專利名稱：一種前列地爾脂質毫微球注射液及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種前列地爾脂質毫微球注射液及其制備方法，該制劑主要用于注射 給藥，用于心血管及腦神經外科疾病的治療，屬于藥品技術領域。
背景技術：
前列地爾是一種療效確切的血管擴張藥，是一種人體生理物質，該藥品臨床上廣 泛用于冠心病，脈管炎，腦血栓后遺癥，重癥肝炎，血栓病，勃起障礙癥的治療。對潰瘍性疾 病，如糖尿病性潰瘍，肢末端缺血引起的潰瘍也有較好療效。前列地爾化學性質極不穩定，對水、熱不穩定，很容易降解。前列地爾體內靜脈給 藥，血液經過肺循環一次可滅活90%以上，首過效應明顯，因此需要連續給藥。前列地爾對 血管刺激性很強，直接使用前列地爾給藥，很多病人因為疼痛反應不能耐受，對臨床應用有 較大限制。因此，本領域技術人員研究開發了一系列可以保護主藥穩定性和減少生理降解 的新劑型，如采用α -環糊精包合技術制備的前列地爾包合物粉針，脂微球技術制備的前 列地爾乳注射液，以及前列地爾脂質體技術等。環糊精包合雖可提高藥物體外穩定性，但 在體內能被肺酶降解，對肺首過效應沒有明顯幫助。脂質體技術由于包封率較低，工業化 困難，較少采用。使用脂微球技術，可在體內、外保護前列地爾藥物，減少主藥在體內血液 循環首過效應，延長藥物作用時間，并具有靶向作用，減少藥物對血管產生的刺激性，臨床 上取得了較好的效果，如已經上市的凱時前列地爾脂微球注射液等，以此技術申報的專利 已有較多，如歐洲專利ΕΡ0097481，前列地爾脂肪乳制備方法。中國專利200610034259. 3， 前列地爾納米乳及其制備方法。中國專利200410021253. 3，前列地爾凍干乳劑及其制備方 法，中國專利200710011921. 8，一種供靜脈輸液用的前列地爾乳劑及其制備方法。中國專利 200910058187. X，一種穩定的前列地爾注射乳劑及其制備方法。中國專利200910091207. 3， 一種前列地爾注射液制備方法。中國專利2008100646Μ. 5，一種前列地爾脂肪乳劑的無菌 制劑的制備方法等等。上述的專利技術方案都是關于制備前列地爾亞微乳劑(脂微球)的， 其乳劑處方中，油相基本使用包括大豆油等長鏈甘油三酸酯，乳化劑使用磷脂為主的乳化 劑，最終得到的乳劑粒徑一般在150nm以上，通常在200nm-500nm范圍，在這些專利公開的 內容中，其粒徑都在150nm以上，按照目前本領域公知的知識，可以判定制備的乳劑屬于亞 微乳(脂微球)范疇。上述前列地爾專利技術方案均沒有揭示出本發明的制備低于IOOnm 乳劑驚奇的技術效果。亞微乳注射液滅菌方法主要包括熱壓滅菌和完全無菌操作，無菌過 濾方法不能使亞微乳所有乳滴微球通過濾膜，即使在正壓下大粒徑乳滴擠過濾膜，也有可 能因此破壞乳劑系統，因此，工業化生產不能采用過濾除菌方式進行亞微乳滅菌。完全無菌 操作在工業上應用具有較大難度，對于含有營養成分的乳劑來說，被細菌污染可能性非常 大，產品保障系數較低，所以熱壓滅菌是亞微乳常見、可靠的滅菌方式。由于前列地爾極不 耐熱，使用熱壓滅菌可能使產品全部降解，即使采用短時高溫方法，產品也將產生可能高達 60 %降解物，而且由于高熱產生的磷脂降解物繼續影響主藥穩定性，使產品保質期縮短，如 現在已經上市的產品就是采用這樣的方式生產，所表現出的產品技術缺陷已經極大影響了產品的臨床應用。中國專利200410021253. 3，前列地爾凍干乳劑及其制備方法，其公開的 技術方案中雖然部分涉及到本專利注射油和乳化劑類似組合，并在專利其中一個實施例中 羅列了包括藥物前列地爾、大豆油、大豆卵磷脂、HS15、純水等組合，但目的是為了制備凍干 乳，因此加入了大量凍干保護劑甘露醇和采用了凍干工藝，從而使其乳劑粒徑不可能小于 lOOnm，發明說明書公開的實際乳液粒徑達到了 166nm和188nm，另外，關鍵是在這份專利中 沒有采用中鏈油和乳化劑組合的技術方案，從而不能得到這種小粒徑的脂質毫微球效果。 該專利的技術方案只適合于粒徑超過IOOnm或更大的亞微乳(脂微球)制劑。傳統脂肪乳 處方基本都包含長鏈甘油三酸酯和磷脂，尤其是含有長鏈甘油三酸酯做為油相的處方，很 難形成IOOnm以下乳劑。目前已有的公知技術中，載藥脂肪乳按照粒徑大小主要包括亞微乳和納米脂肪 乳，亞微乳也稱為脂微球(LM)，乳粒粒徑大于lOOnm，通常分布在200-500nm，納米脂肪乳也 稱為脂質毫微球(LN)，乳粒粒徑在IOOnm以下，大多在50nm以下。上述已經公開的專利技術方案，沒有涉及到前列地爾脂質毫微球注射液技術方 案，沒有揭示出本發明的技術方案，即制備小粒徑乳劑(脂質毫微球)處方中，油相必須包 含中鏈油，乳化劑包含磷脂與HS15等共同組合。上述公開的前列地爾乳劑專利和已經上市的脂微球產品，其主要的藥理、生理上 的優點是與原型藥靜脈給藥相比，減少了肺酶滅活，增加血液循環時間，能夠特異性地被 RES組織攝取，達到被動靶向RES組織目地，但是由于RES組織吞噬等作用，將很快從血液 中清除，導致藥理作用時間縮短。由于前列地爾是一種具有廣泛生理活性的成分，對心臟組 織、腦組織等非RES組織具有較好藥理活性，另外，更長的血液清除時間對持久的藥效也是 更有意義，根據目前公知的技術得知，低于IOOnm的小粒徑乳劑將有助于在非RES組織中分 布，如心、腦組織等，因此，更小粒徑的前列地爾脂質毫微球注射液與較大粒徑的脂微球相 比，更適合靶向非RES組織，將發揮對心臟疾病和腦神經外科疾病更好作用，同時，其血液 清除時間將延長。本發明人的前述中國專利201010101968. 5，前列地爾脂質毫微球凝膠及其制備方 法，是關于經皮給藥的外用制劑，不同于本發明的內容和目的。
發明內容
本發明就是為了解決上述技術問題而提供一種前列地爾脂質毫微球注射液及其 制備方法，其粒徑在20-100nm，其含藥乳液完全透明，可以通過過濾除菌達到滅菌目的，穩 定性好，比大粒徑脂微球具有更長時間的體循環，不容易被血液清除，易于聚集在靶器官， 減少肺循環滅活和血液清除，提高了藥效。為了解決上述技術問題，本發明是通過下述技術方案實現的前列地爾脂質毫微球注射液，它是由下述原料按重量份數比制備而成前列地爾 0. 002 0. 2、注射用油40 100、乳化劑20 40、助乳化劑25 50、甘油20 30、水 780 890。所述的前列地爾脂質毫微球注射液，它是由下述原料按重量份數比制備而成前 列地爾0. 005 0. 10、注射用油70 100、乳化劑30 40、助乳化劑30 46、甘油20 24、水 800 840。
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所述的注射用油是中鏈油(MCT)。所述的注射用油是中鏈油和大豆油的混合油，中鏈油(MCT)在混合油中所占的重 量比大于等于60%。所述的乳化劑為大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂。所述的助乳化劑為聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯(HS 15)。一種所述的前列地爾脂質毫微球注射液制劑的制備方法，在無菌車間或百級凈 化車間內，按所述重量比取注射用油、乳化劑和助乳化劑混合，加熱至60-70°C，加入符合 所述重量比的前列地爾使其溶解，再加入含有所述重量比的甘油和水的混合溶液，保溫至 60-70°C，剪切攪拌形成初乳，然后放入高壓均質機中，在20-100ΜΙ^壓力下，循環3_10次， 冷卻至室溫，采用0. 45 μ m的濾膜過濾，再用0. 22 μ m濾膜過濾，灌裝，制備成乳液包裝，即 得。本發明的優點、效果及特征如下本發明前列地爾脂質毫微球注射液粒徑在20-100nm，其含藥乳液完全透明，可以 通過過濾除菌達到滅菌目的，穩定性好，比大粒徑脂微球具有更長時間的體循環，不容易被 血液清除，易于聚集在靶器官，減少肺循環滅活和血液清除，提高了藥效。本發明人通過研究發現，傳統脂肪乳(脂微球)處方，即大豆油(長鏈甘油三酸 酯)與蛋黃卵磷脂、甘油，可以得到150-1000nm的亞微乳劑，為了得到低于IOOnm小粒徑 的脂質毫微球，本發明人進行了大量實驗處方及工藝研究，令人驚奇發現油相中包含中鏈 油(MCT)，可以制備成功小粒徑乳劑，而長鏈甘油三酸酯將使乳滴粒徑變大，即使為了某種 需要而將中鏈油與長鏈甘油三酸酯(LCT)混合，其中鏈油占油相比例應超過60%，這種情 況下乳劑中總油相不能超過10%。還發現乳化劑中加入HS15，也有助于形成小粒徑乳劑和 乳劑液晶膜的穩定。通過實驗本發明得出的技術方案是，包含前列地爾、含有中鏈油的注射 用油、卵磷脂、聚乙二醇-12羥基硬脂酸酯(HSM)、甘油、純水以合適比例組合時，經過高壓 均質可制備成穩定的低于IOOnm小粒徑的脂質毫微球，其外觀完全透明，其粒徑最小可達 20-50nm。實驗還發現在這個處方中再加入一些保護劑或其他一些成分，或者經過不合理的 凍干工藝過程后，乳劑系統將被改變，不能形成穩定的低于IOOnm的小粒徑脂質毫微球。研 究證明，這種小粒徑的前列地爾脂質毫微球注射液在鼠藥代動力學組織分布的試驗中，同 大粒徑的脂微球相比具有不同的組織分布行為，更趨向于非RES組織，血液清除時間更長， 這將有利于前列地爾長效、以及對心臟病和腦神經疾病的治療。本發明前列地爾脂質毫微球注射液，粒徑小于lOOnm，乳液完全透明，可以采用無 菌過濾的方式滅菌，主藥前列地爾幾乎不降解，克服了前列地爾脂微球注射液極不穩定的 缺點，增加了產品的穩定性，保質期延長，使前列地爾注射液質量有了顯著的提高，為臨床 使用提供了安全的保障。同時由于脂質微球具有低于IOOnm的更小粒徑，更有利于主藥前 列地爾的體內長循環，減少了肺循環滅活和血液清除，其組織分布，顯著不同于大粒徑的脂 微球注射液，趨向于非RES組織靶向，有利于對心臟病和腦神經外科疾病治療。更長的血液 清除時間對持久的藥效也是更有意義，根據目前公知的技術得知，低于IOOnm的小粒徑乳 劑將有助于在非RES組織中分布，如心、腦組織等，因此，更小粒徑的前列地爾脂質毫微球 注射液與較大粒徑的脂微球相比，更適合靶向非RES組織，將發揮對心臟疾病和腦神經外 科疾病更好作用，同時，其血液清除時間將延長。
圖1為實施例1的粒徑測定結果圖。
圖2為實施例2的粒徑測定結果圖。
圖3為實施例3的粒徑測定結果圖。
圖4為實施例4的粒徑測定結果圖。
圖5為實施例5的粒徑測定結果圖。
圖6為實施例6的粒徑測定結果圖。
圖7為實施例7的粒徑測定結果圖。
圖8為實施例8的粒徑測定結果圖。
圖9為實施例9的粒徑測定結果圖。
圖10為實施例10的粒徑測定結果圖。
圖11為實施例11的粒徑測定結果圖。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步詳細說明，但本發明的保護范圍不受實施例所 限。實施例1 本發明前列地爾脂質毫微球注射液，由下述原料按重量份數比制備而成前列地 爾0. 03g、中鏈油90g、大豆卵磷脂40g、聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯50g、甘油20g、水800g 制備而成。在無菌車間或百級凈化車間內，稱取注射用中鏈油90g，向其中加入無菌大豆卵磷 脂40g及無菌聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯50g，將其加熱至60-70°C，混合均勻，再向其中 加入主藥前列地爾30mg，使其溶解；加入60-70°C注射用水800g和注射級甘油20g的混合 液，保溫至60-70°C，剪切攪拌形成初乳，然后放入高壓均質機中，在20-100MPa壓力下，循 環3-4次，冷卻至室溫，用0. 45 μ m的濾膜過濾后，再用0. 22 μ m濾膜過濾，制備成乳液。實施例2 本發明前列地爾脂質毫微球注射液，由下述原料按重量份數比制備而成前列 地爾0. 002g、中鏈油40g、蛋黃卵磷脂^g、聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯25g、甘油22g、水 890go在無菌車間或百級凈化車間內，稱取注射用中鏈油40g，向其中加入無菌蛋黃卵磷 脂26g及無菌聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯25g，將其加熱至60-70°C，混合均勻，再向其中加 入主藥前列地爾ang，使其溶解，保溫60-70°C ；加入60-70°C注射用水890g和注射級甘油 22g的混合液，保溫至60-70°C，剪切攪拌形成初乳，然后放入高壓均質機中，在20-100MPa 壓力下，循環8次，冷卻至室溫，用0. 45 μ m的濾膜過濾后，再用0. 22 μ m濾膜過濾，制備成 乳液。實施例3 本發明前列地爾脂質毫微球注射液，由下述原料按重量份數比制備而成前列地 爾0. 06g、中鏈油42g、大豆油^g、大豆卵磷脂30g、聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯40g、甘油22g、水 838g。在無菌車間或百級凈化車間內，按所述重量比稱取注射用中鏈油42g和注射用大 豆油^g，向其中加入無菌大豆卵磷脂30g及無菌聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯40g，將其加 熱至60-70°C，混合均勻，再向其中加入主藥前列地爾60mg，使其溶解，保溫60-70°C ；加入 60-70°C注射用水838g和注射級甘油22g的混合液，保溫至60-70°C，剪切攪拌形成初乳，然 后放入高壓均質機中，在20-100MPa壓力下，循環10次，冷卻至室溫，用0. 45 μ m的濾膜過 濾后，再用0. 22 μ m濾膜過濾，制備成乳液實施例4 本發明前列地爾脂質毫微球注射液，由下述原料按重量份數比制備而成前列地 爾0. 06g、中鏈油52. 5g、大豆油17. 5g、大豆卵磷脂30g、聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯40g、甘 油 22g、水 840g。在無菌車間或百級凈化車間內，按所述重量比稱取注射用中鏈油52. 5g和注射用 大豆油17. 5g，向其中加入無菌大豆卵磷脂30g及無菌聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯40g，將 其加熱至60-70°C，混合均勻，再向其中加入主藥前列地爾60mg，使其溶解，保溫60_70°C ； 加入60-70°C注射用水840g和注射級甘油22g的混合液，保溫至60-70°C，剪切攪拌形成初 乳，然后放入高壓均質機中，在20-100MPa壓力下，循環10次，冷卻至室溫，用0. 45 μ m的濾 膜過濾后，再用0. 22 μ m濾膜過濾，制備成乳液實施例5 本發明前列地爾脂質毫微球注射液，由下述原料按重量份數比制備而成前列地 爾0. 06g、注射用油70g、大豆卵磷脂30g、聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯40g、甘油22g、水 838g。在無菌車間或百級凈化車間內，按所述重量比稱取注射用中鏈油70g，向其中加入 無菌大豆卵磷脂30g及無菌聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯40g，將其加熱至60-70°C，混合均 勻，再向其中加入主藥前列地爾60mg，使其溶解，保溫60-70°C;加入60-70°C注射用水838g 和注射級甘油22g的混合液，保溫至60-70°C，剪切攪拌形成初乳，然后放入高壓均質機中， 在20-100MPa壓力下，循環10次，冷卻至室溫，用0. 45 μ m的濾膜過濾后，再用0. 22 μ m濾 膜過濾，制備成乳液實施例6 本發明前列地爾脂質毫微球注射液，由下述原料按重量份數比制備而成前列地 爾0. 2g、中鏈油100g、大豆卵磷脂40g、聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯50g、甘油22g、水780g。在無菌車間或百級凈化車間內，按所述重量比稱取注射用中鏈油100g，向其中加 入無菌大豆卵磷脂40g及無菌聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯50g，將其加熱至60-70°C，混 合均勻，再向其中加入主藥前列地爾200mg，使其溶解，保溫60-70°C ；加入60_70°C注射用 水780g和注射級甘油22g的混合液，保溫至60-70°C，剪切攪拌形成初乳，然后放入高壓 均質機中，在20-100MPa壓力下，循環10次，冷卻至室溫，用0. 45 μ m的濾膜過濾后，再用 0. 22 μ m濾膜過濾，制備成乳液實施例7:本發明前列地爾脂質毫微球注射液，由下述原料按重量份數比制備而成前列地 爾0. 04g、中鏈油80g、大豆卵磷脂36g、HS-15為46g、甘油22g、水816g。
在無菌車間或百級凈化車間內，按所述重量比稱取注射用中鏈油80g，向其中加入 無菌大豆卵磷脂36g及46g無菌HS-15，將其加熱至60-70°C，混合均勻，再向其中加入主 藥前列地爾40mg，使其溶解，保溫60-70°C ；加入60_70°C注射用水816g和注射級甘油22g 的混合液，保溫至60-70°C，剪切攪拌形成初乳，然后放入高壓均質機中，在20-100MPa壓力 下，循環10次，迅速冷卻至室溫，用0. 45 μ m的濾膜過濾后，再用0. 22 μ m濾膜過濾，制備成 乳液實施例8 本發明前列地爾脂質毫微球注射液，由下述原料按重量份數比制備而成前列地 爾0. 10g、中鏈油100g、大豆卵磷脂40g、HS-15為46g、甘油Mg、水790g。在無菌車間或百級凈化車間內，按所述重量比稱取注射用中鏈油100g，向其中加 入無菌大豆卵磷脂40g及無菌46g HS-15，將其加熱至60-70°C，混合均勻，再向其中加入主 藥前列地爾lOOmg，使其溶解，保溫60-70°C ；加入60_70°C注射用水790g和甘油24g的混 合液，保溫至60-70°C，剪切攪拌形成初乳，然后放入高壓均質機中，在20-100MPa壓力下， 循環10次，冷卻至室溫，用0. 45 μ m的濾膜過濾后，再用0. 22 μ m濾膜過濾，制備成乳液實施例9 本發明前列地爾脂質毫微球注射液，由下述原料按重量份數比制備而成前列地 爾0. 005g、中鏈油60g、大豆卵磷脂25g、HS-15為30g、甘油Mg、水861g。在無菌車間或百級凈化車間內，按所述重量比稱取注射用中鏈油60g，向其中加入 無菌大豆卵磷脂25g及30g無菌HS-15，將其加熱至60-70°C，混合均勻，再向其中加入主藥 前列地爾5mg，使其溶解，保溫60-70°C ；加入60_70°C注射用水861g和注射級甘油24g的混 合液，保溫至60-70°C，剪切攪拌形成初乳，然后放入高壓均質機中，在20-100MPa壓力下， 循環10次，迅速冷卻至室溫，用0. 45 μ m的濾膜過濾后，再用0. 22 μ m濾膜過濾，制備成乳 液。實施例10 本發明前列地爾脂質毫微球注射液，由下述原料按重量份數比制備而成前列地 爾0. 02g、中鏈油46g、大豆卵磷脂20g、HS-15為25g、甘油20g、水889g。在無菌車間或百級凈化車間內，按所述重量比稱取注射用中鏈油46g，向其中加入 無菌大豆卵磷脂20g及無菌十二羥基硬脂酸酯25g，將其加熱至60-70°C，混合均勻，再向 其中加入主藥前列地爾20mg，使其溶解，保溫60-70°C ；加入60_70°C注射用水889g和注 射級甘油20g的混合液，保溫至60-70°C，剪切攪拌形成初乳，然后放入高壓均質機中，在 20-IOOMI3a壓力下，循環10次，迅速冷卻至室溫，用0. 45 μ m的濾膜過濾后，再用0. 22 μ m濾 膜過濾，制備成乳液。實施例11 本發明前列地爾脂質毫微球注射液，由下述原料按重量份數比制備而成前列地 爾0. 050g、中鏈油60g、大豆卵磷脂27g、HS-15為33g、甘油30g、水850g。在無菌車間或百級凈化車間內，按所述重量比稱取注射用中鏈油60g，向其中加入 大豆卵磷脂27g及33g的HS-15，將其加熱至60_70°C，混合均勻，再向其中加入主藥前列地 爾50mg，使其溶解，保溫60-70°C ；加入60_70°C注射用水850g和注射級甘油30g的混合液， 保溫至60-70°C，剪切攪拌形成初乳，然后放入高壓均質機中，在20-100MPa壓力下，循環10
8次，迅速冷卻至室溫，用0. 45 μ m的濾膜過濾后，再用0. 22 μ m濾膜過濾，制備成乳液實驗例12 粒徑測定，取以上實施例1至實施例11所得到的前列地爾脂質毫微球注射液，使 用激光散射光譜儀(PCQ進行粒徑測定，結果見附圖1-11及下表
權利要求
1.前列地爾脂質毫微球注射液，其特征在于它是由下述原料按重量份數比制備而成 前列地爾0. 002 0. 2、注射用油40 100、乳化劑20 40、助乳化劑25 50、甘油20 30、水 780 890。
2.根據權利要求1所述的前列地爾脂質毫微球注射液，其特征在于它是由下述原料按 重量份數比制備而成前列地爾0. 005 0. 1、注射用油70 100、乳化劑30 40、助乳化 劑30 46、甘油20 對、水800 840。
3.根據權利要求1或2所述的前列地爾脂質毫微球注射液，其特征在于所述的注射用 油是中鏈油。
4.根據權利要求1或2所述的前列地爾脂質毫微球注射液，其特征在于所述的注射用 油是中鏈油和大豆油的混合油，中鏈油在混合油中所占的重量比大于等于60%。
5.根據權利要求1或2所述的前列地爾脂質毫微球注射液，其特征在于所述的乳化劑 為大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂。
6.根據權利要求1或2所述的前列地爾脂質毫微球注射液，其特征在于所述的助乳化 劑為聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯。
7.—種權利要求1或2所述的前列地爾脂質毫微球注射液的制備方法，在無菌車間或 百級凈化車間內，按所述重量比取注射用油、乳化劑和助乳化劑混合，加熱至60-70°C，加入 符合所述重量比的前列地爾使其溶解，再加入符合所述重量比的甘油和水的混合溶液，保 溫至60-70°C，剪切攪拌形成初乳，然后放入高壓均質機中，在20-100MPa壓力下，循環3_10 次，冷卻至室溫，采用0. 45 μ m的濾膜過濾，再用0. 22 μ m濾膜過濾，灌裝，制備成乳液包裝， 即得。
全文摘要
本發明公開了一種前列地爾脂質毫微球注射液及其制備方法，屬于藥品技術領域。前列地爾脂質毫微球注射液，它是由下述原料按重量份數比制備而成前列地爾0.002～0.2、注射用油40～100、乳化劑20～40、助乳化劑25～50、甘油20～30、水780～890。本發明前列地爾脂質毫微球注射液粒徑小于100nm，可以采用無菌過濾的方式滅菌，克服了前列地爾熱不穩定的缺點，增加了產品的穩定性。同時由于脂質微球具有低于100nm的更小粒徑，更有利于前列地爾體內非RES組織分布，減少肺循環滅活和血液清除，有利于在體內長時間循環，適于心臟和腦神經外科疾病的治療。
文檔編號A61K47/44GK102144970SQ20101010792
公開日2011年8月10日 申請日期2010年2月10日 優先權日2010年2月10日
發明者李樂, 王會芳, 艾莉, 董英杰 申請人:沈陽萬嘉生物技術研究所有限公司