基于Ⅲ型纖連蛋白結構域的支架組合物、方法及用途的制作方法

專利名稱：基于Ⅲ型纖連蛋白結構域的支架組合物、方法及用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及具有新性質的蛋白質支架，所述新性質包括結合細胞靶標的能力。更具體而言，本發明涉及基于III型纖連蛋白(FN3)重復序列的共有序列的蛋白質支架。
背景技術：
當需要對靶分子具有高親和性和特異性時，單克隆抗體是最廣泛使用的治療性蛋白質類型。但是，可被工程改造成能結合這種靶標的非抗體蛋白質在生物醫藥行業中也具有很大的重要性。這些“另類的支架”蛋白質可具有優于傳統抗體的優點，因為它們尺寸小、 缺乏二硫鍵、穩定性高和能夠在原核生物宿主中表達。容易應用新的純化方法；它們容易綴合到藥物/毒素，能有效地滲透到組織中且容易編組成多特異性結合物(binder) (Skerra 2000，Binz 和 Pluckthun 2005)。一種這樣的另類支架是免疫球蛋白(Ig)折疊。這個折疊存在于抗體以及數千種非抗體蛋白質的可變區。已證實，一種這樣的Ig蛋白，即人纖連蛋白的第10個III型纖連蛋白(FN3)重復序列，能容忍表面所暴露的環中的許多突變而保持總體的Ig折疊結構。因此，已建立了這些環的氨基酸變體的文庫，并選擇出了針對許多不同的靶標的特異性結合物。(Koide等人，1998，Karatan等人，2004)。已發現這種經工程改造的FN3結構域能以高親和力結合靶標，同時保持重要的生物物理性質(Parker等人，2005)。潛在的另選支架分子的合乎需要的物理性質包括熱穩定性高以及熱折疊和解折疊之間可逆。已應用了幾種方法來提高蛋白質和酶的表觀熱穩定性，包括基于與高度類似的熱穩定序列的比較進行的合理設計、起穩定作用的二硫鍵的設計、為了提高α螺旋傾向所作的突變、鹽橋的工程改造、蛋白質的表面電荷的變更、定向進化以及共有序列的構成 (Lehmarm和Wyss 2001)。高熱穩定性是這種支架的期望性質，因為它可提高所獲得的重組蛋白質的產率，改善純化的分子的溶解性，改善細胞內支架的活性，降低免疫原性和盡可能減少在制造中需要冷鏈。

發明內容
本發明提供基于III型纖連蛋白(FN3)重復序列蛋白的蛋白質支架、編碼核酸或互補核酸、載體、宿主細胞、組合物、組合、制劑、裝置以及制備和使用它們的方法。在一個優選的實施例中，蛋白質支架由來自人生腱蛋白C(下文稱“生腱蛋白”)的多個FN3結構域的共有序列組成。在又一個優選的實施例中，本發明的蛋白質支架是15個FN3結構域的共有序列。可將本發明的蛋白質支架設計成能結合各種分子，例如細胞靶標蛋白質。本發明的蛋白質支架可包括另外的分子或部分，例如抗體的Fc區、白蛋白結合結構域或其他影響半壽期的部分。在另外的實施例中，可使本發明的蛋白質支架結合到可編碼該蛋白質支架的核酸分子。本發明還提供至少一種在宿主細胞中表達至少一種基于多個FN3結構域的共有序列的蛋白質支架的方法，所述方法包括將本文所述的宿主細胞在其中至少一種蛋白質支架能以可檢測和/或可回收的量表達的條件下進行培養。本發明還提供至少一種組合物，其包含(a)基于多個FN3結構域的共有序列的蛋白質支架和/或本文所述的編碼核酸；和(b)合適的和/或可藥用的載體或稀釋劑。本發明還包括產生基于III型纖連蛋白(FN3)重復序列蛋白的蛋白質支架的文庫的方法，所述重復序列蛋白優選為多個FN3結構域的共有序列，更優選地為來自人生腱蛋白的多個FN3結構域的共有序列。該文庫是通過在該支架的幾個部分(例如環區域)中的特定位置改變(通過突變來改變)分子中的氨基酸或氫基酸數目來制備連續幾代的支架而形成的。文庫可通過改變單環的氨基酸組成或者通過同時改變支架分子的多個環或另外的位置來產生。被改變的環可相應地延長或縮短。可將這種文庫產生成包括每個位置處的所有可能的氨基酸或者指定的氨基酸子集。文庫成員可用于通過展示進行篩選，如體外展示 (DNA、RNA、核糖體展示等)、酵母展示、細菌展示和噬菌體展示。本發明的蛋白質支架提供增強的生物物理性質，如在還原條件下的穩定性和在高濃度下的溶解性；它們可在原核生物系統(如大腸桿菌)中、在真核生物系統(如酵母)中和在體外轉錄/翻譯系統(如兔網織紅細胞溶解物系統)中表達和折疊。在另外的一個方面，本發明提供通過用靶標淘選本發明的支架文庫并檢測結合物來產生能結合特定靶標的支架分子的方法。在其他相關的方面，本發明包括可用于產生具有期望的活性(例如能夠以一定的親和力結合靶標蛋白質)的蛋白質支架并使其親和力成熟的方法。親和力成熟可通過反復進行幾輪誘變并用諸如噬菌體展示或體外展示的系統進行選擇來完成。此過程中的誘變可以是對特定的支架殘基的定點誘變、易錯PCR所致的隨機誘變、DNA改組和/或這些技術的組合所產生的結果。本發明還提供本文所述的任何發明。


圖1.在NuPAGE 4-12% Bis-Tris膠(Invitrogen)上進行并用考馬斯藍染色對純化的Tencon所進行的SDS-PAGE分析。N代表天然條件，R代表還原條件。圖2. Tencon在PBS中的圓二色性分析。圖3.來自生腱蛋白和Tencon的第3個FN3結構域在PBS中的DSC分析。分別獲得了和78 °C的解鏈溫度。圖4. pTencon-pIX的噬菌粒質粒設計。表達是由Lac啟動子來驅動，分泌是通過 OmpA信號序列進行。圖5. Myc-Tencon在M13噬菌體上的展示。ELISA結果顯示了噬菌體對α -Myc包被孔、CNT095包被孔和未包被孔的結合。圖6.人生腱蛋白的第3個FN3結構域的環結構。圖7.通過ELISA對IgG選擇的輸出結果進行的篩選。試驗了各個克隆對生物素酰化IgG或作為對照的生物素酰化HSA的結合。
具體實施例方式本發明提供基于III型纖連蛋白(FN3)重復序列蛋白的共有序列的分離的、重組的和/或合成的蛋白質支架，包括但不限于衍自哺乳動物的支架，以及組合物和包含至少一種編碼基于該共有FN3序列的蛋白質支架的多核苷酸的編碼核酸分子。本發明還包括但不限于制備和使用這種核酸和蛋白質支架的方法，包括診斷組合物和治療組合物、方法和裝置在內。本發明的蛋白質支架提供優于常規治療劑的優點，如能夠局部給予、經口給予，或者能夠穿過血腦屏障，能夠在大腸桿菌中表達而使得與哺乳動物細胞表達相比相對于資源而言蛋白質表達增加，能夠工程改造成能結合多個靶標或同一靶標的多個表位的雙特異性分子，能夠綴合到藥物、聚合物和探針，能夠配制成高濃度以及這種分子能夠有效地滲透患病的組織和腫瘤。此外，所述蛋白質支架具有抗體的許多性質，這和它們的與抗體可變區相仿的折疊有關。這個取向使得FN3環能夠像抗體互補決定區(CDR)那樣被暴露。它們應當能夠結合細胞靶標，且可對環進行改變(例如親和力成熟)以改善某些結合性質或相關性質。本發明的蛋白質支架的六個環中有三個在拓撲學上對應于抗體的互補決定區 (CDR 1-3)(即抗原結合區)，而其余三個環以與抗體⑶R相似的方式在表面上暴露。這些環橫跨于下表3和圖6中所示的SEQ ID NO :16的殘基13-16、22-28、38-43、51-54、60-64 和75-81之處或附近。優選地，將殘基22-觀、51巧4和75-81之處或附近的環區域加以改變，以獲得結合特異性和親和力。將這些環區域中的一個或多個與其他環區域和/或其他鏈段隨機化排列，但保持它們的序列作為主鏈部分，以擴充文庫，并可從該文庫選擇出對特定的蛋白質靶標具有高親和力的強效結合物。所述環區域中的一個或多個可像抗體CDR與靶標蛋白發生相互作用那樣與該蛋白發生相互作用。本發明的支架可摻入其他的亞單位，例如通過共價相互作用摻入。可將抗體恒定區的全部或一部分連接到該支架，以賦予抗體樣性質，例如補體活性(ADCC)、半壽期等。例如，可例如通過修飾Clq結合和/或Fc γ R結合從而改變⑶C活性和/或ADCC活性，來提供和/或控制效應子功能。“效應子功能”負責激活或減弱生物活性(例如在受試者中)。 效應子功能的例子包括但不限于Clq結合、補體依賴性細胞毒性(CDC)、Fc受體結合、抗體依賴性細胞介導細胞毒性(ADCC)、吞噬作用、細胞表面受體(例如B細胞受體(BCR))的下調等。這類效應子功能可能要求Fc區與結合結構域(例如蛋白質支架環)相組合，可用各種測定法(例如Fc結合測定、ADCC測定、CDC測定等)進行評估。另外，可將毒素綴合物、白蛋白或白蛋白結合物、聚乙二醇(PEG)分子連接到支架分子以獲得期望的性質。任何這些融合物可通過標準的技術產生，例如通過從使用可公開獲得的基因序列構建的重組融合基因表達融合蛋白來產生。本發明的支架可以以單聚形式用作單特異性支架，或者以多聚體形式用作雙特異性或多特異性支架(針對不同的蛋白質靶標或同一蛋白質靶標上的多個表位)。連接可以是共價連接或非共價連接。例如，二聚雙特異性支架有一個亞單位對第一靶標蛋白或表位具有特異性，而第二個亞單位對第二靶標蛋白或表位有特異性。支架的各亞單位可以以多種能提高抗原結合的價位從而提高抗原結合的親合力的構象進行連接。本文所用的“抗體”包括任何這樣的含蛋白質或肽的分子，它包含免疫球蛋白分子的至少一部分，如但不限于重鏈或輕鏈的至少一個互補決定區(CDR)或其配體結合部分、 重鏈或輕鏈可變區、重鏈或輕鏈恒定區、構架區、或者它們的任何部分。這種抗體任選地還影響特異性配體，如但不限于這種抗體在體外、在原位和/或在體內調節、降低、提高、拮
7抗、激動、緩和、減輕、阻斷、抑制、消除和/或干擾至少一種活性或結合，或者干擾受體活性或結合。術語“抗體”還意在涵蓋抗體及其消化片段、指定部分和變體，包括但不限于抗體模擬物或者包含模擬某種抗體或其指定片段或部分的結構和/或功能的抗體部分，包括但不限于單鏈抗體、單結構域抗體及其片段。功能片段包括能結合特定靶標的抗原結合片段。 例如本發明涵蓋能夠結合特定靶標或其部分的抗體片段，包括但不限于Fab片段(例如通過木瓜蛋白酶消化)、Fab'片段(例如通過胃蛋白酶消化和部分還原)和F(ab’)2片段 (例如通過胃蛋白酶消化)、facb片段(例如通過纖溶酶消化)、pFc’片段(例如通過胃蛋白酶或纖溶酶消化)、Fd片段(例如通過胃蛋白酶消化、部分還原和重聚集)、Fv或scFv片段(例如通過分子生物學技術)(參見例如Colligan，Immunology,出處同上)。通過本領域中已知和/或本文描述的酶促切割、合成或重組技術可制備這些片段。使用其中在天然終止位點上游引入了一個或多個終止密碼子的抗體基因也可以產生多種截短形式的抗體。例如，可以將編碼F(ab’)2重鏈部分的組合基因設計成包括編碼重鏈的CH1結構域和/或鉸鏈區的DNA序列。抗體的各個部分可通過常規技術用化學方法連接在一起，或可使用遺傳工程技術制備為連續蛋白質。本發明的支架蛋白可用來在細胞、組織、器官或動物(包括哺乳動物和人類)中測量或引起至少一種如下的疾病或病癥，用來診斷、監測、調節、治療、減輕、幫助預防所述疾病或病癥的發生，或者用來減少所述疾病或病癥的癥狀，所述疾病或病癥選自但不限于免疫障礙或疾病、心血管障礙或疾病、傳染性、惡性和/或神經性障礙或疾病或者其他已知或指定的相關病癥中的至少一種。這種方法可包括將有效量的包含至少一種支架蛋白的組合物或藥物組合物給予需要這種調節、治療、減輕、預防或者癥狀減少、作用或機制的細胞、組織、器官、動物或患者。有效量可包括經由單次給予(例如推注(bolus))、多次給予或連續給予的約 0. 001-500mg/kg的量，或者經由單次給予、多次給予或連續給予的能實現0.01-5000 μ g/ ml的血清濃度的量，或者其中的任何有效范圍或數值，這按本文所述或相關領域所知使用已知的方法來進行和確定。本發日月的支奧g白-牛產禾口產牛至少一種本發明的支架蛋白可任選地通過細胞系、混合細胞系、無限增殖化細胞或無限增殖化細胞的克隆群體來生產，這是本領域公知的。參見例如Ausubel等人 (編輯)，Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. , NY, NY(1987-2001) ；Sambrook 等人，Molecular Cloning :A Laboratory Manual，第 2 版，Cold Spring Harbor, NY(1989) ；Harlow 禾口 Lane, Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY(1989) ；Colligan ^A (編輯)，Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons，he.，NY(1994-2001) ；Colligan等人，Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001)。可將支架蛋白的氨基酸進行改變、添加和/或缺失，以減少免疫原性或者降低、 提高或修飾結合力、親和力、結合速率(on-rate)、解離速率(off-rate)、親合力、特異性 (specificity)、半壽期、穩定性、溶解性或任何其他合適的特性，這是本領域知道的。任選地，可對支架蛋白進行工程改造，但保留對抗原的高親和力和其他有利的生物學性質。為實現這個目標，可任選地通過使用親本序列和工程化改造序列的三維模型對親本序列和各種概念性的工程改造產物進行分析的這么一個過程來制備支架蛋白。三維模型是本領域技術人員可公共獲得的和熟悉的。有計算機程序可供圖解和展示選定的候選序列的可能三維構象結構并能測量可能的免疫原性(例如Xencor，he. (Monrovia, CA)的 Immunofilter程序)。對這些展示結果進行檢查，可以分析殘基在候選序列的功能發揮中的可能作用，即分析會影響候選支架蛋白結合其抗原的能力的殘基。這樣，可從親本序列和參比序列選擇殘基并進行組合，使得獲得期望的特性，如對靶標抗原的親和力。作為另外一種選擇，或者除上述程序之外，可使用其他合適的工程改造方法。MM篩選能特異性結合類似的蛋白質或片段的蛋白質支架，這可便利地用核苷酸(DNA 或RNA展示)或者肽展示文庫(例如體外展示)來實現。這個方法涉及從一大批肽中篩選具有期望的功能或結構的個體成員。所展示的核苷酸或肽序列其長度可為3-5000個或更多個核苷酸或氨基酸，經常長5-100個氨基酸，通常長約8-25個氨基酸。除了用于產生肽文庫的直接化學合成方法之外，有幾種重組DNA方法也得到了描述。一種類型涉及在噬菌體或細胞表面上展示肽序列。每個噬菌體或細胞均含有編碼具體展示的肽序列的核苷酸序列。這類方法描述于 PCT 專利申請 No. 91/17271,91/18980,91/19818 和 93/08278。其他的用于產生肽文庫的系統同時具有體外化學合成方法和重組方法的各方面。 參見PCT專利公開文本No. 92/05258、92/14843和96/19256。另參見美國專利No. 5，658，754 和5，643，768。肽展示文庫、載體和篩選試劑盒可從諸如Invitrogen(Carlsbad, CA)和 Cambridge Antibody Technologies (Cambridgeshire, UK)的供應商市售獲得。參見例如美國專禾Ij No. 4704692、4939666、4946778、5260203、5455030、5518889、5534621、5656730、 5763733,5767260,5856456 (轉讓給 Enzon) ；5223409,5403484,5571698,5837500 (轉讓給 Dyax) ；5427908,5580717(轉讓給 Affymax) ；5885793(轉讓給 Cambridge Antibody Technologies) ；5750373(轉讓給 Genentech) ；5618920,5595898,5576195,5698435, 5693493、5698417(轉讓給 Xoma) ；Colligan (出處同時)；Ausubel (出處同時)或者 Sambrook(出處同時)。本發明的蛋白質支架能以寬范圍的親和力(Kd)結合人蛋白質或其他哺乳動物蛋白質。在一個優選的實施例中，至少一個本發明的蛋白質支架能任選地以高親和力結合靶標蛋白，例如以等于或小于約10- 、如但不限于0. 1-9.9(或其中的任何范圍或數值)X 10_8、10_9、10_1(1、10—11、10_12、10_13、10_14、10_15或其中的任何范圍或數值的Kd結合靶標蛋白，這由本領域技術人員所慣用的表面等離子共振或Kinexa方法測定。蛋白質支架對抗原的親和力或親合力可用任何合適的方法實驗測定。(參見例如，Berzofsky 等人，"Antibody-Antigen Interactions,，，載于 Fundamental Immunology, Paul, W. Ε·(編輯)，Raven Press :New York, NY(1984) ； Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman and Company :New York,NY(1992)；以及本文所述的方法)。如果在不同的條件(例如鹽濃度、PH)下測量，則所測得的某種特定蛋白質支架-抗原相互作用的親和力可不同。因此，親和力及其他的抗原結合參數(例如KD、K。n、K。ff)的測量優選地用蛋白質支架和抗原的標準化溶液以及標準化緩沖液(如本文所述的緩沖液)來進行。可用本發明的蛋白質支架進行競爭性測定法，以確定什么蛋白質、抗體和其他拮抗劑與本發明的蛋白質支架競爭與靶標蛋白的結合和/或共享表位區域。這些測定法是本領域普通技術人員熟知的，用來評估各種拮抗劑或配體之間對某種蛋白質上的有限數目的結合位點的競爭。將蛋白質和/或抗體在競爭之前或之后進行固定化或不溶解化，并將結合到靶標蛋白的樣品與未結合的樣品分離，例如通過傾析(在蛋白質/抗體進行預先不溶解化的情況下)或通過離心(在蛋白質/抗體在競爭性反應后沉淀出來的情況下)進行分離。另外，可通過蛋白質支架與靶標蛋白的結合或無結合是否會使功能發生改變，例如蛋白質支架分子是否會抑制或增強(例如)標記物的酶活性，來確定競爭性結合。可使用ELISA 和其他的功能測定法，這是本領域公知的。核酸分子本發明的編碼蛋白質支架的核酸分子可為RNA的形式，如mRNA、hnRNA、tRNA或任何其他形式，或者為DNA的形式，包括但不限于克隆獲得的或合成產生的cDNA和基因組 DNA,以及它們的任何組合。DNA可以為三鏈的、雙鏈的或單鏈的或它們的任何組合。DNA或 RNA的至少一條鏈的任何部分可以是編碼鏈，也稱為有義鏈，或其可以是非編碼鏈，也稱作反義鏈。本發明的分離的核酸分子可包括包含開放閱讀框(ORF)、任選地帶有一個或多個內含子(例如但不限于至少一個蛋白質支架的至少一個指定區域)的核酸分子；包含能結合靶標蛋白的蛋白質支架或環區域的編碼序列的核酸分子；和包含與上述那些核苷酸序列實質上不同的核苷酸序列、但由于遺傳密碼的簡并性仍能編碼該蛋白質支架的核酸分子，如本文中所述和/或本領域中所知的。當然，遺傳密碼是本領域所熟知的。因此，本領域技術人員產生這種編碼本發明的特異性蛋白質支架的簡并核酸變體將是常規之舉。參見， 例如Ausubel等人，同上，并且此類核酸變體包括在本發明中。如本文所指出，本發明的包含編碼蛋白質支架的核酸的核酸分子可包括但不限于本身編碼蛋白質支架片段的氨基酸序列的那些核酸分子；整個蛋白質支架或其部分的編碼序列；蛋白質支架、片段或部分以及額外序列的編碼序列，如至少一個信號肽或融合肽的編碼序列，具有或不具有前述的額外編碼序列，如至少一個內含子，與額外的非編碼序列一起，包括但不限于非編碼的5’序列和3’序列，如在轉錄、mRNA加工中起作用的經轉錄的非翻譯序列，包括剪接信號和聚腺苷酸化信號(例如mRNA的核糖體結合和穩定化)；編碼額外氨基酸(如提供額外功能性的氨基酸)的額外編碼序列。因此，可將編碼蛋白質支架的序列融合到標記序列，如編碼有助于包含蛋白質支架片段或部分的融合蛋白質支架的純化的肽的序列。mmm^^icmm^^m^m^^^m^m本發明提供在選擇性雜交條件下與本文所公開的多核苷酸雜交的分離的核酸。因而，本實施例的多核苷酸可用于分離、檢測和/或定量包含此類多核苷酸的核酸。例如，本發明的多核苷酸可用于鑒定、分離或擴增寄存文庫中的部分或全長克隆。在一些實施例中， 多核苷酸是分離的基因組序列或cDNA序列，或與來自人或哺乳動物核酸文庫的cDNA互補。優選地，cDNA文庫包含至少80%全長序列，優選地至少85%或90%全長序列，更優選地至少95%全長序列。cDNA文庫可以進行標準化以增加罕見序列的表現。低或中等嚴格雜交條件通常但不是唯一地用于與互補序列的序列同一性較低的序列。中等和高嚴格條件可任選用于同一性較高的序列。低嚴格條件可使具有約70%序列同一性的序列進行選擇性雜交，并且可用于鑒定直系同源或旁系同源序列。任選地，本發明的多核苷酸將編碼由本文所述的多核苷酸所編碼的蛋白質支架的至少一部分。本發明的多核苷酸涵蓋可用來與編碼本發明的蛋白質支架的多核苷酸進行選擇性雜交的核酸序列。參見，例如Ausubel，同上；Colligan，同上，各自以引用方式全文并入本文中。核酸的構建本發明的分離的核酸可用以下方法技術制備(a)重組方法、(b)合成技術、(C)純化技術和/或(d)它們的組合，這是本領域公知的。所述核酸可方便地包含除了本發明的多核苷酸之外的序列。例如，可以將包含一個或多個內切核酸酶限制位點的多克隆位點插入核酸中以幫助該多核苷酸的分離。此外， 可以插入可翻譯序列以幫助分離翻譯出的本發明多核苷酸。例如，六組氨酸標記序列為純化本發明的蛋白質提供了便利手段。本發明的核酸除編碼序列以外，任選是用于本發明的多核苷酸的克隆和/或表達的載體、銜接子或接頭。可將額外序列加入這些克隆和/或表達序列來優化它們在克隆和/或表達中的功能，以幫助分離所述多核苷酸，或改進該多核苷酸向細胞中的導入。克隆載體、表達載體、銜接子或接頭的使用是本領域所熟知的(參見，例如，Ausubel,同上；或Sambrook，同上)。用于構津核酸的重組方法本發明的分離核酸組合物，例如RNA、cDNA、基因組DNA或它們的任何組合，可用多種本領域技術人員已知的克隆方法從生物來源獲得。在一些實施例中，將在嚴格條件下與本發明多核苷酸選擇性雜交的寡核苷酸探針用于在cDNA或基因組DNA文庫中鑒定所需序列。RNA的分離、cDNA和基因組文庫的構建是本領域普通技術人員公知的。(參見例如 Ausubel,出處同上；或者Sambrook，出處同上)核酸篩選和分離方法cDNA或基因組文庫可用基于本發明多核苷酸的序列(例如本文所公開的那些)的探針進行篩選。探針可用于與基因組DNA或cDNA序列雜交以分離相同或不同生物體中的同源基因。本領域的技術人員會知道，可以在測定中采用不同程度的雜交嚴格性；并且雜交或洗滌介質可以是嚴格的。隨著用于雜交的條件變得更嚴格，在探針和靶之間必須存在更高程度的互補性才能使雙鏈體形成得以發生。可通過溫度、離子強度、PH和部分變性溶劑 (如甲酰胺)的存在中的一者或多者，來控制嚴格性程度。例如，雜交的嚴格性可通過經由例如將甲酰胺濃度在0%至50%內操縱而改變反應物溶液的極性來方便地加以改變。可檢測的結合所需的互補性(序列同一性)的程度將根據雜交介質和/或洗滌介質的嚴格性而變化。互補性程度將最佳為100%或70-100%或其中的任何范圍或數值。然而應當理解， 探針和引物中較小的序列變異可以通過減少雜交和/或洗滌介質的嚴格性進行補償。擴增RNA或DNA的方法是本領域熟知的，并且基于本文給出的教導和指導，無需過多實驗即可根據本發明進行使用。已知的DNA或RNA擴增方法包括(但不限于)聚合酶鏈反應(PCR)和相關擴增方法(參見，例如，授予Mullis等人的美國專利No. 4，683，195,No. 4，683，202,No. 4，800，159、 No. 4，965，188 ；授予 Tabor 等人的 No. 4，795，699 和 No. 4，921，794 ；授予 Innis 的 No. 5，142，033 ；授予 Wilson 等人的 No. 5，122，464 ；授予 Innis 等人的 N0. 5，091，310 ；授予Gyllensten 等人的 No. 5，066，584 ；授予 Gelfand 等人的 No. 4，889，818 ；授予 Silver 等人的 No. 4，994，370 ；授予 Biswas 的 No. 4，766，067 ；Ringold 的 No. 4，656，134)和 RNA 介導的擴增，該RNA介導的擴增使用靶序列的反義RNA作為雙鏈DNA合成的模板(授予Malek等人的美國專利No. 5，130，238，商品名NASBA)，這些參考文獻的全部內容以引用方式并入本文。(參見例如Ausubel，出處同上；或者Sambrook，出處同上。)例如，可用聚合酶鏈反應(PCR)技術直接從基因組DNA或cDNA文庫擴增本發明的多核苷酸和相關基因的序列。例如PCR和其他體外擴增方法也可用于克隆編碼待表達的蛋白質的核酸序列、制備核酸以用作探針來檢測樣品中所需mRNA的存在，用于核酸測序，或用于其他目的。足以指導技術人員進行體外擴增方法的技術的例子可在BergeH同上)、 Sambrook (同上)和 Ausubel (同上)以及 Mullis 等人的美國專利 No. 4，683，202 (1987)； 禾口 Innis 等人，PCR Protocols A Guide to Methods and Applications, Eds. , Academic Press Inc. , San Diego, CA(1990)中找到。用于基因組PCR擴增的市售試劑盒是本領域已知的。參見例如，Advantage-GC Genomic PCR Kit (Clontech)。另外，例如，T4 gene 32 protein (Boehringer Mannheim) ^TffiPCR，·白勺H·。用于構津核酸的合成方法本發明的分離的核酸還可通過已知方法通過直接化學合成進行制備(參見，例如 Ausubel等人，同上)。化學合成一般會產生單鏈寡核苷酸，其可以通過與互補序列雜交，或通過用該單鏈作為模板用DNA聚合酶進行聚合而轉變成雙鏈DNA。本領域技術人員會認識到，雖然DNA的化學合成可能局限于約100個或更多個堿基的序列，但更長的序列可通過連接較短序列來獲得。重組表達盒本發明還提供包含本發明核酸的重組表達盒。本發明的核酸序列，例如編碼本發明的蛋白質支架的cDNA或基因組序列，可用來構建可被導入到至少一個期望的宿主細胞中的重組表達盒。重組表達盒通常會包含與轉錄起始調節序列可操作地連接的本發明多核苷酸，所述轉錄起始調節序列會引導所述多核苷酸在預定的宿主細胞中的轉錄。異源和非異源(即內源)啟動子兩者均可用于引導本發明核酸的表達。在一些實施例中，可將充當啟動子、增強子或其他元件的分離核酸導入在本發明多核苷酸的非異源形式的適當位置中(在上游、在下游或在內含子中)，以上調或下調本發明的多核苷酸的表達。例如，可通過突變、缺失和/或替換在體內或體外改變內源啟動子。載體和宿主細胞本發明還涉及包含本發明的分離核酸分子的載體、經遺傳工程改造帶有所述重組載體的宿主細胞，和涉及通過重組技術生產至少一種蛋白質支架，這是本領域公知的。參見，例如，Sambrook等人，同上；Ausubel等人，同上，各自以引用方式全文并入本文中。可將所述多核苷酸任選與含有可選擇標記的載體連接，以在宿主中增殖。一般來講，質粒載體在沉淀物例如磷酸鈣沉淀物中，或在與帶電脂質的復合物中被導入。如果載體是病毒，其可用合適的包裝細胞系在體外進行包裝并隨后轉導至宿主細胞中。應將DNA插入物與合適的啟動子可操作地連接。表達構建體還會含有轉錄起始位點、終止位點以及在轉錄區中含有用于翻譯的核糖體結合位點。該構建體表達的成熟轉錄物的編碼部分將優選包括在待翻譯的mRNA開始處的翻譯起始密碼子和在該mRNA末端適宜
12位置的終止密碼子(例如，UAA、UGA或UAG)，對于哺乳動物或真核細胞表達優選UAA和UAG。表達載體將優選但任選包括至少一個可選擇標記。這類標記包括例如但不限于對于真核細胞培養物，為甲氨喋呤(MTX)、二氫葉酸還原酶、(DHFR，美國專利 No. 4，399，216,4, 634，665,4, 656，134,4, 956，288,5, 149，636,5, 179，017、氨芐青霉素、 新霉素(G418)、霉酚酸或谷氨酰胺合成酶(GS，美國專利No.5，122，464、5，770，359、 5，827，739)抗性，對于在大腸桿菌和其他細菌或真核生物中培養，為四環素或氨芐青霉素抗性基因(以上專利全部以引用方式并入本文)。用于上述宿主細胞的合適培養基和條件是本領域已知的。合適的載體對于技術人員來說將是顯而易見的。載體構建體導入宿主細胞可通過磷酸鈣轉染、DEAE-葡聚糖介導的轉染、陽離子脂質介導的轉染、電穿孔、轉導、感染或其他已知方法來實現。此類方法已在本領域中有所描述，例如Sambrook(同上)，第1-4 和 16-18 章；Ausubel (同上)，第 1、9、13、15、16 章。至少一種本發明的蛋白質支架可以以修飾的形式(如融合蛋白)表達，并可不僅包括分泌信號，而且包括額外的異源功能區域。例如，可將額外氨基酸特別是帶電氨基酸的區域加到蛋白質支架的N末端，以改進在純化過程中或者在后續的處理和保存過程中在宿主細胞中的穩定性和保持性。另外，可將肽部分加到本發明的蛋白質支架以有助于純化。這類區域可在蛋白質支架或其至少一個片段的最終制備之前去除。這些方法在許多標準實驗室手冊有所描述，例如Sambrook,同上，第17. 29-17. 42和18. 1-18. 74章；Ausubel，同上， 第16,17和18章。本領域技術人員可認識到許多表達系統可用于表達編碼本發明蛋白質的核酸。 或者，可通過在含有編碼本發明的蛋白質支架的內源DNA的宿主細胞中開啟(通過操縱)，來在宿主細胞中表達本發明的核酸。此類方法是本領域熟知的，例如，如美國專利 No. 5，580, 734、No. 5，641，670、No. 5，733，746 和 No. 5，733，761 中所述，所述專利以引用方式全文并入本文中。示例性的可用于生產蛋白質支架、其指定部分或變體的細胞培養物有細菌細胞、 酵母細胞和哺乳動物細胞，這是本領域知道的。哺乳動物細胞系統通常將是細胞單層的形式，但也可使用哺乳動物細胞懸浮液或生物反應器。在本領域中已經開發了許多能夠表達完整糖基化蛋白的合適宿主細胞系，包括COS-I (例如ATCC CRL 1650)、C0S-7 (例如ATCC CRL-1651)、HEK293、BHK21(例如 ATCC CRL-10)、CH0 (例如 ATCC CRL 1610)和 BSC-1 (例如 ATCC CRL-26)細胞系，Cos-7 細胞、CHO 細胞、h印 G2 細胞、P3X63Ag8. 653、SP2/0_Agl4、293 細胞、HeLa細胞等，它們可容易地從(例如)美國典型培養物保藏中心(Manassas，Va (www. atcc. org))獲得。優選的宿主細胞包括淋巴來源的細胞，如骨髓瘤細胞和淋巴瘤細胞。特別優選的宿主細胞是P3)(63Ag8. 653細胞(ATCC登記號CRL-1580)和SP2/0_Agl4細胞(ATCC 登記號CRL-1851)。在尤其優選的實施例中，重組細胞是P3)(63Ab8. 653或SP2/0_Agl4細胞。這些細胞的表達載體可包括例如但不限于以下的表達控制序列中的一者或多者 復制起點；啟動子(例如晚期或早期SV40啟動子、CMV啟動子(美國專利No. 5，168，062、 5，385，839)、HSV tk啟動子、pgk(磷酸甘油酸激酶)啟動子、EF-I α啟動子(美國專利 No. 5，266, 491)、至少一個人啟動子；增強子和/或加工信息位點，如核糖體結合位點，RNA 剪接位點、聚腺苷酸化位點(例如SV40大T Ag聚A添加位點)和轉錄終止子序列。參見，例如，Ausubel等人，同上；Sambrook，等人，同上。可用于產生本發明的核酸或蛋白質的其他細胞也是已知的和/或可例如從美國典型培養物保藏中心細胞系和雜交瘤目錄(書 atcc.org)或其他已知的來源或商業來源得到。當采用真核宿主細胞時，通常將多腺苷酸化或轉錄終止序列整合進載體內。終止序列的例子是來自牛生長激素基因的多腺苷酸化序列。還可包括用于準確剪接轉錄物的序列。剪接序列的例子是來自SV40的VPl內含子(Sprague等人，J. Virol. 45 773-781 (1983))。此外，如本領域所知，可將控制在宿主細胞中的復制的基因序列整合進載體內。蛋白質支架的純^可通過公知的方法從重組細胞培養物回收和純化蛋白質支架，所述方法包括但不限于A蛋白純化、硫酸銨或乙醇沉淀、酸提取、陰離子或陽離子交換層析、磷酸纖維素層析、疏水相互作用層析、親和層析、羥磷灰石層析和凝集素層析。高效液相層析(“HPLC”) 也可以用于純化° 參見,例如 Colligan, Current Protocols in Immunology 或 Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons，NY，NY，(1997-2001)，例如第 1、4、6、 8、9、10章，各自以引用方式全文并入本文中。本發明的蛋白質支架包括天然純化的產物、化學合成程序的產物和通過重組技術從原核生物或真核生物宿主(包括例如大腸桿菌、酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動物細胞) 生產的產物。取決于在重組生產程序中所采用的宿主，本發明的蛋白質支架可以是糖基化的，或者可以是非糖基化的。此類方法在許多標準實驗室手冊中有描述，例如Sambrook， 同上，第 17. 37-17. 42 節；Ausubel,同上，第 10、12、13、16、18 和 20 章，Colligan, Protein kience，同上，第12-14章，所有參考文獻都以引用方式全文并入本文中。氨基酸代碼構成本發明的蛋白質支架的氨基酸往往用縮寫表示。可通過氨基酸的單字母代碼、三字母代碼或者三核苷酸密碼子來表示氨基酸，由此指示氨基酸名稱，這是本領域眾所周知的(參見 Alberts，B.等人，Molecular Biology of The Cell，第三版，Garland Publishing, Inc. , New York，1994)。本發明的蛋白質支架可包含一個或多個由天然突變或人工操縱產生的氨基酸置換、缺失或添加，如本文所指明。可通過本領域知道的方法來鑒定本發明的蛋白質支架中對于功能而言必需的氨基酸，所述方法如定點誘變或丙氨酸掃描誘變(例如Ausubel，出處同上，第8、15章；Cunningham和Wells，Science 244 1081-1085(1989))。后一方法在分子的每個殘基處引入單個丙氨酸突變。然后對所產生的突變分子測試生物學活性，如但不限于至少一種中和活性。還可通過結構分析，如晶化、核磁共振或光親和力標記，來鑒定對于蛋白質支架結合而言關鍵的位點(Smith等人，J. Mol. Biol. 224 :899-904(1992)以及 de Vos 等人，Science 255:306-312(1992))。技術人員會認識到，本發明包括至少一種本發明的生物活性蛋白質支架。生物活性蛋白質支架的比活性為天然的(非合成的)、內源的或相關的和已知的蛋白質支架的比活性的至少20%、30%或40%，優選地至少50%、60%或70%，最優選地至少80%、90%或 95% -1000%或更多。測定和定量酶活性和底物特異性的度量的方法是本領域技術人員公知的。在另一個方面，本發明涉及通過共價連接有機部分進行修飾的本發明所述蛋白質支架和片段。這種修飾能產生具有改進的藥代動力學性質(例如體內血清半壽期延長)的蛋白質支架片段。有機部分可以是線性或支化的親水聚合基團、脂肪酸基團或脂肪酸酯基團。在具體實施例中，親水聚合基團可以具有約800至約120，000道爾頓的分子量，并且可以是聚鏈烷二醇(例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG))、碳水化合物聚合物、氨基酸聚合物或聚乙烯吡咯烷酮，并且脂肪酸或脂肪酸酯基團可包含約8至約40個碳原子。本發明的修飾的蛋白質支架和片段可包含一個或多個直接或間接地共價鍵合到該抗體的有機部分。每個鍵合到本發明的蛋白質支架或片段的有機部分可獨立地為親水聚合物基團、脂肪酸基團或脂肪酸酯基團。如本文所用，術語“脂肪酸”包括單羧酸和二羧酸。 “親水聚合基團”，該術語在本文中使用時是指在水中比在辛烷中更易溶的有機聚合物。例如，聚賴氨酸在水中比在辛烷中更易溶。因此，本發明涵蓋通過共價連接聚賴氨酸來進行修飾的蛋白質支架。適用于修飾本發明的蛋白質支架的親水聚合物可以是線型的或者帶支鏈的，包括例如聚烷二醇(例如PEG、單甲氧基-聚乙二醇(mPEG)、PPG等)、碳水化合物(例如葡聚糖、纖維素、寡糖、多糖等)、親水氨基酸的聚合物(例如聚賴氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸等)、聚環氧烷烴(例如聚環氧乙烷、聚環氧丙烷等)和聚乙烯吡咯烷酮。優選地，修飾本發明的蛋白質支架的親水聚合物作為單獨的分子實體具有約800至約150，000道爾頓的分子量。例如可使用PEG·* PEG2tl,■，其中下標是聚合物的平均分子量(道爾頓)。親水聚合基團可以由1至約6個烷基、脂肪酸或脂肪酸酯基團取代。由脂肪酸或脂肪酸酯基團取代的親水聚合物可以通過采用合適的方法制備。例如，可將包含胺基的聚合物與脂肪酸或脂肪酸酯的羧酸根偶聯，且可將脂肪酸或脂肪酸酯上的活化羧酸根(如用N，N-羰基二咪唑活化)與聚合物上的羥基偶聯。適用于修飾本發明的蛋白質支架的脂肪酸和脂肪酸酯可以是飽和的，或者可含有一個或多個不飽和單位。適用于修飾本發明的蛋白質支架的脂肪酸包括例如正十二烷酸 (c12，月桂酸)、正十四烷酸(C14，肉豆蔻酸)、正十八烷酸(C18，硬脂酸)、正二十烷酸(C20，花生酸)、正二十二烷酸(C22，山崳酸)、正三十烷酸(C3tl)、正四十烷酸(C4tl)、順式-Δ 9-十八烷酸(C18，油酸)、全順式-Δ5，8，11，14-二十碳四烯酸酯(C2tl，花生四烯酸)、辛二酸、十四烷二酸、十八烷二酸、二十二烷二酸等。合適的脂肪酸酯包括包含直鏈或支鏈的低級烷基的二羧酸的單酯。低級烷基基團可包含一個至約十二個碳原子，優選地一個至約六個碳原子。修飾的蛋白質支架和片段可用合適的方法來制備，例如通過與一種或多種修飾劑反應來制備。本文所用的“修飾劑”是指包含活化基團的合適有機基團(例如親水性聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)。“活化基團”是化學部分或官能團，它們可在合適條件下與第二化學基團反應，由此在修飾劑和第二化學基團之間形成共價鍵。例如，胺反應性活化基團包括親電子基團，如甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、鹵素(氯、溴、氟、碘)、N-羥基琥珀酰亞胺酯(NHS)等。可以與硫醇反應的活化基團包括，例如，馬來酰亞胺、碘代乙酰基、丙烯酰基 (acrylolyl)、吡啶基二硫化物、5-硫醇-2-硝基苯甲酸硫醇(TNB-硫醇)等。醛官能團可以與含胺或酰胼的分子偶聯，并且疊氮基可以與三價含磷基團反應以形成氨基磷酸酯或磷酰亞胺鍵。將活化基團引入分子的合適方法是本領域已知的(參見例如Hermanson，G.T.， Bioconjugate Techniques, Academic Press :San Diego, CA(1996)(Hermanson, G.Τ.,《生物交聯技術》，Academic Press San Diego (CA)，1996年))。可將活化基團直接鍵合到該有機基團(例如親水性聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)，或者通過接頭部分來鍵合，所述接頭部分例如二價C1-C12基團，其中一個或多個碳原子可被雜原子如氧、氮或硫取代。合適的接頭部分包括例如四乙二醇、-(CH2) 3">-NH- (CH2) 6-NH-、- (CH2) 2_NH_ 和-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH-NH-0包含接頭部分的修飾劑，可例如通過使單-Boc-烷基二胺(例如單-Boc-乙二胺、單-Boc-二氨基己烷)與脂肪酸在1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺(EDC) 存在下反應以在游離胺和脂肪酸羧酸酯之間形成酰胺鍵來產生。可通過用三氟乙酸(TFA) 處理從產物除去Boc保護基以暴露出伯胺，后者可偶聯到另一羧酸酯(如所描述)，或者可與馬來酸酐反應且所得的產物環化以產生脂肪酸的活化馬來酰亞胺基衍生物。(參見例如 Thompson等人的WO 92/16221，該專利的全部教導內容以引用方式并入本文。)可通過使蛋白質支架或片段與修飾劑反應，來生產本發明的修飾的蛋白質支架。 例如，可通過采用胺反應性修飾劑(例如PEG的MHS酯)以非位點特異性方式將有機部分鍵合到蛋白質支架。可用合適的方法來制備包含鍵合到本發明蛋白質支架特定位點的有機部分的修飾的蛋白質支架和片段，所述方法例如逆蛋白水解作用(Fisch等人，Bioconjugate Chem. ，3 :147-153(1992) ；Werlen 等人，Bioconjugate Chem. ，5 :411-417(1994)； Kumaran 等人，Protein Sci. 6(10) :2233-2241(1997) ；Itoh 等人，Bioorg. Chem. ,24(1) 59-68(1996) ；Capellas 等人，Biotechnol. Bioeng. ,56(4) :456-463 (1997))，以及在 Hermanson, G. T. , Bioconjugate Techniques, Academic Press San Diego, CA (1996)中描述的方法。本發明的蛋白質支架組合物可任選地還包含有效量的至少一種選自以下至少一者的化合物或蛋白質(小分子或大分子)抗感染藥物、心血管(CV)系統藥物、中樞神經系統(CNQ藥物、自主神經系統(ANQ藥物、呼吸道藥物、胃腸(GI)道藥物、激素藥物、使流體或電解質平衡的藥物、血液學藥物、抗腫瘤藥物、免疫調節藥物、眼耳或鼻藥物、局部用藥物、營養藥物等。這類藥物是本領域公知的，包括本文給出的每種藥物的制劑、適應癥、劑量和給予方式在內(參見例如Nursing 2001 Handbook of Drugs，第21版，Springhouse Corp. , Springhouse, PA, 2001 ；Health Professional' s Drug Guide 2001 年版· , Shannon, Wilson,Stang,Prentice-Hall,Inc,Upper Saddle River,NJ ；Pharmcotherapy Handbook, Wfells等人(編輯)，Appleton & Lange，Stamford，CT ；每個文獻都以引用方式全文并入本文)。抗感染藥物可為選自選自以下的至少一種抗阿米巴藥或者抗原蟲藥、抗蠕蟲藥、 抗真菌藥、抗瘧藥、抗結核藥或者至少一種抗麻風藥、氨基糖苷、青霉素、頭孢菌素、四環素類、磺胺藥物、氟喹諾、抗病毒藥、大環內酯抗感染藥和其他抗感染藥。心血管藥物可為選自以下的至少一種正性肌力藥物、抗心律失常藥物、抗心絞痛藥物、抗高血壓藥物、抗血脂藥物和其他心血管藥物。中樞神經系統藥物可為非麻醉性鎮痛藥中的至少一種，或者選自以下的至少一種解熱藥物、非留體類抗炎藥物、麻醉藥物或者至少一種阿片樣鎮痛藥物、鎮靜催眠藥物、抗驚厥藥物、抗抑郁藥物、抗焦慮藥物、抗精神病藥物、中樞神經系統刺激劑、 抗帕金森病藥物和其他中樞神經系統藥物。自主神經系統藥物可為選自以下的至少一種 膽堿能藥物(擬副交感神經藥物)、抗膽堿能藥物、腎腺素能藥物(擬交感神經藥物)、腎上腺素阻斷劑(交感神經抑制劑)、骨骼肌松弛劑和神經肌肉阻斷劑。呼吸道藥物可為選自以下的至少一種抗組胺劑、支氣管擴張藥物、祛痰藥物或者至少一種鎮咳藥物以及其他呼
16吸道藥物。胃腸道藥物可為選自以下的至少一種抗酸劑或者至少一種吸附劑或者至少一種排氣藥物、消化酶或者至少一種膽石增溶劑、止瀉藥物、緩瀉藥物、止吐藥物和抗潰瘍藥物。激素藥物可為選自以下的至少一種皮質類固醇、雄激素或者至少一種促合成代謝類甾醇、雌激素或者至少一種孕酮、促性腺激素、抗糖尿病藥物或者至少一種胰高血糖素、甲狀腺激素、甲狀腺激素拮抗劑、垂體激素和甲狀旁腺激素樣藥物。使流體和電解質平衡的藥物可為選自以下的至少一種利尿劑、電解質或者至少一種置換溶液、酸化劑或者至少一種堿化劑。血液學藥物可為選自以下的至少一種補血劑、抗凝血劑、血液衍生物和溶栓酶。抗腫瘤藥物可為選自以下的至少一種烷基化藥物、抗代謝藥物、抗生素類抗腫瘤藥、改變激素平衡的抗腫瘤藥以及其他抗腫瘤藥物。免疫調節藥物可為選自以下的至少一種免疫抑制劑、疫苗或者至少一種類毒素、抗毒素或者至少一種抗蛇毒素、免疫血清和生物應答調節劑。眼耳鼻藥物可為選自以下的至少一種眼用抗感染劑、眼用抗炎劑、縮瞳劑、散瞳劑、眼用血管收縮劑、其他眼耳鼻藥物。局部用藥物可為選自以下的至少一種局部抗感染劑、殺疥癬劑或者至少一種殺虱劑或局部用皮質類固醇。營養藥物可為選自以下的至少一種維生素、礦物質或熱質。參見例如，Nursing 2001 Drug Handbook(同上)的內容。
該至少一種抗阿米巴藥或抗原蟲藥可為選自以下的至少一種阿托伐醌、鹽酸氯喹、磷酸氯喹、甲硝唑、鹽酸甲硝唑和依西酸噴他脒。該至少一種抗蠕蟲藥可為選自以下的至少一種甲苯達唑、雙羥萘酸噻嘧啶和噻苯達唑。該至少一種抗真菌藥物可為選自以下的至少一種兩性霉素B、兩性霉素B硫酸膽留醇酯復合物、兩性霉素B脂質復合物、兩性霉素B脂質體、氟康唑、氟胞嘧啶、微粉化灰黃霉素、超微粉化灰黃霉素、伊曲康唑、酮康唑、制霉菌素和鹽酸特比萘芬。該至少一種抗瘧藥物可為選自以下的至少一種鹽酸氯喹、磷酸氯喹、多西環素、硫酸羥氯喹、鹽酸甲氟喹、磷酸伯氨喹、乙胺嘧啶以及乙胺嘧啶與磺胺多辛。 該至少一種抗結核藥物或抗麻風藥物可為選自以下的至少一種氯法齊明、環絲氨酸、氨苯砜、鹽酸乙胺丁醇、異煙胼、吡嗪酰胺、利福布汀、利福平、利福噴汀和硫酸鏈霉素。該至少一種氨基糖苷可為選自以下的至少一種硫酸阿米卡星、硫酸慶大霉素、硫酸新霉素、硫酸鏈霉素和硫酸托普霉素。該至少一種青霉素可為選自以下的至少一種阿莫西林/克拉維酸鉀、三水合阿莫西林、氨芐青霉素、氨芐青霉素鈉、三水合氨芐青霉素、氨芐青霉素鈉/舒巴坦鈉、氯唑西林鈉、二氯唑西林鈉、美洛西林鈉、萘夫西林鈉、苯唑西林鈉、青霉素G芐星、青霉素G鉀、青霉素G普魯卡因、青霉素G鈉、青霉素V鉀、哌拉西林鈉、哌拉西林鈉/三唑巴坦鈉、替卡西林二鈉和替卡西林二鈉/克拉維酸鉀。該至少一種頭孢菌素可為選自以下的至少一種頭孢克洛、頭孢羥氨芐、頭孢唑林鈉、頭孢地尼、鹽酸頭孢吡肟、頭孢克肟、頭孢美唑鈉、頭孢尼西鈉、頭孢哌酮鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢替坦二鈉、頭孢西丁鈉、頭孢泊肟普塞酯、 頭孢丙烯、頭孢他啶、頭孢布烯、頭孢唑肟鈉、頭孢曲松鈉、頭孢呋辛醋氧乙酯、頭孢呋辛鈉、 鹽酸頭孢氨芐、一水合頭孢氨芐、頭孢拉定和氯碳頭孢。該至少一種四環素可為選自以下的至少一種鹽酸地美環素、多西環素鈣、海克多西環素、鹽酸多西環素、一水合多西霉素、鹽酸米諾環素和鹽酸四環素。該至少一種磺胺藥物可為選自以下的至少一種復方新諾明、 磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、硫代異噁唑和乙酰硫代異噁唑。該至少一種氟喹諾酮可為選自以下的至少一種甲磺酸阿拉曲沙星、環丙沙星、依諾沙星、左氧氟沙星、鹽酸洛美沙星、萘啶酸、 諾氟沙星、氧氟沙星、司帕沙星和甲磺酸曲伐沙星。該至少一種氟喹諾酮可為選自以下的至少一種甲磺酸阿拉曲沙星、環丙沙星、依諾沙星、左氧氟沙星、鹽酸洛美沙星、萘啶酸、諾氟沙星、氧氟沙星、司帕沙星和甲磺酸曲伐沙星。該至少一種抗病毒藥可為選自以下的至少一種硫酸阿巴卡韋、阿昔洛韋鈉、鹽酸金剛烷胺、氨普那韋、西多福韋、甲磺酸地位韋啶、去羥肌苷、依法韋侖、泛昔洛韋、福米韋生鈉、膦甲酸鈉、更昔洛韋、硫酸茚地那韋、拉米夫定、拉米夫定/齊多夫定、甲磺酸奈非那韋、奈偉拉平、磷酸奧塞米韋、利巴韋林、鹽酸金剛乙胺、 利托那韋、沙奎那韋、甲磺酸沙奎那韋、司他夫定、鹽酸伐昔洛韋、扎西他濱、扎那米韋和齊多夫定。該至少一種大環內酯抗感染藥物可為選自以下的至少一種阿奇霉素、克拉霉素、 地紅霉素、紅霉素堿、依托紅霉素、琥乙紅霉素、乳糖酸紅霉素和硬脂酸紅霉素。該至少一種其他抗感染藥物可為選自以下的至少一種氨曲南、桿菌肽、氯霉素琥珀酸鈉、鹽酸克林霉素、鹽酸克林霉素棕櫚酸酯、磷酸克林霉素、亞胺培南和西司他汀鈉、美羅培南、大結晶型呋喃妥因、微晶型呋喃妥因、奎奴普丁 /達福普丁、鹽酸壯觀霉素、甲氧芐啶和鹽酸萬古霉素。 (參見例如 Nursing 2001 Drug Handbook 的第 24-214 頁。)該至少一種正性肌力藥物可為選自以下的至少一種乳酸氨力農、地高辛和乳酸米力農。該至少一種心律失常藥物可為選自以下的至少一種腺苷、鹽酸胺碘酮、硫酸阿托品、托西溴芐銨、鹽酸地爾硫卓、丙吡胺、磷酸丙吡胺、鹽酸艾司洛爾、醋酸氟卡尼、富馬酸伊布利特、鹽酸利多卡因、鹽酸美西律、鹽酸莫雷西嗪、苯妥英、苯妥英鈉、鹽酸普魯卡因胺、鹽酸普羅帕酮、鹽酸普萘洛爾、酸式硫酸奎尼丁、葡糖酸奎尼丁、聚半乳糖醛酸奎尼丁、硫酸奎尼丁、索他洛爾、鹽酸妥卡尼和鹽酸維拉帕米。該至少一種抗心絞痛藥物可為選自以下的至少一種苯磺酸氨氯地平、亞硝酸戊酯、鹽酸芐普地爾、鹽酸地爾硫卓、硝酸異山梨酯、單硝酸異山梨酯、納多洛爾、鹽酸尼卡地平、硝苯地平、硝化甘油、鹽酸普萘洛爾、維拉帕米和鹽酸維拉帕米。該至少一種抗高血壓藥物可為選自以下的至少一種鹽酸醋丁洛爾、苯磺酸氨氯地平、阿替洛爾、鹽酸貝那普利、鹽酸倍他洛爾、富馬酸比索洛爾、坎地沙坦西酯、卡托普利、鹽酸卡替洛爾、卡維地洛、可樂定、鹽酸可樂定、二氮嗪、鹽酸地爾硫卓、甲磺酸多沙唑嗪、依那普利、馬來酸依那普利、甲磺酸依普羅沙坦、非洛地平、甲磺酸非諾多泮、福辛普利鈉、醋酸胍那芐、硫酸胍那決爾、鹽酸胍法辛、鹽酸胼屈嗪、厄貝沙坦、伊拉地平、鹽酸拉貝洛爾、賴諾普禾U、氯沙坦鉀、甲基多巴、鹽酸甲基多巴、琥珀酸美托洛爾、酒石酸美托洛爾、米諾地爾、鹽酸莫爾普利、納多洛爾、鹽酸尼卡地平、硝苯地平、尼索地平、硝普鈉、硫酸噴布洛爾、培哚普利特丁胺、甲磺酸酚妥拉明、吲哚洛爾、鹽酸哌唑嗪、鹽酸普萘洛爾、鹽酸喹那普利、雷米普利、替米沙坦、鹽酸特拉唑嗪、馬來酸噻嗎洛爾、群多普利、纈沙坦和鹽酸維拉帕米。該至少一種抗血脂藥物可為選自以下的至少一種阿托伐他汀鈣、西立伐他汀鈉、消膽胺、鹽酸考來替泊、非諾貝特(微粉)、氟伐他汀鈉、吉非貝齊、洛伐他汀、煙酸、普伐他汀鈉和辛伐他汀。該至少一種其他心血管藥物可為選自以下的至少一種阿昔單抗、前列地爾、 鹽酸阿布他明、西洛他唑、硫酸氫氯吡格雷、雙嘧達莫、依替巴肽、鹽酸米多君、己酮可可堿、 鹽酸噻氯匹定和鹽酸替羅非班。(參見例如Nursing 2001 Drug Handbook的第215-336 頁。)該至少一種非麻醉性鎮痛藥物或解熱藥物可為選自以下的至少一種對乙酰氨基酚、阿司匹林、三水楊酸膽堿鎂、二氟尼柳和水楊酸鎂。該至少一種非留體類抗炎藥物可為選自以下的至少一種塞來考昔、雙氯芬酸鉀、雙氯芬酸鈉、依托度酸、非諾洛芬鈣、氟比洛芬、布洛芬、噴哚美辛、三水合吲哚美辛鈉、酮洛芬、酮咯酸氨丁三醇、萘丁關酮、萘普生、 萘普生鈉、噁丙嗪、吡羅昔康、羅非考昔和舒林酸。該至少一種麻醉藥物或阿片樣鎮痛藥物可為選自以下的至少一種鹽酸阿芬太尼、鹽酸丁丙諾啡、酒石酸布托啡諾、磷酸可待因、 硫酸可待因、檸檬酸芬太尼、芬太尼透皮系統、芬太尼透粘膜片劑、鹽酸二氫嗎啡酮、鹽酸哌替啶、鹽酸美沙酮、鹽酸嗎啡、硫酸嗎啡、酒石酸嗎啡、鹽酸納布啡、鹽酸羥考酮、果膠酸羥考酮、鹽酸羥嗎啡酮、鹽酸噴他佐辛、鹽酸噴他佐辛和鹽酸納洛酮、乳酸噴他佐辛、鹽酸丙氧芬、萘磺酸丙氧芬、鹽酸瑞芬太尼、檸檬酸舒芬太尼和鹽酸曲馬多。該至少一種鎮靜催眠藥物可為選自以下的至少一種水合氯醛、舒樂安定、鹽酸氟西泮、苯巴比妥、戊巴比妥鈉、苯巴比妥鈉、司可巴比妥鈉、替馬西泮、三唑侖、扎來普隆和酒石酸唑吡坦。該至少一種抗驚厥藥物可為選自以下的至少一種乙酰唑胺鈉、卡馬西平、氯硝西泮、氯氮卓二鉀、地西泮、 雙丙戊酸鈉、乙琥胺、磷苯妥英鈉、加巴噴丁、拉莫三嗪、硫酸鎂、苯巴比妥、苯巴比妥鈉、苯妥英、苯妥英鈉、苯妥英鈉(延釋)、撲米酮、鹽酸噻加賓、托吡酯、丙戊酸鈉和丙戊酸。該至少一種抗抑郁藥物可為選自以下的至少一種鹽酸阿米替林、雙羥萘酸阿米替林、阿莫沙平、鹽酸安非他酮、氫溴酸西酞普蘭、鹽酸氯米帕明、鹽酸地昔帕明、鹽酸多塞平、鹽酸氟西汀、鹽酸丙咪嗪、雙羥萘酸丙咪嗪、米氮平、鹽酸奈法唑酮、鹽酸去甲替林、鹽酸帕羅西汀、 硫酸苯乙胼、鹽酸舍曲林、硫酸反苯環丙胺、馬來酸曲米帕明和鹽酸文拉法辛。該至少一種抗焦慮藥物可為選自以下的至少一種阿普唑侖、鹽酸丁螺環酮、利眠寧、鹽酸利眠寧、二鉀氯氮卓、地西泮、鹽酸多塞平、恩波酸羥嗪、鹽酸羥嗪、雙羥萘酸羥嗪、勞拉西泮、甲丙氨酯 (mephrobamate)、鹽酸咪達唑侖和奧沙西泮。該至少一種抗精神病藥物可為選自以下的至少一種鹽酸氯丙嗪、氯氮平、氟非那嗪癸酸酯、氟非那嗪庚酸酯、鹽酸氟非那嗪、氟哌啶醇、 癸酸氟哌啶醇、乳酸氟哌啶醇、鹽酸洛沙平、丁二酸洛沙平、苯磺酸美索達嗪、鹽酸嗎茚酮、 奧氮平、奮乃靜、匹莫齊特、丙氯拉嗪、富馬酸喹硫平、利培酮、鹽酸甲硫達嗪、氨砜噻噸、鹽酸氨砜噻噸和鹽酸三氟拉嗪。該至少一種中樞神經系統刺激劑可為選自以下的至少一種 硫酸苯丙胺、咖啡因、硫酸右苯丙胺、鹽酸多沙普侖、鹽酸甲基苯丙胺、鹽酸哌甲酯、莫達非尼、匹莫林和鹽酸芬特明。該至少一種抗帕金森病藥物可為選自以下的至少一種金剛烷胺鹽酸鹽、甲磺酸苯扎托品、鹽酸比哌立登、乳酸比哌立登、甲磺酸溴隱亭、卡比多巴-左旋多巴、恩他卡朋、左旋多巴、甲磺酸培高利特、二鹽酸普拉克索、鹽酸羅匹尼羅、鹽酸司來吉蘭、 托卡朋和鹽酸苯海索。該至少一種其他中樞神經系統藥物可為選自以下的至少一種鹽酸安非他酮、鹽酸多奈哌齊、氟哌利多、馬來酸氟伏沙明、碳酸鋰、檸檬酸鋰、鹽酸那拉曲坦、尼古丁離子交換樹脂復合物、尼古丁透皮系統、丙泊酚、苯甲酸利扎曲坦、鹽酸西布曲明單水合物、琥珀酸舒馬曲坦、鹽酸他克林和佐米曲坦。(參見例如Nursing 2001 Drug Handbook 的第337-530頁。) 該至少一種膽堿能藥物(例如擬副交感神經藥物)可為選自以下的至少一種氯化氨甲酰甲膽堿、氯化騰喜龍氯、溴化新斯的明、甲硫酸新斯的明、水楊酸毒扁豆堿和溴化吡啶斯的明。該至少一種抗膽堿能藥物可為選自以下的至少一種硫酸阿托品、鹽酸雙環胺、吡咯糖、莨菪堿、硫酸莨菪堿、溴化丙胺太林、東莨菪堿、丁溴東莨菪堿和氫溴酸東莨菪堿。該至少一種腎腺素能藥物(擬交感神經藥物)可為選自以下的至少一種鹽酸多巴酚丁胺、鹽酸多巴胺、重酒石酸間羥胺、重酒石酸去甲腎上腺素、鹽酸腎上腺素、鹽酸偽麻黃堿和硫酸偽麻黃堿。該至少一種腎上腺素阻斷劑(交感神經抑制劑)可為選自以下的至少一種甲磺酸二氫麥角胺、酒石酸麥角胺、馬來酸二甲麥角新堿和鹽酸普萘洛爾。該至少一種骨骼肌松弛劑可為選自以下的至少一種巴氯芬、卡立普多、氯唑沙宗、鹽酸環苯扎林、丹曲林鈉、美索巴莫和鹽酸替扎尼定。該至少一種神經肌肉阻斷劑可為選自以下的至少一種 苯磺酸阿曲庫銨、順苯磺酸阿曲庫銨、多庫氯銨、米庫氯銨、泮庫溴銨、哌庫溴銨、雷帕庫溴銨、羅庫溴銨、氯化琥珀膽堿、氯化筒箭毒堿和維庫溴銨。(參見例如Nursing 2001 Drug Handbook 的第 531-84 頁。)該至少一種抗組胺劑可為選自以下的至少一種馬來酸溴苯那敏、鹽酸西替利嗪、 馬來酸氯苯那敏、富馬酸氯馬斯汀、鹽酸賽庚啶、鹽酸苯海拉明、鹽酸非索非那定、氯雷他定、鹽酸異丙嗪、茶氯酸異丙嗪和鹽酸曲普利啶。該至少一種支氣管擴張藥物可為選自以下的至少一種沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、氨茶堿、硫酸阿托品、硫酸麻黃堿、腎上腺素、重酒石酸腎上腺素、鹽酸腎上腺素、異丙托溴銨、異丙腎上腺素、鹽酸異丙腎上腺素、硫酸異丙腎上腺素、鹽酸左旋沙丁胺醇、硫酸奧西那林、膽茶堿、醋酸吡布特羅、羥萘甲酸沙美特羅、硫酸特布他林和茶堿。該至少一種祛痰藥物或鎮咳藥物可為選自以下的至少一種苯佐那酯、 磷酸可待因、硫酸可待因、氫溴酸右美沙芬、鹽酸苯海拉明、愈創甘油醚和鹽酸氫嗎啡酮。該至少一種其他呼吸道藥物可為選自以下的至少一種乙酰半胱氨酸、二丙酸倍氯米松、貝雷克坦、布地奈德、卡爾法坦、色甘酸鈉、阿法鏈道酶、依前列醇鈉、氟尼縮松、丙酸氟替卡松、 孟魯司特鈉、奈多羅米鈉、帕利珠單抗、曲安萘德、扎魯司特和齊留通。(參見例如Nursing 2001 Drug Handbook 的第 585-642 頁。)該至少一種抗酸劑、吸附劑或排氣藥物可為選自以下的至少一種碳酸鋁、氫氧化鋁、碳酸鈣、鎂鋁水合物、氫氧化鎂、氧化鎂、西甲硅油和碳酸氫鈉。該至少一種消化酶或膽石增溶劑可為選自以下的至少一種胰酶制劑、胰脂肪酶和熊去氧膽酸。該至少一種止瀉藥物可為選自以下的至少一種凹凸棒石粘土、次水楊酸鉍、聚卡波非鈣、鹽酸地芬諾酯和硫酸阿托品、洛哌丁胺、醋酸奧曲肽、鴉片酊和鴉片酊(含樟腦)。該至少一種緩瀉藥物可為選自以下的至少一種比沙可啶、聚卡波非鈣、美鼠李皮、美鼠李皮芳香流浸膏、美鼠李皮流浸膏、蓖麻油、多庫酸鈣、多庫酸鈉、甘油、乳酮糖、檸檬酸鎂、氫氧化鎂、硫酸鎂、甲基纖維素、 礦物油、聚乙二醇或電解質溶液、歐車前、番瀉葉和磷酸鈉。該至少一種止吐藥物可為選自以下的至少一種鹽酸氯丙嗪、茶苯海明、甲磺酸多拉司瓊、屈大麻酚、鹽酸格拉司瓊、鹽酸氯苯甲嗪、鹽酸甲氧氯普胺、鹽酸昂丹司瓊、奮乃靜、丙氯拉嗪、乙二磺酸丙氯拉嗪、馬來酸丙氯拉嗪、鹽酸異丙嗪、東莨菪堿、馬來酸硫乙拉嗪和鹽酸曲美芐胺。該至少一種抗潰瘍藥物可為選自以下的至少一種西咪替丁、鹽酸西咪替丁、法莫替丁、蘭索拉唑、米索前列醇、 尼扎替丁、奧美拉唑、雷貝拉唑鈉、枸櫞酸鉍雷尼替丁、鹽酸雷尼替丁和硫糖鋁。(參見例如 Nursing 2001 Drug Handbook 的第 643-95 頁。)該至少一種皮質類固醇可為選自以下的至少一種倍他米松、醋酸倍他米松或倍他米松磷酸鈉、倍他米松磷酸鈉、醋酸可的松、地塞米松、醋酸地塞米松、地塞米松磷酸鈉、 醋酸氟氫可的松、氫化可的松、醋酸氫化可的松、環戊丙酸氫化可的松、氫化可的松磷酸鈉、 氫化可的松琥珀酸鈉、甲基潑尼松龍、醋酸甲基潑尼松龍、甲基潑尼松龍琥珀酸鈉、潑尼松龍、醋酸潑尼松龍、潑尼松龍磷酸鈉、潑尼松龍叔丁乙酯、潑尼松、曲安西龍、曲安萘德和二醋酸曲安西龍。該至少一種雄激素或促合成代謝類留醇可為選自以下的至少一種達那唑、 氟甲睪酮、甲基睪酮、癸酸諾龍、苯丙酸諾龍、睪酮、環戊丙酸睪酮、庚酸睪酮、丙酸睪酮和睪酮透皮系統。該至少一種雌激素或孕酮可為選自以下的至少一種酯化雌激素、雌二醇、環戊丙酸雌二醇、雌二醇/醋酸炔諾酮透皮系統、戊酸雌二醇、雌激素(綴合)、硫酸哌嗪雌酮、炔雌醇、炔雌醇和去氧孕烯、炔雌醇和二醋酸炔諾醇、炔雌醇和去氧孕烯、炔雌醇和二醋酸炔諾醇、炔雌醇和左炔諾孕酮、炔雌醇和炔諾酮、炔雌醇和醋酸炔諾酮、炔雌醇和諾孕酯、炔雌醇和炔諾孕酮、炔雌醇和炔諾酮和醋酸和富馬酸亞鐵、左炔諾孕酮、醋酸甲羥孕酮、美雌醇和炔諾酮、炔諾酮、醋酸炔諾酮、炔諾孕酮以及孕酮。該至少一種促性腺激素可為選自以下的至少一種醋酸加尼瑞克、醋酸戈那瑞林、醋酸組氨瑞林和尿促性素。該至少一種抗糖尿病藥物或胰高血糖素可為選自以下的至少一種阿卡波糖、氯磺丙脲、格列美脲、格列吡嗪、胰高血糖素、格列本脲、胰島素、鹽酸二甲雙胍、米格列醇、鹽酸吡格列酮、瑞格列奈、馬來酸羅格列酮和曲格列酮。該至少一種甲狀腺激素可為選自以下的至少一種左甲狀腺素鈉、碘塞羅寧鈉、Iiotrix和甲狀腺劑。該至少一種甲狀腺激素拮抗劑可為選自以下的至少一種甲硫咪唑、碘化鉀、碘酸鉀(飽和溶液)、丙基硫尿嘧啶、放射性碘(碘化鈉131I)、濃碘溶液。該至少一種垂體激素可為選自以下的至少一種促腎上腺皮質激素、二十四肽促皮質素、醋酸去氨加壓素、醋酸亮丙瑞林、庫促腎上腺皮質激素、人蛋氨生長素、生長激素和血管升壓素。該至少一種甲狀旁腺激素樣藥物可為選自以下的至少一種骨化二醇、降鈣素(人類)、降鈣素(鮭魚)、骨化二醇、雙氫速留醇和依替膦酸二鈉。(參見例如Nursing 2001 Drug Handbook 的 696-796 頁。)該至少一種利尿劑可為選自以下的至少一種乙酰唑胺、乙酰唑胺鈉、鹽酸阿米洛利、布美他尼、氯噻酮、依他尼酸鈉、依他尼酸、速尿、二氫氯噻、吲達帕胺、甘露醇、美托拉宗、螺內酯、托拉塞米、氨苯喋啶、尿素。該至少一種電解質或置換溶液可為選自以下的至少一種醋酸鈣、碳酸鈣、氯化鈣、檸檬酸鈣、葡乳醛酸鈣、葡庚糖酸鈣、葡萄糖酸鈣、乳酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸三鈣、葡聚糖(高分子量)、右旋糖酐(低分子量)、羥乙基淀粉、氯化鎂、硫酸鎂、醋酸鉀、碳酸氫鉀、氯化鉀、葡萄糖酸鉀、林格注射液、林格注射液(加乳酸)和氯化鈉。 該至少一種酸化劑或堿化劑可為選自以下的至少一種碳酸氫鈉、乳酸鈉和氨丁三醇。(參見例如 Nursing 2001 Drug Handbook 的 797—833 頁。)該至少一種補血劑可為選自以下的至少一種富馬酸亞鐵、葡萄糖酸亞鐵、硫酸亞鐵、硫酸亞鐵(干)、右旋糖酐鐵、山梨醇鐵、多糖鐵復合物和葡萄糖酸鐵鈉復合物。該至少一種抗凝血劑可為選自以下的至少一種阿地肝素鈉、達肝素鈉、達那肝素鈉、依諾肝素鈉、肝素鈣、肝素鈉和華法林鈉。該至少一種血液衍生物可為選自以下的至少一種白蛋白 5%、白蛋白25%、抗血友病因子、抗抑制子凝血復合物、抗凝血酶III (人類)、因子IX(人類)、因子IX復合物和血漿蛋白級分。該至少一種溶栓酶可為選自以下的至少一種阿替普酶、阿尼普酶、瑞替普酶(重組)、鏈激酶和尿激酶。(參見例如Nursing 2001 Drug Handbook 的 834-66 頁。)該至少一種烷基化藥物可為選自以下的至少一種白消安、卡鉬、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、順鉬、環磷酰胺、異環磷酰胺、洛莫司汀、鹽酸氮芥、美法侖、鹽酸美法侖、鏈佐星、替莫唑胺和塞替派。該至少一種抗代謝藥物可為選自以下的至少一種卡培他濱、克拉屈濱、 阿糖胞苷、氟尿苷、磷酸氟達拉濱、氟脲嘧啶、羥基脲、巰基嘌呤、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤鈉和硫鳥嘌呤。該至少一種抗生素類抗腫瘤藥可為選自以下的至少一種硫酸博萊霉素、更生霉素、檸檬酸柔紅霉素脂質體、鹽酸柔紅霉素、鹽酸阿霉素、鹽酸阿霉素脂質體、鹽酸表阿霉素、鹽酸伊達比星、絲裂霉素、噴司他丁、普卡霉素和戊柔比星。該至少一種改變激素平衡的抗腫瘤藥可為選自以下的至少一種阿那曲唑、比卡魯胺、雌莫司汀磷酸鈉、依西美坦、氟他胺、醋酸戈舍瑞林、來曲唑、醋酸亮丙瑞林、醋酸甲地孕酮、尼魯米特、枸櫞酸他莫昔芬、睪內酯和枸櫞酸托瑞米芬。該至少一種其他抗腫瘤藥物可為選自以下的至少一種天冬酰胺酶、 卡介苗(BCG)的(活膀胱內)、達卡巴嗪、多西他賽、依托泊苷、磷酸依托泊苷、鹽酸吉西他濱、鹽酸伊立替康、米托坦、鹽酸米托蒽醌、紫杉醇、培門冬酶、嚇吩姆鈉、鹽酸甲基芐胼、美羅華、替尼泊甙、鹽酸拓撲替康、曲妥珠單抗、維甲酸、硫酸長春堿、硫酸長春新堿和酒石酸長春瑞濱。(參見例如 Nursing 2001 Drug Handbook 的 867-963 頁。)該至少一種免疫抑制劑可為選自以下的至少一種咪唑硫嘌呤、巴利昔單抗、環孢素、賽尼哌、淋巴細胞免疫球蛋白、莫羅單抗-CD3、麥考酚酸莫酯、鹽酸麥考酚酸莫酯、西羅莫司和他克莫司。該至少一種疫苗或類毒素可為選自以下的至少一種卡介苗疫苗、霍亂疫苗、白喉和破傷風類毒素(吸附)、白喉和破傷風類毒素和吸附無細胞百日咳疫苗、白喉和破傷風類毒素和全細胞百日咳疫苗、嗜血桿菌b型綴合疫苗、甲肝疫苗(滅活)、乙肝疫苗(重組)、流感病毒疫苗1999-2000三價類型A和B (純化表面抗原)、流感病毒疫苗 1999-2000三價類型A和B (亞毒粒或純化亞毒粒)、流感病毒疫苗1999-2000三價A型和 B (全毒粒)、日本腦炎病毒疫苗(滅活)、萊姆病疫苗(重組OspA)、麻疹和腮腺炎和風疹病毒疫苗(活)、麻疹和腮腺炎和風疹病毒疫苗(減毒活)、麻疹病毒疫苗(減毒活)、腦膜炎球菌多糖疫苗、腮腺炎病毒疫苗(活)、鼠疫疫苗、肺炎球菌疫苗(多價)、脊髓灰質炎疫苗 (滅活)、脊髓灰質炎疫苗(活、口服、三價)、狂犬病疫苗(吸附)、狂犬病疫苗(人二倍體細胞)、風疹和腮腺炎病毒疫苗(活)、風疹病毒疫苗(減毒活)、破傷風類毒素(吸附)、破傷風類毒素(流體)、傷寒疫苗(口服)、傷寒疫苗(胃腸外)、傷寒Vi多糖疫苗、水痘病毒疫苗和黃熱病疫苗。該至少一種抗毒素或抗蛇毒素可為選自以下的至少一種黑寡婦蜘蛛抗蛇毒血清、響尾蛇科抗蛇毒血清(多價)、白喉抗毒素(馬)以及金黃珊瑚蛇(Micrurus fulvius)抗蛇毒素。該至少一種免疫血清可為選自以下的至少一種巨細胞病毒免疫球蛋白(靜脈內)、乙肝免疫球蛋白(人類)、肌肉注射用免疫球蛋白、靜脈注射用免疫球蛋白、 狂犬病免疫球蛋白(人類)、靜脈注射用呼吸道合胞病毒免疫球蛋白(人類)、Μ ο(0)免疫球蛋白(人類)、靜脈注射用Miq(D)免疫球蛋白(人類)、破傷風免疫球蛋白(人類)和水痘帶狀皰疹免疫球蛋白。該至少一種生物應答調節劑可為選自以下的至少一種阿地白介素、 紅細胞生成素α、非格司亭、注射用醋酸格拉替雷、干擾素α-l、干擾素α-2a的(重組)、 干擾素α-2b (重組)、干擾素β-la、干擾素β-Ib (重組)、干擾素Y_lb、鹽酸左旋咪唑、 奧普瑞白介素和沙格司亭。(參見例如Nursing 2001 Drug Handbook的964-1040頁。)該至少一種眼用抗感染劑可選自桿菌肽、氯霉素、鹽酸環丙沙星、紅霉素、硫酸慶大霉素、氧氟沙星0.3%、硫酸多粘菌素B、磺胺醋酰鈉10%、磺胺醋酰鈉15%、磺胺醋酰鈉 30%、妥布霉素和阿糖腺苷。該至少一種眼用抗炎劑可為選自以下的至少一種地塞米松、 地塞米松磷酸鈉、雙氯芬酸鈉0. 1%、氟米龍、氟比洛芬鈉、酮咯酸氨丁三醇、醋酸潑尼松龍 (混懸劑)和潑尼松龍磷酸鈉(溶液劑)。該至少一種縮瞳劑可為選自以下的至少一種氯化乙酰膽堿、卡巴可(眼內)、卡巴可(局部用)、依可碘酯、匹魯卡品、鹽酸匹魯卡品和硝酸匹魯卡品。該至少一種散瞳劑可為選自以下的至少一種硫酸阿托品、鹽酸環噴托酯、鹽酸腎上腺素、硼酸腎上腺素、氫溴酸后馬托品、鹽酸苯腎上腺素、氫溴酸東莨菪堿和托吡卡胺。 該至少一種眼用血管收縮劑可為選自以下的至少一種鹽酸萘甲唑林、鹽酸羥甲唑啉和鹽酸四氫唑啉。該至少一種其他眼用藥物可為選自以下的至少一種鹽酸阿可樂寧、鹽酸倍他洛爾、酒石酸溴莫尼定、鹽酸卡替洛爾、鹽酸地匹福林、鹽酸多佐胺、二富馬酸依美斯汀、 熒光素鈉、富馬酸酮替芬、拉坦前列素、鹽酸左布諾洛爾、鹽酸美替洛爾、氯化鈉(高滲)和馬來酸噻嗎洛爾。該至少一種耳用藥物可為選自以下的至少一種硼酸、過氧化脲、氯霉素以及三乙醇胺多肽油酸-凝析物。該至少一種鼻用藥物可為選自以下的至少一種二丙酸倍氯米松、布地奈德、硫酸麻黃堿、鹽酸腎上腺素、氟尼縮松、丙酸氟替卡松、鹽酸萘甲唑啉、 鹽酸羥甲唑啉、鹽酸去氧腎上腺素、鹽酸四氫唑啉、曲安奈德和鹽酸賽洛唑啉。(參見例如 Nursing 2001 Drug Handbook 的 1041-97 頁。)該至少一種局部抗感染劑可為選自以下的至少一種阿昔洛韋、兩性霉素B、壬二酸霜、桿菌肽、硝酸布康唑、磷酸克林霉素、克霉唑、硝酸益康唑、紅霉素、硫酸慶大霉素、酮康唑、醋酸磺胺米隆、甲硝唑(局部)、硝酸咪康唑、莫匹羅星、鹽酸萘替芬、硫酸新霉素、呋喃西林、制霉菌素、磺胺嘧啶銀、鹽酸特比萘芬、特康唑、鹽酸四環素、噻康唑和托萘酯。該至少一種殺疥癬劑或殺虱劑可為選自以下的至少一種克羅米通、林丹、芐氯菊脂和除蟲菊酯。該至少一種局部用皮質類固醇可為選自以下的至少一種二丙酸倍他米松、戊酸倍他米松、丙酸氯倍他索、地索奈德、去羥米松、地塞米松、地塞米松磷酸鈉、醋酸雙氟拉松、醋酸氟輕松、氟輕松、氟氫縮松、丙酸氟替卡松、哈西奈德、氫化可的松、醋酸氫化可的松、丁酸氫化可的松、戊酸氫化可的松、糠酸莫米松和曲安奈德。(參見例如Nursing 2001 Drug Handbook 的 1098-1136 頁。)該至少一種維生素或礦物質可為選自以下的至少一種維生素A、復合維生素B、 氰鈷維生素、葉酸、羥鈷胺、亞葉酸鈣、煙酸、煙酰胺、鹽酸吡哆辛、核黃素、鹽酸硫胺素、維生素C、維生素D、膽鈣化留醇、鈣化醇、維生素D類似物、多西骨化醇、帕立骨化醇、維生素E、 維生素K類似物、植物甲萘醌、氟化鈉、氟化鈉(局部用)、微量元素、鉻、銅、碘、錳、硒和鋅。 該至少一種熱質可為選自以下的至少一種氨基酸輸液(結晶)、氨基酸輸液(右旋葡萄糖中)、氨基酸輸液(含電解質)、氨基酸輸液(含電解質，右旋葡萄糖中)、用于肝功能衰竭的氨基酸輸液、用于高代謝壓力的氨基酸輸液、用于腎功能衰竭的氨基酸輸液、右旋葡萄糖、 脂肪乳劑和中鏈甘油三酯。(參見例如Nursing 2001 Drug Handbook的1137-63頁。)本發明的蛋白質支架組合物還可包含任何合適和有效量的這樣的組合物和藥物組合物的至少一種，該組合物和藥物組合物包含被接觸或給予需要這種調節、治療或療法的細胞、組織、器官、動物或患者的蛋白質支架，任選還包含至少一種選自以下的藥劑至少一種TNF拮抗劑(例如但不限于TNF化學拮抗劑或蛋白質拮抗劑、TNF單克隆或多克隆抗體或片段、可溶性TNF受體(例如p55、p70或p85)或片段、它們的融合多肽、或者小分子 TNF拮抗劑(例如TNF結合蛋白I或II(TBP-1或TBP-II))、奈瑞莫單抗、英夫利昔單抗、 依那西普、⑶P-571、⑶P-870、阿非莫單抗、來那西普等)、抗風濕劑(例如甲氨蝶呤、金諾芬、金硫葡糖、硫唑嘌呤、依那西普、硫代蘋果酸金鈉、硫酸羥氯喹、來氟米特、柳氮磺吡啶)、 肌肉松弛劑、麻醉劑(narcotic)、非留類抗炎藥物(NSAID)、止痛藥、麻醉劑(anesthetic)、 鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗微生物劑(例如氨基糖苷、抗真菌劑、抗寄生蟲劑、抗病毒劑、碳青霉烯類、頭孢菌素、氟喹諾酮、大環內酯、青霉素、磺胺藥物、四環素、別的抗微生物劑)、抗牛皮癬劑、皮質類固醇、合成代謝類固醇、糖尿病相關藥劑、礦物質、營養劑、甲狀腺劑、維生素、鈣相關激素、止瀉劑、鎮咳劑、止吐劑、抗潰瘍劑、緩瀉劑、抗凝血齊U、 促紅細胞生成素(例如紅細胞生成素α)、非格司亭(例如G-CSF、Neupogen)、沙格司亭(GM-CSF、Leukine)、免疫接種劑、免疫球蛋白、免疫抑制劑(例如巴利昔單抗、環胞菌素、達克珠單抗)、生長激素、激素替代藥物、雌激素受體調節劑、散瞳劑、睫狀肌麻痹劑、烷化劑、 抗代謝物、有絲分裂抑制劑、放射性藥物、抗抑郁藥、抗躁狂劑、抗精神病藥物、抗焦慮藥物、 催眠劑、擬交感神經藥物、興奮劑、多奈哌齊、他克林、哮喘藥物、β激動劑、吸入類固醇、白三烯抑制劑、甲基黃嘌呤、色甘酸、腎上腺素或類似物、阿法鏈道酶(Pulmozyme)、細胞因子或細胞因子拮抗劑。這種細胞因子的非限制性例子包括但不限于IL-I至IL-28中的任何一個(例如IL-1、IL-2等)。合適的劑量是本領域公知的。參見，例如，Wells等人(編輯)，Pharmacotherapy Handbook，第 2 片反，Appleton and Lange，Stamford，CT (2000) ；PDR Pharmacopoeia，Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000，精裝片反，Tarascon Publishing， Loma Linda, CAQ000)，所述參考文獻各自以引用方式全文并入本文中。
這種抗癌或抗感染藥物還可包括與至少一個本發明的蛋白質支架締合、結合、共配制或共給予的毒素分子。毒素可任選起到選擇性殺死病理性細胞或組織的作用。病理性細胞可以是癌細胞或其他細胞。此類毒素可以是(但不限于)純化的或重組的毒素或包含毒素的至少一個功能性細胞毒性結構域的毒素片段，所述毒素例如選自蓖麻毒素、白喉毒素、毒液毒素或細菌毒素中的至少一者。術語毒素還包括由任何天然存在的、突變型或重組型細菌或病毒產生的內毒素和外毒素，其可在人和其他哺乳動物中引起任何病理狀況，包括毒素休克，這可導致死亡。此類毒素可包括(但不限于)腸產毒性大腸桿菌熱不穩定腸毒素(LT)、熱穩定腸毒素(ST)、志賀氏菌屬(Shigella)細胞毒素、氣單胞菌屬 (Aeromonas)腸毒素、中毒性休克綜合征毒素(TSST-I)、葡萄球菌Staphylococcal)腸毒素A (SEA)、B (SEB)或C(SEC)、鏈球菌(Mr印tococcal)腸毒素等。此類細菌包括(但不限于)下列細菌的菌株腸產毒性大腸桿菌(ETEC)、腸出血性大腸桿菌(例如血清型0157:H7 菌株)、葡萄球菌屬(例如金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus)、化膿性葡萄球菌 (Staphylococcus pyogenes))、志賀氏菌屬(例如痢疾志賀氏菌(Shigella dysenteriae)、 弗氏志賀氏菌(Shigella flexneri)、鮑氏志賀氏菌(Shigella boydii)和宋內氏志賀氏菌(Shigella sormei))、沙門氏菌屬(例如傷寒沙門氏菌(Salmonella typhi)、豬霍亂沙門氏菌(Salmonella cholera-suis)、腸炎沙門氏菌(Salmonella enteritidis))、梭菌屬 (例如產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)、艱難梭菌(Clostridium dificile)、 肉毒梭菌(Clostridium botulinum))、彎曲菌屬(例如 Camphlobacter jejuni、 Camphlobacter fetus)、螺桿菌屬(例如幽門螺桿菌(Heliobacter pylori))、氣單胞菌屬(例如溫禾口氣單胞菌(Aeromonas sobria)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila) > 豚鼠氣單胞菌(Aeromonas caviae)), Pleisomonas shigelloides、小腸結腸炎耶爾森氏菌(Yersina enterocolitica)、弧菌屬(例如霍亂弧菌(Vibrios cholerae)、副溶血弧菌 (Vibrios parahemolyticus))、克雷伯氏菌屬，銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 和鏈球菌屬。參見，例如Mein(編輯)，INTERNAL MEDICINE，第3版，第1-13頁，Little, Brown and Co. , Boston, (1990) ；Evans ^A ( ) ‘ Bacterial Infections of Humans Epidemiology and Control,第 2 版，第 239-254 頁，Plenum Medical Book Co. , New York(1991) ；Mandell 等人，Principles and Practice of Infectious Diseases,第 3 版， Churchill Livingstone, New York (1990) ；Berkow ^A (H$t)，The Merck Manual, H 16 片反，Merck and Co. ， Rahway, N. J. ，1992 ；Wood 等人,FEMS Microbiology Immunology, 76 121-134(1991) ；Marrack 等人，Science, 248 :705-711 (1990)，所述參考文獻的內容以引用方式全文并入本文中。本發明的蛋白質支架化合物、組合物或組合還可包含任何合適的輔助劑中的至少一種，所述輔助劑例如但不限于稀釋劑、粘合劑、穩定劑、緩沖劑、鹽、親脂性溶劑、防腐劑、 佐劑等。可藥用輔助劑是優選的。制備這類無菌溶液的非限制性例子和方法是本領域公知的，如但不限于 Gennaro (編輯),Remington，s Pharmaceutical Sciences,第 18 版，Mack Publishing Co. (Easton，PA) 1990。可按常規方式選擇適合于蛋白質支架、片段或變體組合物的給予方式、溶解性和/或穩定性的藥物可接受載體，如本領域所公知或者如本文所述。可用于本發明組合物的藥物賦形劑和添加劑包括但不限于蛋白質、肽、氨基酸、脂質和碳水化合物(例如糖類，包括單糖、雙糖、三糖、四糖和寡糖；衍生糖，如醛醇、醛糖酸、 酯化糖等；以及多糖或糖聚合物)，它們可單獨存在或者以組合的方式存在，單獨地或者組合在一起占1-99. 99% (重量或體積)。示例性的蛋白質賦形劑包括血清白蛋白，如人血清白蛋白(HSA)、重組人白蛋白(rHA)、明膠、酪蛋白等。還能以緩沖能力起作用的代表性的氨基酸/蛋白質組分包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜堿、組氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、賴氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、天冬甜素等。一種優選的氨基酸是甘氨酸。適用于本發明的碳水化合物賦形劑包括例如單糖，如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等；雙糖，如乳糖、蔗糖、海藻糖、纖維二糖等；多糖，如棉子糖、松三糖、麥芽糖糊精、右旋糖苷、淀粉等；以及醛醇，如甘露糖醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨糖醇(葡萄糖醇)、肌醇等。用于在本發明中使用的優選碳水化合物賦形劑是甘露糖醇、海藻糖和棉子糖。蛋白質支架組合物還可包括緩沖劑或pH調節劑；通常緩沖劑為從有機酸或有機堿制備的鹽。代表性的緩沖劑包括有機酸鹽，如檸檬酸、抗壞血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或鄰苯二甲酸的鹽；Tris、鹽酸氨丁三醇或磷酸鹽緩沖劑。優選用于本發明組合物的緩沖劑是有機酸鹽，如檸檬酸鹽。另外，本發明的蛋白質支架組合物可包括聚合賦形劑/添加劑，如聚乙烯吡咯烷酮、ficolls (—種聚合糖)、dextrates (例如環糊精，如2_羥丙基-β -環糊精)、聚乙二醇、矯味劑、抗微生物劑、甜味劑、甜味料、抗氧化劑、抗靜電劑、表面活性劑(例如聚山梨醇酯，如“TWEEN 20”和“TWEEN 80”)、脂質(例如磷脂、脂肪酸)、類固醇(例如膽固醇)和螯合劑(例如EDTA)。這些和另外的適用于本發明蛋白質支架、部分或變體組合物的已知藥物賦形劑和/或添加劑是本領域知道的，例如列于“Remington The Science & Practice of Pharmacy",第 19 版，Williams & Williams, (1995)，禾口列于“Physician，s Desk Reference”，第 52 版，Medical Economics, Montvale, NJ(1998)，這兩個參考文獻的公開內容以引用方式全文并入本文。優選的載體或賦形劑材料是碳水化合物(例如糖和糖醇)和緩沖劑(例如檸檬酸鹽)或聚合劑。示例性的載體分子是透明質酸這種黏多糖，其可用于進行關節內遞送。MM如上所指出，本發明提供優選包含具有鹽水或選定的鹽的磷酸鹽緩沖劑的穩定制劑，以及含有防腐劑的防腐溶液和制劑，以及適合于醫藥用途或獸醫用途的多用途防腐制劑，這些制劑包含至少一種在可藥用的配方中的蛋白質支架。防腐制劑含有至少一種處于水性稀釋液中的已知防腐劑，所述防腐劑任選選自以下至少一種苯酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯甲酚、芐醇、亞硝酸苯汞、苯氧基乙醇、甲醛、氯丁醇、氯化鎂(例如六水合物)、對羥基苯甲酸烷基酯(甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等)、苯扎氯銨、芐索氯銨、脫氫乙酸鈉和硫柳汞、 它們的聚合物或混合物。可以使用本領域知道的任何合適的濃度或混合比，如約0.0015%， 或者其中的任何范圍、數值或分數。非限制性例子包括無防腐劑、約0.1-2%間甲酚(例如 0. 2,0. 3,0. 4,0. 5,0. 9,1. 0 % )、約 0. 1-3 % 芐醇(例如 0. 5,0. 9,1. 1、1. 5,1. 9,2. 0、 2. 5% )、約0. 001-0. 5%硫柳汞(例如0. 005,0. 01)、約0. 001-2. 0%苯酚(例如0. 05,0. 25、 0. 28,0. 5,0. 9,1. 0% )、0· 0005-1. 0%對羥基苯甲酸烷基酯(例如 0. 00075,0. 0009,0. 001、 0. 002、0· 005、0· 0075、0· 009、0. 0U0. 02,0. 05,0. 075,0. 09,0. U0. 2、0· 3、0· 5、0· 75、0· 9、 1.0% )等。如上所指出，本發明提供一種這樣的制品，其包括包裝材料和至少一個小瓶，該小瓶包含至少一種蛋白質支架與任選地在水性稀釋液中的規定的緩沖劑和/或防腐劑所成的溶液，其中所述包裝材料包含一標簽，該標簽說明這種溶液可保持1、2、3、4、5、6、9、12、 18、20、M、30、36、40、48、54、60、66、72小時或更長時間。本發明還包括這樣的制品，其包括包裝材料、包含經冷凍干燥的至少一種蛋白質支架的第一小瓶和包含規定的緩沖劑或防腐劑的水性稀釋液的第二小瓶，其中所述包裝材料包括一標簽，該標簽指導患者將該至少一種蛋白質支架在該水性緩沖液中進行復水以形成可保持M小時或更長時間的溶液。按照本發明來使用的該至少一種蛋白質支架可通過重組方法生產，包括從哺乳動物細胞或轉基因制品生產，或者可從其他生物來源純化，如本文中所述或者如本領域所知。至少一種蛋白質支架在本發明的產物中的含量范圍包括這樣的量，如果是在濕/ 干系統中，在復水時所述量會產生約1. ομ g/ml至約1000mg/ml，盡管更低的和更高的濃度也是可行的且取決于預定的遞送介質，例如溶液制劑將不同于透皮貼劑方法、肺部方法、透粘膜方法或者滲透泵或微型泵方法。優選的是，水性稀釋液還任選包含可藥用防腐劑。優選的防腐劑包括選自如下的那些苯酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯甲酚、芐醇、對羥基苯甲酸烷基酯(甲基酯、乙基酯、 丙基酯、丁基酯等)、烷基芐基二甲基氯化銨、氯化芐乙氧銨、脫氫乙酸鈉和硫柳汞或其混合物。在制劑中使用的防腐劑的濃度是足以產生抗微生物作用的濃度。該濃度取決于所選防腐劑且容易由技術人員確定。其他的賦形劑，例如等滲劑、緩沖劑、抗氧化劑和防腐增強劑，也可任選地和優選地加到該稀釋液中。等滲劑例如甘油常常以已知的濃度使用。優選加入生理學耐受的緩沖劑以提供改善的PH控制。制劑可以覆蓋寬的PH范圍，例如約pH 4至約pH 10，并且優選的范圍是約PH 5至約pH 9，并且最優選的范圍是約6.0至約8.0。優選地，本發明的制劑的pH在約6. 8至約7. 8之間。優選的緩沖液包括磷酸鹽緩沖液，最優選地為磷酸鈉，特別是磷酸緩沖鹽水(PBS)。也可任選地向配方或組合物中添加其他的添加劑以減少聚集現象，所述添加劑例如可藥用的增溶劑，如Tween 20 (聚氧乙烯Q0)失水山梨糖醇單月桂酸酯)Jween 40 (聚氧乙烯O0)失水山梨醇單棕櫚酸酯)、Tween 80(聚氧乙烯Q0)失水山梨醇單油酸酯)、Pluronic F68 (聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物)和PEG(聚乙二醇)或非離子表面活性劑如聚山梨醇酯20或80或者泊洛沙姆184或188、Pluronic polyls、其他的嵌段共聚物以及螯合劑如EDTA和EGTA。如果使用泵或塑料容器來給予制劑，則這些添加劑是特別有用的。 可藥用表面活性劑的存在減輕了蛋白質聚集的傾向。本發明的制劑可通過這樣的方法制備，該方法包括將至少一種蛋白質支架與選自以下的防腐劑在水性稀釋液中混合苯酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯甲酚、芐醇、對羥基苯甲酸烷基酯(甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等)、苯扎氯銨、芐索氯銨、脫氫乙酸鈉和硫柳汞或者它們的混合物。將該至少一種蛋白質支架與防腐劑在水性稀釋液中混合，是用常規的溶解和混合程序來進行。為制備合適的制劑，例如將量好數量的、在經緩沖的溶液中的至少一種蛋白質支架與所需的防腐劑在經緩沖的溶液中進行組合，后一經緩沖的溶液其數量足以將所述蛋白質和防腐劑以所需的濃度提供。該方法的變型形式會是本領域普通技術人員認識到的。例如，組分添加的順序、是否使用另外的添加劑、制劑制備時的溫度和PH都是可以為所用的給藥濃度和方式進行最優化的因素。受權利要求書保護的制劑可作為澄清溶液提供給患者，或者以兩個小瓶來提供給患者，其中一個小瓶裝著經冷凍干燥的至少一種蛋白質支架，該蛋白質支架用裝有水、在水性稀釋液中的防腐劑和/或賦形劑(優選地，磷酸鹽緩沖劑和/或鹽水和選定的鹽)的第二小瓶進行復水。單個溶液小瓶或需要復水的雙小瓶都可以多次再次使用，并且可以滿足患者治療的單個或多個周期，且因此可以提供比目前可用的治療方案更方便的治療方案。本發明受權利要求書保護的制品可用于從立即到M小時或更長的時間里進行給藥。因此，本發明受權利要求書保護的制品能給患者提高明顯優點。本發明的制劑可任選地在約2°C至約40°C的溫度下安全保藏并長時間保持蛋白質的生物活性，從而包裝標簽可說明該溶液可在6、12、18、24、36、48、72或96小時或更長時間里保持和/或使用。如果使用防腐稀釋劑，則該標簽可說明使用期可長達1-12個月、半年、一年半和/或兩年。本發明的至少一種蛋白質支架的溶液可通過這樣的方法進行制備，該方法包括將至少一種蛋白質支架在水性稀釋液中進行混合。混合是用常規的溶解和混合程序來進行。 為制備合適的稀釋液，例如將量好數量的至少一種蛋白質支架在水或緩沖劑中進行組合， 該水或緩沖劑的數量足以將該蛋白質和任選地將防腐劑或緩沖劑以所需的濃度提供。該方法的變型形式會是本領域普通技術人員認識到的。例如，組分添加的順序、是否使用另外的添加劑、制劑制備時的溫度和PH都是可以為所用的給藥濃度和方式進行最優化的因素。受權利要求書保護的產品可作為澄清溶液提供給患者，或者以兩個小瓶來提供給患者，其中一個小瓶裝著經冷凍干燥的至少一種蛋白質支架，該蛋白質支架用裝有該水性稀釋液的第二小瓶進行復水。單個溶液小瓶或需要復水的雙小瓶都可以多次再使用，并且可以滿足患者治療的單個或多個周期，因而提供比目前可用治療方案的更方便的治療方案。可通過將澄清溶液或兩個小瓶提供給藥房、診所或其他此類機構和設施，來將受權利要求書保護的產品間接地提供給患者，所述兩個小瓶中一個小瓶裝著經冷凍干燥的至少一種蛋白質支架，該蛋白質支架用裝有該水性稀釋液的第二小瓶進行復水。在這個情況中透明溶液體積可最高達一升甚至更大，從而提供大的儲備，從中可一次或多次獲取該至少一種蛋白質支架溶液的小份供轉移到更小的小瓶中，并由藥房或診所提供給它們的消費者和/或患者。公認的包含單小瓶系統的裝置包括供遞送溶液的筆式注射器裝置，如BD Pens.BD Auto jector 、Humaject 、NovoPen 、B-D Pen> AutoPen 禾口 OptiPen 、GenotropinPen 、Genotronorm Pen 、Humatro Pen 、Reco-Pen 、Roferon Pen 、Biojector 、Iject 、 J-tip Needle-Free Injector, 、Intraject 、Medi-Ject ，它們例如由以下公司制造或開發Becton Dickensen (Franklin Lakes, NJ, www. bectondickenson. com) ；Disetronic (瑞士 Burgdorf, www.disetronic.com) ；Bioject, Portland, Oregon(www. bioject. com)； National Medical Products, Weston Medical (英國 Peterborough,www. weston-medical. com) ；Medi-Ject Corp (Minneapolis, MN, www. mediject. com),以及類似的合適裝置。公認的包含雙小瓶系統的裝置包括那些用于在筒中將經凍干的藥物進行復水的筆式注射器系統，而該筒用于遞送該復水溶液，如HumatroPen 。其他合適的裝置的例子包括預充注射器、自動注射器、無針注射器和無針靜脈輸注器。本發明受權利要求書保護的產品包括包裝材料。包裝材料除了提供管理機構要求的信息之外，還提供本產品可得以使用的條件。對于兩小瓶的濕/干產品，本發明的包裝材料給患者提供說明，指導他們將至少一種蛋白質支架在水性稀釋液中進行復水以形成溶液并在2-M小時或更長時間里使用該溶液。對于單小瓶溶液產品，標簽標明此類溶液可以在 2-24小時或更長時間段內使用。本發明受權利要求書保護的產品可用于人藥物產品用途。本發明的制劑可通過這樣的方法進行制備，該方法包括將至少一種蛋白質支架與選定的緩沖劑(優選地，含有鹽水或選定的鹽的磷酸鹽緩沖劑)進行混合。將至少一種蛋白質支架與緩沖劑在水性稀釋液中混合，是用常規的溶解和混合程序來進行。為制備合適的制劑，例如將量好數量的、在水或緩沖劑中的至少一種蛋白質支架與所需的緩沖劑在水中進行組合，后一水的數量足以將所述蛋白質和緩沖劑以所需的濃度提供。該方法的變型形式會是本領域普通技術人員認識到的。例如，組分添加的順序、是否使用另外的添加劑、 制劑制備時的溫度和PH都是可以為所用的給藥濃度和方式進行最優化的因素。受權利要求書保護的穩定的或防腐的制劑可作為澄清溶液提供給患者，或者以兩個小瓶來提供給患者，其中一個小瓶裝著經冷凍干燥的蛋白質支架，該蛋白質支架用裝有在水性稀釋液中的防腐劑或緩沖劑和賦形劑的第二小瓶進行復水。單個溶液小瓶或需要復水的雙小瓶都可以多次再使用，并且可以滿足患者治療的單個或多個周期，因而提供比目前可用治療方案的更方便的治療方案。其他的使該蛋白質支架穩定的制劑或方法，可產生包含該蛋白質支架的凍干粉末的非澄清溶液。非透明的溶液包括包含顆粒懸浮液的制劑，所述顆粒為在尺寸不定的結構中含有該蛋白質支架(而形成)的組合物，所述結構有不同名稱，如微球體、微顆粒、納米顆粒、納米微球或脂質體。這種含有活性劑的相對均勻、基本上球形的顆粒制劑可這樣形成 使含有該活性劑和聚合物的水相與非水相進行接觸，然后蒸發非水相以使顆粒從水相中凝聚出來，如美國專利4，589，330中所教導。多孔微顆粒可如下制備使用含有活性劑和聚合物的第一相分散在連續溶劑中(所成的懸浮液)，通過冷凍干燥或稀釋-提取-沉淀從該懸浮液除去所述溶劑，如美國專利4，818，542中所教導。用于這種制備的優選的聚合物為選自以下的天然或合成共聚物或聚合物明膠、瓊膠、淀粉、阿拉伯半乳聚糖、白蛋白、膠原、聚乙醇酸、聚乳酸、乙交酯-L(-)丙交酯、聚(ε-己酸內酯)、聚(ε-己酸內酯-CO-乳酸)、聚(ε -己酸內酯-CO-乙醇酸)、聚(β -羥基丁酸)、聚環氧乙烷、聚乙烯、聚O-氰基丙烯酸烷基酯)、聚(甲基丙烯酸羥乙酯)、聚酰胺、聚(氨基酸)、聚(2-羥乙基DL-天冬酰胺)、 聚(酯脲)、聚(L-苯丙氨酸/乙二醇/1,6-二異氰酸己烷)和聚(甲基丙烯酸甲酯)。特別優選的聚合物是聚酯，如聚乙醇酸、聚乳酸、乙交酯-L(-)丙交酯、聚(ε-己酸內酯)、聚 (ε -己酸內酯-CO-乳酸)和聚(ε -己酸內酯-CO-乙醇酸)。可用于溶解聚合物和/或活性物的溶劑包括水、六氟異丙醇、二氯甲烷、四氫呋喃、己烷、苯或六氟丙酮倍半水合物。 將含有活性物的相與第二相分散的方法可包括施加壓力迫使所述第一相通過噴嘴中的孔口而實現小滴形成。干粉制劑可由冷凍干燥以外的方法產生，如通過噴霧干燥或溶劑萃取、通過蒸發或者通過沉淀結晶組合物然后經過一個或多個步驟以除去水性溶劑或非水溶劑來產生。噴霧干燥的蛋白質支架制品的制備在美國專利6，019，968中有教導。可通過將蛋白質支架和任選的賦形劑于溶劑中(所成)的溶液或漿液在能提供可呼吸的干粉的條件下進行噴霧干燥，來生產基于蛋白質支架的干粉組合物。溶劑可包括極性化合物，如水和乙醇，它們可容易干燥。可通過在不存在氧的情況下進行噴霧干燥程序，例如在氮封下或者通過使用氮氣作為干燥氣體來進行噴霧干燥程序，來增強蛋白質支架的穩定性。另一種相對干燥的制劑， 是多個穿孔的微結構分散于通常包含氫氟烷烴推進劑的懸浮介質中(所成)的分散體，如 WO 9916419中所教導。可用計量劑量吸入器將該穩定化的分散體給予患者的肺。可用于噴霧干燥藥物的商業制備中的設備由Buchi Ltd.或Niro Corp制造。本文所述的處于穩定的或防腐的制劑或溶液中的至少一種蛋白質支架，可按照本發明通過多種遞送方法給予患者，包括皮下注射或肌肉內注射；透皮給予、肺部給予、透粘膜給予、植入物給予、滲透泵給予、藥筒(cartridge)給予、微型泵給予，或者技術人員知道的其他方式，如本領域所公知。治療應用本發明還提供使用本發明的至少一種蛋白質支架來調節或治療細胞、組織、器官、 動物或患者中的本領域所知或本文所述的疾病的方法，例如用治療有效量的蛋白質支架給予或接觸該細胞、組織、器官、動物或患者。本發明還提供調節或治療細胞、組織、器官、動物或患者中的疾病的方法，所述疾病包括但不限于肥胖癥、免疫相關疾病、心血管疾病、傳染病、惡性疾病或神經疾病中的至少一者。本發明還提供調節或治療細胞、組織、器官、動物或患者中的至少一種免疫相關疾病的方法、所述免疫相關疾病包括但不限于以下疾病中的至少一種類風濕關節炎、青少年類風濕性關節炎、全身發病型青少年類風濕性關節炎、牛皮癬關節炎、關節強直性脊椎炎、 胃潰瘍、血清反應陰性關節病、骨關節炎、骨質溶解、整形外科植入物的無菌性松動、炎性腸道疾病、潰瘍性結腸炎、系統性紅斑狼瘡、抗磷脂綜合征、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、特發性肺纖維化、系統性血管炎/韋格納氏肉芽腫、肉樣瘤病、睪丸炎/輸精管切除術逆轉過程、過敏性/特應性疾病、哮喘、過敏性鼻炎、濕疹、過敏性接觸性皮炎、過敏性結膜炎、超敏性肺炎、移植、器官移植排斥、移植物抗宿主病、全身炎癥反應綜合征、膿毒癥綜合征、革蘭氏陽性敗血癥、革蘭氏陰性菌敗血癥、培養陰性敗血癥、真菌敗血癥、粒細胞減少性發熱、尿膿毒癥、腦膜炎球菌血癥、創傷/出血、燒傷、電離輻射暴露、急性胰腺炎、成人呼吸窘迫綜合癥、類風濕關節炎、酒精性肝炎、慢性炎癥性疾病、肉樣瘤病、克羅恩氏病、鐮狀細胞性貧血、糖尿病、腎病、特應性疾病、超敏反應、過敏性鼻炎、干草熱、常年性鼻炎、結膜炎、 子宮內膜異位癥、哮喘、蕁麻疹、全身性過敏反應、皮炎、惡性貧血、溶血病、血小板減少癥、 任何器官或組織的移植排斥、腎移植排斥、心臟移植排斥、肝移植排斥、胰腺移植排斥、肺移植排斥、骨髓移植(BMT)排斥、皮膚同體移植排斥、軟骨移植排斥、骨移植排斥、小腸移植排斥、胎兒胸腺移植排斥、甲狀旁腺移植排斥、任何器官或組織的異種移植排斥、同種異體移植排斥、抗受體超敏反應、格雷夫斯氏病、雷諾氏病、B型胰島素抗性糖尿病、哮喘、重癥肌無力、抗體介導的細胞毒性、III型超敏反應、POEMS綜合征(多神經病、器官巨大癥、內分泌病、單克隆丙種球蛋白癥和皮膚改變綜合癥)、多神經病、器官巨大癥、內分泌病、單克隆丙種球蛋白癥、皮膚變化綜合征、抗磷脂綜合征、天皰瘡、硬皮病、混合性結締組織病、特發性阿狄森氏病、糖尿病、慢性活動性肝炎、原發性膽管肝硬化、白癜風、血管炎、心肌梗塞后心切開術綜合征、IV型超敏反應、接觸性皮炎、超敏性肺炎、同種異體移植排斥、細胞內生物導致的肉芽腫、藥物敏感性、代謝性/特發性、威爾森氏病、血色素沉著癥、α-1-抗胰蛋白酶缺乏癥、糖尿病性視網膜病變、橋本甲狀腺炎、骨質疏松癥、下丘腦-垂體-腎上腺軸評價、 原發性膽汁性肝硬化、甲狀腺炎、腦脊髓炎、惡病質、囊腫性纖維化、新生兒慢性肺病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、家族性噬血性淋巴組織細胞增多癥、皮膚病、牛皮癬、禿頭癥、腎病綜合癥、腎炎、腎小球腎炎、急性腎功能衰竭、血液透析、尿毒癥、毒性、先兆子癇、0ΚΤ3治療、抗 cd3治療、細胞因子治療、化療、放射治療(例如包括但不限于乏力、貧血、惡病質等)、慢性水楊酸中毒等等。參見，例如《默克手冊》(Merck Manual)，第12-17版，Merck & Company， Rahway, NJ (1972，1977，1982，1987，1992，1999)，《藥物治療手冊》(Pharmacotherapy Handbook) ,Wells 等人(編輯)，第二版，Appleton 和 Lange，Stamford, Conn. (1998，2000)， 各自全文以引用方式并入。本發明還提供調節或治療細胞、組織、器官、動物或患者中的至少一種心血管疾病的方法，所述心血管疾病包括但不限于以下疾病中的至少一種心肌頓抑綜合征、心肌梗塞、充血性心臟衰竭、中風、缺血性中風、出血、急性冠狀動脈綜合征、動脈硬化、動脈粥樣硬化、再狹窄、糖尿病性動脈硬化疾病、高血壓、動脈高血壓、腎血管性高血壓、昏厥、休克、心血管系統的梅毒、心臟衰竭、肺心病、原發性肺高血壓、心律失常、心房異位搏動、心房撲動、 心房顫動(持續或陣發性)、后灌注綜合征、心肺旁路炎癥反應、混亂性或多源性房性心動過速、規則窄QRS心動過速、特異性心律失常、心室顫動、希氏束心律失常、房室傳導阻滯、 束支傳導阻滯、心肌缺血性疾病、冠心病、心絞痛、心肌梗塞、心肌病、擴張型充血性心肌病、 限制型心肌病、心臟瓣膜病、心內膜炎、心包疾病、心臟腫瘤、主動脈和外周動脈瘤、主動脈剝離、主動脈的炎癥、腹主動脈及其分支的閉塞、周圍血管疾病、動脈閉塞性疾病、外周動脈硬化性疾病、血栓閉塞性脈管炎、功能外周動脈疾病、雷諾氏現象和疾病、手足發紺、紅斑性肢痛病、靜脈疾病、靜脈血栓、靜脈曲張、動靜脈瘺、淋巴水腫、脂肪水腫、不穩定型心絞痛、 再灌注損傷、后泵綜合征、缺血再灌注損傷等等。這種方法可任選地包括將有效量的包含至少一種蛋白質支架的組合物或藥物組合物給予需要這種調節、治療或療法的細胞、組織、器官、動物或患者。本發明還提供調節或治療細胞、組織、器官、動物或患者中的至少一種傳染病的方法，所述傳染病包括但不限于以下疾病中的至少一種急性或慢性細菌性感染、急性和慢性寄生蟲或感染過程(包括細菌、病毒和真菌感染)、HIV感染/HIV神經病、腦膜炎、肝炎(例如甲肝、乙肝或丙肝)、化膿性關節炎、腹膜炎、肺炎、會厭炎、大腸桿菌0157:h7、溶血性尿毒癥綜合征/溶栓血小板減少性紫癜、瘧疾、登革熱出血熱、利什曼病、麻風病、中毒性休克綜合征、鏈球菌肌炎、氣性壞疽、分枝桿菌結核、鳥胞內分枝桿菌、卡氏肺囊蟲肺炎、盆腔炎、 睪丸炎/附睪炎、軍團菌、萊姆病、A型流感、EB病毒、病毒相關性噬血細胞綜合征、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎等等本發明還提供調節或治療細胞、組織、器官、動物或患者中的至少一種惡性疾病的方法，所述惡性疾病包括但不限于以下疾病中的至少一種白血病、急性白血病、急性急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性淋巴細胞性白血病、B細胞、T細胞或FAB ALL、急性髓細胞性白血病(AML)、急性骨髓性白血病、慢性粒細胞白血病(CML)、慢性淋巴細胞性白血病 (CLL)、毛細胞性白血病、脊髓發育不良綜合征(MDS)、淋巴瘤、霍奇金病、惡性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、多發性骨髓瘤、卡波濟氏肉瘤、結腸直腸癌、胰臟癌、鼻咽癌、惡性組織細胞增生癥、惡性腫瘤的副腫瘤綜合征/高鈣血癥、實體瘤、膀胱癌、乳腺癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、頭癌、頸癌、遺傳性非息肉性癌、霍奇金淋巴瘤、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、腎細胞癌、睪丸癌、腺癌、肉瘤、惡性黑素瘤、血管瘤、轉移性疾病、癌癥相關骨吸收、癌癥相關骨痛等等。本發明還提供調節或治療細胞、組織、器官、動物或患者中的至少一種神經疾病的方法，所述神經疾病包括但不限于以下疾病中的至少一種神經退化性疾病；多發性硬化；偏頭痛；艾滋病癡呆綜合征；脫髓鞘疾病，如多發性硬化癥和急性橫貫性脊髓炎；錐體外系和小腦疾病，如皮質脊髓系統病變、基底神經節的疾病；過動癥，如亨廷頓氏舞蹈病和老年性舞蹈病；藥物引起的運動障礙，如由阻斷中樞神經系統多巴胺受體的藥物引起的那些運動障礙；少動癥，如帕金森氏病；進行性核上麻痹；小腦的結構性病變；脊髓小腦變性，如脊髓共濟失調、Friedreich共濟失調、小腦皮層變性、多系統變性(Mencel、 Dejerine-Thomas、Shi—Drager 禾口 Machado-Jos 印 h)、系統性疾病(Refsum 病、β-月旨蛋白缺乏癥、共濟失調、毛細血管擴張和線粒體多系統疾病)；脫髓鞘核疾病(demyelinating core disorder)，如多發性硬化癥、急性橫貫性脊髓炎；以及運動單位的疾病，如神經性肌肉萎縮(前角細胞變性，如肌萎縮性側索硬化癥、小兒脊髓性肌肉萎縮癥和少年脊髓性肌肉萎縮癥)；阿爾茨海默病；中年唐氏綜合癥；彌漫性Lewy小體病、Lewy小體型老年性癡呆Wernicke-Korsakoff綜合征；慢性酒精中毒；Creutzfeldt-Jakob病；亞急性硬化性全腦炎、Hallerrorden-Spatz病、拳擊員癡呆；神經創傷性損傷(例如脊髓損傷、腦損傷、腦震蕩、反復震蕩)；疼痛；炎癥性疼痛；自閉癥；抑郁癥；中風；認知障礙；癲癇等等。此類方法可以任選包括將有效量的包含至少一種TNF抗體或特定部分或變體的組合物或藥物組合物給予需要這種調節、處理或治療的細胞、組織、器官、動物或患者。參見，例如Merck Manual，第 16 版，Merck & Company，Rahway, NJ(1992)。本發明還提供調節或治療細胞、組織、器官、動物或患者中的至少一種傷(wound)、 創傷或組織損傷或相關慢性病癥的方法，所述傷包括但不限于以下至少一者身體損傷或者與口腔手術有關的創傷，所述口腔手術包括牙周手術、拔牙、根管治療、牙種植體的插入、 牙修復體的應用及使用；或者其中所述傷選自無菌傷、挫傷、切傷、裂傷、非穿透傷、開放傷、 穿透傷、穿孔傷、刺傷、有菌傷、梗塞形成傷和皮下傷；或者其中所述傷選自局部缺血潰瘍、 壓瘡、瘺、嚴重咬傷、熱燙傷和供體部位傷；或者其中所述傷為口瘡傷、創傷性傷或皰疹相關
31的傷。傷和/或潰瘍通常可見從皮膚突出，或者在粘膜表面上，或者由器官中的梗塞形成(“中風”)所致。傷可能是軟組織缺陷或病變的結果，或者是潛在性病癥的結果。在本發明情形中，術語“皮膚”涉及動物(包括人在內)的身體的最外表面，涵蓋完整或幾乎完整的皮膚以及受損的皮膚表面。術語“粘膜”涉及動物(如人)的未受損壞或已受損壞的粘膜，可以是口粘膜、口腔粘膜、耳粘膜、鼻粘膜、肺粘膜、眼粘膜、胃腸粘膜、陰道粘膜或直腸粘膜。在本發明情形中，術語“傷”表示破壞組織結構的正常完整性的身體損傷。該術語還意在涵蓋術語“瘡(sore)，，、“損傷(lesion)”、“壞死”和“潰瘍”。通常，術語“瘡(sore)" 是表示皮膚或黏膜的幾乎任何損傷(lesion)的通用詞語，術語“潰瘍”是由壞死組織的脫落所產生的器官或組織表面的局部缺陷或露出。損傷通常涉及任何組織缺陷。壞死涉及由感染、傷害、炎癥或梗塞形成所引起的死組織。本發明情形中所用的術語“傷(wound) ”表示任何傷(傷的分類見下文)，并表示在愈合過程中的任何特定階段的傷，包括任何愈合開始之前的階段，或者甚至在作出特定的傷(如手術切口)(預防性治療)之前的階段。可按照本發明進行預防和/或治療的傷的例子例如是無菌傷、挫傷、切傷、裂傷、非穿透傷(即其中皮膚沒有破壞但對皮膚底下結構有損害的傷)、開放傷、穿透傷、穿孔傷、刺傷、有菌傷、皮下傷等。瘡的例子有褥瘡、口瘡、鉻瘡、感冒瘡、壓瘡等。潰瘍的例子例如是消化性潰瘍、十二指腸潰瘍、胃潰瘍、痛風性潰瘍、糖尿病性潰瘍、高血壓性局部缺血性潰瘍、淤積性潰瘍、下肢潰瘍(靜脈性潰瘍)、舌下潰瘍、 黏膜下潰瘍、癥狀性潰瘍、營養不良性潰瘍、熱帶性潰瘍和生殖器潰瘍(例如由淋病引起) (包括尿道炎、宮頸黏膜炎和直腸炎)。可按照本發明得到成功治療的與傷或瘡相關的病癥有燒傷、炭疽、破傷風、氣性壞疽、猩紅熱、丹毒、須瘡、毛囊炎、接觸傳染性膿皰瘡或大皰性膿皰瘡等。術語“傷”和“潰瘍”以及“傷”和“瘡”的使用之間往往有一定的重疊，此外，各個術語往往隨意使用。因此，如上所述，在本發明情形中術語“傷”涵蓋術語“潰瘍”、“損傷”、 “瘡”和“梗死形成”，且各個術語任意使用，除非另有指明。要按照本發明進行治療的各種傷還包括(i) 一般的傷，例如手術傷、外傷、感染傷、局部缺血傷、熱傷、化學傷和大泡傷；(ii) 口腔特有的傷，例如拔牙后的傷、牙髓傷(特別是與囊腫和膿腫的治療有關)、細菌病毒或自身免疫來源的潰瘍和損傷、機械傷、化學傷、 熱傷、感染傷和青苔狀傷(lichenoid wound)；皰疹性潰瘍、口瘡性口炎、急性壞死性潰瘍性齒齦炎和灼口綜合征為具體的例子；以及(iii)皮膚上的傷，例如贅生物、燒傷(例如化學傷、熱傷)、損傷(細菌性、病毒性、自身免疫性)、咬傷和手術切口。傷的另一種分類法是分成(i)由手術切口、輕微磨擦和輕微咬傷導致的組織小損失，或者(ii)組織大損失。后一組包括局部缺血性潰瘍、壓瘡、瘺、裂傷、嚴重咬傷、熱傷和供體部位傷(在軟組織和硬組織中)以及梗塞形成。其他對于本發明重要的傷是諸如局部缺血潰瘍、壓瘡、瘺、嚴重咬傷、熱傷和供體部位傷的傷。局部潰瘍和壓瘡是通常只非常慢地愈合的傷，從而尤其在這種情況中，改進的和更快的愈合過程對于患者而言當然十分重要。此外，當愈合得到改進并更快地進行時，在遭受這類傷的患者的治療中所涉及的費用明顯降低。供體部位傷是例如從身體的一個部位移取硬組織到身體的另一個部位(例如與移植相關)時出現的傷。由這種手術引起的傷是非常痛苦的，因此改進的愈合是十分有價值的。術語“皮膚”以十分廣義的含義使用，涵蓋皮膚的表皮層，且在大多數的其中皮膚表面或多或少受損的情況中，還涵蓋皮膚的真皮層。除了角質層以外，皮膚的表皮層是外層(上皮層)，皮膚的更深的結締組織層稱為真皮。本發明的任何方法可包括將有效量的包含至少一種蛋白質支架的組合物或藥物組合物給予需要這種調節、治療或療法的細胞、組織、器官、動物或患者。這種方法可任選地還包括用于治療這類疾病或病癥的共給予或組合療法，其中給予所述至少一種蛋白質支架、其指定部分或變體，且還包括在這之前、與此同時和/或在這之后給予至少一種選自以下的藥劑至少一種TNF拮抗劑(例如但不限于TNF化學拮抗劑或蛋白質拮抗劑、TNF單克隆或多克隆抗體或片段、可溶性TNF受體(例如p55、p70或p85)或其片段、融合多肽、 或者小分子TNF拮抗劑、例如TNF結合蛋白I或II(TBP-1或TBP-II)、奈瑞莫單抗、英夫利昔單抗、依那西普(Enbrel )、adalimulab(Humira )、CDP-571、CDP-870、阿非莫單抗、 來那西普等)、抗風濕藥物(例如甲氨蝶呤、金諾芬、金硫葡糖、硫唑嘌呤、硫代蘋果酸金鈉、 硫酸羥氯喹、來氟米特、柳氮磺吡啶)、肌肉松弛劑、麻醉劑(narcotic)、非留類抗炎藥物 (NSAID)、止痛藥、麻醉劑(anesthetic)、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗微生物劑(例如氨基糖苷、抗真菌劑、抗寄生蟲劑、抗病毒劑、碳青霉烯類、頭孢菌素、氟喹諾酮、大環內酯、青霉素、磺胺藥物、四環素、別的抗微生物劑)、抗牛皮癬劑、皮質類固醇、合成代謝類固醇、糖尿病相關藥劑、礦物質、營養劑、甲狀腺劑、維生素、鈣相關激素、止瀉劑、鎮咳劑、 止吐劑、抗潰瘍劑、緩瀉劑、抗凝血劑、促紅細胞生成素(例如紅細胞生成素α)、非格司亭 (例如G-CSF、Neup0gen)、沙格司亭(GM-CSF、Leukine)、免疫接種劑、免疫球蛋白、免疫抑制劑(例如巴利昔單抗、環胞菌素、達克珠單抗)、生長激素、激素替代藥物、雌激素受體調節劑、散瞳劑、睫狀肌麻痹劑、烷化劑、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、放射性藥物、抗抑郁藥、抗躁狂劑、抗精神病藥物、抗焦慮藥物、催眠劑、擬交感神經藥物、興奮劑、多奈哌齊、他克林、 哮喘藥物、β激動劑、吸入類固醇、白三烯抑制劑、甲基黃嘌呤、色甘酸、腎上腺素或類似物、 阿法鏈道酶(Pulmozyme)、細胞因子或細胞因子拮抗劑。合適的劑量是本領域公知的。參見例如 Wells 等人(編輯),Pharmacotherapy Handbook,第 2 版，Appleton and Lange, Stamford, CT(2000) ；PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000,精裝片反，Tarascon Publishing, Loma Linda, CA(2000) ；Nursing 2001 Handbook of Drugs，第 21 版，Springhouse Corp. , Springhouse, PA, 2001 ；Health Professional' s Drug Guide 2001 年版，Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ.,以上每個參考文獻以引用方式全部并入本文。細胞因子包括任何已知的細胞因子。參見例如CopewithCytokines. com。細胞因子拮抗劑包括但不限于任何蛋白質支架抗體、片段或模擬物，任何可溶性受體、片段或模擬物，任何小分子拮抗劑，或者它們的任何組合。通常，病理狀況的治療是通過給予有效量或有效劑量的至少蛋白質支架組合物來實現，該有效量或有效劑量平均而言合計達至少約0. 01-500毫克的至少一種蛋白質支架/千克患者/劑的范圍，優選地為至少約0. 1-100毫克的蛋白質支架/千克患者/單次或多次給予，這取決于該組合物中所含的活性劑的比活性。或者，有效血清濃度可包含 0. 1-5000 μ g/ml血清濃度/單次或多次給予。合適的劑量是醫學從業者已知的，當然要取決于具體疾病狀態、待給予組合物的比活性，以及接受治療的具體患者。在某些情況下，為了達到所需治療量，可能有必要提供重復給予，即重復單獨給予特定的監控劑量或計量劑量，其中單獨給予可以重復直至達到所需日劑量或效果。優選的劑量可任選地包括約0. 1-99和/或100_500mg/kg/次給予，或其任何范圍、數值或分數，或者是為了實現這樣的血清濃度約0. 1-5000 μ g/ml血清濃度/單次或多次給予，或其任何范圍、數值或分數。本發明的蛋白質支架的優選劑量范圍為約lmg/kg，直至約3、約6或約iang/kg患者體重。或者，給予的劑量可以根據已知因素而變化，所述因素例如為具體試劑的藥物動力學特征及其給予方式和途徑；接受者的年齡、健康狀況和重量；癥狀的性質和程度、當前治療的類型、治療頻率和所需效果。通常活性成分的劑量可以是約0.1至100毫克/千克體重。通常，一次給予或者以緩釋形式給予0. 1-50、優選地0. 1-10毫克/公斤，能有效地獲得期望的結果。作為非限制性例子，可這樣提供對人類或動物的治療在第1-40天中的至少一天，或者，作為另外一種選擇或除此之外，在第1-52周中的至少一周，或者，作為另外一種選擇或除此之外，在第1-20年中的至少一年，或者它們的任何組合，使用單劑量、輸注劑量或重復劑量，每天一次性或者定期地投與本發明的至少一種蛋白質支架約0. l-100mg/kg 或其任何范圍、數值或分數。適合于內部給予的劑型(組合物)，每單位或容器一般包含約0. 001毫克至約500 毫克的活性成分。在這些藥物組合物中，基于組合物總重量，活性成分一般會以約0. 5至 99. 999重量％的量存在。對于胃腸外給予，可將蛋白質支架與藥用的胃腸外介質一起配制成溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、散劑或凍干散劑，或者與藥用的胃腸外介質分開提供。這類介質的例子有水、鹽水、林格溶液、右旋葡萄糖溶液和約1-10%人血清白蛋白。也可使用脂質體和非水介質，如固定油。介質或凍干粉末可含有維持等滲性的添加劑(例如氯化鈉、甘露糖醇)和維持化學穩定性的添加劑(例如緩沖劑和防腐劑)。可通過已知的或合適的技術對制劑進行滅菌。Remington' s Pharmaceutical Sciences, A. Osol ^ } 本(該領域的標準參考文本)中有描述。另選的給予方式可根據本發明使用許多已知的和已開發的模式來給予藥物有效量的至少一種本發明的蛋白質支架。盡管在下文描述中使用的是經肺給予，但其他給予方式也可根據本發明使用，得到合適的結果。本發明的蛋白質支架可在載體中遞送，作為溶液劑、乳劑、膠體劑或混懸劑體送，或者使用多種適合進行吸入給予的裝置和方法中的任何一種或者本文所述或本領域知道的其他方式，作為干粉遞送。腸胃外用制劑及給予胃腸外給予用的制劑可含有作為普通賦形劑的無菌水或鹽水、聚亞烷基二醇(如聚乙二醇)、植物來源的油、氫化萘等。注射用水性或油性混懸劑可通過使用合適的乳化劑或濕潤劑和懸浮劑根據已知方法來制備。注射用介質可以是無毒、非口服給予的稀釋劑，如含水溶液、在溶劑中(所成)的無菌可注射溶液或混懸液。作為可用的介質或溶劑，水、林格溶液、等滲鹽水等是允許的；作為普通溶劑或懸浮溶劑，可使用無菌非揮發性油。為了這些目的，可以使用任何種類的不揮發性油和脂肪酸，包括天然的或合成的或半合成的脂肪油或脂肪酸；天然的或合成的或半合成的甘油單酯或甘油二酯或甘油三酯。胃腸外給予是本領域知道的，包括但不限于常規形式的注射、如美國專利No. 5，851，198中所述的氣壓式無針注射裝置和如美國專利No. 5，839，446中所述的激光穿孔器裝置。另詵的遞送方式本發明還涉及通過以下方式來給予至少一種蛋白質支架胃腸外、皮下、肌肉內、 靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、腹腔內、小腦內、腦室內、結腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、 腎內、視網膜內、脊柱內、滑膜內、胸內、子宮內、膀胱內、病灶內、推注(bolus)、陰道、直腸、 口腔、舌下、鼻內或透皮方式。可制備至少一種蛋白質支架組合物，供用于胃腸外給予(皮下、肌肉內或靜脈內給予)或任何其他方式的給予，特別是以液體溶液劑或混懸劑的形式； 供用于陰道或直腸給予，特別是以半固體形式，如但不限于乳膏劑和栓劑；供口腔或舌下給予，如但不限于以片劑或膠囊劑的形式；或者供鼻內給予，如但不限于以散劑、滴鼻劑或氣溶膠或某些介質的形式；或者供透皮給予，如但不限于凝膠劑、軟膏劑、洗劑、混懸劑或貼劑遞送系統，其中含有化學增強劑(如二甲亞砜)以修飾皮膚結構或增加透皮貼劑中的藥物濃度(Junginger，等人，載于“Drug Permeation Enhancement ； ^siehjD. S.編輯，第 59-90 頁(Marcel Dekker，Inc. New York 1994，全文以引用方式并入本文))，或者含有氧化劑以使得能夠將含有蛋白質和肽的制劑施加到皮膚上(W0 98/53847)，或者施加電場以產生瞬間轉運途徑(如電穿孔)或者提高帶電藥物通過皮膚的遷移率(如離子電滲療法)，或者施加超聲波(如超聲透入療法)(美國專利No. 4，309，989和No. 4，767，402)(上述出版物和專利以引用方式全文并入本文中)。經肺/鼻給予對于經肺給予，優選地，將至少一種蛋白質支架組合物以能有效地到達肺下呼吸道或竇腔的顆粒大小進行遞送。根據本發明，至少一種蛋白質支架可通過多種本領域所知的用于治療劑的吸入給予的吸入裝置或鼻裝置中的任何一種進行遞送。這些能夠在患者的竇腔或肺泡中沉積氣溶膠化制劑的裝置包括定量吸入器、霧化器、干粉產生器、噴霧器等等。其他適合于管理蛋白質支架的經肺給予或經鼻給予的裝置也是本領域知道的。所有這類裝置都可使用適合于將蛋白質支架分配在氣溶膠中來給予的制劑。此類氣溶膠可由溶液 (水性或非水性)或固體顆粒構成。定量吸入器如Ventolin 定量吸入器通常利用推進氣體并且要求在吸氣期間啟動(參見，例如 WO 94/16970、WO 98/35888)。干粉吸入器如 Turbuhal er (Astra)、 Rotahaler (Glaxo)、Diskus (Glaxo)、Spiros 吸入器(Dura)、Inhale Therapeutics 公司銷售的裝置以及Spinhaler 粉末吸入器(Fi sons)，都采用呼吸來驅動混合粉末 (US 4668218(Astra)、EP 237507(Astra)、WO 97/25086(Glaxo)、WO 94/08552(Dura)、US 5458135 (Inhale) ,WO 94/06498 (Fisons)，所有這些專利都以引用方式全文并入本文)。霧化器如AEfcc Aradigm、Ultravent 霧化器(Mallinckrodt)和Acorn II 霧化器(Marquest Medical Products) (US 5404871 Aradigm, WO 97/22376)(以上參考文獻都以引用方式全文并入本文)從溶液產生氣溶膠，而計量劑量吸入器、干粉吸入器等則產生小顆粒氣溶膠。
35市售吸入裝置的這些具體例子旨在代表適用于實施本發明的具體裝置，并且無意于限制本發明的范圍。 優選地，通過干粉吸入器或噴霧器遞送包含至少一種蛋白質支架的組合物。吸入裝置有幾種合乎需要的特征適于給予本發明的至少一種蛋白質支架。例如，有利地，通過吸入裝置進行的遞送是可靠的、可再現的和準確的。吸入裝置可任選地遞送小的干燥顆粒，例如小于約10 μ m，優選地約1-5 μ m,以便容易呼吸。可通過迫使至少一種蛋白質支架的懸浮液或溶液在壓力下經過噴嘴，來產生包含蛋白質支架組合物的噴霧。可以選擇噴嘴大小和構造、所施加的壓力和液體加料速率來實現所需的輸出和粒子大小。例如，通過電場結合毛細管或噴嘴加料，可產生電噴霧。有利地， 通過噴霧器遞送的至少一種蛋白質支架組合物的顆粒具有小于約ΙΟμπι的顆粒大小，優選地顆粒大小在約1 μ m至約5 μ m的范圍內，最優選地在約2 μ m至約3 μ m的范圍內。適用于噴霧器的至少一種蛋白質支架組合物的制劑，通常是在含水溶液中包含蛋白質支架組合物，濃度為約0. Img至約IOOmg的至少一種蛋白質支架組合物/ml溶液或mg/ g，或其中的任何范圍、數值或分數。該制劑可包含各種物劑，如賦形劑、緩沖劑、等滲劑、防腐劑、表面活性劑，且優選地包含鋅。該制劑還可包含用于使蛋白質支架組合物穩定的賦形劑或物劑，如緩沖劑、還原劑、填充蛋白(bulk protein)或碳水化合物。可用于配制蛋白質支架組合物的填充蛋白包括白蛋白、魚精蛋白等。可用于配制蛋白質支架組合物的代表性碳水化合物包括蔗糖、甘露糖醇、乳糖、海藻糖、葡萄糖等。該蛋白質支架組合物制劑還可包含表面活性劑，其可減少或防止表面誘導的蛋白質支架組合物的聚集現象，該聚集現象由形成氣溶膠時溶液的霧化所引起。可以采用多種常規表面活性劑，例如聚氧乙烯脂肪酸酯和醇，以及聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯。以制劑的重量計，用量將通常在0. 001至14%之間。對于本發明的目的而言特別優選的表面活性劑為聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20等等。另外的本領域已知用于配制蛋白質如蛋白質支架或其指定部分或變體的物劑，也可包含在該制劑中。iiay^^^^s a質支奧組合物本發明的蛋白質支架組合物可通過霧化器來給予，如噴射式霧化器或超聲波霧化器。通常，在噴射式霧化器中，用壓縮空氣源通過孔口產生高速噴氣流。隨著氣體過了噴嘴后膨脹，有低壓區域產生，從而通過與液體貯器連接的毛細管抽取蛋白質支架組合物的溶液。來自毛細管的液體流在其離開管時被剪切成不穩定的細絲或小滴，從而產生氣溶膠。可以采用一系列構造、流速和擋板類型從給定的噴射式霧化器產生所需性能特征。在超聲波霧化器中，用高頻率電能產生振動機械能量，通常使用壓電轉換器。此能量直接地或通過耦合流體被傳輸到該蛋白質支架組合物制劑，從而產生包含蛋白質支架組合物的氣溶膠。有利地，通過霧化器遞送的蛋白質支架組合物的顆粒具有小于約10 μ m的顆粒大小，優選地顆粒大小在約1 μ m至約5 μ m的范圍內，最優選地為約2 μ m至約3 μ m。適用于霧化器(噴射式霧化器或超聲波霧化器)的至少一種蛋白質支架組合物的制劑，通常包含的濃度為約0. Img至約IOOmg的至少一種蛋白質支架/ml溶液。該制劑可包含各種物劑，如賦形劑、緩沖劑、等滲劑、防腐劑、表面活性劑，且優選地包含鋅。該制劑還可包含用于使該至少一種蛋白質支架組合物穩定的賦形劑或物劑，如緩沖劑、還原劑、填充蛋白或碳水化合物。可用于配制至少一種蛋白質支架組合物的填充蛋白包括白蛋白、魚精蛋白等。可用于配制至少一種蛋白質支架的代表性碳水化合物包括蔗糖、甘露糖醇、乳糖、 海藻糖、葡萄糖等。該至少一種蛋白質支架制劑還可包含表面活性劑，其可減少或防止表面誘導的該至少一種蛋白質支架的聚集現象，該聚集現象由形成氣溶膠時溶液的霧化所引起。可以采用多種常規表面活性劑，例如聚氧乙烯脂肪酸酯和醇，以及聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯。數量通常將占該制劑的約0.001至4重量％。對于本發明而言特別優選的表面活性劑為聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20等等。另外的本領域已知用于配制蛋白質如蛋白質支架的物劑，也可包含在該制劑中。iSi寸i十入盤合勿在計量劑量吸入器(MDI)中，推進劑、至少一種蛋白質支架和任何賦形劑或其他添加劑裝在罐中成為包含液化壓縮氣體的混合物。開動計量閥會將該混合物作為氣溶膠釋放出來，該氣溶膠優選地含有如下尺寸范圍的顆粒小于約10 μ m、優選地約1 μ m至約 5 μ m、最優選地約2 μ m至約3 μ m。可通過采用由本領域技術人員知道的各種方法(包括氣流粉碎、噴霧干燥、臨界點凝聚等)生產的蛋白質支架組合物的制劑，來獲得所需的氣溶膠顆粒大小。優選的定量吸入器包括由3M或Glaxo生產并采用氫氟烴推進劑的那些吸入器。 供用于計量劑量吸入器裝置的至少一種蛋白質支架的制劑，通常將在非水介質中包含微細的含至少一種蛋白質支架的粉末而成為混懸劑，例如借助于表面活性劑而懸浮于推進劑中。推進劑可以是用于該目的的任何常規材料，例如氯氟烴、氫氯氟烴、氫氟烴或包括三氯氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙醇和1，1，1，2_四氟乙烷、HFA-IMa(氫氟烷烴-13 )、 HFA-227(氫氟烷烴-227)在內的烴類。優選地，推進劑為氫氟烴。可選擇表面活性劑以使該至少一種蛋白質支架在推進劑中穩定成為混懸劑，以保護活性劑免于化學降解等。適宜的表面活性劑包括脫水山梨糖醇三油酸酯、大豆卵磷脂、油酸等等。在一些情況中，使用諸如乙醇的溶劑的溶液氣溶膠是優選的。另外的本領域已知用于配制蛋白質的物劑也可包含在該制劑中。本領域普通技術人員會認識到，可通過用本文沒有描述的裝置進行至少一種蛋白質支架組合物的肺部給予，來實現本發明的方法。口服制劑及給予口服用制劑有賴于共給予輔助劑(例如間苯二酚和非離子型表面活性劑如聚氧乙烯油基醚和正十六烷基聚乙烯醚)以人工提高腸壁的滲透性，以及共給予酶抑制劑(例如胰腺胰蛋白酶抑制劑、二異丙基氟磷酸(DFF)和特斯樂)以抑制酶促降解。在美國專利 No. 6，309，663中教導了用于遞送包括蛋白質和蛋白質支架在內的親水性物劑的制劑，其包含至少兩種表面活性劑的組合，旨在用于口服給予、口腔給予、粘膜給予、經鼻給予、經肺給予、陰道跨膜給予或者直腸給予。可將供口服的固體型劑型的活性組分化合物與至少一種添加劑混合，所述添加劑包括蔗糖、乳糖、纖維素、甘露糖醇、海藻糖、棉子糖、麥芽糖醇、葡聚糖、淀粉、瓊脂、藻酸鹽、幾丁質、殼聚糖、果膠、黃蓍膠、阿拉伯樹膠、明膠、膠原、酪蛋白、 白蛋白、合成的或半合成的聚合物和甘油酯。這些劑型還可含有其他類型的添加劑，例如無活性稀釋劑、潤滑劑如硬脂酸鎂、對羥基苯甲酸酯、防腐劑如山梨酸、抗壞血酸、α -生育酚、 抗氧化劑如半胱氨酸、崩解劑、粘合劑、增稠劑、緩沖劑、甜味劑、矯味劑、香味劑等。片劑和丸劑可進一步加工成腸溶衣包衣制劑。供口服的液體制劑包括可允許用于醫學用途的乳劑、糖漿劑、酏劑、混懸劑和溶液制劑。這些制劑可以含有常用于所述領域的無活性稀釋劑，例如水。脂質體作為胰島素和肝素的藥物遞送系統已有描述(美國專利 No. 4, 239, 754) 0最近，混合氨基酸的人工聚合物(類蛋白)的微球體已用于遞送藥物(美國專利No. 4，925，673)。此外，美國專利No. 5，879，681和美國專利No. 5，5，871，753中所述的、用于口服遞送生物活性劑的載體化合物，是本領域知道的。粘膜用制劑及給予將供口服給予生物活性劑的制劑包囊在一種或多種生物相容性聚合物或共聚物賦形劑(優選地生物可降解的聚合物或共聚物)中得到微膠囊，由于所得的微膠囊尺寸適當，該生物活性劑能達到動物的集合淋巴小結(也稱為“派氏集合淋巴結”或“GALT”)并被集合淋巴濾泡吸收，而又不會因為該生物活性劑穿過了胃腸道而失去有效性。可以在支氣管(BALT)和大腸中發現相似的集合淋巴小結。上述組織通常稱作粘膜相關的淋巴網狀組織(MALT)。對于通過粘膜表面進行的吸收，用于給予至少一種蛋白質支架的組合物和方法包括乳劑，其包含多個亞微米顆粒、粘膜粘附性大分子、生物活性肽和含水連續相，這通過實現乳劑顆粒的粘膜粘附來促進通過粘膜表面進行的吸收(美國專利No. 5，514，670)。適于施用本發明的乳劑的粘膜表面可包括角膜、結膜、口腔、舌下、鼻、陰道、肺、胃、腸和直腸給予途徑。供陰道或直腸給予的制劑(例如栓劑)可含有例如聚亞烷基二醇、凡士林、可可脂等作為賦形劑。鼻內給予制劑可以是固體并且含有例如乳糖作為賦形劑，或可以是鼻滴劑的水性或油性溶液。對于口腔給予，賦形劑包括糖類、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、預膠化淀粉等 (美國專利 No. 5，849，695)。誘皮制劑及給予對于透皮給予，該至少一種蛋白質支架包囊在遞送裝置如脂質體或聚合物納米顆粒、微顆粒、微膠囊或微球體(統稱微顆粒，除非另有規定)中。有多種合適的裝置是已知的，包括由合成聚合物和天然聚合物制成的微顆粒，所述合成聚合物例如聚羥基酸(如聚乳酸、聚乙醇酸以及它們的共聚物)、聚原酸酯、聚酸酐和聚磷腈，所述天然聚合物例如膠原、聚氨基酸、白蛋白和其他蛋白質、海藻酸鹽和其他多糖以及它們的組合(美國專利 No. 5，814，599)。長期給予及制劑可取的是，在長時間里將本發明的化合物遞送給受試者，例如單次給予即能遞送一個星期到一年的時間。可以利用多種緩釋劑型、儲庫(Cbpot)劑型或植入劑型。例如，劑型可含有所述化合物的、在體液中溶解度低的藥用無毒鹽，例如(a):與多元酸所成的酸加成鹽，所述多元酸例如磷酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、單寧酸、雙羥萘酸、海藻酸、聚谷氨酸、萘單磺酸或萘雙磺酸、聚半乳糖醛酸等；(b)與多價金屬陽離子所成的鹽，所述金屬例如鋅、 鈣、鉍、鋇、鎂、鋁、銅、鈷、鎳、鎘等，或者與由例如N，N' -二芐基-乙二胺或乙二胺形成的有機陽離子所成的鹽；或者(c) :(a)和(b)的組合，例如鋅單寧酸鹽。另外，可本發明的化合物，或者優選地，相對不可溶的鹽(如剛剛描述的那些)，與例如適合注射的芝麻油一起在凝膠例如單硬脂酸鋁凝膠中進行配制。尤其優選的鹽為鋅鹽、鞣酸鋅鹽、雙羥萘酸鹽等等。 另一種類型的注射用緩釋長效制劑(cbpot formulation)會含有分散的所述化合物或鹽以包囊在緩慢降解的無毒非抗原性聚合物(如聚乙醇酸/聚乙醇酸聚合物)中，例如如美國專利No. 3，773，919中所述。所述化合物或者優選地相對不可溶的鹽(如以上描述的那些) 還可配制在膽固醇基質硅橡膠小丸(pellet)中，特別是供用于動物。另外的緩釋制劑、長效制劑或植入制劑(例如氣體或液體脂質體)在文獻中有描述(美國專利No. 5，770，222 以及"Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，，，J. R. Robinson(編輯)，Marcel Dekker, Inc.，N. Y.，1978)。已總體地描述了本發明，通過參考下面的實例將更容易理解本發明，所述實例僅以示例的方式給出并且無意于作為限制。SM實例I-jTencon的設計可將人生腱蛋白的第三個FN3結構域(SEQ ID NO 3)用作能夠被工程改造成能通過結構上與抗體互補決定區(CDR)類似的表面暴露環結合到特定靶標分子的另選支架。此結構域在其天然形式下在PBS中解鏈溫度為M°C。為了產生具有類似的結構和改進的物理性質(如改進的熱穩定性)的支架分子，基于人生腱蛋白的15個FN3結構域(SEQ ID NO 1-15)的比對設計了共有序列。表1中的多個序列比對的分析顯示，這15個結構域相互間的序列同一性在 13-80%之間，各對序列間序列同一性的平均值為四％。通過在表1中所示的比對的每個位置處摻入最保守(頻現)的氨基酸，設計出了共有序列(SEQ ID N0:16)。在雙序列比對中，本發明的共有序列(SEQ ID N0:16)(稱其為Tencon)在34-59%的位置處與生腱蛋白的FN3結構域有同一性，平均序列同一性為43%。表汰和純化將1Tencon的氨基酸序列(SEQ ID NO 16)進行反翻譯，得到SEQ ID NO 17所示的DNA序列。通過重疊PCR將此序列進行裝配，亞克隆到經過修飾的PET15載體中，轉化到 BL21Star(DE3)大腸桿菌(Invitrogen)中，并接種到含有75 μ g/mL羧芐西林的LB瓊脂平板上。挑取單菌落，在含有2%葡萄糖和100 μ g/mL羧芐西林的50ml TB培養基中于37°C下過夜生長。用此培養物接種2. 5L Ultra Yield燒瓶(Thomson Instrument Company)中的 500mL 自誘導培養基(Overnight Express Instant TB培養基，Novagen)。在ATR Multitron 振蕩培養箱中，用雙程序(37°C、300rpm下3小時，然后30°C、250rpm下16小時)進行生長和表達。收獲培養物，在JL8. 1轉子中7000rpm下離心15分鐘以沉淀細胞。將細胞重懸在含有20mM磷酸鈉pH 7. 5、500mM NaCl、10%甘油、20mM咪唑、0. 37mg/mL溶菌酶、IX完全蛋白酶抑制劑(無 EDTA ；Roche)和 benzonase 核酸酶(Sigma-Aldrich，最終 0. 25 μ 1/ml)的 30ml緩沖液中，并用Misonix XL2020超聲處理器以脈沖模式(開5秒，關30秒)在冰上裂解5分鐘。在JA-17轉子中17，OOOrpm離心30分鐘，以除去不溶性物質。在2步驟色譜過程中，從可溶性裂解物純化出Tencon蛋白。首先，通過固定化金屬親和色譜捕捉該蛋白質將anl M-NTA瓊脂糖微球Oiiagen)加到裂解物并將其放在搖擺平臺上于4°C下1小時。然后將樹脂裝填到Poly-Pr印柱(Bio-Rad)中，用20mM磷酸鈉pH 7. 5,500mM NaCl, 10%甘油和20mM咪唑進行洗滌，以除去未結合的物質。用2OmM磷酸鈉pH 7. 5,500mM NaCl，10%甘油和500mM咪唑將蛋白質從樹脂洗脫下來。各流份通過 SDS-PAGE進行分析，是同時通過考馬斯染色和通過使用HRP綴合的抗His抗體(Immunology Consultants Laboratory)的蛋白質印跡來進行。將所需的流份集中并向PBS pH 7. 4中透析。作為第二純化步驟，將該蛋白質荷載到在PBS中平衡的Superdex-75 HiLoad 16/60柱(GE Healthcare)上。各流份通過SDS-PAGE進行分析，將含有Tencon的各流份集中并用 Centripr印 UltraCel YM-3 濃縮器(Amicon)進行濃縮。用BioTek讀板機測定蛋白質濃度，以測量樣品在280nm處的吸光度。通過考馬斯染色(圖1)、通過用抗His抗體進行的蛋白質印跡和通過用在PBS中平衡的G3000SW-XL柱 (TOSOH Biosciences)進行的HPLC-SEC，對最終制品進行分析。SDS-PAGE分析表明Tencon 在6和14kDa之間，這與該單聚蛋白的10. 7kDa的預期質量相符。獲得了每升培養物> 50mg 純Tencon蛋白的收率。牛物物理學表征分別通過圓二色性光譜法和差示掃描量熱法對Tencon的結構和穩定性進行了表征。圓二色性測量是在AVIV光譜儀上在20°C下PBS中及0. 2mg/mL濃度下進行。圖2中的光譜顯示最小值在218nm處，這提示所設計的屬于FN3家族的蛋白質的預期的β折疊結構。差示掃描量熱數據是通過將生腱蛋白或Tencon的第3個FN3結構域于PBS中的0. 5mg/ mL溶液在N-DSCII熱量計(Applied Thermodynamics)中以1°C /分鐘的速率從35°C加熱到95°C來獲得。減去單獨緩沖液的曲線，以得到圖3中所示的譜型。用CpCalc (Applied Thermodynamics)軟件，由此數據計算出第3個FN3結構域和Tencon的解鏈溫度分別為
和78°C。兩種結構域的折疊和解折疊在這些溫度下都是可逆的。免疫原件分析使用模擬氨基酸序列對人的免疫源性的計算機程序，來比較代表人生腱蛋白、 Tencon和幾種治療性抗體的第3個FN3結構域的氨基酸序列的預測免疫源性(表2中所示)。嵌合單克隆抗體和人單克隆抗體(阿達木單抗)用該程序分析后，接著應用容限閾值 (去除與人種系編碼序列有100%同一性的9-mer肽)。對生腱蛋白或Tencon則不應用容限閾值。容限閾值假定T細胞對種系編碼的單克隆抗體序列的容限寬，并將分析聚焦于主要在CDR和側翼結構域中的新序列。這些分析基于衍自被分析的序列的9-mer肽會結合一個或多個HLA分子的可能性，預測出生腱蛋白和Tencon兩者的免疫源性風險都是低的。根據每種HLA等位基因的流行程度，對得分進行加權。對于每個序列，將模型的得分進行加和，以提供描述每個序列的總體PIR的單個數值(得分總和)。這個分析所得的結果總結于表2中。表中示出生腱蛋白具有最低的總得分(11.9)。Tencon和生腱蛋白一樣，得分表明主要為非結合物和低預測免疫原性風險限制位(agretope)(得分=13.2)。與治療性抗體相比，生腱蛋白序列和 Tencon序列得分都有利。通過PlX融合在M13噬菌體上展示Tencon通過PCR和限制酶切消化克隆，將編碼Tencon氨基酸序列的基因亞克隆到噬菌粒表達載體PP印9中，得到載體pTencon-pIX。這個系統將N末端進行了 Myc標記的"Tencon 表達成C末端融合體融合到M13 pIX蛋白的N末端(圖4)。Lac啟動子使得在沒有IPTG 的情況下表達水平較低，而在添加IPTG后表達增加。將OmpA信號序列附接到Tencon的N 末端以有助于有效地向周質遷移。在Tencon和pIX之間構建了短的TSGGGGS接頭(SEQ ID NO :141)，以防止這些蛋白質之間的空間相互作用。為證實在M13噬菌體顆粒的表面上展示，將pTencon-pIX轉化到XLl-Blue大腸桿菌中，用單菌落接種補加有氨芐青霉素的5ml LB培養物。使培養物在37°C下生長至對數中期，此時加入61(lpfu的VCSM13輔助噬菌體，將培養物于37°C在不振搖下溫育10分鐘，然后在振搖下溫育50分鐘。然后將輔助噬菌體拯救的培養物(helper phage rescued culture)稀釋到補加有氨芐青霉素和卡那霉素的50ml 2YT培養基中，于37°C在振搖下生長至0. D. 600達到0. 7，此時加入IPTG至ImM的終濃度并將溫度降低到30°C。16小時后，將培養物以4000Xg離心20分鐘，收集上清液并在4°C下保藏以待分析。用噬菌體顆粒與抗Myc抗體(Invitrogen)的結合來證實Myc-Tencon構建物在 M13噬菌體表面上的展示。用α -Myc或抗α ν抗體(陰性對照)以2. 5 μ g/mL的濃度對 Maxisorp板包被過夜，然后用SuperBlock T20 (Pierce)進行封閉。在PBS中制備上述噬菌體中期培養物上清液的兩倍系列稀釋液，并加到包被板的各孔。1小時后，將板用TBST洗滌，向每個孔加入α -M13HRP抗體，溫育1小時后用TBST洗滌。加入Roche BD ELISA POD 底物，在讀板機(Tecan)上檢測發光。圖5顯示，Myc-Tencon噬菌體顆粒以濃度依賴性方式結合α -myc，但不結合板的抗α ν抗體包被孔或未包被對照孔，這證實了 Myc-Tencon在 M13噬菌體顆粒上的特異性展示。可構建出另外的噬菌粒載體，以將Tencon和文庫成員(見實例2)展示在M13噬菌體上作為與外被蛋白PlII的融合蛋白。對于這個系統，將PlX的基因用編碼PlII的截短版本的基因替換(Bass等人，1990)。相比于圖4中所示的系統，另外的變化包括OmpA信號序列用DsbA的信號序列替換，因為采用這個序列所得的分泌情況據證實對于穩定的另選支架分子的展示是有利的(Steiner等人，2006)。實例2-文庫的產牛Tencon變體文庫可通過多種不同的方法制作，這取決于所需的復雜性和分子中突變的相對位置。優選用DNA合成方法來產生遍布于Tencon基因的突變。也可用限制酶克隆來將含有該基因不同區域中的突變的各DNA片段重組在一起。可通過使用簡并寡核苷酸和寡核苷酸指導的誘變，來在小的限定的區域(如單個Tencon環)中引入飽和誘變(Kimkel 等人，1987)。構建了 Tencon文庫即文庫TO7，其被設計成使用寡核苷酸指導的誘變以7個隨機氨基酸替換re環。合成了寡核苷酸(TC0nre7-F0r-5’ pho)，其在編碼FG環的位置處具有 NNS的21堿基對(bp)簡并序列，并具有兩個與Tencon編碼序列有互補性的側翼20_27bp 核苷酸序列。在這個設計中，所有二十種氨基酸都能夠在FG環中得到體現。在核苷酸水平上計算出的多樣性為1.3X109。TconFG7-For5' pho (SEQ ID NO 18)GAATACACCGTTTCTATCTACGGTGTTNNSNNSNNSNNSNNSNNSNNSCCGCTGTCTGCGGAATTCAC通過用含有AscI限制位點的莖環序列替換Tencon F:G環編碼序列，構建出寡核苷酸指導的誘變的模板pDsbA-Tencon-Asc-loop-Myc-pIII。這個系統使得可以在誘變后轉化前用AscI消化所得的DNA來除去背景模板DNA。為純化出單鏈DNA模板供進行誘變， 將攜帶有pDsbA-Tencon-Asc-loop-Myc-pIII的大腸桿菌CJ236的單菌落挑取到含有羧芐西林(50ug/ml終濃度)和氯霉素(10ug/ml)的5ml 2YT生長培養基中。6小時后，加入 VCSM13輔助噬菌體至KTpfu/ml的終濃度并在不振搖下溫育10分鐘，然后轉移到含有羧芐西林(10ug/ml)和尿苷(0. 25ug/ml)的150ml 2YT并在200rpm振搖下37°C溫育過夜。 通過離心沉淀細胞，收集上清液，并用PEG NaCl沉淀噬菌體。用QIApr印Spin M13試劑盒
41(Qiagen)按照生產商說明書從這個沉淀純化出單鏈DNA。為使簡并寡核苷酸與模板退火，將5 μ g的模板DNA與寡TC0nre7-F0r-5-ph0以 10 1的摩爾比在Tris-HCl (50mM，pH7. 5)和MgC12 (IOmM)中進行組合，并在90°C下溫育2分鐘，60°C下溫育3分鐘和20°C下溫育5分鐘。在退火反應后，向反應混合物加入 ATP (IOmM)、dNTP (各 25mM)、DTT (IOOmMhjM 連接酶(7 單位)和 T7DNA 聚合酶(10 單位)，并在14°C下溫育6小時，然后在20°C下溫育12小時。所得的DNA用PCR純化試劑盒^jiagen) 進行純化，并回收在IOOyL的水中。將文庫DNA用10單位的AscI消化4小時，然后用 Qiagen PCR純化試劑盒再次進行純化。最終的文庫DNA回收在50 μ L的水中。然后將所得的雙鏈DNA產物通過電穿孔轉化到大腸桿菌MC1061F，中。將轉化子收集在20ml SOC培養基中，讓其在37°C下恢復1小時。恢復結束時，將轉化液的等分試樣進行系列稀釋并接種在含有葡萄糖的羧芐西林(lOOug/ml)板上，以評估總轉化子數目。然后用剩余的SOC培養物接種含有羧芐西林和葡萄糖的IL 2xYT 培養基，并生長至0D_達到0. 6。將IOOml的此培養物接種上M13輔助噬菌體至IOltVmL并在37°C下進行溫育，然后離心。將所得的細胞沉淀重懸于含有羧芐西林(lOOug/mL)和卡那霉素(35ug/mL)的500ml新鮮MYT培養基中，并在30°C下生長過夜，然后離心。加入PEG/ NaCl沉淀出噬菌體顆粒，并在-80°C下保藏。設計了第二個文庫BC6/TO7，以同時在Tencon的B:C環和F:G環內引入多樣性。 為此，合成了兩個寡核苷酸Tc-BC6-For-5’phOS和P0P149。正向寡核苷酸被磷酸化并在編碼B:C環的每個位置處含有18個堿基的NNS密碼子，而反向寡核苷酸在5’末端被生物素酰化并在編碼F:G環的每個位置處含有21個堿基的NNS密碼子。兩個寡核苷酸的側翼都有兩個與要進行誘變的區域之前和之后的區域相同的18bp核苷酸序列(引物的細節見下)。Tc-BC6-For-5，phos (SEQ ID NO 19)gactctctgcgtctgtcttggNNSNNSNNSNNSNNSNNSTTCGACTCTTTCCTGATCCAGTACCPOP 2149 (SEQ ID NO 20)GTGAATTCCGCAGACAGCGGSNNSNNSNNSNNSNNSNNSNNAACACCGTAGATAGAAACGGTG為構建該文庫，用I^c-CBe-ForS'phos 和 P0P2149 這兩種 t oligo 進行 16 個 100 μ L PCR反應以擴增Tencon DNA模板，從而在此過程中將NNS密碼子同時引入到B:C環和F:G 環中。將雙鏈PCR產物與磁性鏈霉親和素珠粒(Dynal)在B&W緩沖液(IOmM Tris-HCl, pH7. 5, ImM EDTA, 2Μ NaCl, 0. 1 % Tween-20)中混合并溫育20分鐘，用磁鐵吸下來，用B&W 緩沖液洗滌兩次。用300yL的150mM NaOH將正向鏈從珠粒洗脫下來。用這個“特大引物 (megaprimer)”(即理論多樣性超過8X10"5的長引物的混合物)與單鏈文庫模板退火。文庫構建是如上文對TO7文庫所述來進行。實例3-1戒結合物的選擇為進行能結合IgG的Tencon文庫成員的選擇，用磺基-NHS-LC-生物素(Pierce) 將重組IgG (人IgGl亞型)進行生物素酰化，然后透析到PBS中。為進行選擇，將200yL的噬菌體展示文庫TO7或BC6/TO7用200 μ L的化學封閉劑進行封閉，然后加入生物素酰化的 IgG,濃度為500ηΜ (第1輪)或IOOnM (第2輪和第3輪)。在第1輪中用中和親和素磁珠粒 (Seradyne)回收結合的噬菌體，或者在第2輪和第3輪中用鏈霉親和素磁珠粒(ftOmega) 回收結合的噬菌體。用Iml的含tween的Tris緩沖鹽水(TBST)洗滌5_10次，然后用Iml的Tris緩沖鹽水(TBQ洗滌2次，將未結合的噬菌體從珠粒洗滌下來。通過加入對數中期大腸桿菌MC1061F’將結合的噬菌體從珠粒洗脫下來。將受感染的細胞接種在補加有羧芐西林和葡萄糖的LB瓊脂平板上。第二天，從板刮取細胞并使其生長至對數中期，然后用 VCSM13輔助噬菌體拯救并生長過夜。通過PEG/NaCl沉淀分離出噬菌體顆粒，用于下一輪的選擇。經過3輪的針對IgG進行的淘選后，將輸出結果(output)亞克隆到pET27載體中， 該載體通過PCR擴增Tencon基因而被修飾成包括連接酶非依賴性克隆位點。將此PCR產物與該載體退火并轉化到BL21-G0LD(DE;3)細胞(Stratagene)中。將各個菌落挑取到96 深孔板(Corning)的各個Iml培養物中，在37°C下過夜生長至飽和。第二天，用50 μ L的過夜培養物接種新鮮的Iml培養物。在各培養物在37°C下生長2小時，然后加入IPTG至ImM 并將溫度降低到30°C。在用100 μ L的BugBuster (Novagen)誘導和裂解16小時后，離心收獲細胞。所得的裂解物通過離心進行澄清，并用于通過ELISA測試是否與IgG結合。將各Maxisorp板(Nunc)用0. 1 μ g的抗HIS抗體^liagen)包被過夜，用TBST洗滌，并用 Marting Block T20 (Thermo Scientific)進行封閉。將在 Marting Block 中 1 4稀釋的澄清裂解物加到各板，讓其結合1小時，然后用TBST洗滌。將生物素酰化的 IgG或生物素酰化的HAS以1 μ g/ml的濃度加入，溫育1小時后用TBST洗滌。通過加入鏈霉親和素-HRP (Jackson Immunoresearch)并用POD化學發光底物進行檢測，實現對結合的 IgG或HAS的檢測。ELISA的結果在圖7中示出。對由ELISA信號判斷出結合生物素酰化的IgG比結合生物素酰化的HSA大10倍以上的構建物進行了測序。在幾次選擇實驗完成后，獲得了 60個來自文庫TO7的獨特結合序列和10個來自文庫BC6TO7的獨特序列；表4 顯示IgG結合物的代表性序列，其中示出B:C環和/或F:G環與SEQ ID N0:16之不同。表 4中還示出了支架的其他區域中的許多突變。本發明所設計、表達和純化的Tencon蛋白相對于已被用作另選支架分子的人生腱蛋白的第3個FN3結構域，熱穩定性提高達。基于這個穩定性增加，這個支架分子很可能更適于進行氨基酸置換并更容易制造。在更穩定的支架的情形中，很可能可以更好地容忍會降低蛋白質穩定性的突變，從而穩定性增強的支架很可能從支架變體的文庫得到更多的有功能、折疊良好的結合物。由于這個新型蛋白不是人基因組所編碼的蛋白質，當它被用作治療劑時，它產生免疫反應的風險還可能比例如天然人生腱蛋白產生免疫反應的風險要少(本質上，比基于野生型結構域的治療劑的風險要少)。出于本發明的目的，用本領域知道的合適計算機算法確定出70-100%氨基酸或核苷酸序列同一性(即90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100或者其中的任何范圍或數值)。顯而易見的是，本發明可以與前面的說明和實例中具體描述的方式不同的方式來實施。根據上面的教導，可以作出本發明的多種修改形式和變型形式，并且這些修改形式和變型形式落入所附權利要求的范圍內。表 權利要求
1.一種基于III型纖連蛋白(FN3)結構域的分離的蛋白質支架，所述蛋白質支架包含衍自FN3結構域的共有序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列與所述共有FN3結構域序列具有至少75%的同一性。
2.一種基于III型纖連蛋白(FN3)結構域的分離的蛋白質支架，所述蛋白質支架包含衍生自腱蛋白FN3結構域的共有序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列與SEQ ID NO 16 具有至少75%的同一性。
3.一種基于III型纖連蛋白(FN3)結構域的分離的蛋白質支架，所述蛋白質支架包含衍自FN3結構域的共有序列的氨基酸序列，所述蛋白質支架包含7條鏈和各鏈之間的6個環。
4.根據權利要求3所述的蛋白質支架，其中所述環中的一個或多個能夠結合細胞蛋白質和/或核酸分子。
5.根據權利要求4所述的蛋白質支架，其包含SEQID NO: 16的氨基酸序列并在SEQ ID NO 16的殘基13-16、22-28、38-43、51-54、60-64和75-81之處或附近形成環，所述環能夠結合包含細胞蛋白質和/或核酸分子的靶標。
6.根據權利要求5所述的蛋白質支架，其中所述環中的一個或多個被改變以便結合所述靶標。
7.根據權利要求5所述的蛋白質支架，其中所述支架以至少一個選自至少10_9M、至少 1(T1CIM、至少1(Γ"Μ以及至少1(Γ12Μ、至少1(Γ13Μ、至少KT14M和至少KT15M的Kd的親和力結合靶標，所述親和力是通過表面等離子共振或Kinexa方法測定。
8.—種構建基于III型纖連蛋白(FN3)結構域的、衍自FN3結構域共有序列的蛋白質支架的文庫的方法，所述方法包括以下步驟提供衍自FN3結構域的共有序列的多肽；和向所述多肽的拷貝中引入多樣性以形成所述蛋白質支架文庫。
9.一種文庫，所述文庫通過根據權利要求8所述的方法產生。
10.一種產生以預定的結合親和力結合特定靶標的蛋白質支架的方法，所述方法包括使根據權利要求9所述的文庫與所述特定靶標進行接觸，并分離出以所述預定的親和力結合所述特定靶標的蛋白質支架。
11.根據權利要求10所述的方法，其中所述分離步驟包括分離結合所述特定靶標的支架分子并測試所述分離的支架分子與所述特定靶標的結合親和力。
12.根據權利要求11所述的方法，其中所述分離步驟包括用所述特定靶標對所述文庫進行淘選，鑒定結合所述特定靶標的支架分子，并分離所述結合性支架分子。
13.根據權利要求11所述的方法，其中所述親和力小于或等于約ΙΟΙ。
14.一種構建基于III型纖連蛋白(FN3)結構域的蛋白質支架的文庫的方法，所述方法包括以下步驟提供具有SEQ ID NO 16的氨基酸序列的多肽；和向所述具有SEQ ID NO :16的氨基酸序列的多肽的拷貝中引入多樣性以形成所述蛋白質支架文庫。
15.根據權利要求14所述的方法，其中所述引入多樣性的步驟包括將至少一個選自 SEQ ID NO 16 的位置 13-16、22-28、38-43、51-54、60_64 和 75-81 之處或附近的殘基的環區域進行突變。
16.一種文庫，所述文庫通過根據權利要求15所述的方法產生。
17.—種產生以預定的結合親和力結合特定靶標的蛋白質支架的方法，所述方法包括使根據權利要求16所述的文庫與所述特定靶標進行接觸，并分離出以所述預定的親和力結合所述特定靶標的蛋白質支架。
18.根據權利要求17所述的方法，其中所述分離步驟包括分離結合所述特定靶標的支架分子并測試所述分離的支架分子與所述特定靶標的結合親和力。
19.根據權利要求18所述的方法，其中所述分離步驟包括用所述特定靶標對所述文庫進行淘選，鑒定結合所述特定靶標的支架分子，并分離所述結合性支架分子。
20.根據權利要求18所述的方法，其中所述親和力小于或等于約10_7M。
21.一種分離的核酸分子，所述分離的核酸分子編碼根據權利要求5所述的蛋白質支^K O
22.根據權利要求21所述的分離的核酸分子，其包含SEQID NO :17中所示的核苷酸序列。
23.一種分離的核酸載體，所述分離的核酸載體包含根據權利要求21所述的分離的核酸分子。
24.一種原核生物或真核生物宿主細胞，所述原核生物或真核生物宿主細胞包含根據權利要求21所述的分離的核酸分子。
25.根據權利要求M所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞為選自以下的至少一者大腸桿菌BL21Mar (DE3)、其他大腸桿菌細胞、酵母細胞、C0S-1細胞、C0S-7細胞、HEK293細胞、BHK21細胞、CHO細胞、BSC-I細胞、H印G2細胞、653細胞、SP2/0細胞、293細胞、HeLa 細胞、骨髓瘤細胞或淋巴瘤細胞，或者它們的任何衍生物、無限增殖化細胞或轉化細胞。
26.一種組合物，所述組合物包含根據權利要求5所述的蛋白質支架和至少一種藥用載體或稀釋劑。
27.根據權利要求沈所述的組合物，所述組合物還包含至少一種選自以下的化合物或多肽可檢測標記或報道分子、TNF拮抗劑、抗感染藥物、心血管(CV)系統藥物、中樞神經系統(CNQ藥物、自主神經系統(ANQ藥物、呼吸道藥物、胃腸(GI)道藥物、激素藥物、使流體或電解質平衡的藥物、血液學藥物、抗腫瘤藥物、免疫調節藥物、眼、耳或鼻藥物、局部用藥物、營養藥物、細胞因子和細胞因子拮抗劑。
28.一種醫療器械，所述醫療器械包含根據權利要求5所述的蛋白質支架，其中所述器械適合于通過至少一種以下方式來接觸或給予所述蛋白質支架胃腸外、皮下、肌肉內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、腹腔內、小腦內、腦室內、結腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊柱內、滑膜內、胸內、子宮內、膀胱內、病灶內、推注、陰道、直腸、口腔、舌下、 鼻內和透皮方式。
29.一種用于人體醫藥用途或診斷用途的制品，所述制品包含包裝材料和容器，所述容器包含根據權利要求5所述的蛋白質支架的溶液或凍干形式。
30.根據權利要求四所述的制品，其中所述容器是以下遞送裝置或系統的組件胃腸外、皮下、肌肉內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、腹腔內、小腦內、腦室內、結腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊柱內、滑膜內、胸內、子宮內、膀胱內、病灶內、推注、陰道、直腸、口腔、舌下、鼻內或者透皮遞送裝置或系統。
31.一種基于III型纖連蛋白(FN3)結構域的分離的蛋白質支架，所述蛋白質支架包含衍生自腱蛋白FN3結構域的共有序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列與SEQ ID NO 21-140的B:C環或F:G環中的任何一個具有至少75%的同一性，且所述蛋白質支架結合人 IgG0
32.根據權利要求31所述的蛋白質支架，其中所述支架包含7條鏈和各鏈之間的6個環。
33.根據權利要求31所述的蛋白質支架，所述蛋白質支架包含SEQID NO :21-140的 B:C環或F:G環中的任何一個的氨基酸序列，其中所述蛋白質支架在殘基13-16、22-28、 38-43,51-54,60-64和75-81之處或附近形成環。
34.一種基于III型纖連蛋白(FN3)結構域的分離的蛋白質支架，所述蛋白質支架包含主鏈部分，其具有在殘基1-21、29-74和82-89處與SEQ ID NO 16有同一性的氨基酸序列；SEQ ID NO :16的殘基21和四之間的B:C環部分，其與SEQ ID NO :21-45中的任何一個具有至少75%的同一性；和SEQ ID NO :16的殘基74和82之間的F:G環部分，其與 SEQ ID NO :46-140中的任何一個具有至少75%的同一性，其中所述蛋白質支架能夠結合人 IgG0
35.根據權利要求34所述的蛋白質支架，所述蛋白質支架包含主鏈部分，其具有在殘基1-21、29-74和82-89處與SEQ ID NO 16有同一性的氨基酸序列；SEQ ID NO: 16的殘基21和四之間的B: C環部分，其包含SEQ ID NO :21-45中的任何一個；和SEQ ID NO :16的殘基74和82之間的F:G環部分，其包含SEQ ID NO :46-140中的任何一個，其中所述蛋白質支架能夠結合人IgG。
36.根據權利要求34所述的蛋白質支架，其中所述支架以至少一個選自小于或等于 10_9M、小于或等于ΙΟ,Μ、小于或等于10-"Μ、小于或等于10_12Μ、小于或等于10_13Μ、小于或等于10_μΜ以及小于或等于的Kd的親和力結合靶標，所述親和力是通過表面等離子共振或Kinexa方法測定。
37.根據權利要求35所述的蛋白質支架，其中所述環形成供結合IgG的位點。
38.一種基于III型纖連蛋白(FN3)結構域的分離的蛋白質支架，所述蛋白質支架包含衍生自腱蛋白FN3結構域的共有序列的氨基酸序列，其中所述蛋白質支架能夠結合人IgG。
39.本文所述的任何發明。
全文摘要
本發明涉及一種基于III型纖連蛋白(FN3)蛋白質的共有序列的蛋白質支架，所述Ⅲ型纖連蛋白(FN3)蛋白質例如來自人纖連蛋白(人生腱蛋白)的第10個FN3重復序列，還涉及編碼蛋白質支架的分離的核酸、載體、宿主細胞，以及它們的制備和使用方法，它們在診斷性和/或治療性組合物、方法和裝置中具有應用。具體而言，能結合IgG的蛋白質支架分子已被鑒定為可用于診斷性和/或治療性應用。
文檔編號A61P21/00GK102307896SQ200980153649
公開日2012年1月4日 申請日期2009年10月27日 優先權日2008年10月31日
發明者K·奧奈爾, S·雅各布斯 申請人:森托科爾奧索生物科技公司