專利名稱：：吳茱萸及其提取物、化合物的新用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及吳茱萸及其提取物的新用途，具體地，是在制備治療高尿酸血癥和/或痛風的藥物中的用途。屬于醫藥領域。
背景技術：
：痛風屬于代謝性風濕病，是嘌呤代謝紊亂及/或尿酸排泄減少所引起的一種晶體性關節炎，臨床表現為高尿酸血癥和尿酸鹽結晶沉積所致的特征性急性關節炎、痛風石形成、痛風石性慢性關節炎，并可發生尿酸鹽腎病、尿酸性尿路結石等，嚴重者可出現關節致殘、腎功能不全。上述表現可呈不同的組合，體現了本病的異質性。痛風常與中心性肥胖、高脂血癥、糖尿病、高血壓病以及心腦血管病伴發。痛風發病的先決條件是高尿酸血癥，因此，高尿酸血癥是痛風最重要的生化基礎，其次是尿酸鹽沉積引起炎性反應。近20年來，隨著飲食結構的改變(如熱量攝入增加、高嘌呤食品增加)、酒精尤其是啤酒類飲品的攝入增加以及體力活動量的減少，導致高尿酸血癥和原發性痛風的發病率呈逐年上升趨勢，且發病年齡呈現低齡化。據相關資料報道，美國20世紀80年代到90年代痛風發病率為0.275%1.000%，而2003年痛風發病率為2.7%;歐美地區為20Z018%。目前我國每年有上百萬新發病人，1980年方圻等報道我國高尿酸血癥發病率為1.4%；1998年杜惠等在上海調查顯示高尿酸血癥發病率為10.1%，痛風發病率達0.34%；2003年邵繼紅等在南京的調查顯示，高尿酸血癥發病率已達13.3%，痛風發病率達1.33%。由此可見，痛風的流行病學特征在悄然發生變化，痛風正日益成為威脅我國及世界人民健康的常見病。目前治療高尿酸血癥和/或痛風多為口服藥物，西藥治療藥物主要根據疾病情況分三類1.急性期的治療秋水仙堿、非留體類抗炎藥、糖皮質激素；2.間歇期的治療抑制尿酸生成和促進尿酸排泄藥物，如別嘌醇、丙磺舒及磺吡酮等。3.慢性期的治療飲食治療及上述藥物。但因該類藥物具有胃腸道反應、皮膚過敏反應、腎損害、肝損害、白細胞減少等副作用，患者順應性較差。現代臨床及藥理研究表明，中醫中藥在治療高尿酸血癥和/或痛風方面具有一定的療效。據尹蓮統計，在45篇臨床報道中，四妙湯加味治療急性痛風性關節炎，治療近1500例急性痛風患者，總有效率達90%以上，尿酸恢復正常或明顯降低，復發率均降低。萬于軍等用蘚瓜方治療痛風關節炎，蘚瓜方組血尿酸值下降明顯。金晨宇等報道，祛濁通痹顆粒能顯著降低急性痛風模型關節滑膜PGE2和6-k-PGFlα水平，對IL_1、IL-6水平也有明顯下調作用。王文娟等報道，當歸拈痛丸能降低實驗性高尿酸血癥大鼠血清中血尿酸及黃嘌呤氧化酶的水平。吳茱萸是中醫臨床常用的中藥，始載于《神農本草經》，其味苦辛、性溫熱、有小毒。能溫中散寒、疏肝止痛。用于厥陰頭痛、腹脘冷痛、嘔吐泄瀉、痛經、高血壓等癥。目前對吳茱萸的化學、藥理研究表明，其化學成分主要為多種生物堿、揮發油、苦味素等。主要有效成分為生物堿，具有抗炎、強心、降血壓和抗腫瘤、抗血栓等藥理作用。關于吳茱萸治療痛風，有復方制劑的報道，如申請號=200510021790.2，發明名稱一種治療痛風的藥物，該發明公開了一種治療痛風的藥物，它由臨床有效量的以下原料藥組成檳榔、淫羊藿、蒼術、薏苡仁、蠶砂、陳皮、桔梗、姜黃、蘇葉、吳茱萸、木瓜、生姜。該藥物治療痛風療效較好，副作用小，安全性好。雖然中藥在治療高尿酸血癥和/或痛風中顯示了良好的前景和確切的療效，也有一些相關上市藥品，但均為復方制劑，未見有關有單獨使用吳茱萸及其生物堿類成分降血尿酸，用于治療高尿酸血癥和/或痛風的報道。
發明內容為了解決上述技術問題，本發明提供了一種單味藥物吳茱萸的新用途，本發明的另一技術方案是提供了一種治療高尿酸血癥和/或痛風的藥物組合物。本發明提供了吳茱萸及其提取物在制備治療高尿酸血癥和/或痛風的藥物中的用途。其中，所述的吳茱萸提取物是吳茱萸總生物堿。其中，所述的吳茱萸提取物是吳茱萸乙醇提取物。進一步的，所述的乙醇濃度為50%-95%乙醇。更進一步優選地，所述的乙醇濃度為70%乙醇。所述的藥物是具有降血尿酸、抗炎、鎮痛作用的藥物。本發明還提供了吳茱萸堿或其衍生物在制備治療高尿酸血癥和/或痛風的藥物中的用途。其中，所述的吳茱萸堿衍生物包括吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿、羥基吳茱萸堿、去甲吳茱萸酰胺。所述的藥物是具有降血尿酸、抗炎、鎮痛作用的藥物。其中，吳茱萸堿(Evodiamine)化學名稱8，13，13b,14-tetrahydro-14-methyindolo[2，3，；3，4]pyrido[2，l_b]quinazolin-5(7H)-one，分子式C19H17N30，分子量:303·36。理化性質黃色片狀晶體，與改良的碘化鉍鉀反應呈陽性，硅烏酸反應呈陽性。化學結構式12IuTCH3ΨIΙδ^^1817吳茱萸次堿(Rutaecarpin)化學名稱8，13_dihydroindolo[2，，3，；3，4]pyrido[2，1-b]quinazolin-5(7H)-one，分子式C18H13N3O,分子量287.31，理化性質無色結晶，與改良的碘化鉍鉀反應呈陽性，硅烏酸反應呈陽性。化學結構式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>去氫吳茱萸堿(Dehydroevodiamine)分子式=C19H15N3O,分子量301.353，理化性質黃色片狀結晶，碘化鉍鉀顯色為橙紅色。化學結構式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>本發明還提供了一種治療高尿酸血癥和/或痛風的藥物組合物，它是由有效量的吳茱萸或其提取物為活性成分，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。其中，所述的吳茱萸提取物為吳茱萸總生物堿。其中，所述的藥劑是口服制劑。本發明還提供了該藥物組合物在制備治療高尿酸血癥和/或痛風的藥物中的用途。本發明藥物包括吳茱萸原生藥材、吳茱萸總生物堿、吳茱萸堿或含吳茱萸堿類組分的復方制劑，具有降血尿酸、抗炎、鎮痛作用，可用于治療高尿酸血癥和/或痛風，藥效明確，安全性高，為臨床提供了一種新的用藥選擇。具體實施例方式實施例1本發明藥物的制備稱取吳茱萸粗粉(過二號篩)適量，加70%乙醇回流提取兩次，每次加8倍量溶媒，提取1.5h，合并濾液，減壓回收至無醇味，提取液濃縮至相對密度為1.25-1.35，加入適量淀粉，于60-70°C烘干，粉碎，過篩，裝膠囊，即得吳茱萸總堿膠囊。實施例2本發明藥物的制備一、吳茱萸提取物的制備(1)吳茱萸水提物稱取吳茱萸粗粉(過二號篩)適量，加8倍水，煎煮2次，每次lh，濃縮至適量。臨用時用0.5%CMC溶液稀釋成每Iml含1.Og生藥的藥液，供試驗用。(2)吳茱萸總生物堿稱取吳茱萸粗粉(過二號篩)適量，加70%乙醇回流提取兩次，每次加8倍量溶媒，提取1.5h，合并濾液，減壓回收至500ml時，加入Iml濃HCl，繼續回收乙醇至125ml，堿化至PH=9，氯仿萃取至近無色，減壓回收氯仿至干，加入吐溫、10%乙醇水溶液適量。臨用時用0.5%CMC溶液稀釋成每Iml含1.Og生藥的藥液，供藥理試驗用(采用高效液相法測定，吳茱萸堿含量0.247mg/ml，吳茱萸次堿含量1.64mg/ml)。除了可以采用70%乙醇提取之外，也可以選擇其它濃度的乙醇提取，如50%-95%乙醇。由于乙醇提取主要含有生物堿類成分，不同濃度的乙醇提取物均具有治療高尿酸血癥或/和痛風的藥效。二、吳茱萸堿的制備吳茱萸堿(Evodiamine)化學名稱8，13，13b,14-tetrahydro-14-methyindolo[2，3，；3，4]pyrido[2，l-b]quinazolin-5(7H)-one，分子式:C19H17N30，分子量:303·36；理化性質黃色片狀晶體，與改良的碘化鉍鉀反應呈陽性，硅烏酸反應呈陽性。吳茱萸堿可參照文獻制備，也可直接購買市售產品，如純度>98%的吳茱萸堿，批號GY20070603，西安冠宇生物技術有限責任公司提供，臨用時加乙醇制成0.257mg/ml濃度的藥液供藥理實驗用。吳茱萸堿化學結構式12^λλ〖9CH31T117以下通過具體藥效學試驗證明本發明的有益效果。實驗材料動物昆明種小鼠，雌雄兼有，體重18_23g，四川省實驗動物專委會養殖場提供，普通級動物，許可證=SCXK(川)2008-14。試藥試劑吳茱萸堿純度>98%，批號CY20070603，西安冠宇生物技術有限公司生產。二甲苯(分析純，批號990819，鄭州化學試劑二廠生產)；冰乙酸(分析純，批號210819，廣東汕頭新寧化工廠生產)。次黃嘌呤純度彡99%，批號037K06854，Sigma-Aldrich公司提供。阿司匹林腸溶片25mg/片，批號090603，石家莊市康達制藥廠生產，國藥準字H13023679。吲哚美辛腸溶片25mg/片，批號0812010，江蘇亞邦愛普森藥業有限公司生產，國藥準字H32021431。別嘌醇片0.Ig/片，批號090901，重慶青陽藥業有限公司生產，國藥準字H50021422。尿酸測定試劑盒批號1009091，四川省邁克科技有限責任公司生產。實驗儀器BP-211D賽多利斯電子天平，德國。T-1000型電子天平，美國雙杰兄弟(集團)有限公司。BASIC70VB0370型半自動生化分析儀，法國西克曼(SEC0MAM)公司。LXJ-II型離心沉淀機，上海醫用分析儀器廠。試驗例1吳茱萸藥材不同組分對小鼠血尿酸的影響雄性小鼠50只，體重18-22g，隨機分為5組，每組10只，按表1所列劑量灌胃給藥，給藥容量為0.2mL·lOg—1，空白組及模型組灌胃給予等容量的0.5%CMC-Na溶液，各組每天給藥1次，連續給予6d，末次給藥后30min，除空白組(腹腔注射生理鹽水IOmL·kg—1)夕卜，其余小鼠用10%次黃嘌呤lOOOmg'kg—1腹腔注射造模，Ih后每鼠由眼眶靜脈叢取血，分離血清，按尿酸酶終點法測定血清尿酸值，結果見表1。采用t檢驗進行組間差異顯著性比較。表1吳茱萸不同組分對小鼠血尿酸的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與空白組比較▲▲▲P<0.001，與模型組比較*P<0.05，_P<0.001試驗結果與模型組比較，吳茱萸總生物堿組對降低小鼠血尿酸具有極顯著性差異，吳茱萸水提液組無差異。說明吳茱萸總生物堿有明顯降低小鼠血尿酸的作用。試驗例2吳茱萸不同組分對小鼠抗炎作用的影響采用小鼠耳廓二甲苯致炎法。雄性小鼠40只，體重19-23g，隨機分為4組、每組10只，按表2所列劑量灌胃給藥，給藥容量為0.2mLQOg^空白組灌胃給予等容量的0.5%CMC-Na溶液，每天給藥1次，連續給予3d，末次給藥后30min，每只小鼠右耳廓內外側涂布二甲苯0.02mL/只致炎，左耳作為對照，致炎后20min脫頸椎處死小鼠，用直徑7mm打孔器分別于左、右耳相同部位打下耳片，置電子天平上稱重，以左、右耳片重量差值表示腫脹度，計算各組耳腫脹度，計算抑制率，結果見表2。采用t檢驗進行組間差異顯著性比較。表2吳茱萸不同組分對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與空白組比較*P<0.05，_P<0.001試驗結果與空白組比較，吳茱萸水提液組對二甲苯所致小鼠耳腫脹有明顯抑制作用，吳茱萸總生物堿組有抗炎趨勢，無顯著差異。說明吳茱萸水提液有明顯的抗炎作用。試驗例3吳茱萸不同組分對小鼠鎮痛作用的影響采用小鼠扭體法。小鼠40只，雌雄各半，體重18_22g，隨機分為4組，每組10只，按表3所列劑量灌胃給藥，給藥容量為0.2mL·lOg—1，空白組灌胃給予等容量的0.5%CMC-Na溶液。每天給藥1次，連續給藥3d。末次給藥后30min，于每鼠腹腔注射0.7%冰醋酸溶液0.2mL，觀察并記錄給冰醋酸后15min內各鼠的扭體次數，計算鎮痛率，結果見表3。采用t檢驗進行組間差異顯著性比較。表3吳茱萸不同組分對小鼠腹腔注射冰醋酸所致扭體反應次數的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與空白組比較<0.001試驗結果與空白組比較，吳茱萸水提物、吳茱萸總生物堿對小鼠腹腔注射醋酸引起的疼痛反應均有極顯著性差異。表明吳茱萸水提物、吳茱萸總生物堿均具有明顯的鎮痛作用。試驗例4吳茱萸堿對小鼠血尿酸的影響雄性小鼠60只，體重18_22g，隨機分為5組，每組10只。按表4所列劑量灌胃給藥，給藥容量為0.2mL·lOg—1，空白組及模型組同法給予等容量的0.5%CMC-Na溶液，各組每天給藥1次，連續給予6天，末次給藥后30分鐘，除空白組(腹腔注射等容量的0.5%CMC-Na溶液)外，其余小鼠用10%次黃嘌呤IOOOmg·kg—1腹腔注射造模，造模后1小時每鼠由眼眶靜脈叢取血，分離血清，按尿酸酶終點法測定血清尿酸值，結果見表4。采用t檢驗進行組間差異顯著性比較。表4吳茱萸堿對小鼠血尿酸的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與空白組比較▲▲▲P<0.001，與模型組比較*Ρ<0.05，***Ρ<0.001試驗結果與模型組比較，吳茱萸堿高、中、低劑量組對降低小鼠血尿酸均具有明顯差異，吳茱萸堿高、中、低劑量組之間無明顯差異。說明吳茱萸堿有明顯降低小鼠血尿酸的作用。試驗例5吳茱萸堿對小鼠的抗炎作用采用二甲苯致小鼠耳腫脹法。取雄性小鼠60只，體重18_22g，隨機分為5組，每組12只。按表5所列劑量灌胃給藥，給藥容量為0.2mL·lOg—1，空白組同法給予等容量的0.5%CMC-Na溶液，每天給藥1次，連續給予3天，末次給藥后30分鐘，每只小鼠右耳廓內外側涂布二甲苯0.02mL/只致炎，以左耳作對照，致炎后20min脫頸椎處死小鼠，用直徑7mm打孔器分別于左、右耳相同部位打下耳片，置電子天平上稱重，以左、右耳片重量差值表示腫脹度，計算各組耳腫脹度，計算抑制率，結果見表5。采用t檢驗進行組間差異顯著性比較。表5吳茱萸堿對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響G士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與空白組比較*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001試驗結果吳茱萸堿高、中、低劑量組對二甲苯所致小鼠耳腫脹均有抑制作用。與空白組比較，高劑量組有極顯著性抑制作用(P<0.001)，中、低劑量組有明顯抑制作用(P<0.05、P<0.05)。表明吳茱萸堿具有明顯的抗炎作用。試驗例6吳茱萸堿對小鼠鎮痛試驗采用小鼠扭體法。取小鼠60只，雌雄各半，體重18_22g，隨機分為5組，每組12只，。按表6所列劑量灌胃給藥，給藥容量為0.2mL·10Ρ，空白組同法給予等容量的0.5%CMC-Na溶液，每天給藥1次，連續給予3天。末次給藥后30分鐘，每只小鼠腹腔注射0.7%冰醋酸溶液0.2mL。觀察并記錄給冰醋酸后15min內各鼠的扭體次數，計算鎮痛率，結果見表6。采用t檢驗進行組間差異顯著性比較。表6吳茱萸堿對小鼠腹腔注射冰醋酸所致扭體反應次數的影響G士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與空白組比較*P<0.05，_P<0.001試驗結果吳茱萸堿高、中、低劑量組對小鼠腹腔注射冰醋酸引起的疼痛反應均有明顯的抑制作用。與空白組比較，低劑量組有極顯著性抑制作用(p<0.001)，高、中劑量組有明顯抑制作用(P<0.05、P<0.05)。表明吳茱萸堿具有明顯的鎮痛作用。試驗例7吳茱萸堿急性毒性試驗取小鼠40只，體重1822g，實驗前禁食12h，隨機分成2組，每組20只，雌雄各半。按表7所列劑量灌胃給藥，給藥容量為0.2mL·lOg—1，空白組同法給予等容量的0.5%CMC-Na溶液。一次給藥，連續觀察14d，詳細記錄兩組小鼠行為活動、狀態、飲食、大便、小便、毛色、分泌物及死亡等情況，結果見表7。表7吳茱萸堿急性毒性試驗G士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>試驗結果小鼠給藥后第14d，小鼠的行為、飲食、糞便未見異常，無一只死亡，第14d小鼠體重平均增長值為11.8士3.9g，空白組為12.8士3.7g，給藥組動物的體重增長與對照組比較無顯著性差異(P>0.05)。14d后處死小鼠，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腸等內臟器官，未發現異常變化。綜上所述，通過吳茱萸不同提取組分對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響實驗、小鼠腹腔注射冰醋酸所致扭體反應次數的影響實驗、小鼠血尿酸影響實驗，及吳茱萸堿抗炎、鎮痛、對小鼠血尿酸影響試驗，得出吳茱萸抗高尿酸血癥和/或痛風的有效部位是吳茱萸生物堿，吳茱萸的該有效組分可以用于高尿酸血癥和/或痛風的治療。本發明為傳統中藥吳茱萸藥材、總生物堿、單一生物堿化合物的應用提供了新用途，還為治療高尿酸血癥和/或痛風的藥品研發提供了新的、廣泛的可利用資源。權利要求吳茱萸及其提取物在制備治療高尿酸血癥和/或痛風的藥物中的用途。2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于所述的吳茱萸提取物是吳茱萸總生物堿。3.根據權利要求1所述的用途，其特征在于所述的吳茱萸提取物是吳茱萸乙醇提取物。4.根據權利要求1-3任意一項所述的用途，其特征在于所述的藥物是具有降血尿酸、抗炎、鎮痛作用的藥物。5.吳茱萸堿或其衍生物在制備治療高尿酸血癥和/或痛風的藥物中的用途。6.根據權利要求5所述的用途，其特征在于所述的吳茱萸堿衍生物包括吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿、羥基吳茱萸堿、去甲吳茱萸酰胺。7.根據權利要求5或6所述的用途，其特征在于所述的藥物是具有降血尿酸、抗炎、鎮痛作用的藥物。8.一種治療高尿酸血癥和/或痛風的藥物組合物，它是由有效量的吳茱萸或其提取物，或吳茱萸堿及其衍生物為活性成分，加入藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。9.根據權利要求8所述的藥物組合物，其特征在于所述的吳茱萸提取物為吳茱萸總生物堿。10.根據權利要示8或9所述的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑是口服制劑。全文摘要本發明提供了吳茱萸及其提取物在制備治療高尿酸血癥或/和痛風的藥物中的用途，本發明還提供了含有有效量的吳茱萸或其提取物為活性成分制備的藥物組合物。本發明藥物包括吳茱萸原生藥材、溶媒提取物、吳茱萸總生物堿、吳茱萸單一生物堿或含上述組分的復方制劑，具有降血尿酸、抗炎、鎮痛作用，可用于治療高尿酸血癥和/或痛風，藥效明確，安全性高，為臨床提供了一種新的用藥選擇。文檔編號A61P19/06GK101810715SQ20101012412公開日2010年8月25日申請日期2010年2月11日優先權日2009年2月24日發明者宋英,朱家位,盛蓉,袁燕,談靜申請人:成都中醫藥大學附屬醫院