專利名稱：一種口服紫杉醇納米粒及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種納米粒及其制備方法，具體地涉及一種口服紫杉醇納米粒及其制備方法。
背景技術：
紫杉醇是紫杉醇(Paclitaxel)最初是由美國科學家Wall和Wani于1971年從太平洋短葉紅豆杉(Taxus drevifolia)的樹皮中提取分離得到的一種天然活性產物，四環二萜類生物堿，分子式為C47H51O14N,分子質量853. 9，具有高度親脂性，不溶于水，但能在氯仿、 甲醇、乙醇、乙醚等有機溶劑中可溶，血漿蛋白結合率89% 98%等特性。化學結構中文名稱為5β，20_ 環氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羥基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13-(2R，3S)-N-苯甲酰基-3-苯基異絲氨酸酯。美國從1983年開始經過7年3期臨床試驗研究，于1992年經美國食品與藥品管理局(FDA)批準上市，其代表藥物是紫杉醇(泰素)和多烯紫杉醇(泰索帝)，用于治療其他抗癌藥物無效的晚期卵巢癌的治療，1994年又批準用于治療晚期乳腺癌。現紫杉醇作為一種新型廣譜抗腫瘤藥物已廣泛用于臨床，特別在晚期卵巢癌、乳腺癌、非小細胞肺癌等惡性腫瘤的治療中具有明確療效。紫杉醇具有高度親脂性，不溶于水，因此，口服給藥生物利用度極低，幾乎不吸收， 目前多為注射給藥，并且加入了較大量的表面活性劑，注射后藥物與輔料的不良反應均較大。注射給藥患者的順應性也較差。因此，開發高生物利用度紫杉醇口服制劑將具有較好市場前景。專利申請文獻CN200710047767. X公開了一種紫杉醇納米粒子，通過如下制備方法獲得將含有表面活性劑的紫杉醇的醇溶液置于室溫條件下，隨著醇溶劑的揮發，制得紫杉醇納米粒子；將紫杉醇納米粒子溶解在殼聚糖溶液中作為水相，與油相混合后在 25-35°C的恒溫下攪拌1 4小時，制備乳液；用交聯劑將殼聚糖包裹的紫杉醇納米粒子從乳液中固化析出，用有機溶劑洗滌粒子，真空干燥后即可獲得載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子。本方法無須對殼聚糖進行任何化學修飾，所制備的載藥納米粒子對腫瘤細胞有明顯的緩釋促凋亡作用。專利CN02133333. 5是一種紫杉醇納米微粒的制備方法，是在紫杉醇的醇溶液中添加0. 05-5%的表面活性劑，在高速攪拌和超聲震動條件下，將母液滴加到5-500倍純凈水中，并經一定時間存放后即成為納米紫杉醇懸浮液，經冷凍干燥等方法，即可獲得紫杉醇納米微粒。本發明的方法可靠，操作簡便，所需能耗很低，不產生環境污染，所制得的納米紫杉醇具有更高的生物活性，可以充分發揮紫杉醇的治療效果。專利申請文獻CN200610028745.4公開了類紫杉醇納米制劑在制備腹腔淋巴靶向化療藥物中的新用途，該類紫杉醇納米制劑的粒子具有親水表面修飾，平均粒徑控制在 100 300納米之間。通過腹腔注射后，該納米制劑可有效減少腹腔巨噬細胞的吞噬并明顯提高類紫杉醇對腹膜后淋巴的靶向性，該給藥系統可用于卵巢癌、胃癌、直腸癌等具有腹膜腔內淋巴道擴散的典型腫瘤的淋巴靶向治療，在防治淋巴轉移方面取得較好效果。
專利申請文獻CN200910076874. 4公開一種紫杉醇納米乳注射液，其中按重量份數計，該注射液包含紫杉醇1 3份，磷脂10 30份，聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯50 100份，助表面活性劑10 70份，溶劑30 80份。該注射劑可以提高紫杉醇的水溶性， 提高藥物在體內的生物利用度，減少原有制劑中的聚氧乙烯蓖麻油在臨床應用中的毒副作用，增強藥物的穩定性，減少劑量，減少因配伍產生的變化。目前，尚沒有作為口服應用的紫杉醇納米粒專利，且在紫杉醇納米粒的應用中存在一個很大的缺陷在溶液相中其穩定性不高，藥物紫杉醇容易析出。有文獻采用了凍干的方法以提高其穩定性，但凍干后容易出現包封率降低過大，納米粒粒徑變大的問題。
發明內容
本發明的目的是公開一種供口服應用的紫杉醇納米粒，且能克服現有技術中缺陷、更適用于醫藥領域的紫杉醇納米粒。本發明的紫杉醇納米粒由下列原料成分組成活性成分紫杉醇、可生物降解材料丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)、表面活性劑和膜修飾材料。本發明的紫杉醇納米粒結構為 紫杉醇包封于PLGA中，形成納米粒，表面被覆表面活性劑和膜修飾材料，再加干燥保護劑后干燥成納米粒粉末。本發明中，上述各原料組分的重量份數比較佳的為紫杉醇1份PLGA3 8 份表面活性劑1 20份膜修飾材料1 20份干燥保護劑1 20份本發明的紫杉醇納米粒用于醫藥領域時，其中所含紫杉醇的量為治療有效量。本發明的紫杉醇納米粒的平均粒徑較佳的為20 200nm。本發明中，所述的膜修飾材料較佳的選自下列中的一種或幾種泊洛沙姆188、聚乙二醇(PEG)、聚乙二醇類脂衍生物和殼聚糖；所述的表面活性劑較佳的選自下列中的一種或多種磷脂、泊洛沙姆188、聚山梨醇80和聚乙烯吡咯烷酮，所述的干燥保護劑選自下列中的一種或多種乳糖、葡萄糖、右旋糖苷、蔗糖、甘露醇。本發明的另一目的是提供一種紫杉醇納米粒的制備方法，其包括下列步驟將紫杉醇和丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)溶于有機溶劑中，加入到含表面活性劑和膜修飾材料的水溶液中，然后經剪切制成乳劑，再蒸去有機溶劑，攪拌，再加干燥保護劑后經凍干或噴霧干燥成納米粒粉末。其中，所述的原料組分紫杉醇、丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)、表面活性劑、膜修飾材料和干燥保護劑的重量比較佳的為1份4 5份1 20份1 20份1 20 份；所述的有機溶劑較佳的選自下列中的一種或幾種乙醚、石油醚、乙酸乙酯、氯仿和二氯甲烷；所述的表面活性劑在水溶液中的濃度一般應能滿足形成亞微乳或納米乳所需要的量，較佳的濃度為0. 5 5g/100ml，而膜修飾材料在水溶液中的濃度要保證這些材料能吸附或鍵合在最后形成的納米粒表面，較佳的濃度為1 5g/100ml ；所述的剪切較佳的為高速剪切，剪切轉速較佳為8000 15000轉/分鐘的高速，時間較佳的為4 10分鐘，可使用的儀器如fluko剪切機，剪切可在室溫下進行；所述的蒸去有機溶劑較佳的在40 70°C 下進行；所述的攪拌較佳的在室溫下進行，時間較佳的為1小時；所述的干燥保護劑選自下列中的一種或多種乳糖、葡萄糖、右旋糖苷、蔗糖、甘露醇，較佳的濃度為2 6g/100ml ；所述的噴霧干燥條件為進風溫度170 250°C，進料速度25mL/min，噴頭壓力0. 35Mpa,并在液氮條件下冷卻。噴霧干燥是常用的液體藥劑粉末化技術，但常規的噴霧干燥技術難以使載藥納米粒膠體溶液粉末化，因此，需要對噴霧干燥技術進行改良才有可能使載藥納米粒膠體溶液粉末化。本發明采用液氮冷卻載藥納米粒膠體溶液霧化技術，可以使載藥納米粒在液氮的保護下在膠體溶液保持較好的晶體狀態，在干燥條件下可將載藥納米粒膠體溶液粉末化。按上述方法進行制備，其制備過程的溶液體系在中性或接近中性的條件下進行， 避免了藥物在強酸或強堿性條件下的分解失活。由上述方法制得的紫杉醇納米粒，可再進行凍干或噴霧干燥，制劑成納米粒粉末， 即制得口服用紫杉醇納米粒干混懸劑，或填充膠囊后，制得口服用紫杉醇納米粒膠囊。本發明的紫杉醇納米粒可用于制備細胞毒類抗癌藥物，用于治療卵巢癌和乳腺癌，對肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效。其劑量一般為紫杉醇的常用劑量135 175mg/m2。本發明所用試劑均市售可得。本發明的積極進步效果在于(1)本發明的紫杉醇納米粒可提高紫杉醇口服給藥的生物利用度。口服生物利用度差的原因是①藥物分子自身的理化性質而使其在胃腸道中的溶解度差，或者不能經胃腸粘膜擴散；②肝臟的“首過效應”(first-passeffect)；③腸壁細胞的代謝酶細胞色素 P4503A (CYP3A)代謝和外向轉運載體蛋白(efflux transporter) P-糖蛋白(Ρ-gp)外排作用。本發明的紫杉醇納米粒，能改善藥物的溶解性，易于附著胃腸粘膜，且能抑制P-gp的外排作用，因而能顯著提高紫杉醇口服給藥的生物利用度。(2)本發明的紫杉醇納米粒粒徑小，平均粒徑可達IOOnm以下，且經凍干或噴霧干燥后粒徑無明顯變化。能將藥物更好地載入到血液中，且能將藥物緩慢釋放出來，因而能降低紫杉醇的毒副作用。(3)本發明在制備過程中將膜修飾材料置于水相當中，大大提高了納米粒在液相中的穩定性，使納米粒干燥后再分散性較好，并且能改善載藥系統在胃腸液中的分散性。(4)本發明的制備方法可將紫杉醇納米粒粉末化，并制備成干混懸劑或膠囊劑，解決了紫杉醇納米粒口服給藥的劑型問題。(5)本發明的制備方法步驟較簡單、重復性好，可應用于工業化生產。
圖1為制備實施例1的紫杉醇納米粒的粒徑圖。圖2為紫杉醇極細粉原料藥、紫杉醇溶液劑、紫杉醇納米粒(制備實施例1)，在大鼠體內的血藥濃度 時間曲線圖。
具體實施方式
下面通過實施例的方式進一步說明本發明，但并不因此將本發明限制在所述的實施例范圍之中。為什么實施例1-6都沒有采用噴霧干燥并用氮氣保護冷卻呢？這些條件下也能獲得符合條件/發明目的的紫杉醇納米粒嗎？而且后面的效果試驗中采用的都是沒有經過噴霧干燥所獲得的納米粒.這個有些不符合！制備實施例1將30mg紫杉醇和150mg PLGA溶于75ml乙酸乙酯中，加入到IOOml含有1. 5g泊洛沙姆188和0. 5g PEG400的水溶液中，pH值為4. 5，于室溫下，用fluko剪切機以8000轉 /分鐘的轉速剪切10分鐘，制成乳劑，再于40°C下旋轉蒸發除去乙酸乙酯，室溫攪拌1小時即得紫杉醇納米粒，用常規方法測得平均粒徑為70nm，其粒徑分布見圖1。制備實施例2將50mg紫杉醇和200mg PLGA溶于80ml石油醚中，加入到IOOml含有Ig聚山梨醇80和Ig泊洛沙姆188的水溶液中，pH值為7. 2，于室溫下，用fluko剪切機以10000轉 /分鐘的轉速剪切8分鐘，制成乳劑，于60°C下旋轉蒸發除去石油醚，室溫攪拌1小時即得紫杉醇納米粒，測得平均粒徑為60nm。制備實施例3將40mg紫杉醇和180mg PLGA溶于80ml乙醚中，加入到IOOml含有2g泊洛沙姆 188和Ig PEG400的水溶液中，pH值為6. 3，于室溫下，用fluko剪切機以12000轉/分鐘的轉速剪切6分鐘，制成乳劑，于60°C下旋轉蒸發除去乙醚，室溫攪拌1小時，即得紫杉醇納米粒，測得平均粒徑為80nm。制備實施例4將40mg紫杉醇和180mg PLGA溶于80ml 二氯甲烷中，加入到IOOml含有2g磷脂和2g殼聚糖的水溶液中，pH值為6. 7，于室溫下，用fluko剪切機以15000轉/分鐘的轉速剪切4分鐘，制成乳劑，于50°C下旋轉蒸發除去二氯甲烷，室溫下攪拌1小時，即得紫杉醇納米粒，測得平均粒徑為90nm。制備實施例5將40mg紫杉醇和180mg PLGA溶于80ml氯仿中，加入到IOOml含有2g泊洛沙姆 188和2g PEG4000的水溶液中，pH值為5. 6，于室溫下，用fluko剪切機以8000轉/分鐘的轉速剪切6分鐘，制成乳劑，于70°C下旋轉蒸發除去氯仿，35°C下攪拌2小時，即得紫杉醇納米粒，測得平均粒徑為90nm。制備實施例6將制備實施例1制得到的紫杉醇納米粒膠體溶液加入甘露醇(1. 8g/100ml)作支架劑，凍干后得到其凍干產品，此凍干產品復溶后，測其包封率為82. 3%。制備實施例7將制備實施例1制得到的紫杉醇納米粒膠體溶液加入乳糖(1. 8g/100ml)作干燥保護劑，乳糖溶解后溶液在液氮的輸送下霧化進行噴霧干燥，所述的噴霧干燥條件為進風溫度170 250°C，進料速度25mL/min，噴頭壓力0. 35Mpa。噴霧干燥后的納米粒粉末，測其包封率為81.6%。效果實施例的目的是說明本發明所取得的積極效果，即紫杉醇納米粒能顯著提高原藥物在胃腸道中的分散性、提高藥物口服給藥的生物利用度、提高藥物口服的治療作用。效果實施例1取制備實施例6制得到的紫杉醇納米粒凍干粉和紫杉醇原料藥，分別加入至過量的人工胃液(取稀鹽酸16. 4mL，加水約SOOmL與胃蛋白酶10g，搖勻后，加水稀釋至IOOmL, 即得)和人工腸液(取磷酸二氫鉀6. 8g，加水500mL使溶解，用0. lmol/L氫氧化鈉溶液調節Ph值至6. 8，取胰酶10g，加水量使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至IOOOmL即得) 中，于37°C下測定溶解度，結果，紫杉醇原料藥在人工胃液和人工腸液中的溶解度分別為 3. 5 μ g/mL和4. 3 μ g/mL，而紫杉醇納米粒凍干粉在人工胃液和人工腸液中的溶解度分別為186. 8 μ g/mL和258. 2 μ g/mL,紫杉醇納米粒在人工胃液和人工腸液的分散性大大增加。效果實施例2將紫杉醇注射液(市售)、紫杉醇極細粉膠囊、紫杉醇納米粒膠體溶液(制備實施例1)，分別通過灌胃給予大鼠。在不同時間測其血漿中的藥物濃度，繪制血藥濃度隨時間曲線圖，如圖2所示。由圖2可見，紫杉醇納米粒膠體溶液的血藥濃度要遠高于紫杉醇注射液(市售) 和紫杉醇極細粉混懸液，峰濃度也遠高于后兩者，說明納米粒提高了紫杉醇給藥的生物利用度。效果實施例2取生長良好的小鼠Lewis肺癌組織，用生理鹽水勻漿法制備成細胞懸液，每只小鼠右腋皮下接種0. 2ml,隨機分組，設生理鹽水組(NS)、紫杉醇注射液(市售)(30mg/kg， poX7)、紫杉醇納米粒膠體溶液(按制備實施例1制備)(15mg/kg，poX 10)、紫杉醇納米粒膠體溶液(30mg/kg，poX10)。接種后次日起按以上方案給藥，給藥體積為2. 0ml/20g體重。接種后12日脫頸處
死動物，解剖取瘤塊，稱瘤重，結果判定根據以下公式
對照組平均瘤重一給藥組平均瘤重
腫瘤抑制率％二 - X 100%
對照組平均瘤重試驗結果紫杉醇納米粒膠體溶液連續灌胃10天，15、30mg/kg劑量對小鼠 Lewis肺癌的抑瘤率分別為57. 33,75. 55%，而紫杉醇注射液30mg/kg灌胃7天抑瘤率為 38. 99%。結果見表1。表1.蟾素對小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用
權利要求
1.一種供口服用的紫杉醇納米粒，其特征在于包含原料組分紫杉醇、丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)、表面活性劑、膜修飾材料和干燥保護劑，其結構為紫杉醇包封于丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)中，表面再被覆表面活性劑和膜修飾材料，再加干燥保護劑后干燥成納米粒粉末；其中所述的原料組分紫杉醇、丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)、表面活性劑、膜修飾材料和干燥保護劑的重量比為1份3 8份1 20份1 20份1 20份；所述的紫杉醇納米粒的平均粒徑為20 200nm ；所述的膜修飾材料選自下列中的一種或幾種泊洛沙姆188、聚乙二醇、聚乙二醇類脂衍生物和殼聚糖；所述的表面活性劑選自下列中的一種或多種磷脂、泊洛沙姆188、聚山梨醇80和聚乙烯吡咯烷酮；所述的干燥保護劑選自下列中的一種或多種乳糖、葡萄糖、右旋糖苷、蔗糖、甘露醇。
2.根據權利要求1所述的供口服用的紫杉醇納米粒，其特征在于紫杉醇、丙交酯乙交酯共聚物的重量分數比為1 4 5。
3.權利要求1所述的紫杉醇納米粒的制備方法，其包括下列步驟將紫杉醇和丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)溶于有機溶劑中，加入到含表面活性劑和膜修飾材料的水溶液中，然后經剪切制成乳劑，再蒸去有機溶劑，攪拌，加入干燥保護劑，經噴霧干燥制成納米粒粉末； 其中所述的有機溶劑選自下列中的一種或幾種乙醚、石油醚、乙酸乙酯、氯仿和二氯甲烷；所述的噴霧干燥條件為加入1.8g/100ml乳糖作干燥保護劑，乳糖溶解后溶液在液氮的輸送下霧化進行噴霧干燥，所述的噴霧干燥條件為進風溫度170 250°C，進料速度 25mL/min,噴頭壓力 0. 35Mpa。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于所述的攪拌條件為室溫下攪拌1小時。
5.權利要求1-2所述的供口服用的紫杉醇納米粒在制備細胞毒類抗癌藥物中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于所述的癌癥為卵巢癌、乳腺癌、對肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤和腦瘤。
全文摘要
本發明公開了一種供口服用的紫杉醇納米粒，包含原料組分紫杉醇、丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)、表面活性劑、膜修飾材料和干燥保護劑，其結構為紫杉醇包封于丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)中，表面再被覆表面活性劑和膜修飾材料，再加干燥保護劑后干燥成納米粒粉末。本發明還公開了其制備方法。本發明的口服用紫杉醇納米粒粒徑小而均勻，且凍干或噴霧干燥后粒徑無明顯變化，口服后可經胃腸道吸收，大大地提高了紫杉醇口服給藥的生物利用度，且降低了紫杉醇的全身毒副作用。本發明的制備方法可在紫杉醇穩定的條件下進行，避免藥效的降低，且可應用于工業化生產。
文檔編號A61K47/34GK102232926SQ201010153598
公開日2011年11月9日 申請日期2010年4月23日 優先權日2010年4月23日
發明者易躍能 申請人:湖南易能生物醫藥有限公司