專利名稱：評估體內血管舒縮反應的動物模型的制作方法
評估體內血管舒縮反應的動物模型相關申請的交叉參考本申請要求2008年10月21日提交的美國臨時專利申請?zhí)?1/107，053的權益， 其內容通過引用而整體結合到本文中。
背景技術：
1.發(fā)明領域提供非侵入性評估體內血管收縮和血管舒張的方法。2.相關技術的說明心臟、腦和腎臟的血管結構能夠在較寬的灌注壓范圍內維持恒定血流，這種現象稱為自動調節(jié)。幾種因素影響在冠脈及其它血管床中的血流，包括動脈壓、組織壓、神經和體液影響、組織代謝物、血管肌源性緊張度和內皮(由Konidala和Gutterman綜述，2004， Progress in Cardiovascular Diseases 46:349-373)。對血管中收縮和舒張刺激的適當的血管舒縮反應是調節(jié)血流的關鍵因素。收縮與舒張刺激之間平衡的失調可影響器官血流 (如缺血)和總外周阻力，導致血壓改變(如高血壓)。在正常生理狀態(tài)下，通過阻力血管對多種因素反應性舒張的能力可克服對血流的阻力。但是，一些病理生理狀態(tài)包括動脈粥樣硬化、血栓形成和內皮損傷影響阻力血管對正常血管舒張信號反應性舒張的能力。此外，疾病例如糖尿病、肥胖癥、充血性心力衰竭和高血壓、某些自身免疫性疾病和某些內分泌紊亂對阻力血管的舒張具有不良作用。其它因素例如內源性因素、藥物和飲食可干擾正常動脈舒張。例如，蛋氨酸及其代謝副產物同型半胱氨酸和血脂障礙損害多種血管類型的舒張過程(Dayal et al., 2005, Circulation 112 :737-744 ；Distrutti et al. ,2008, Hepatology 47 :659-667 ； Hansrani and Stansby,2008, Journal of Surgical Research 145 :13-18 ；Moat et al. ,2006, Journal of Clinical Investigation 36:850-859)。高脂肪或鹽攝入產生異常血管舒張(Hermann et al. ,2003, Circulation 108 :2308-2311 ；Mahmud et al.， 2008，Journal of Pediatrics 152:557-562)。也已顯示溶解的香煙顆粒和煙堿代謝物可阻斷血管松弛(Zhang et al. ,2006, BMC Cardiovascular Disorders 6 3 ；Conklin et al.，2001，Journal of Surgical Research，95 :23-31)。通常見于嗜鉻細胞瘤的過量循環(huán)去甲腎上腺素水平導致血管舒張異常(Hagashi et al. ,2002, Hypertension 39: 513-518)。例如，糖皮質激素、可卡因、某些抗腫瘤藥、環(huán)孢素Α、氟烷已知對正常動脈舒張具有不良作用(Tonga et al. ,2001, Toxicology Letters 123 :43-50 ；El-Mas et al.， 2007,Biochemical Pharmacology 73 :359-367 ；Chow et al. ,2006,Journal of Clinical Oncology 24 :925-928 ；Mondo et al. ,2006, Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology 33 :1029-1034)。研究已顯示當內皮功能完整時，血管對膽堿能激動劑或擬膽堿藥表現舒張反應 (Sugama et al. ,2002, Japan Heart J 43:545-558 ；Laher et al. ,1995, Canadian J Physiology Pharmacology 73:1669-1673)。血管舒張是由于乙酰膽堿及其它擬膽堿藥對內皮細胞上毒蕈堿M3受體的刺激，然后釋放血管舒張劑一氧化氮(NO)，這是靜止血管緊張 Wi^ 13S (Brown and Taylor, 2001, Pharmacological Basis of Therapeutics, Hardman, J. G and Limbird,第 10 版，pp 155-173 ；Moody et al. , 2001, Pharmacological Basis of Therapeutics, Hardman, J. G and Limbird, H 10 IK, PP 385—397)。 $1^1 ! 受傷或被損害時，毒蕈堿受體-刺激的NO產生減少。在無對抗的交感神經腎上腺素能緊張度的存在下，NO量減少聯合平滑肌細胞中毒蕈堿受體的刺激不僅可以導致血管舒張反應的喪失，還可能在血管中產生血管收縮。因此，由膽堿能激動劑刺激的血管舒張取決于功能上完整的內皮。因為人與家兔之間血管形態(tài)的相似性，所以家兔已被用作測量對藥物的血管舒縮反應的研究模型。Laher et al.使用從家兔腎臟或耳分離的血管證實α -毒素選擇性損傷內皮介導的血管舒張(Laher et al.，1995，Canadian J Physiology Pharmacology 73 1669-1673) ο 最近，Drolet et al. (Drolet et al. , 2004, Cardiovascular Ultrasound 2: 10)使用腹主動脈超聲記錄顯示在對乙酰膽堿的反應中，腹主動脈的直徑從變?yōu)?%。 這些方法既不提供正常存在于體內的合適生理環(huán)境，也缺乏有效檢驗體內血管舒縮反應的足夠的動態(tài)范圍或敏感性。因此，仍然有需要發(fā)展用于測量體內血管舒縮反應的有效和敏感的方法。本申請?zhí)峁┰u估測試化合物對血管舒縮反應的作用的方法。此外，提供評估內皮對血管舒縮功能的作用的方法，包括全身暴露于收縮劑例如去甲腎上腺素、舒張劑例如乙酰膽堿或其它增進或干擾內皮信號的藥物，測量家兔中央耳動脈的內腔。本申請的動脈血管舒縮功能動物模型可用于評估測試化合物對體內基礎血管緊張度和內皮依賴性血管舒縮功能的作用。發(fā)明概述本發(fā)明的一個目的是提供評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法，包括以下步驟將化合物給予家兔，測量家兔中央耳動脈管腔的直徑，與家兔中央耳動脈管腔的基線直徑相比?；衔锟梢允茄苁鎻垊┗蜓苁湛s劑。本發(fā)明的另一個目的是提供評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法，包括以下步驟測量家兔中央耳動脈管腔的基線直徑，將化合物給予家兔，然后給予血管收縮劑以預收縮血管直徑，接著將血管舒張劑給予家兔以增加預收縮血管的直徑，通過再次測量家兔中央耳動脈管腔的直徑，確定在對血管舒張劑的反應中，化合物對預收縮血管的基線直徑改變的作用。本發(fā)明的另一個目的是提供評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法，包括以下步驟將化合物給予家兔，測量家兔中央耳動脈管腔的基線直徑，然后將血管收縮劑給予家兔中央耳動脈以收縮血管直徑，通過再次測量家兔中央耳動脈管腔的基線直徑確定化合物對收縮血管直徑的作用。本發(fā)明的另一個目的是提供評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法，包括以下步驟將化合物給予家兔，測量家兔中央耳動脈管腔的基線直徑，通過再次測量家兔中央耳動脈管腔的基線直徑確定化合物對收縮血管直徑的作用。根據本發(fā)明，可以將化合物經口、外周、胃腸外或局部給予家兔，可通過超聲顯像系統測量所述管腔的直徑。
根據以下詳細描述，并結合附圖考慮，本發(fā)明的其它目的和特征將變得顯而易見。 但是，應理解設計附圖只用于示例性目的，并非限制本發(fā)明的定義，本發(fā)明的定義應參考所附的權利要求。還應理解附圖不一定按比例繪制，除非另外說明，它們只用于在概念上舉例說明本文描述的結構和方法。附圖簡述在圖中
圖1 (A)在家兔中L-NAME對去甲腎上腺素預收縮動脈的乙酰膽堿誘發(fā)的血管舒張中中央耳動脈管腔直徑的作用。將數據以終平均直徑士SEM表示。N = 6條血管。(B) 在家兔中L-NAME對去甲腎上腺素預收縮動脈的乙酰膽堿誘發(fā)的血管舒張中中央耳動脈管腔面積的作用。將數據以終平均面積士SEM表示。N = 6。圖2 :(A)在家兔中化合物2對去甲腎上腺素預收縮動脈的乙酰膽堿誘發(fā)的血管舒張中中央耳動脈管腔直徑的作用。將數據以終平均直徑士SEM表示。N = 6。(B)在家兔中化合物2對去甲腎上腺素預收縮動脈的乙酰膽堿誘發(fā)的血管舒張中中央耳動脈管腔面積的作用。將數據以終平均面積士SEM表示。N = 6。圖3 (A)在家兔中托塞匹布對去甲腎上腺素預收縮動脈的乙酰膽堿誘發(fā)的血管舒張中中央耳動脈管腔直徑的作用。將數據以終平均直徑士SEM表示。N = 6。(B)在家兔中托塞匹布對去甲腎上腺素預收縮動脈的乙酰膽堿誘發(fā)的血管舒張中中央耳動脈管腔面積的作用。將數據以終平均面積士SEM表示。N = 6。本發(fā)明優(yōu)選實施方案的詳述包括通常由一氧化氮介導的內皮依賴性血管舒張在內的血管舒縮反應的異常，被認為在血管疾病(CAD，高血壓等)中發(fā)揮主要作用，可能伴隨心血管危險增加。損傷正常血管舒張機制的藥物可增加不良心血管事件的危險。臨床研究顯示在接受托塞匹布(一種膽固醇酯轉移蛋白(CETP)抑制劑)的患者中收縮壓較高(Barter et al. ,2007,New England J Med 357:2109-2122)。這可能是由于托塞匹布對正常血管舒張刺激的血管舒縮反應的作用。因為CETP抑制劑是可能用于調節(jié)膽固醇代謝的藥物，所以它可用于檢驗CETP抑制劑，包括托塞匹布和化合物2，因為它們對血管舒縮反應的作用。托塞匹布，(2R, 4S) -4-[ [3， 5-雙(三氟甲基)芐基](甲氧基羰基)氨基]-2-乙基-6-(三氟甲基)-3，4_ 二氫喹啉-K2H)-甲酸乙酯，具有以下化學結構
O化合物2，1，1，1_三氟-3-[2-{3-[(l，l，2，2-四氟乙基)氧基]苯基}-5-{3_[(三氟甲基)氧基]苯基}-3，4_ 二氫喹啉-1 QH)-基]丙-2-醇，具有以下結構
權利要求
1.一種評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法，所述方法包括以下步驟將所述化合物給予家兔，測量所述家兔中央耳動脈(CEA)的管腔直徑，與所述家兔所述中央耳動脈管腔的基線直徑相比，在給予所述化合物之前測量所述基線直徑。
2.權利要求1的方法，其中將所述化合物經口、外周、胃腸外或局部給予所述家兔。
3.權利要求1的方法，其中所述化合物是血管舒張劑。
4.權利要求1的方法，其中所述化合物是血管收縮劑。
5.權利要求1的方法，其中通過超聲顯像系統測量所述管腔的直徑。
6.一種評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法，所述方法包括以下步驟a.測量家兔CEA管腔的基線直徑；b.將所述化合物給予所述家兔；c.將血管收縮劑給予所述家兔的所述CEA使所述血管的直徑預收縮；d.將血管舒張劑給予所述家兔的所述CEA以增加所述預收縮血管的直徑；和e.通過與在步驟a測量的所述管腔的基線直徑相比，測量所述家兔所述CEA所述管腔的直徑，來確定所述化合物對步驟c和d所得所述血管的直徑的作用。
7.權利要求6的方法，其中通過超聲顯像系統測量所述管腔的直徑。
8.權利要求6的方法，其中所述血管收縮劑包括去甲腎上腺素、腎上腺素、苯腎上腺素、甲氧明、美芬丁胺、間羥胺、甲氧胺福林、高劑量多巴胺、可卡因、苯丙胺和相關藥物、 5-羥色胺、加壓素和相關類似物、血管緊張素II和相關的肽、內皮素肽、尿壓素II或其組I=I O
9.權利要求6的方法，其中所述血管舒張劑包括乙酰膽堿、乙酰甲膽堿、醋克利定、檳榔堿、毛果蕓香堿、西維美林、硝普鹽、硝酸甘油、硝普酯、硝基甘油、笑氣、異丙腎上腺素和相關的β-2腎上腺素受體激動劑、胼屈嗪、米諾地爾、二氮嗪、維拉帕米及其它鈣通道拮抗劑、卡托普利、氯沙坦、可樂定、酮色林、組胺、六烴季銨、緩激肽和相關的肽、腎上腺髓質素、 心房肽和腦鈉肽、降鈣素基因相關肽或其組合。
10.權利要求6的方法，其中所述血管舒張劑選自膽堿能激動劑和血管舒張肽。
11.權利要求9的方法，其中所述膽堿能激動劑是乙酰膽堿、乙酰甲膽堿、醋克利定、檳榔堿、毛果蕓香堿、西維美林或其組合。
12.權利要求9的方法，其中所述血管舒張肽是緩激肽和相關的肽、腎上腺髓質素、心房肽和腦鈉肽、降鈣素基因相關肽或其組合。
13.一種評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法，所述方法包括以下步驟a.測量所述家兔CEA管腔的基線直徑；b.將所述化合物給予家兔；c.將血管收縮劑給予所述家兔的所述CEA使所述血管的直徑預收縮；和d.通過與在步驟a測量的所述管腔的基線直徑相比，測量所述家兔所述中央耳動脈所述管腔的直徑，來確定所述化合物對步驟c所得所述血管的直徑的作用。
14.權利要求13的方法，其中通過超聲顯像系統測量所述管腔的直徑。
15.一種評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法，所述方法包括以下步驟a.測量所述家兔CEA管腔的基線直徑；b.將所述化合物給予家兔；c.通過與在步驟a測量的所述管腔的基線直徑相比，測量所述家兔所述中央耳動脈所述管腔的直徑，來確定所述化合物對在步驟b所得所述血管的直徑的作用。
16.權利要求15的方法，其中通過超聲顯像系統測量所述管腔的直徑。
全文摘要
一種評估化合物對體內血管舒縮反應的作用的方法，包括以下步驟將所述化合物給予家兔，測量所述家兔中央耳動脈的管腔直徑，與所述家兔所述中央耳動脈管腔的基線直徑相比，在給予所述化合物之前測量所述基線直徑。
文檔編號A61K49/00GK102238968SQ200980142455
公開日2011年11月9日 申請日期2009年10月21日 優(yōu)先權日2008年10月21日
發(fā)明者B·P·達米亞諾, E·C·吉亞迪諾, M·A·康奈利, T·J·帕里 申請人:強生醫(yī)藥研究及開發(fā)有限責任公司