專利名稱：具有高抗炎活性的細菌菌株的制作方法
具有高抗炎活性的細菌菌株本發明涉及具有高抗炎活性的益生菌菌株。本發明涉及作為白細胞介素-IO(IL-IO)的產生的強誘導物的細菌菌株。特別的是，本發明涉及由所述細菌菌株因其增強在外周血單個核細胞中的IL-10產生而顯示出的抗炎活性，另一方面該細菌菌株具有較低的刺激促炎性IL-12產生的能力，因此導致了高IL-10/IL-12比。本發明還涉及至少一種細菌菌株在制備用于預防或治療炎性腸病(IBD)和腸易激綜合征(IBS)的組合物中的應用。最后，本發明涉及包含作為活性成分的至少一種益生菌菌株的食物產品，例如益生菌食物補充劑。已知益生菌是在以充足的量施用時會為宿主帶來健康益處的活微生物。正逐漸認識到益生性乳酸桿菌和雙歧桿菌是用來預防和/或治療腸道病況的方法。與抗原或感染原的多數遭遇都出現在粘膜表面，粘膜表面包括在胃腸道、呼吸道和生殖泌尿道形成內襯的表面。由于通常以口服方式來攝取益生菌，因此理想的是，益生菌適合用來影響在胃腸道的超過300m2的“粘膜邊界”發生的免疫應答。腸免疫系統構成免疫系統的最大部分。其與形式為食物抗原的復雜抗原性負載物、共棲細菌和偶然出現的病原體相互作用。樹突狀細胞(DC)在最早期的細菌識別中和在T細胞應答定形中起關鍵作用。樹突狀細胞感知組織中的抗原，隨后遷移至引流淋巴結， 在引流淋巴結中樹突狀細胞具有激活并影響初始T細胞功能分化的獨特能力。來自DC的信號能夠確定是否會出現針對特定抗原的耐受性或活性免疫應答，并且進一步影響Thl或 Th2免疫應答是否會占據優勢DC使共刺激分子CD80和CD86上調，并產生促成Thl應答的 IL-12。DC還可以產生IL-10和IL_4，IL-10和IL-4促進Th2應答的產生或促進調節T細胞的生成。對作為病原體的有害微生物、過敏原和毒素的識別會激活胃腸免疫系統。抗原特異性Treg細胞介導對共棲微生物的口服耐受，并將無害的腸居生物和病原體區分開。口服耐受的發展和保持發生中斷時會導致一系列異常的破壞性炎性病況，包括炎性腸病(IBD) 和結腸炎。IBD和結腸炎是其中患者的免疫系統對原生腸內細菌產生過度反應的病癥。在這些病況中出現的Treg細胞耗盡會有效地破壞耐受性，并使得在腸中出現大規模的炎癥。 Treg細胞的體內轉移通過IL-10、TGF-β和CTLA-4依賴性機制而抑制上述疾病的發展。益生菌菌株能夠誘導諸如白細胞介素-I(IL-I)、IL-6、IL-12、腫瘤壞死因子 α (TNF-α)和Y干擾素(IFN-γ )等促炎細胞因子以及諸如IL-10和轉化生長因子β等抗炎細胞因子。IFN-Y和IL-12強力地放大巨噬細胞和NK細胞的功能，這或許是其抗致癌活性和抗感染活性的可能機制。另一方面，據假設，對IL-10和轉化生長因子β的誘導會參與炎癥的下調，因為這些細胞因子能夠抑制巨噬細胞和T細胞的功能并且促進調節性T 細胞的發展。IL-10由多種細胞產生，包括Th2細胞、DC、單核細胞(monocyte)、B細胞、角化細胞和調節性T細胞；其具有抗炎效果，并主要起抑制Thl應答的作用。IL-10驅動抑制抗原特異性免疫應答的CD4+T細胞子集(稱為調節性T細胞1 (Trl))的生成，并且活躍地下調體內的病理性免疫應答。
“炎性腸病(IBD) ”涵蓋了若干種腸部病癥，包括克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎和囊炎 (pouchitis)ο在炎性腸病中，IL-10是引起特殊治療興趣的細胞因子，因為已在動物模型中顯示，白細胞介素(IL)-IO(-/-)小鼠自發地發展腸部炎癥。已在動物模型中顯示，在體外顯示出誘導更高水平的抗炎細胞因子IL-10和更低水平的炎性細胞因子IL-12的潛力的益生菌菌株在該模型中提供抵御體內結腸炎的最佳保護。在對IBD的治療中，益生菌介導的免疫調節是令人感興趣的選擇，據顯示，口服遞送的細菌可以調節全身免疫系統和粘膜免疫系統。然而，由于菌株在胃腸道中的存活情況和持續性的不同，且/或由于益生菌與宿主免疫系統之間的菌株特異性相互作用，并非所有候選益生菌都被證明同樣高效。因此，對成功的保護性菌株的選擇將取決于對大量候選菌株進行的針對其技術性能和免疫調節性能的適當篩選。所以，仍需要分離并選擇具有突出抗炎活性的細菌菌株。特別而言，仍需要分離并選擇作為IL-10的產生的強誘導物的特定細菌菌株。此外，仍需要分離并選擇具有較低的刺激促炎性IL-12的產生的能力從而使IL-10/IL-12比至少大于1的細菌菌株。最后，仍需要找到并選擇在胃腸道中因其對胃液、膽汁鹽、胰分泌物和對腸壁的粘附有抗性而顯示出高持續性的細菌菌株。最后但并非最次要的是，選擇不具有獲得性抗生素抗性的細菌菌株是很重要的。本申請人已選出了一組能夠解決現有技術中存在的突出問題的細菌菌株。根據本發明的第一方面，提供了通過刺激白細胞介素-10而具有免疫調節功能的一組細菌菌株或其細胞組分。根據本發明的第二方面，提供了含有至少一種細菌菌株或其細胞組分作為活性成分的食物產品。根據本發明的第三方面，提供了含有用作藥物的至少一種細菌菌株或其細胞組分的組合物。根據本發明的第四方面，提供了至少一種細菌菌株或其細胞組分在制備用于預防或治療大腸和小腸炎性病癥的藥物中的應用。根據本發明的第五方面，提供了至少一種細菌菌株或其細胞組分在制備用于預防或治療機能性腸障礙的藥物中的應用。本申請人已測試了屬于以下物種的細菌菌株嗜酸乳桿菌、卷曲乳桿菌、加氏乳桿菌、德氏乳桿菌、唾液乳桿菌、干酪乳桿菌、副干酪乳桿菌、植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、短乳桿菌、布氏乳桿菌、發酵乳桿菌、青春雙歧桿菌、角雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、 短雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、乳雙歧桿菌、長雙歧桿菌、假鏈狀雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌。表1示出了在本發明范圍內具有有效應用的一組細菌菌株。表權利要求
1.一種細菌菌株，所述細菌菌株是白細胞介素-10的誘導物，所述細菌菌株選自由副干酪乳桿菌LMG P-21380、植物乳桿菌LMG P-21021、乳雙歧桿菌LMG P-21384和短雙歧桿菌DSM 16604或其細胞組分組成的組。
2.如權利要求1所述的細菌菌株，其中，所述細菌顯示出大于1且小于150、優選為 10 100、更優選為30 60的IL-10/IL-12比。
3.如權利要求1或2所述的細菌菌株短雙歧桿菌DSM16604，所述短雙歧桿菌DSM 16604是白細胞介素-10的誘導物，且顯示出50 100、優選為70 80的IL-10/IL-12比。
4.如權利要求1 3中任一項所述的細菌菌株，其中所述細菌為活細菌形式或死細菌形式或其細胞組分形式。
5.一種食物產品，所述食物產品包含至少一種作為活性成分的權利要求1 4中任一項所述的細菌菌株。
6.一種組合物，所述組合物包含至少一種用作藥物的權利要求1 4中任一項所述的細菌菌株。
7.如權利要求6所述的組合物，所述組合物用作用于預防或治療大腸和小腸炎性病癥的藥物。
8.如權利要求7所述的組合物，其中，所述炎性病癥選自由克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎組成的組。
9.如權利要求6所述的組合物，所述組合物用作用于預防或治療機能性腸障礙的藥物。
10.如權利要求9所述的組合物，其中，所述機能性腸障礙選自由痢疾和便秘組成的組。
11.權利要求1 4中任一項所述的細菌菌株中的至少一種在制備用于預防或治療大腸和小腸炎性病癥的藥物中的應用。
12.如權利要求11所述的應用，其中，所述炎性病癥選自由克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎組成的組。
13.權利要求1 4中任一項所述的細菌菌株中的至少一種在制備用于預防或治療機能性腸障礙的藥物中的應用。
14.如權利要求13所述的應用，其中，所述機能性腸障礙選自由痢疾和便秘組成的組。
全文摘要
本發明涉及具有高抗炎活性的益生菌菌株。本發明涉及作為產生白細胞介素10(IL-10)的強力誘導物的細菌菌株。特別地，本發明涉及由所述細菌菌株因其增強IL-10在外周血單個核細胞中的產生而表現出的抗炎活性，另一方面該細菌菌株具有較低的刺激促炎性IL-12產生的能力，因此導致了高IL-10/IL-12比。本發明還涉及至少一種細菌菌株在制備用于預防或治療炎性腸病(IBD)和腸易激綜合征(IBS)的組合物中的應用。本發明最后涉及包含至少一種益生菌菌株作為活性成分的食物產品，例如益生菌食物補充劑。
文檔編號A61P1/00GK102438637SQ200980158993
公開日2012年5月2日 申請日期2009年3月5日 優先權日2009年3月5日
發明者G·P·斯特羅齊, G·莫格納, L·莫格納 申請人:益生菌股份公司