日 優先權日2010年4月22日
發明者趙航, 鄭海明, 鄭萍 申請人:趙航, 鄭海明, 鄭萍