專利名稱：用于加速膠原蛋白生成的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本公開主要涉及一種局部皮膚護(hù)理組合物，更具體地，涉及一種用于膠原蛋白加速生成的配制的局部皮膚護(hù)理組合物。
背景技術(shù)：
膠原蛋白是一種長形纖維結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)，其功能與例如酶等球狀蛋白質(zhì)具有很大不同。膠原蛋白是在動物體內(nèi)結(jié)締組織的主要蛋白質(zhì)，并且是哺乳動物體內(nèi)最多的蛋白質(zhì)，占到總量的大約40%。膠原蛋白強(qiáng)韌且不能伸展，具有很大的抗張強(qiáng)度，是軟骨、韌帶及腱的主要成分，并且是骨頭和牙齒的主要蛋白質(zhì)成分。膠原蛋白連同柔軟的角蛋白質(zhì)一起，形成皮膚的強(qiáng)度和彈性，而且伴隨著老化，膠原蛋白的減少導(dǎo)致皺紋的產(chǎn)生。膠原蛋白強(qiáng)化血管并且對組織發(fā)育也起作用。膠原蛋白以晶體形式出現(xiàn)在眼睛的角膜和晶狀體上。膠原蛋白還用于整容外科手術(shù)和燒傷外科手術(shù)。膠原蛋白出現(xiàn)在遍及整個人體的許多地方，并且以不同的形式，每一種形式被認(rèn)為是一種類型。至少有12種不同的膠原蛋白類型，其中I型膠原蛋白是最豐富的。I型膠原蛋白的基本三股螺旋結(jié)構(gòu)是其他大多數(shù)膠原蛋白類型的原型。其他類型膠原蛋白在它們的三股螺旋的長度上，以及在它們的氨基或羧基末端是否具有球狀區(qū)域上不同于I型膠原蛋白。I型膠原蛋白可以在皮膚，腱和骨頭中發(fā)現(xiàn)，而且類型I -III型被認(rèn)為對皮膚的發(fā)育和形成起重要作用。人們需要能提高膠原蛋白的生成的皮膚護(hù)理組合物以及生物體外給藥的組合物。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明在第一實施例中提供了一種用于動物尤其是哺乳動物皮膚的局部施用組合物，該組合物包括結(jié)合有一種或多種植物脂肪的十八碳四烯酸。十八碳四烯酸的優(yōu)選來源是從藍(lán)薊屬的一個或更多個種中萃取的植物油。優(yōu)選的種是車前葉藍(lán)薊、紫色蝰蛇牛舌草、佩特森的詛咒(Patterson' s Curse)。本發(fā)明的再一實施例中提供了一種用于動物尤其是哺乳動物皮膚的局部施用組合物，該組合物包括結(jié)合有一種或多種CODAT’ s的十八碳四烯酸。十八碳四烯酸的優(yōu)選來源是從藍(lán)薊屬的一個或更多個種中萃取出的植物油。優(yōu)選的種是車前葉藍(lán)薊，紫色蝰蛇牛舌草，佩特森的詛咒。優(yōu)選地，植物脂肪選自含有稱為十八碳三烯酸(CODTA’ s)的脂肪酸。優(yōu)選的 CODTA' s為金盞花酸、梓樹酸，α-桐酸，蘭花酸和石榴油酸。CODTA' s的優(yōu)選來源是金盞草成藥、梓樹、油桐、蘭花楹和石榴。藍(lán)薊屬的一個或更多個種選自以下任何一種或多種化合物^Echium acanthocarpum Svent. · Echium aculeatum Poir. · Echium albicans Lag.& Rodr. · Echium angustifolium Lam. · Echium arenarium Guss. · Echium asperrimum Lam. · Echium auberianum Webb et Berth. · Echium bethencourtii Santos · Echium boissieri Steudel · Echium bonnetii Coincy · Echium brevirame Sprague et Hutch. · Echium callithyrsum Webb ex Bolle · Echium candicans L. fil. Pride of Madeira · Echium creticum L. · Echium decaisnei Webb · Echium flavumDesf. · Echium gaditanum Boiss. · Echium gentianoides · Echium giganteum Lfil. · Echium handiense Svent. · Echium humile Desf. · Echium italicum L :Pale Viper' s-bugloss · Echium lancerottense Lems et HoIz. · Echium leucophaeum Webb ex Sprague et Hutch. · Echium lusitanicum L. · Echium marianum Boiss. · Echium nervosum Dryand. in W. T. Aiton · Echium parviflorum Moench Small-flowered Viper' s-bugloss · Echium pavonianum Boiss. · Echium pininana Webb et Berth. Giant Viper ' s-bugloss · Echium plantagineum L PurpIe Viper ' s-bugloss, Patterson' s Curse · Echium pustulatum Sibth. & Sm. · Echium rosulatum Lange :Lax Viper' s-bugloss · Echium russicum J. F. Gme1. · Echium sabulicola Pomel · Echium salmanticum Lag. · Echium simplex DC. · Echium strictum L f. · Echium sventenii Bramw. · Echium tuberculatum Hoffmanns. & Link · Echium virescens DC. :Tower of Jewels · Echium vulgare L :Viper ' s Bugloss · Echium webbii Coincy · Echium wildpretii Pears, ex Hook· Fil0在根據(jù)本發(fā)明的再一實施例中，提供了一種處理皮膚的方法，其包括局部地將包括結(jié)合有一種或更多種植物脂肪的十八碳四烯酸的組合物施加到皮膚上。在根據(jù)本發(fā)明的再一實施例中，提供了一種處理皮膚的方法，包括在皮膚上局部使用一種組合物，該組合物包括結(jié)合有一種或多種CODTA’ s的十八碳四烯酸。在根據(jù)本發(fā)明的再一實施例中，提供了一種結(jié)合有一種或多種植物脂肪的十八碳四烯酸在加速皮膚中膠原蛋白生成中的應(yīng)用。在根據(jù)本發(fā)明的再一實施例中，提供了一種結(jié)合有一種或多種CODTA’ s的十八碳四烯酸在加速皮膚中膠原蛋白的生成中的應(yīng)用。在根據(jù)本發(fā)明的再一實施例中，提供了一種結(jié)合有一種或多種植物脂肪或其生理學(xué)上可接受的衍生物的十八碳四烯酸或其生理學(xué)上可接受的衍生物在制備加速皮膚中膠原蛋白生成的藥物中的應(yīng)用。在根據(jù)本發(fā)明的再一實施例中，提供了一種結(jié)合有一種或多種CODTA’ s或其生理學(xué)上可接受的衍生物的十八碳四烯酸或其生理學(xué)上可接受的衍生物在制備加速皮膚中膠原蛋白生成的藥物中的應(yīng)用。用于處理皮膚情況包括年老皮膚的藥物組合物包括結(jié)合有一種或多種植物脂肪或其生理學(xué)上可接受的衍生物的十八碳四烯酸或其生理學(xué)上可接受的衍生物，以及生理學(xué)上可接受的載體。用于處理皮膚情況包括年老皮膚的藥物組合物包括十八碳四烯酸或其生理學(xué)上可接受的衍生物結(jié)合一種或多種CODTA’ s或其生理學(xué)上可接受的衍生物，以及生理學(xué)上可接受的載體。藍(lán)薊油具體優(yōu)選使用超臨界二氧化碳萃取工藝從植物種子中提取得到。
圖1 由配制在三種不同稀釋劑中的藍(lán)薊油處理過的人類真皮纖維原細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞生存能力。使用純藍(lán)薊油或者稀釋在細(xì)胞培養(yǎng)基中，2mM BSA或2mM BSA/1. 8% DMSO0 所顯示的結(jié)果是三倍井方式，并且表示為未處理的控制生存能力的百分比。每項處理中的五個長條分別代表所測試的每一種稀釋物的五種不同體積；從左到右分別是10 (無陰影)， 8，6，3和1 μ 1 (最多陰影)。每個井中的細(xì)胞培養(yǎng)基體積是100 μ 1。
圖2 測試油(第一篩選)處理過的人類真皮纖維原細(xì)胞培養(yǎng)物中的細(xì)胞生存能力。將測試油預(yù)稀釋，1/10，在2mM BSA/1.8%DMS0中。所顯示的結(jié)果是三倍井方式，并且表示為未處理的控制生存能力的百分比。每項處理中的五個長條分別代表所測試的每一種測試油的五種不同體積；從左到右分別是10 (無陰影)，8，6，3和1 μ 1 (最多陰影)。每個井中的細(xì)胞培養(yǎng)基體積是100 μ 1。圖3 測試油(第二篩選)處理過的人類真皮纖維原細(xì)胞培養(yǎng)物中的細(xì)胞生存能力。將測試油預(yù)稀釋，如所示，在2mM BSA/1.8%DMS0中。所顯示的結(jié)果是三倍井方式，并且表示為未處理的控制生存能力的百分比。每項處理中的五個長條分別代表所測試的每一種測試油的五種不同體積；從左到右分別是10(無陰影)，8，6，3和1 μ 1 (最多陰影)。每個井中的細(xì)胞培養(yǎng)基體積是100 μ 1。圖4 所選擇的測試油稀釋物以及測試油混合物的配制。配制藍(lán)薊油/測試油混合物并以最終體積10 μ 1加入到100 μ 1的細(xì)胞培養(yǎng)基中。圖5 測試油混合物通過人類真皮纖維原細(xì)胞對于I型膠原蛋白分泌的效果。通過ELISA(CoSmo生物有限公司)確定I型膠原蛋白的水平，并且表示為在來自于僅使用稀釋劑(賦形劑)處理的培養(yǎng)物的樣品中所觀察到的水平的百分比。分析來自于每一項處理過的培養(yǎng)物井中的細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞培養(yǎng)物表面(平皿)上的胃蛋白酶消化物。每一長條表示重復(fù)抽樣樣品的平均數(shù)。該圖右側(cè)顯示了每一種測試油的編碼。根據(jù)圖4中的詳細(xì)信息配制測試油混合物(3 1，藍(lán)薊油測試油比率)。圖6 試驗平皿設(shè)計以及藍(lán)薊油(Epi63)稀釋物WST-I細(xì)胞生存能力化驗中的吸光率讀數(shù)。圖形表示450nm下的吸光率減去620nm下的吸光率。平皿2中的下列井給出了出乎意料低的讀數(shù)-M，C2，E2，E3，F(xiàn)2，F(xiàn)3，F(xiàn)4-這些是稀釋在2mM BSA中的樣品并且不認(rèn)為值得重復(fù)，來自于稀釋在2mM BSA/1. 8% DMSO-優(yōu)選的稀釋劑-中的樣品的結(jié)果-顯示出很好的一致性。圖7 細(xì)胞生存能力表示為未處理過的對照細(xì)胞的生存能力相對于使用藍(lán)薊油 (Epi63)稀釋物處理過的細(xì)胞培養(yǎng)物井的百分比?；罴?xì)胞數(shù)目直接與修正后的吸光率讀數(shù) (A45Onm-A620nm)有關(guān)。未處理過的控制培養(yǎng)井的平均吸光率讀數(shù)是14 . 57。圖8 平皿設(shè)計以及來自測試油第一細(xì)胞毒性篩選的吸光率讀數(shù)。圖9 細(xì)胞生存能力表示為未處理過的對照細(xì)胞生存能力相對于使用測試油稀釋物處理過的細(xì)胞培養(yǎng)物井的百分比-篩選I?；罴?xì)胞數(shù)目直接與修正后的吸光率讀數(shù) (A45Onm-A620nm)有關(guān)。未處理過的控制培養(yǎng)井的平均吸光率讀數(shù)是1764. 17。所有油都以1/10 在 2mM BSA/1. 8% DMSO 中稀釋。圖10 平皿布局以及來自測試油第二細(xì)胞毒性篩選的吸光率讀數(shù)。平皿1上的兩個井Gl和Hl (10 μ 1賦形劑)給出了非常低的吸光率讀數(shù)，顯示沒有WST-I試劑加入到這些井中。圖11 細(xì)胞生存能力表示為未處理過的對照細(xì)胞生存能力相對于使用測試油稀釋物處理過的細(xì)胞培養(yǎng)物井的百分比-篩選II。活細(xì)胞數(shù)目直接與修正后的吸光率讀數(shù) (A45Onm-A620nm)有關(guān)。未處理過的對照培養(yǎng)井的平均吸光率讀數(shù)是1235. 8。所有油都在2mM BSA/1. 8% DMSO 中稀釋。圖12 平皿布局以及來自藍(lán)薊油/測試油混合物的細(xì)胞毒性篩選中的吸光率讀數(shù)。藍(lán)薊油/測試油混合物按照表3.1進(jìn)行配制；向每一個井(100 μ 1細(xì)胞培養(yǎng)基體積) 中加入10 μ 1的每種油。帶有藍(lán)薊記號的井只用藍(lán)薊油進(jìn)行處理。圖13 細(xì)胞生存能力表示為未處理過的對照細(xì)胞生存能力相對于使用藍(lán)薊油/ 測試油混合物處理過的細(xì)胞培養(yǎng)物井的百分比?；罴?xì)胞數(shù)目直接與修正后的吸光率讀數(shù) (A45Onm-A620nm)有關(guān)。未處理過的控制培養(yǎng)井的平均吸光率讀數(shù)是1552. 33。所有油都在2mM BSA/1. 8% DMSO 中稀釋。圖14 平皿布局以及使用ELISA確定I型膠原蛋白的吸光率讀數(shù)。I型膠原蛋白的水平在細(xì)胞培養(yǎng)基樣品(標(biāo)記為黃色)的胃蛋白酶消化物和組織培養(yǎng)物表面(標(biāo)記為綠色)的胃蛋白酶消化物中確定，這是按照ELISA套件生產(chǎn)商的介紹(Cosmo Bio Co Ltd)準(zhǔn)備。I型膠原蛋白的標(biāo)準(zhǔn)濃度也已經(jīng)給出并且展示了 I型膠原蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。每一個樣品來自于單獨的細(xì)胞培養(yǎng)物井。圖15 分析用試樣中I型膠原蛋白的濃度。I型膠原蛋白的濃度由μ g/ml表示并經(jīng)ELISA分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線中計算公式所確定。在藍(lán)色列中突出顯示的油混合物指示，對于所給的一組樣品(介質(zhì)或培養(yǎng)物表面)相對于在僅使用稀釋劑(賦形劑=2mM BSA/1.8% DMS0)處理的培養(yǎng)物賦形劑中所觀測到的水平，膠原蛋白濃度具有> 10%的增長的樣品。 黑體的圖是不僅增加了培養(yǎng)物介質(zhì)中的還增加了附著于細(xì)胞培養(yǎng)物表面上的I型膠原蛋白的水平的油混合物。圖16 測試油的配制。按照從之前的研究中所得到的數(shù)據(jù)，使用或不使用藍(lán)薊(基礎(chǔ))油配制薔薇(精煉)，琉璃苣，蘭花楹和金盞草油；將200 μ 1的每一種測試油加入到aiil 的培養(yǎng)基中。使用2mM BSA/1. 8% DMSO作為稀釋劑——在培養(yǎng)物井中得到的DMSO的最大量是0. 18%。圖17 在使用測試油/測試油化合物處理過的人類真皮纖維原細(xì)胞培養(yǎng)基中分泌的I型膠原蛋白的水平。顯示的數(shù)據(jù)是從兩種各自的細(xì)胞培養(yǎng)物井中得到數(shù)值的平均值。 通過它們的參考數(shù)字(見圖16)將油對應(yīng)到X軸上去。測試油結(jié)合精制薔薇油(Epi29)和藍(lán)薊油(Epi63)導(dǎo)致I型膠原蛋白在培養(yǎng)基中最一致的增長。可以在圖19到30中找到原始數(shù)據(jù)。圖18 來自于使用測試油/測試油化合物處理過的人類真皮纖維原細(xì)胞中的，附著于培養(yǎng)物平皿的井上的分泌的I型膠原蛋白的水平。顯示的數(shù)據(jù)是從兩種各自的細(xì)胞培養(yǎng)物井中得到數(shù)值的平均數(shù)。通過它們的參考數(shù)字(見圖16)將油對應(yīng)到χ軸上去。相對于賦形劑-處理和未處理控制，所有的測試油化合物都增強(qiáng)了附著型I型膠原蛋白的水平。除藍(lán)薊油(Epi60)以外，供體2的細(xì)胞對于測試油的響應(yīng)比供體1的細(xì)胞的響應(yīng)要大。 可以在圖19到30中找到原始數(shù)據(jù)。圖19 供體1——平皿布局以及介質(zhì)樣品的原始吸光率數(shù)據(jù)。相鄰列中具有相同標(biāo)記的樣品來自于相同的培養(yǎng)物井中的重復(fù)抽樣樣品。同一列中的具有相同標(biāo)記的樣品來自于不同培養(yǎng)物井。測定450nm下的吸光率。圖20 供體1——介質(zhì)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖21 供體1——由介質(zhì)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線確定的I型膠原蛋白的值。圖22 供體1——平皿布局以及平皿(附著性膠原蛋白)的原始吸光率數(shù)據(jù)。相鄰列中具有相同標(biāo)記的樣品是來自于相同培養(yǎng)物井中的重復(fù)抽樣樣品。同一列中的具有相同標(biāo)記的樣品來自于不同培養(yǎng)物井。測定450nm下的吸光率。圖23 供體1——平皿(附著性膠原蛋白)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖M 供體1——由平皿(附著性膠原蛋白)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線確定I型膠原蛋白的值。圖25 供體2——平皿布局以及介質(zhì)樣品的原始吸光率數(shù)據(jù)。相鄰列中具有相同標(biāo)記的樣品是來自于相同培養(yǎng)物井中的重復(fù)抽樣樣品。同一列中的具有相同標(biāo)記的樣品來自于不同培養(yǎng)物井。測定450nm下的吸光率。圖沈供體2——介質(zhì)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖27 供體2——由介質(zhì)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線確定的I型膠原蛋白的值。圖觀供體2——平皿布局以及平皿(附著性膠原蛋白)樣品的原始吸光率數(shù)據(jù)。 相鄰列中具有相同標(biāo)記的樣品是來自于相同培養(yǎng)物井中的重復(fù)抽樣樣品。同一列中的具有相同標(biāo)記的樣品來自于不同培養(yǎng)物井。測定450nm下的吸光率。圖四供體2——平皿(附著性膠原蛋白)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖30 供體2——由平皿(附著性膠原蛋白)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線確定的I型膠原蛋白的值。
具體實施例方式眾所周知十八碳四烯酸和作為十八碳四烯酸原料的藍(lán)薊油能夠獲利性地用于改善皮膚的外觀。然而十八碳四烯酸或藍(lán)薊油在提高該活性方面的生物功能還未被確定。此外，十八碳三烯酸(C0DTA’s)例如金盞花酸、梓樹酸、α -桐酸、蘭花酸和石榴油酸，并且植物脂肪作為十八碳三烯酸的原料能用于皮膚再生中也是已知的。與背景技術(shù)相反，本發(fā)明人決定研究十八碳四烯酸與十八碳三烯酸的組合在生物體外生成膠原蛋白的效果。令人驚訝地，他們發(fā)現(xiàn)十八碳四烯酸，包括作為十八碳四烯酸原料的藍(lán)薊油與十八碳三烯酸，包括作為十八碳三烯酸原料的不同植物脂肪的組合通過增加可溶性膠原蛋白的水平和附著型I型膠原蛋白的水平從而增加了人體皮膚纖維原細(xì)胞培養(yǎng)物中I型膠原蛋白的分泌。這些化合物的提高I型膠原蛋白生成的性能以前從未被發(fā)現(xiàn)。八種測試油的混合物增加了胃蛋白酶消化物細(xì)胞培養(yǎng)物表面上可測量的I型膠原蛋白的量(表現(xiàn)為分泌的膠原蛋白粘附于細(xì)胞培養(yǎng)物井的外壁以及底部上，含有處理過的纖維原細(xì)胞)該八種測試油為薔薇(精煉)、琉璃苣、蘭花楹、金盞花、石榴、琉璃苣(精煉)以及基礎(chǔ)藍(lán)薊油。這些數(shù)據(jù)用附隨的圖來說明。四種油的混合物一薔薇(精煉)、琉璃苣、蘭花楹和金盞花——能夠看出它們在細(xì)胞培養(yǎng)基中增加了可溶性I型膠原蛋白并且在細(xì)胞培養(yǎng)物的表面增加了附著性I型膠原蛋白。而且可以發(fā)現(xiàn)蘭花酸(一種十八碳三烯酸)與十八碳四烯酸的混合物能通過人類皮膚纖維原細(xì)胞強(qiáng)烈地催生出I型膠原蛋白分泌物。金盞花酸(也是一種十八碳三烯酸)具有與蘭花酸相似的能力。這些令人驚訝的發(fā)現(xiàn)從未被預(yù)知，并且從現(xiàn)有的關(guān)于這些材料的信息中也不是顯而易見的。他們同樣也證明這些十八碳四烯酸和十八碳三烯酸對于促進(jìn)膠原蛋白的產(chǎn)生具有協(xié)同效用。通過提高膠原蛋白的產(chǎn)生，可以預(yù)料到，該含有十八碳四烯酸，藍(lán)薊油作為十八碳四烯酸原料，與十八碳三烯酸，植物脂肪作為十八碳三烯酸原料，的組合物作為局部的化妝品制劑具有很大實用性。在本發(fā)明之前，人們還沒認(rèn)識到該含有十八碳四烯酸，藍(lán)薊油作為十八碳四烯酸原料，與十八碳三烯酸，植物脂肪作為十八碳三烯酸原料，的組合物能促進(jìn)皮膚中膠原蛋白的生成，并且因而用于施用于在皮膚局部的用途。本發(fā)明第一方面提供一種用于動物皮膚的局部旋滴用組合物，該組合物包括結(jié)合有一種或多種十八碳三烯酸(CODTA’ s)的十八碳四烯酸。十八碳四烯酸是ω-3必需脂肪酸，有時被叫做十八碳-4，8，12，15-四烯酸。它是通過使用S-6-去飽和酶用生化方法由α-亞麻酸合成的。這種脂肪酸的天然來源是大麻， 黑醋栗和藍(lán)薊的種子油。它的化學(xué)式是C18H28O2。化學(xué)純的十八碳四烯酸能夠從多家不同的供應(yīng)商那得到。例如，Cayman化學(xué) (http://www. caymanchem. com/)提供十八碳四烯酸乙酯，產(chǎn)品號碼是10006856。然而本發(fā)明中的組合物中，十八碳四烯酸優(yōu)選使用天然原料的提取物的一部分， 例如植物或種子油提取物。這些植物或種子油提取物被來源廣泛，例如含有十八碳四烯酸的大麻油可在商業(yè)上由大量的供應(yīng)商得到。十八碳四烯酸的其他來源包括黑醋栗油提取物，其也是可以從大量不同的原料中得到的。本發(fā)明該方面的組合物優(yōu)選包含有從藍(lán)薊屬中的一個種中提取出的植物油作為十八碳四烯酸的原料。上文的W010]段中列舉了這種藍(lán)薊屬，從這些物質(zhì)中可以得到合適的提取物。植物油提取物優(yōu)選來自于車前葉藍(lán)薊、紫色蝰蛇牛舌草、佩特森的詛咒，油提取物優(yōu)選含有大約13%的十八碳四烯酸。藍(lán)薊油從車前葉藍(lán)薊，例如已知的紫色蝰蛇牛舌草，的植物種子中得到。這種油能夠從很多供應(yīng)商那獲得，例如G4/SSD有限公司(Orford Hall, Binbrook Business Park, Brookenby, Market Rasen, Lincolnshire LN8 6HF)。G4/SSD 有限公司出產(chǎn)的藍(lán)薊油對于必需脂肪酸具有優(yōu)良的平衡性，有大約45% n-3，含有13%十八碳四烯酸(SA)，25% n_6，還含有10%伽馬亞麻酸(GLA)，和18% n-9脂肪酸。藍(lán)薊油含有兩種通常在天然種子油中不能得到的脂肪酸，這兩種脂肪酸叫做伽瑪亞麻酸(GLA)和十八碳四烯酸(SA)。這兩個必須脂肪酸在長鏈脂肪酸，前列腺素和其他代謝物的形成過程中是必需的。冷壓藍(lán)薊油因為保留了大部分的抗氧化劑，因而不僅有助于天然油的保存，而且還被證明了有益于促進(jìn)健康。除十八碳四烯酸和作為十八碳四烯酸原料的藍(lán)薊油外，本發(fā)明該方面的組合物還含有一種或多種十八碳三烯酸(CODTAs)。通過“十八碳三烯酸”，該組合物包括一種或多種這種類型的聚合不飽和脂肪酸化合物。十八碳三烯酸可以由大量的不同化學(xué)供應(yīng)商那獲得，例如Sigma-Aldrich就提供大量的這種化合物。該組合物優(yōu)選包含一種或多種植物脂肪作為十八碳三烯酸的原料。通過“一種或多種植物脂肪”，該組合物包含有從一種或多種不同植物原料中提取出的脂肪。例如，本發(fā)明的一種組合物含有從琉璃苣中得到的植物油，除十八碳四烯酸外明確使用藍(lán)薊油作為十八碳四烯酸原料，該組合物被認(rèn)為是本發(fā)明該方面的組合物。這種植物脂肪可以從大量的不同天然原料中得到。下面舉例說明可以用于本發(fā)明該方面組合物中的植物脂肪Seatons (http://www. seat, ons-uk. co. uk/)提供的薔薇油(冷壓；有機(jī)；精煉)；石榴油(batons)；桐油(http://www.made-in_china.com/)； 琉璃苣油(含有精制的琉璃苣油；Seatons)；大麻籽油(batons)；亞麻油(http://www. bulknaturaloils. com/)；麥芽油(katons)；山茶油(katons)；蘭花楹油(G4/SSD 有限公司，詳細(xì)資料如上)；金盞草油(Springdale)。
植物脂肪優(yōu)選琉璃苣油(琉璃苣)，麥芽油(小麥)，薔薇油(精煉；亞馬遜薔薇)， 蘭花楹油(蘭花楹)，和/或金盞草油(金盞草)。該十八碳三烯酸優(yōu)選金盞花酸，梓樹酸，α -桐酸，蘭花酸和/或石榴油酸。本發(fā)明特別優(yōu)選的實施例中，該組合物包括從車前葉藍(lán)薊，紫色蝰蛇牛舌草，佩特森的詛咒中提取出的植物油，以及植物脂肪為琉璃苣油(琉璃苣)。本發(fā)明再一優(yōu)選實施例中該組合物包括從車前葉藍(lán)薊，紫色蝰蛇牛舌草，佩特森的詛咒中提取出的植物油，以及植物脂肪為麥芽油(小麥)。本發(fā)明該方面的組合物中十八碳四烯酸/十八碳三烯酸(CODTAs)的比率的數(shù)值范圍例如從10 1到1 10。然而優(yōu)選的比率是大約1 1;2 1 ；3 1 ；4 1或5; 1。最優(yōu)選的比率是大約3 1。而且，根據(jù)本發(fā)明該方面的實施例，植物油提取物與植物脂肪的比率的適宜數(shù)值范圍例如從10 1到1 10。然而優(yōu)選的植物油提取物與植物脂肪的比率是大約1 1; 2 1 ；3 1 ；4 1或5 1。最優(yōu)選的比率是大約3 1。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，基于能增加膠原蛋白生成的有效組分的量，施用的組合物的量以及向皮膚施用局部組合物的頻率，本發(fā)明該方面的組合物也可以含有不同量的十八碳四烯酸，藍(lán)薊油作為十八碳四烯酸的原料，以及十八碳三烯酸，植物脂肪作為十八碳三烯酸原料。作為指導(dǎo)，下面列舉的例子提供了能夠促進(jìn)膠原蛋白的產(chǎn)生的藍(lán)薊油提取物和植物脂肪的比率以及量。該例子還提供了一系列的分析試驗以確定該組合物在產(chǎn)生膠原蛋白方面的效果，其中本發(fā)明所使用的組合物包括藍(lán)薊油和琉璃苣油，該例子中顯示了最終含有10%藍(lán)薊油和3. 33%琉璃苣油的組合物能促進(jìn)膠原蛋白的產(chǎn)生。對于精煉的薔薇油，可以使用10%藍(lán)薊油和3. 33%琉璃苣油的混合物。對于蘭花楹和金盞草，可以使用
藍(lán)薊油和0.3%植物脂肪。目前超臨界二氧化碳已經(jīng)被確定為一種用于萃取的溶劑。這有很多原因。首先是由于超臨界二氧化碳具有高擴(kuò)散率，因而通常能比液體溶劑更快地滲透固體樣品，其次由于它具有低粘性，因而可以從樣品基質(zhì)中迅速地運(yùn)輸出已溶解的溶質(zhì)。當(dāng)然產(chǎn)品中的溶劑殘余也很少。當(dāng)用于制備植物提取物時，超臨界二氧化碳萃取工藝能夠提供雜質(zhì)少于0. 1% 的提取物。發(fā)明人已經(jīng)確定使用超臨界二氧化碳萃取工藝從原料物質(zhì)中提取出的植物油和植物脂肪比起使用其他方法提取出的油和脂肪，保留了更好的促進(jìn)新增膠原蛋白產(chǎn)生的能力。因此，本發(fā)明該方面進(jìn)一步提供一項實施例，其中植物油提取物和植物脂肪都是使用超臨界二氧化碳萃取工藝從植物種子中提取得到的。很多不同的公司都可以完成從天然產(chǎn)品中使用超臨界二氧化碳萃取工藝提取物質(zhì)；例如Botanix (http //botanix. co. uk/ index, html)禾口 NATECO2 (http//www. nateco2. de/index, htm)。本發(fā)明的第一方面提供了一種局部施用于動物皮膚尤其是人類皮膚上的組合物。有很多方法可以將根據(jù)本發(fā)明該第一方面配制的組合物局部施用到動物皮膚上。例如，該組合物可以以粉末，液體，軟膏，乳油，凝膠，水凝膠，氣溶膠，噴霧，膠囊， 皮膚藥貼，脂質(zhì)體的形式，或者以其他任何適合的可以將該組合物局部施用的形式。因此， 該制劑可以通過撒布或通過噴霧施用于皮膚上。本發(fā)明中該組合物的載體應(yīng)該是一種使受驗者可以很好地接受的物質(zhì)。該制劑中也可以含有更多的成分，例如香料，著色劑，防腐劑或其它生物活性成分。為局部施用于皮膚上，可以將本發(fā)明的組合物配制為合適的含有懸浮式活性成分或溶解入活性成分的軟膏，例如含有一種或多種下述成分的混合物礦物油，液體礦脂，白礦脂，丙二醇，聚氧乙烯聚氧丙烯化合物，乳化蠟和水。這些物質(zhì)可以被配制為合適的涂劑或乳油，懸浮或溶解，例如一種含有以下一種或多種物質(zhì)的混合物礦物油，硬脂酸山梨糖醇脂，聚乙二醇，液體石蠟，聚山梨糖醇酯60，鯨蠟酯基蠟，鯨蠟硬脂酸，2-辛基十二烷醇， 苯甲醇和水。然而本發(fā)明的該組合物優(yōu)選配制為乳劑凝膠中的粒子。這種配制方式受益地允許本發(fā)明的該組合物為可溶的，以促進(jìn)有效輸送，尤其是輸送到皮膚上。優(yōu)選的配制技術(shù)為 Malvern Cosmeceutics Limited (http://www. malceutics. com/index, html)提供的“納米乳劑制備”技術(shù)。本發(fā)明再一方面提供了一種含有本發(fā)明第一方面所述組合物的藥物組合物和一種制藥適合的賦形劑。此處“藥物學(xué)可接受的賦形劑”是指本領(lǐng)域用于配制藥物組合物的普通技術(shù)中已知的任意生理學(xué)賦形劑。本發(fā)明的再一方面提供了一種處理皮膚的方法，該方法包括將本發(fā)明上述方面中的組合物或藥物組合物應(yīng)用于皮膚上。本發(fā)明的再一方面提供了一種組合物或藥物組合物，其用作增加皮膚中膠原蛋白的產(chǎn)生的藥劑。本發(fā)明的再一方面提供了一種根據(jù)本發(fā)明上述方面的組合物或藥物組合物，該組合物能夠增加皮膚中膠原蛋白的產(chǎn)生。本發(fā)明上述每一項再一方面中優(yōu)選的實施例是包含有從車前葉藍(lán)薊，紫色蝰蛇牛舌草，佩特森的詛咒中提取出的植物油，以及琉璃苣油(琉璃苣成藥)和/或麥芽油(小麥)作為植物脂肪。試驗例例1 生物體外研究以確定所使用的脂肪對纖維原細(xì)胞膠原蛋白合成的效果。該試驗是為確定植物——衍生脂肪結(jié)合藍(lán)薊油對在人類真皮纖維原細(xì)胞培養(yǎng)基中促進(jìn)合成I型膠原蛋白的效果。人類真皮纖維原細(xì)胞培養(yǎng)基來源于人類真皮的移植培養(yǎng)基，使用酶去除表皮后提供一項有用的皮膚毒性篩選模型，確定紫外保護(hù)效果因素和可以修改真皮中基因/蛋白質(zhì)表達(dá)的因素。該研究是為了確定一些系列的由植物得到的油通過真皮纖維原細(xì)胞促進(jìn)I型膠原蛋白分泌的效果。分泌出的I型膠原蛋白在細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞培養(yǎng)基表面的胃蛋白酶消化物中通過ELISA進(jìn)行化驗。試驗方法在標(biāo)準(zhǔn)條件下培養(yǎng)人類真皮纖維原細(xì)胞(最初來自于普通人類胸部真皮的已知培養(yǎng)基)。通過客戶提供一系列測試油，開始細(xì)胞毒性篩選，該測試使用96井、 甲-基底細(xì)胞生存能力測定，該測定使用單一劑量測試油，48小時后檢測細(xì)胞生存能力。接下來，按照1份測試油混合3份藍(lán)薊油的比例制備測試油與藍(lán)薊油(作為原油)的混合物。 這些測試油/藍(lán)薊油混合物在被用在一個6井型平皿格式分析前也進(jìn)行篩選生物毒素。將細(xì)胞暴露于油混合物中三天。得到細(xì)胞培養(yǎng)基，細(xì)胞和培養(yǎng)基平皿，并且在分析前在-80°C 下貯藏。使用商用ELISA套件測定培養(yǎng)基中的I型膠原蛋白的含量和附著在細(xì)胞培養(yǎng)基井上的分泌出的膠原蛋白的量。
具體方法人類真皮纖維原細(xì)胞培養(yǎng)基人類真皮纖維原細(xì)胞在具有10% FCS, L-谷氨酸鹽(2mM)，青霉素(100IU/ml)和鏈霉素(100 μ g/ml)的DMEM中，37°C下，95 %空氣/5% 二氧化碳的氣氛中，95%相對濕度下保持。為用于細(xì)胞毒性和I型膠原蛋白分析，通過胰島素/EDTA處理獲得細(xì)胞。測試試劑在室溫下通過客戶機(jī)程序以液體形式提供測試試劑。下面，表1列決了測試試劑和它們的參考代碼。表權(quán)利要求
1.一種向動物皮膚上局部施用的組合物，包括結(jié)合有一種或多種十八碳三烯酸 (CODTAs)的十八碳四烯酸。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物包括作為所述十八碳四烯酸來源的植物油提取物。
3.如權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述植物油提取物來自于藍(lán)薊屬物種。
4.如權(quán)利要求3所述的組合物，其中所述植物油提取物來源于車前葉藍(lán)薊、紫色蝰蛇牛舌草、佩特森的詛咒。
5.如上述權(quán)利要求中任意一項所述的組合物，其中所述組合物包括一種或多種作為十八碳三烯酸的來源的植物脂肪。
6.如權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述植物脂肪是琉璃苣油(琉璃苣)、麥芽油(小麥)、薔薇油(精煉；亞馬遜薔薇)、蘭花楹油(蘭花楹)、和/或金盞草油(金盞草)。
7.如上述權(quán)利要求中任意一項所述的組合物，其中所述十八碳三烯酸是金盞花酸、梓樹酸、α -桐酸、蘭花酸和/或石榴油酸。
8.如上述權(quán)利要求中任意一項所述的組合物，其中所述組合物包括來源于車前葉藍(lán)薊、紫色蝰蛇牛舌草、佩特森的詛咒的植物油提取物，并且所述植物脂肪是琉璃苣油(琉璃苣)和/或麥芽油(小麥)。
9.如上述權(quán)利要求中任意一項所述的組合物，其中所述十八碳四烯酸/十八碳三烯酸的比率為大約3 1。
10.如上述權(quán)利要求中任意一項權(quán)利要求所述組合物，其中所述植物油提取物和植物脂肪由超臨界二氧化碳萃取工藝從植物種子中提取。
11.一種藥物組合物，包括上述任意一項權(quán)利要求中所述組合物和藥物學(xué)可接受的賦形劑。
12.一種處理皮膚的方法，包括局部施用上述任意一項權(quán)利要求所述的組合物或藥物組合物。
13.上述任意一項權(quán)利要求所述的組合物或藥物組合物用于皮膚以增加皮膚中膠原蛋白生成的用途。
14.根據(jù)上述權(quán)利要求中任意一項所述組合物或藥物組合物，作為藥劑用于皮膚以增加皮膚中膠原蛋白的生成。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種局部施用于動物皮膚上的組合物，該組合物包括結(jié)合有一種或十八碳三烯酸(CODTAs)的十八碳四烯酸。該組合物優(yōu)選包括作為十八碳四烯酸原料的藍(lán)薊油，以及作為十八碳三烯酸原料的植物脂，例如琉璃苣油(琉璃苣)、麥芽油(小麥)、薔薇油(精煉的，亞馬遜薔薇)、藍(lán)花楹油(蘭花楹)、和/或金盞草油(金盞草)。本發(fā)明所涉及的組合物增進(jìn)Ⅰ型膠原蛋白的分泌，從而對促進(jìn)皮膚膠原蛋白的生成具有特殊效用。
文檔編號A61K8/36GK102164577SQ200980137907
公開日2011年8月24日 申請日期2009年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月1日
發(fā)明者克利福德·斯賓塞 申請人:E·S·L·I·有限公司