針對組織因子的人抗體的制作方法

專利名稱：針對組織因子的人抗體的制作方法
技術領域：
本發明涉及針對組織因子，特別是人組織因子的抗體，和這類抗體的用途，特別是它們在治療癌癥、炎癥和血管疾病中的用途。
背景技術：
組織因子(TF)，也稱作促凝血酶原激酶(thromboplastin)、因子III或 CD142，是一種存在于內皮下組織、血小板和白細胞中的蛋白質，是引發從酶原凝血酶原 (prothrombin)形成凝血酶所必需的。凝血酶形成最終導致血液凝固。組織因子使細胞能夠觸發凝血級聯，并且發揮凝血因子VII高親和力受體的功能。所得到的復合體提供一種催化事件，該事件負責通過特異的限制性蛋白水解(limited proteolysis)引發凝血蛋白酶級聯。與這些蛋白酶級聯中其它作為無功能前體形式進行循環的輔助因子不同，這種因子是一種強力的引發劑(initiator)，其表達在細胞表面上時即具有完全的功能。組織因子是絲氨酸蛋白酶因子Vlla(FVIIa)的細胞表面受體。FVIIa與組織因子的結合已經被發現可以在細胞內開始信號傳遞過程，所述信號傳遞功能在血管發生中發揮作用。盡管血管發生在生長和發育以及傷口愈合中是一種正常的過程，但是它也是腫瘤從休眠狀態轉變成惡性狀態過程中的一個基本步驟當癌細胞獲得可以產生參與血管發生的蛋白質，即所謂的血管發生生長因子，的能力時，這些蛋白質被腫瘤釋放到附近組織內，并刺激現有的健康血管朝著腫瘤萌生出(sprout)新血管并進入腫瘤內部。一旦新血管進入腫瘤內，它就能夠快速增大其尺寸，并侵襲局部的組織和器官。通過這些新血管，癌細胞可以進一步逃逸進入循環中，并棲息于其它器官內形成新的腫瘤(轉移)。此外，TF在炎癥中發揮作用。TF的作用被認為是通過血液凝固介導的(A. J. Chu "Tissue factor mediates inflammation，，in Archives of biochemistry and biophysics, 2005, vol. 440，No. 2，pp. 123-132)。因此，通過例如單克隆抗-TF 抗體抑制 TF， 在干擾凝固-炎癥循環中具有重要意義，不僅有助于抗炎而且有助于抗血管疾病。TF表達在許多類型的癌癥中均被觀察到，并且與侵襲性較高的疾病有關。而且， 人TF還以一種可變剪接形式存在，即asHTF。最近發現，asHTF促進腫瘤生長(Hobbs et al.2007 Thrombosis Res. 120(2)S13-S21)。在先前技術中已經公開了與TF結合的抗體W098/40408公開了能夠結合天然(native)人TF的抗體，單獨存在或者存在于 TFiVIIa復合體中，可有效阻止因子X結合到TF或該復合體，借此降低凝血。該文獻公開了該抗體可用于減輕侵入性醫療程序(invasive medical procedure)，例如動脈或心臟手術，后的血栓形成，或者消除由于使用醫療措施(medical implementation)引發的凝血。其他抗體被公開用于體內診斷方法，包括天然人TF的體內診斷成像。W004/094475提供了能夠與人組織因子結合的抗體，其與正常血漿對照相比，不抑制因子介導的凝血。沒有描述人抗體。據稱，該抗體可用于治療癌癥。W003/093422涉及與TF VIIa復合體的結合親和力大于與TF本身的結合親和力的抗體。并提出了這些抗體作為抗凝劑在某些疾病治療中的用途，例如敗血癥、彌散性血管內凝血、缺血性腦卒中、血栓形成、急性冠狀動脈綜合癥和晚期癌癥中的凝血病。W001/27079公開了組合物和方法，用于抑制異常細胞增殖，特別是內皮細胞增殖， 例如癌癥，胚胎異常發育，免疫應答機能失常，以及與新生血管化和腫瘤生長有關的血管發生。提供了許多活性物質，包括抗體，但沒有公開具體的抗體。W003/037361涉及TF激動劑或拮抗劑用于細胞凋亡相關的治療的用途。W003/029295涉及分離的人抗體，其與人TF免疫反應，抑制凝血因子VIIa的結合。 然而，該申請沒有公開具有這些性質的抗體的任何實例。已經有若干單克隆抗體療法被批準用于治療不同類型的腫瘤，包括例如貝伐單抗(bevacizumab) (Avastin ),西妥昔單抗(cetuximab) (Erbitux ),帕尼單抗 (panitumumab) (Vectibix )禾口曲妥單抗(trastuzumab) (Herceptin )。
發明概要盡管已經取得了很多進展，但是仍然需要有基于治療性抗體的改進方法用于治療嚴重的疾病，例如改進的癌癥治療。本發明的一個目的是提供用于醫療用途的新的高特異性、有效的人抗-TF抗體。 本發明抗體顯示與本領域中已有描述的抗體不同的TF結合特性。在優選實施方案中，本發明的抗體對人組織因子具有高親和力，介導抗體依賴的細胞毒性(ADCC)，抑制FVIIa結合 TF,抑制FVIIa誘導的ERK磷酸化和IL-8釋放，不抑制或者較弱地抑制凝血。附圖簡述

圖1 本發明抗體的序列比對。根據IMGT的⑶R1、⑶R2和⑶R3被高亮顯示斜體的序列代表⑶Rl區，加下劃線的序列代表CDR2區，粗體的序列代表CDR3區。圖 2 :IgG4 序歹Ij (SEQ ID NO :113-114)SEQ ID NO 113 野生型人IgG4CH區的氨基酸序列。斜體的序列代表CHl區，高亮的序列代表鉸鏈區，規則序列代表CH2區，加下劃線的序列代表CH3區。SEQ ID NO :114 人IgG4的無鉸鏈CH區的氨基酸序列。圖3 抗-TF人單抗與TF胞外域的結合。圖4 抗-TF人單抗與膜結合的TF的結合。圖5 抑制FVIIa與TF結合。圖6 抑制FVIIa誘發的ERK磷酸化。圖6a 抑制 FVIIa 誘發的 ERK 磷酸化(phosphylation)。圖7 抑制FVIIa誘發的IL-8釋放。圖8:抑制FXa產生。圖9:抑制血液凝固。圖10 =TF-人單抗通過ADCC誘導Bx_PC3細胞溶解。圖11 補體組分C3c和Ck沉積在靶細胞上。圖12 =TF人單抗與腎小球結合的免疫組化分析。圖13 =TF-人單抗與胰腺腫瘤結合的免疫組化分析。圖14 =TF-人單抗在已建立的MDA-MB-231腫瘤異種移植物中的體內效力。
圖15 食蟹猴(cynomolgus monkeys)中通過靜脈內注射TF特異性人單抗011在后確定的出血時間。抗體在第1 (Omg/kg), 8 (lmg/kg), 15 (10mg/kg)和22 (100mg/kg)天施用。圖16 =TF-人單抗在預防性的已建立的BX-PC3腫瘤異種移植物中的體內效力。圖17 改組改組構建體和TF域。圖18 抗-TF抗體與TF改組改組構建體的結合。圖19 人單抗-TF Fab片段與TF胞外域的結合，ELISA。圖20 人單抗-TF Fab片段與TF胞外域的結合，FACS。圖21 依賴于所表達的TF分子的數目的抗-TF人單抗的結合譜。發明詳細說明定義術語“組織因子”、“TF”、“⑶142”、“組織因子抗原”、“TF抗原”和“⑶142抗原”在
這里可互換使用，并且除非明確指出，包括由細胞天然表達的或在用組織因子基因轉染的細胞上表達的人組織因子的任何變體、同種型和物種同源物。術語“免疫球蛋白”是指一類結構上相關的糖蛋白，由兩對多肽鏈構成，一對輕(L) 低分子量鏈和一對重(H)鏈，所有四條鏈可以通過二硫鍵內部連接。免疫球蛋白的結構已經得至IJ充分表征。見例如 Fundamental Immunology 第 7 章(Paul, W.，ed.，2nd ed. Raven Press, N. Y. (1989))。簡而言之，每條重鏈典型地由重鏈可變區(這里縮寫為Vh或VH)和重鏈恒定區構成。重鏈恒定區典型地由三個結構域構成CH1，Ch2*Ch3。每條輕鏈典型地由輕鏈可變區(這里縮寫為八或VL)和輕鏈恒定區構成。輕鏈恒定區典型地由一個結構域構成:CLO V1^Pt區可以進一步再分成超可變性區(或超變區，其在結構限定環的序列和/或形式方面可有極高的可變性)，也稱作補體決定區(CDRs)，它們之間間散布著更保守的、稱作框架區(FR)的區域。每個V1^Pt典型地由三個CDR和4個FR構成，從氨基端向羧基端按照如下的次序排列FR1，CDRl，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4 (SlChothia and Lesk J. Mol. Biol. 196,901-917 (1987))。典型地，該區域中氨基酸殘基的編號是根據IMGT.，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版，Public Health Service, National Institutes of Health,Bethesda,MD. (1991)( “與如 Kabat 中相同或者根據 Kabat 的編號的可變區殘基”等短語，在本文中對于重鏈可變區或輕鏈可變區而言，是參考這種編號系統的)。使用這種編號系統，肽的實際線性氨基酸序列可能含有更少或更多的氨基酸，相應于可變區FR或⑶R的縮短或插入。例如，重鏈可變區可能在Vh⑶R2殘基52后面包含一個單氨基酸插入(根據Kabat，殘基52a)，和在重鏈FR殘基82后面包含多個插入殘基(例如根據Kabat，殘基82a，82b和82c等)。給定抗體的殘基的Kabat編號可以通過在該抗體序列的同源區與“標準”Kabat編號序列進行比對加以確定。在本發明的上下文中，術語“抗體”(Ab)是指免疫球蛋白分子，免疫球蛋白分子的片段，或其衍生物，其在典型的生理條件下具有與抗原特異性結合的能力，具有相當時間的半壽期，例如至少大約30分鐘，至少大約45分鐘，至少大約1小時，至少大約2小時，至少大約4小時，至少大約8小時，至少大約12小時，大約M小時或者更長，大約48小時或者更長，大約3、4、5、6、7或更多天等，或者任何其它相關的功能上限定的期間(例如足夠誘發、促進、提高和/或調節與抗體與抗原的結合關聯的生理應答的時間，和/或足以供抗體募集效應物活性的時間)。免疫球蛋白分子的重鏈和輕鏈的可變區含有與抗原互作的結合域。抗體(Abs)的恒定區可以介導免疫球蛋白與宿主組織或因子的結合，包括免疫系統的各種細胞(例如效應物細胞)和補體系統的組分，例如Clq，補體活化經典途徑中的第一組分。抗-TF抗體還可以是雙特異性抗體、雙抗體(diabody)或類似分子(雙抗體的描述見例如PNAS USA迎(14) ,6444-8(1993))。確實，本發明提供的雙特異性抗體、雙抗體等除了結合組織因子的一部分或組織因子FVIIa復合體之外，還可以結合任何合適的靶標。如前所述，除非在上下文中另外指出或明顯有矛盾，在這里，術語“抗體”包括抗體保持與抗原特異性結合能力的片段。已經顯示，抗體的抗原結合功能可以由全長抗體的片段執行。涵蓋在術語“抗體”中的結合片段的實例包括(i)Fab’或Fab片段，一種由\，VH，(^和 ChI域構成的單價片段，或者如W02007059782 (Genmab)中描述的單價抗體；(ii)F(ab ‘ )2 片段、包含兩個通過在鉸鏈區中的二硫橋連接的Fab片段的雙價片段；(iii)基本上由Vh 和ChI域組成的Fd片段；(iv)基本上由八和乂11域組成的Fv片段；(v)dAb片段(Ward et al.，Nature 341, 544-546 (1989)),其基本上由V11域構成，也稱作結構域抗體(Ho 11 et al ；Trends Biotechnol. 2003 Nov ；21 (11) :484-90) ； (vi)駱駝抗體(camelid)或納米抗體(nanobodies)(Revets et al ；Expert Opin Biol Ther. 2005 Jan ；旦(1) :111-24)，禾口 (vii)分離的補體決定區(CDR)。而且，盡管Fv片段的兩個域，，是由不同的基因編碼的，但是它們可以通過合成的接頭用重組方法連接起來，該合成的接頭能夠使它們作為單個蛋白鏈制造出來，其中\和Vh區配對形成單價分子(稱作單鏈抗體或單鏈Fv(SCFV)， 見例如 Bird et al.，Science 242,423-426(1988)和 Huston et al.，PNAS USA 85, 5879-5883(1988))。除非另外指出或上下文中明確指明，這些單鏈抗體包含在術語“抗體” 的范圍內。盡管這些片段一般包含在抗體的意思之內，它們總體上并且各自獨立地構成本發明的獨特特征，顯示不同的生物學性質和效用。在本發明的上下文中，進一步討論了這些和其它有用的抗體片段。還應當理解，除非另外指出，否則術語“抗體”還包括用任何已知的技術提供多克隆抗體、單克隆抗體(單抗)、抗體樣多肽，例如嵌合抗體和人源化抗體，以及抗體的保留與抗原特異性結合能力的片段(抗原結合片段)，所述已知技術例如酶法切割(enzymatic cleavage)、肽合成和重組技術。所產生的抗體可以具有任何同種型。“抗-TF抗體”是如上所述的抗體，其與抗原組織因子特異結合。如這里所使用的，術語“人抗體”意圖包括具有來自人種系免疫球蛋白序列的可變區和恒定區的抗體。本發明的人抗體可以包括不是由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如通過體外隨機或定點誘變，或在基因改組期間或通過體內體細胞突變引入的突變)。然而，如這里所使用的，術語“人抗體”不意圖包括如下的抗體，其中來自另一種哺乳動物物種(，例如小鼠)種系的CDR序列被嫁接到人框架序列上。在一個優選實施方案中，本發明的抗體是分離的。如這里所使用的，“分離的抗體” 意圖指示如下的抗體，其基本上不含其它具有不同抗原特異性的抗體(例如，特異結合組織因子的分離抗體基本上不含特異結合除組織因子之外的抗原的抗體)。然而，特異結合人組織因子的表位、同種型或變體的分離抗體可以同其它相關抗原，例如來自其它物種的抗原(例如組織因子種間同源物)具有交叉反應性。而且，分離的抗體可以基本上不含其它細胞材料和/或化學劑。在本發明的一個實施方案中，兩種或多種具有不同抗原結合特異性的“分離”單克隆抗體被組合在良好限定的組合物中。
當在本文上下文中使用兩種或多種抗體時，術語“與...競爭”或“與...交叉競爭”是指，兩個或多個抗體競爭結合TF，例如在本文實施例6中所述的測定中競爭結合TF。 對于一些抗體對，實施例6中測定方法中的競爭只有在將一種抗體包被在平板上，而用另一種進行競爭時才能觀察到，但反之則不行。當在本文中使用時，術語“與...競爭”還意圖涵蓋這些組合抗體。如這里所使用的，術語“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”是指具有單一分子組成的抗體分子的制備物。單克隆抗體組合物顯示對特定表位的單一的結合特異性和親和力。因此，術語“人單克隆抗體”是指顯示單一結合特異性的抗體，其具有來自人種系免疫球蛋白序列的可變區和恒定區。人單克隆抗體可以通過雜交瘤產生，雜交瘤包含與永生化細胞融合的、從轉基因或轉染色體非人類動物(例如轉基因小鼠)獲得的B細胞，該動物具有包含人重鏈轉基因和輕鏈轉基因的基因組。如這里所使用的，在抗體與預定抗原的結合的語境中，術語“結合”典型地是其以相當于Kd大約ΙΟΙ或者更小，例如大約101或者更小，例如大約ΙΟ—Ι或者更小，大約 IO^ioM或者更小，或者大約10_"M或者更小的親和力結合(例如當在BIAcore 3000設備中用抗原作為配體、以抗體作為分析物通過表面等離子體共振(SPR)技術進行測定時)，并且與預定抗原的結合親和力與除預定抗體或密切相關的抗原之外的非特異性抗原(例如BSA 或酪蛋白)的結合親和力相比，與預定抗原的Kd比與非特異抗原的Kd低至少10倍，例如至少低100倍，例如至少低1，000倍，例如至少低10，000倍，例如至少低100，000倍。親和力低出的量取決于抗體的KD，因此當抗體的Kd非常低時(即抗體高度特異)，對抗原的親和力低于對非特異性抗原的親和力的量可以是至少10，000倍。如這里所使用的，術語“k/^sec—1)是指特定抗體-抗原互作的解離速率常數。所述值也稱作k。ff值。如這里所使用的，術語“ka” (M-1X sec"1)是指特定抗體-抗原互作的結合速率常數。如這里所使用的，術語“KD” (M)是指特定抗體-抗原互作的解離平衡常數。如這里所使用的，術語“ΚΑ” (Μ"1)是指特定抗體-抗原互作的結合平衡常數，并且通過ka除以kd獲得。本發明還提供了包括實施例抗體的\區、、或一個或多個⑶R的功能變體的抗體。在抗-TF抗體的語境中使用的\、Vh或CDR的功能變體仍然允許該抗體保留本發明抗體的親和力/親合力和/或特異性/選擇性的至少相當部分(至少大約50^,60^,70%, 80 %，90 %，95 %或更多)，并且在一些情況下，這種抗-TF抗體可以有比親本抗體更大的親和力、選擇性和/或特異性。這些功能變體典型地保留與親本抗體的顯著序列同一性。兩條序列之間的百分比同一性是序列所分享的相同位置的數目的函數(即，％同源性=相同位置數/總位置數 xlOO)，同時考慮缺口的數目和每個缺口的長度，缺口的引入是為了在兩條序列間進行最佳比對的需要。兩條序列之間的序列比對和百分比同一性的確定可以用數學算法實現，如下面非限制性實例中所述。兩條核苷酸序列之間的百分比同一性可以用GCG軟件包(可在http://WWW. gcg. com獲得)中的GAP程序加以確定，使用NWSgapdna. CMP矩陣，缺口權重為40、50、60、70或80，和長度權重1、2、3、4、5或6。兩條核苷酸或氨基酸序列之間的百分比同一性還可以用 E. Meyers and W. Miller, Comput. Appl. Biosci 4,11-17(1988))的算法加以確定，其已經被引入到ALIGN程序版)中，使用PAM120加權殘基表，缺口長度罰分為12，缺口罰分為4。此外，兩條氨基酸序列之間的百分比同一性可以用Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48,444-453 (1970))算法加以確定，其被引入到GCG軟件包(可以從http //www. gcg. com獲得)的GAP程序中，使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣，缺口權重為16、14、12、 10、8、6、或4，長度權重為1、2、3、4、5、或6。⑶R變體的序列可以通過主要是保守的替換而與親本抗體序列的⑶R序列不同， 例如變體的替換中有至少大約35%、大約50%或更多、大約60%或更多、大約70%或更多、 大約75%或更多、大約80%或更多、大約85%或更多、大約90%或更多、大約95%或更多 (例如大約65-99%，例如大約96%，97%或98% )是保守的氨基酸殘基替換。⑶R變體的序列可以通過主要是保守的替換而與親本抗體序列的⑶R序列不同， 例如變體中的至少10個替換，例如至少9、8、7、6、5、4、3、2或1個替換是保守的氨基酸殘基替換。在本發明的上下文中，保守替換可以用下列三個表格中的一個或多個中反映的氨基酸分類中的替換加以定義。用于保守替換的氨基酸殘基分類
權利要求
1.一種結合人組織因子的人抗體。
2.權利要求1的抗體，其中當用實施例13中所述的測定方法進行測定時，該抗體以 3nM或更低，例如0. 50nM或更低，例如0. 35nM或更低，例如0. 20nM或更低，例如0. InM或更低的表觀親和力(EC5tl)與組織因子的胞外域結合。
3.前述權利要求中任一項的抗體，其中該抗體結合表達組織因子的哺乳動物細胞，例如用編碼組織因子的構建體轉染的A431細胞，優選地，當用實施例14中所述的測定方法進行測定時，其表觀親和力(EC5tl)為IOnM或更低，例如8nM或更低，例如5nM或更低，例如2nM 或更低，例如InM或更低，例如0. 5nM或更低，例如0. 3nM或更低。
4.前述權利要求中任一項的抗體，其中該抗體能夠在A431細胞中誘發抗體依賴的細胞細胞毒性，優選地，當用實施例20中所述的測定方法進行測定時，其EC5tl值為2nM或更低，例如InM或更低，例如0. 7nM或更低，或者0. 3nM或更低，例如0. 20nM或更低，或者0. InM 或更低，或者0. 05nM或更低。
5.前述權利要求中任一項的抗體，其中當用實施例M中所述的方法進行測定時，該抗體可有效抑制已建立的MDA-MB-231腫瘤的生長，和/或當用實施例沈中所述的方法進行測定時，可有效抑制已建立的BxPC3腫瘤的生長。
6.前述權利要求中任一項的抗體，其中該抗體抑制組織因子誘導的凝血，優選地，當用實施例19中所述的測定方法進行測定時，其中值抑制濃度小于ΙΟηΜ，例如小于5nM，例如小于2nM，例如小于InM。
7.前述權利要求中任一項的抗體，其中該抗體抑制FVIIa與組織因子結合，優選地， 當用實施例15中所述的測定方法進行測定時，其抑制的最大抑制值大于80%，例如大于 90%。
8.前述權利要求中任一項的抗體，其中該抗體抑制FVIIa誘導的MDA-MB-231細胞的 IL-8釋放，優選地，當用實施例17中所述的測定方法進行測定時，抑制的最大抑制值大于 40 %，例如大于50 %，例如大于60 %。
9.前述權利要求中任一項中的抗體，其中該抗體抑制FX被TF/FVIIa復合體轉變成 FXa,優選地，當用實施例18中所述的測定方法進行測定時，抑制小于50%，例如小于40%， 例如在1-30%的范圍內。
10.前述權利要求中任一項的抗體，其中所述抗體與包括包含序列SEQID N0:9的VH 區和包含序列SEQ ID NO 65的VL區的抗體競爭組織因子結合。
11.前述權利要求中任一項的抗體，其中與組織因子的結合不涉及組織因子的下述任一氨基酸45位的W，46位的K或94位的Y。
12.前述權利要求中任一項的抗體，其中所述抗體與包括包含序列SEQID N0:37的VH 區及包含序列SEQ ID NO 93的VL區的抗體競爭組織因子結合。
13.前述權利要求中任一項的抗體，其中所述抗體抑制FVIIa誘導的ERK磷酸化，優選地，當用實施例16中所述的測定方法進行測定時，其中值抑制濃度小于ΙΟηΜ，例如小于 ^iM,例如小于&ιΜ。
14.權利要求1-7和9-13中任一項的抗體，其中該抗體抑制ERK磷酸化，優選地，當用實施例16中所述的測定方法進行測定時，其中值抑制濃度小于ΙΟηΜ，例如小于5nM，例如小于2nM，并且如實施例17中的測定方法所述的對FVII誘導的IL-8釋放的抑制不超過最大10%。
15.前述權利要求中任一項的抗體，其中抗體能夠誘導C3c和Wc沉積，優選地，如實施例21中所述進行測定，該抗體能夠誘導C3c和Ck沉積。
16.前述權利要求中任一項的抗體，其中如實施例觀所述，抗體Fab片段與組織因子胞外域結合，用ELISA測得的EC50值低于0. 1 μ g/mL,例如低于0. 05 μ g/mL,例如低于 0.04 μ g/mL。
17.權利要求1-15中任一項的抗體，其中如實施例28所述，抗體Fab片段與組織因子胞外域結合，按照ELISA測得的EC50值高于1. 0 μ g/mL。
18.權利要求1-15中任一項的抗體，其中如實施例28所述，抗體Fab片段與組織因子胞外域結合，EC50值低于10 μ g/mL,例如低于1 μ g/mL,例如低于0. 5 μ g/mL,或者低于 0.2 μ g/mL。
19.上述任一權利要求的抗體，其中該抗體與人組織因子結合但不與鼠組織因子結合， 并且相比于與人TF的結合，其與改組構建體42-84mm顯示降低的結合，該改組構建體包含人的TF序列，只是氨基酸42-84被小鼠序列代替，如實施例27所述。
20.權利要求1-18的抗體，其中該抗體與人組織因子結合但不與鼠組織因子結合，并且相比于與人TF的結合，其與改組構建體85-122mm顯示降低的結合，該改組構建體包含人的TF序列，只是氨基酸85-122被小鼠序列代替，如實施例27所述。
21.權利要求1-18的抗體，其中該抗體與人組織因子結合但不與鼠組織因子結合，并且相比于與人TF的結合，其與改組構建體123-137mm顯示降低的結合，該改組構建體包含人的TF序列，只是氨基酸123-137被小鼠序列代替，如實施例27所述。
22.權利要求1-18的抗體，其中該抗體與人組織因子結合但不與鼠組織因子結合，并且相比于與人TF的結合，其與改組構建體185-225mm顯示降低的結合，該改組構建體包含人的TF序列，只是氨基酸185-225被小鼠序列代替，如實施例27所述。
23.權利要求1-18的抗體，其中該抗體與人組織因子結合但不與鼠組織因子結合，并且相比于與人TF的結合，其與改組構建體226-250mm顯示降低的結合，該改組構建體包含人的TF序列，只是氨基酸2沈-250被小鼠序列代替，如實施例27所述。
24.根據權利要求19-23中任一項的抗體，其中相比于與人TF的結合，其與超過1種改組構建體顯示降低的結合，例如與下列改組構建體的降低的結合如權利要求19中所定義的改組構建體42-84mm和如權利要求20中所定義的改組構建體85-122mm，或如權利要求21中所定義的改組構建體123-137mm，和如權利要求22中所定義的改組構建體185-225mm，和如權利要求23中所定義的改組構建體226_250mm。
25.前述權利要求中任一項中的抗體，其中所述抗體-與包括包含序列SEQ ID NO 9的VH區及包含序列SEQ ID NO 65的VL區的抗體競爭組織因子結合，并且-不與包括包含序列SEQ ID NO 37的VH區及包含序列SEQ ID NO 93的VL區的抗體競爭組織因子結合。
26.權利要求25的抗體，其中所述抗體包括這樣的VH⑶R3區，其具有a)如下所示的序列-SEQ ID No 12,-SEQ ID No 16,-SEQ ID No 20,-SEQ ID No 24,-SEQ ID No 28,或者b)所述任一序列的變體，例如具有最多1、2、3、4、或5個氨基酸修飾，優選替換例如保守替換的變體。
27.權利要求沈的抗體，其中該抗體包括具有如SEQID NO: 12所示的序列或其變體的VH⑶R3區，其中該變體在位置2、3、6、9和11中一個或多個位置處包含修飾，優選地，其中該修飾是替換，更優選地，其中該替換選自下組a)位置2處的R被K替換，b)位置3處的S被A或T替換，c)位置6處的G被T替換，d)位置9處的L被F替換，和e)位置11處的S被Y替換。
28.權利要求1或沈的抗體，其中該抗體包括a)包含CDR1，2和3序列SEQID NO :10，11和12的VH區，和包含CDR1，2和3序列SEQ ID NO 66,67 和 68 的 VL 區，b)包含CDR1，2和3序列SEQID NO 14，15和16的VH區，和包含CDR1，2和3序列SEQ ID NO 70,71 和 72 的 VL 區，c)包含CDR1，2和3序列SEQID NO 18，19和20的VH區，和包含CDR1，2和3序列SEQ ID NO 74,75 和 76 的 VL 區，d)包含CDRl，2禾口3序歹Ij SEQ ID NO 22，23和M的VH區，和包含CDRl，2禾口 3序列SEQ ID NO 78,79 和 80 的 VL 區，e)包含CDR1，2和3序列SEQID NO :26，27和沘的VH區，和包含CDR1，2和3序列SEQ ID NO 82,83 和 84 的 VL 區，或f)所述任一抗體的變體，其中所述變體優選地在所述序列中具有最多1、2或3個氨基酸修飾，更優選地是氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
29.權利要求沈的抗體，包含這樣的VH，其a)與選自SEQID NO :9，13，17，21和25的VH區序列具有至少80%同一性，例如至少 90 %，至少95 %，或者至少98 %或100 %同一性，或者b)與選自SEQID NO :9，13，17，21，21和25的VH區序列相比具有最多20個，例如15 個，或者10個，或者5、4、3、2或1個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
30.權利要求沈的抗體，包含這樣的VL，其a)與選自SEQID NO :65，69，73，77和81的VL區序列具有至少80%同一性，例如至少 90 %，至少95 %，或者至少98 %或100 %同一性，或者b)與選自SEQID NO :65，69，73，77和81的VH區序列相比具有最多20個，例如15個， 或者10個，或者5、4、3、2或1個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
31.權利要求沈的抗體，包括a)包含序歹IjSEQ ID NO 9的VH區和包含序列SEQ ID NO 65的VL區，b)包含序列SEQID NO 13的VH區和包含序列SEQ ID NO 69的VL區，c)包含序列SEQID NO 17的VH區和包含序列SEQ ID NO 73的VL區，d)包含序歹IjSEQ ID NO :21的VH區和包含序列SEQ ID NO 77的VL區，e)包含序列SEQID NO 25的VH區和包含序列SEQ ID NO 81的VL區，或f)所述任一抗體的變體，其中所述變體在所述序列中優選地具有最多1、2或3個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
32.權利要求114中任一項的抗體，其中所述抗體-與包括包含序列SEQ ID NO 9的VH區及包含序列SEQ ID NO 65的VL區的抗體競爭組織因子結合，并且-與包括包含序列SEQ ID NO 37的VH區及包含序列SEQ ID NO 93的VL區的抗體競爭組織因子結合。
33.權利要求32的抗體，其中所述抗體包括這樣的VH⑶R3區，其具有a)如下所示的序列 -SEQ ID No 8, -SEQ ID No 52, 或者b)所述任一序列的變體，例如具有最多1、2或3個氨基酸修飾，優選替換例如保守替換的變體。
34.權利要求1或32的抗體，其中該抗體包括a)包含CDR1，2和3序列SEQID NO :6，7禾口 8的VH區，和包含CDR1，2和3序列SEQ ID NO 62,63 和 64 的 VL 區，b)包含CDRl，2禾口3序列SEQ ID NO 50，51禾口 52的VH區，和包含CDRl，2禾口 3序列SEQ ID NO 106,107 禾口 108 的 VL 區，或c)所述任一抗體的變體，其中所述變體優選地在所述序列中具有最多1、2或3個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
35.權利要求32的抗體，包括這樣的VH，其a)與選自SEQID NO 5和49的VH區序列具有至少80%同一性，例如至少90%，至少 95%，或者至少98%或100%同一性，或者b)與選自SEQID NO :5和49的VH區序列相比具有最多20個，例如15個，或者10個， 或者5、4、3、2或1個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
36.權利要求32的抗體，其包括這樣的VL，所述VLa)與選自SEQID N0:61和105的VL區序列具有至少80%同一性，例如至少90%，至少95%，或者至少98%或100%同一性，或者b)與選自SEQID NO 61和105的VH區序列相比具有最多20個，例如15個，或者10 個，或者5、4、3、2或1個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
37.權利要求32的抗體，其包括a)包含序列SEQ ID NO 5的VH區和包含序列SEQ ID NO :61的VL區，b)包含序列SEQID NO 49的VH區和包含序列SEQ ID NO :105的VL區，或c)所述任一抗體的變體，其中所述變體在所述序列中優選地具有最多1、2或3個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
38.權利要求114中任一項的抗體，其中所述抗體-不與包括包含序列SEQ ID NO 9的VH區及包含序列SEQ ID NO 65的VL區的抗體競爭組織因子結合，并且-與包括包含序列SEQ ID NO 37的VH區及包含序列SEQ ID NO 93的VL區的抗體競爭組織因子結合。
39.權利要求38的抗體，其中所述抗體包括這樣的VH⑶R3區，其具有a)如下所示的序列 -SEQ ID No 32, -SEQ ID No 36, -SEQ ID No 40, -SEQ ID No 56, 或者b)所述任一序列的變體，例如具有最多1、2或3個氨基酸修飾，優選替換，例如保守替換的變體。
40.權利要求1或38的抗體，其中該抗體包括a)包含CDRl，2禾口3序列SEQ ID NO 30，31禾口 32的VH區，和包含CDRl，2禾口 3序列SEQ ID NO 86,87 和 88 的 VL 區，b)包含CDR1，2和3序列SEQID NO :34，；35和36的VH區，和包含CDR1，2和3序列SEQ ID NO 90,91 和 92 的 VL 區，c)包含CDRl，2禾口3序歹Ij SEQ ID NO 38，39禾口 40的VH區，和包含CDRl，2禾口 3序列SEQ ID NO 94,95 和 96 的 VL 區，d)包含CDR1，2和3序列SEQID NO 54，55和56的VH區，和包含CDR1，2和3序列SEQ ID NO :110,11 和 112 的 VL 區，或e)所述任一抗體的變體，其中所述變體優選地在所述序列中具有最多1、2或3個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
41.權利要求38的抗體，其包含這樣的VH，所述VHa)與選自SEQID NO :29，33，37和53的VH區序列具有至少80%同一性，例如至少 90 %，至少95 %，或者至少98 %或100 %同一性，或者b)與選自SEQID NO : ，33，37和53的VH區序列相比具有最多20個，例如15個，或者10個，或者5、4、3、2或1個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
42.權利要求38的抗體，其包含這樣的VL，所述VLa)與選自SEQID NO =85,89,93和109的VH區序列具有至少80%同一性，例如至少 90%，至少95%，或者至少98%或100%同一性，或者b)與選自SEQID NO :85，89，93和109的VH區序列相比具有最多20個，例如15個， 或者10個，或者5、4、3、2或1個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
43.權利要求38的抗體，其包括a)包含序歹IjSEQ ID NO 29的VH區和包含序列SEQ ID NO 85的VL區，b)包含序列SEQID NO 33的VH區和包含序列SEQ ID NO 89的VL區，c)包含序列SEQID NO 37的VH區和包含序列SEQ ID NO 93的VL區，d)包含序列SEQID NO 53的VH區和包含序列SEQ ID NO :109的VL區，或e)所述任一抗體的變體，其中所述變體在所述序列中優選地具有最多1、2或3個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
44.前述權利要求I-M中任一項的抗體，其中所述抗體與包括包含序列SEQID N0:41 的VH區和包含序列SEQ ID NO 97的VL區的抗體競爭組織因子結合。
45.權利要求44的抗體，其中所述抗體包括這樣的VH⑶R3區，其具有a)如下所示的序列-SEQ ID No 4,-SEQ ID No 44,-SEQ ID No 48,或者b)所述任一序列的變體，例如具有最多1、2或3個氨基酸修飾，優選替換例如保守替換的變體。
46.權利要求1或44的抗體，其中該抗體包括a)包含CDRl，2和3序列SEQID NO :2，3禾口 4的VH區，和包含CDRl，2和3序列SEQ ID NO 58,59 和 60 的 VL 區，b)包含CDR1，2和3序列SEQID NO :42，43和44的VH區，和包含CDR1，2和3序列SEQ ID NO 98,99 和 100 的 VL 區，c)包含CDR1，2和3序列SEQID NO 46，47和48的VH區，和包含CDR1，2和3序列SEQ ID NO 102,103 禾口 104 的 VL 區，或者d)所述任一抗體的變體，其中所述變體優選地在所述序列中具有最多1、2或3個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
47.權利要求44的抗體，其包括這樣的VH，所述VHa)與選自SEQID NO :1，41和45的VH區序列具有至少80%同一性，例如至少90%， 至少95%，或者至少98%或100%同一性，或者b)與選自SEQID NO :1，41和45的VH區序列相比具有最多20個，例如15個，或者10 個，或者5、4、3、2或1個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
48.權利要求44的抗體，其包括這樣的VL，所述VLa)與選自SEQID NO :57，97和101的VL區序列具有至少80%同一性，例如至少90%， 至少95%，或者至少98%或100%同一性，或者b)與選自SEQID N0:57，97和101的VH區序列相比具有最多20個，例如15個，或者 10個，或者5、4、3、2或1個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
49.權利要求44的抗體，包括a)包含序列SEQID NO 1的VH區和包含序列SEQ ID NO 57的VL區，b)包含序列SEQID NO :41的VH區和包含序列SEQ ID NO 97的VL區，c)包含序列SEQID NO 45的VH區和包含序列SEQ ID NO :101的VL區，或者d)所述任一抗體的變體，其中所述變體在所述序列中優選地具有最多1、2或3個氨基酸修飾，更優選氨基酸替換，例如保守氨基酸替換。
50.權利要求1-5中任一項的抗體，其中當用本文實施例22中所述的方法進行測定時， 該抗體對組織因子的親和力小于5nM，例如小于3. 5nM，例如小于2nM。
51.權利要求1-5中任一項的抗體，其中當用本文實施例22中所述的方法進行測定時， 該抗體的kd大于KT3sec-1,和/或當用本文實施例22中所述的方法進行測定時，該抗體的 ka 大于 5xl04mol 1Sec 1O
52.權利要求1-5中任一項的抗體，其中當用本文實施例22中所述的親和力方法進行測定時，該抗體的kd大于K^sec—1，并且當用本文實施例22中所述的親合力方法進行測定時，該抗體的親合力小于5nM，例如小于InM，例如小于0. 2nM。
53.權利要求1-5或51或52中任一項的抗體，其中該抗體與健康組織不顯示結合，特別是與人腎小球不顯示結合，例如用實施例23中所述的測定方法測得；但是與胰腺腫瘤顯示結合，例如用本文實施例23中所述的測定方法測得。
54.權利要求1-5或51-53中任一項的抗體，其中當用本文實施例沈中所述的方法進行測定時，該抗體可有效抑制已建立的BX-PC3腫瘤的生長。
55.前述權利要求中任一項的抗體，其中該抗體進一步具有一種或多種如下性質抑制增殖、抑制腫瘤血管發生、誘導腫瘤細胞凋亡、與可變剪接的組織因子結合。
56.權利要求1-5中任一項的抗體，其與包含下列的抗體競爭組織因子結合a)包含序列SEQIDNO:9的VH區和包含序歹Ij SEQ ID NO 65的VL區，b)包含序列SEQIDNO1的VH區和包含序列SEQ ID NO 57的VL區，C)包含序列SEQIDNO:5的VH區和包含序列SEQ ID NO 61的VL區，d)包含序列SEQIDNO13的VH區和包含序列SEQIDNO69的VL區，e)包含序列SEQIDNO17的VH區和包含序列SEQIDNO73的VL區，f)包含序列SEQIDNO21的VH區和包含序列SEQIDNO77的VL區，g)包含序列SEQIDNO25的VH區和包含序列SEQIDNO81的VL區，h)包含序列SEQIDNO29的VH區和包含序列SEQIDNO85的VL區，i)包含序列SEQIDNO33的VH區和包含序列SEQIDNO89的VL區，j)包含序列SEQIDNO37的VH區和包含序列SEQIDNO93的VL區，k)包含序列SEQIDNO41的VH區和包含序列SEQIDNO97的VL區，1)包含序列SEQIDNO45的VH區和包含序列SEQIDNO101 的 VL 區，m)包含序列SEQIDNO49的VH區和包含序列SEQIDNO105的VL區，或者η)包含序列SEQIDNO53的VH區和包含序列SEQIDNO109 的 VL 區。
57.權利要求1-5中任一項的抗體，其與具有下述的抗體結合組織因子上的相同表位包含序歹Ij SEQ ID NO 9的VH區和包含序列SEQ ID NO 65的VL區， 包含序列SEQ ID NO 1的VH區和包含序列SEQ ID NO 57的VL區， 包含序列SEQ ID NO 5的VH區和包含序列SEQ ID NO :61的VL區， 包含序列SEQ ID NO 13的VH區和包含序列SEQ ID NO 69的VL區， 包含序列SEQ ID NO 17的VH區和包含序列SEQ ID NO 73的VL區， f)包含序歹Ij SEQ ID NO :21的VH區和包含序列SEQ ID NO 77的VL區，g)包含序列SEQIDNO25的VH區和包含序歹Ij SEQIDNO81的VL區，h)包含序列SEQIDNO29的VH區和包含序歹Ij SEQIDNO85的VL區，i)包含序列SEQIDNO33的VH區和包含序歹Ij SEQIDNO89的VL區，j)包含序列SEQIDNO37的VH區和包含序歹Ij SEQIDNO93的VL區，k)包含序列SEQIDNO:41的VH區和包含序歹Ij SEQIDNO97的VL區，1)包含序列SEQIDNO45的VH區和包含序列SEQIDNO101 的 VL 區，m)包含序列SEQIDNO49的VH區和包含序列SEQIDNO105的VL區，或者η)包含序列SEQIDNO53的VH區和包含序歹Ij SEQIDNO109 的 VL 區。
58.前述權利要求中任--項的抗體，其中該抗體包括-源自選自下組的人種系Vh序列的重鏈可變區IGHV1-18*01，IGHV3_23*01， IGHV3-30*01， IGHV3-33*01， IGHV3_33*03， IGHV1_69*02， IGHV1_69*04 和 IGHV5_51*01，和 /或-源自選自下組的人種系Vk序列的輕鏈可變區IGKV3-20*01，IGKV1_13*02， IGKV3-11*01和 IGKV1D-16*01。
59.前述權利要求中任一項的抗體，其中該抗體是全長抗體，優選IgGl抗體，特別是 IgGl，κ 抗體。
60.前述權利要求中任一項的抗體，其中該抗體偶聯于另一部分，例如細胞毒部分、放射性同位素或藥物。
61.權利要求1-3或15-49中任一項的抗體，其中該抗體是效應物功能缺陷抗體。
62.權利要求61的抗體，其中該效應物功能缺陷抗組織因子抗體是穩定化的人IgG4 抗體，例如其中人IgG4重鏈恒定區409位精氨酸被替換為賴氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸或亮氨酸，優選賴氨酸，和/或其中鉸鏈區包括Cys-ftO-Pro-Cys序列的抗體。
63.權利要求1-3或15-49中任一項的抗體，其中該抗體是單價抗體。
64.權利要求63的抗體，其中所述單價抗體用如下方法構建，其包括i)提供編碼所述單價抗體輕鏈的核酸構建體，所述構建體包含編碼選定的抗原特異性抗體之VL區的核苷酸序列和編碼Ig之恒定CL區的核苷酸序列，其中所述編碼選定的抗原特異性抗體之VL區的核苷酸序列和所述編碼Ig之CL區的核苷酸序列可操作地連接在一起，并且其中，在IgGl亞型的情況下，編碼所述CL區的核苷酸序列經過修飾，使得所述CL 區不含有任何如下所述的氨基酸在存在多克隆人IgG的條件下或者當施用于動物或人類時，所述氨基酸能夠與其它包含與該CL區相同的氨基酸序列的肽形成二硫鍵或共價鍵； )提供編碼所述單價抗體重鏈的核酸構建體，所述構建體包含編碼選定的抗原特異性抗體之VH區的核苷酸序列和編碼人Ig之恒定CH區的核苷酸序列，其中編碼CH區的核苷酸序列經過修飾，使得相應于鉸鏈區的區域，以及如Ig亞型所要求的CH區的其它區域， 如CH3區，不含有任何如下所述的氨基酸殘基在存在多克隆人IgG的條件下或者當施用于動物或人類時，所述氨基酸殘基參與同其它包含與人Ig之CH區相同的氨基酸序列的肽形成二硫鍵或者共價或穩定非共價的重鏈間鍵，其中該編碼選定的抗原特異性抗體之VH區的核苷酸序列和該編碼所述Ig之CH區的核苷酸序列可操作地連接在一起；iii)提供用于產生所述單價抗體的細胞表達系統；iv)通過在(iii)的細胞表達系統的細胞中共表達(i)和(ii)的核酸構建體產生所述單價抗體。
65.權利要求63的抗體，其中該單價抗體包括(i)權利要求1-26的抗體的可變區或所述區的抗原結合部分，和( )免疫球蛋白Ch區或其包括Ch2和Ch3區的片段，其中該Ch區或其片段已被修飾， 從而使相當于鉸鏈區的區域，以及，如果免疫球蛋白不是IgG4亞型，Ch區的其它區域，例如 Ch3區，不含有任何在多克隆人IgG存在下能夠與相同的Ch區形成二硫鍵或者與相同的Ch 區形成其它共價或穩定非共價重鏈間鍵的氨基酸殘基。
66.權利要求63-65中任一項的抗體，其中該重鏈已被修飾，使得整個鉸鏈已被刪除。
67.一種雙特異性分子，包括權利要求1-62中任一項的抗體以及第二結合特異性，例如對人效應物細胞、人Fc受體或T細胞受體的結合特異性。
68.一種表達載體，包括編碼選自SEQ ID NO=I-SEQ ID NO :112的一個或多個氨基酸序列的核苷酸序列。
69.根據權利要求68的表達載體，進一步包括編碼人抗體的輕鏈恒定區、重鏈恒定區、 或輕鏈和重鏈二者的恒定區的核苷酸序列。
70.一種重組真核或原核宿主細胞，其產生如權利要求1-59或61-66中任一項所限定的抗體。
71.—種藥物組合物，其包含如權利要求I-M中任一項限定的抗體，或者如權利要求 67所限定的雙特異性分子，以及藥學可接受的載體。
72.如權利要求1-66中任一項限定的抗體或如權利要求67中所限定的雙特異性分子， 其用于作為藥物的用途。
73.權利要求72的抗體或雙特異性分子，其中該用途是用于治療癌癥。
74.權利要求73的抗體或雙特異性分子，其中該癌癥選自下組中樞神經系統腫瘤、頭頸癌、肺癌、乳腺癌、食道癌、胃癌、肝和膽癌、胰腺癌、結腸直腸癌、膀胱癌、腎癌、前列腺癌、 子宮內膜癌、卵巢癌、惡性黑素瘤、肉瘤、原始起源不明的腫瘤、骨髓癌、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病和非霍奇金淋巴瘤、皮膚癌、神經膠質瘤、腦的癌癥、子宮的癌癥和直腸的癌癥。
75.權利要求72的抗體或雙特異性分子，其中該用途是用于治療胰腺癌。
76.權利要求72的抗體或雙特異性分子，其中該用途是用于治療結腸直腸癌。
77.權利要求72的抗體或雙特異性分子，其中該用途是用于治療卵巢癌。
78.權利要求72的抗體或雙特異性分子，其中該用途是用于治療乳腺癌。
79.權利要求72的抗體或雙特異性分子，其中該用途是用于治療前列腺癌。
80.權利要求72的抗體或雙特異性分子，其中該用途是用于治療膀胱癌。
81.權利要求72的抗體或雙特異性分子，其中該藥物用于與一種或多種其它治療劑如化療劑組合治療癌癥。
82.權利要求1-66中任一項的抗體或權利要求697的雙特異性分子在制造用于治療癌癥的藥物中的用途。
83.權利要求82的用途，其包含權利要求中74-81任一項的附加特征。
84.一種用于抑制表達組織因子的腫瘤細胞的生長和/或增殖的方法，包括向有需要的個體施用權利要求1-66中任一項的抗體或如權利要求67所限定的雙特異性分子。
85.一種用于產生權利要求1-59或61-66中任一項的抗體的方法，所述方法包括如下步驟a)培養權利要求70的宿主細胞，和b)從培養基中純化抗體。
86.一種診斷用組合物，包含如權利要求1-67中任一項限定的抗體。
87.一種用于檢測樣品中組織因子之存在的方法，包括-使樣品與權利要求1-66任一項的抗體或權利要求67的雙特異性分子在允許所述抗體或雙特異性分子同組織因子之間形成復合體的條件下接觸；和 -分析是否形成了復合體。
88.一種用于檢測樣品中組織因子之存在的試劑盒，包括-權利要求1-66中任一項的抗體或權利要求67的雙特異性分子；和 -使用該試劑盒的說明。
全文摘要
公開了與人TF結合的分離的人單克隆抗體和基于抗體的相關組合物和分子。還公開了包括該抗體的藥物組合物，以及使用該抗體的治療和診斷方法。
文檔編號A61P35/00GK102317319SQ200980156348
公開日2012年1月11日 申請日期2009年12月9日 優先權日2008年12月9日
發明者伊娃.埃恩魯思, 保羅.帕倫, 勒內.M.A.霍伊特, 奧利.巴德斯加德, 威廉.K.布利克, 戴維.P.E.薩廷, 桑德拉.弗普洛根, 湯姆.文克, 米沙.霍特坎普, 維比克.M.布雷恩霍爾特, 羅布.N.德瓊格, 詹.范德溫克爾, 馬羅斯卡.奧德肖恩 申請人:根馬布股份公司