專利名稱：具有糖胺聚糖的藥物組合物及其在治療慢性潰瘍中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種用于治療慢性潰瘍、特別是糖尿病足部潰瘍(diabetic foot ulcers)和壓力性潰瘍(pressure ulcers)的糖胺聚糖組合物。更具體地，涉及治療慢性潰瘍、更特別地制備用于治療慢性潰瘍的醫藥產品的低分子量肝素(LMWHs)和極低分子量肝素(VLMWHs)的組合物。技術狀況糖尿病(Diabetes Mellitus) (DM)是一種代謝疾病，其特征在于血漿葡萄糖水平持續不變的增加，其有助于外周神經病和大血管以及微血管并發癥的發作。根據世界衛生組織(WHO)公布的數據，DM的發病率以令人擔憂的方式遞增，在2000年在世界人口中發病率為2. 8%，并且估計在2030年該數字將增加至4. 4%。因此，在2000年，患有DM的患者數目約為一億七千一百萬，并且估計在2030年這一數目將增加至三億六千六百萬。在其它因素中，DM發病率的增加已經與人口的普遍老齡化相關，因為在年齡和該疾病的發病率之間存在直接的關系。在這種意義上，已經預計，DM在西班牙的發病率可能為2% -6%
將對應是1型DM，患有2型DM的患者中有50%未被確診。考慮到已公布的關于在西班牙不同地區DM發病率的研究是在2002年之前的以及發病率增加的趨勢，預計目前在西班牙有超過兩百五十萬糖尿病病人。神經損害，外周系統和自主系統的神經損害，可能代表最常見的DM并發癥。其可能在兩種類型的DM中發生，并且其發病率和嚴重性與糖尿病發展的年數相關，和肝抗胰島素物質控制的程度相關。估計這種并發癥影響60%的DM受試者，這是糖尿病受試者足部潰瘍發作的主要原因。在這一點上，美國糖尿病協會(American Diabetes Association)在其第十六次科學會議上確定15%的DM患者在其整個一生中發展足部潰瘍，并且足部潰瘍是在糖尿病受試者中發生的6%的住院治療的原因。在糖尿病患者中發生的所有潰瘍中的 15%最終導致截肢，與DM相關的并發癥是非外傷性截肢的主要原因(40-70% )，糖尿病患者中發生的85%的截肢又與足部潰瘍相關。在美國，每年進行100，000例截肢，這極大地影響衛生保健成本，據計算，在2001年，在美國潰瘍和截肢大約花費10億美元，而在英國這筆費用為四億五千六百萬美元。這些源于糖尿病足部潰瘍的花費取決于是否進行截肢而在很大程度上不同，并且因此，在1990年在瑞士進行的研究中，觀察到在治愈且沒有局部缺血成分的那些潰瘍的情形中，相關的費用為16，500美元。相反，在必須進行較輕微的截肢的情形中，花費達到27，000美元，在發生嚴重截肢的事件中費用總計63，000美元。由西班牙血管學和血管手術學會的Grupo de Consenso sobre Pie Diab6tico (關于糖尿病足合意的組(Group of Consensus on Diabetic Foot))提議的糖尿病足的定義為“由持續的高血糖癥誘發的具有神經病疾病發生學基礎的臨床改變，其中，伴有或不伴有缺血的共存，并且在外傷引發后，發生足部損害和/或潰瘍”。足部潰瘍是疾病如糖尿病的顯著并發癥，每年的發病率略微高于2% (Abbott C. Α·,等(2002)The North-ffest Diabetes Foot Care Study :incidence of, and risk factors for,new diabetic foot ulceration in a community-based patient cohort(西北糖尿病性足護理研究基于社團的患者群體中新的糖尿病足部潰瘍的發病率、和危險因素).Diabet. Med.(糖尿病醫學)19 (5) :377_84)。據估計15%的患有糖尿病的患者將在他們生命中的某個時間發展潰蕩(Reiber G. E. (1996) The epidemiology of diabetic foot problems (糖尿病足問題的流行病學).Diabet. Med.(糖尿病醫學)13增刊1 :S6_11)，并且約10% -30%的具有潰瘍的那些患者將發展為肢體的截肢(Lipsky B. A. (2004)Medical treatment of diabetic foot infections ( H^^f^^^ ^ E). Clin. Infect
Dis.(臨床傳染病)39增刊2 :S104-14)。此外，這在該事件中是復雜的，在出現潰瘍的下肢中存在局部缺血，在大部分病例中是由于因高的血栓形成發生率導致的血液供應不足而發生的。關于已經進行了下肢截肢的患者的5年的死亡率，為50-60 % (Reiber G.E. (1996) The epidemiology of diabetic foot problems (糖尿病足問題的流行病學).Diabet. Med.(糖尿病醫學)13增刊1 :S6_11)。已經使用了多種用于治療患有糖尿病足的患者的方法，包括嚴格的代謝控制，預防可緩和的危險因素，清創術，使用敷料，感染的抗微生物治療，消除損害區域的壓力，使用皮膚移植，施用生長因子和在存在適應證的情形中使用血管再造法(revascularization)。在大部分病例中，對這種類型的慢性潰瘍的治療通過局部途徑進行的，例如，在潰瘍處如在糖尿病足部潰瘍處使用敷料劑是常用的。在受控的臨床試驗中研究的新型敷料劑包括基于半透性聚合物膜、Promogran(膠原基質)、藻酸鹽、羧甲基纖維素、透明質烷(hyaluronan)和低于大氣壓的敷料(Eldor R.等(2004)New and experimental approaches to treatment of diabetic foot ulcers :a comprehensive review of emerging treatment strategies (糖尿病足部潰瘍的新的和實驗治療方法新現治療策略的綜合評論).Diabet. Med.(糖尿病醫藥)21 (11) :1161_73)。還開發了置于潰瘍損害處產生皮膚替代品的方法。Dermagraft: 是通過將人皮膚成纖維細胞接種在合成的生物可吸收材料的構架上而生成的，已證明其在低等潰瘍中是有效的，在較短時間中具有較大的治愈比例(M(Marston W. A.，等(2003)Dermagraft Diabetic Foot Ulcer Study Group(Dermagraft 糖尿病足部潰瘍研究組)· The efficacy and safety of Dermagraf in improving the healing of chronic diabetic foot ulcers :results of a prospective randomized trial (Dermagraft在提高慢性糖尿病足部潰瘍的治愈中的功效和安全性預期的隨機化試驗的結果).Diabetes Care (糖尿病護理)26 :1701_5)。 Apligrat 由下列各項組成由人成纖維細胞在牛I型膠原基質上形成的皮膚層和之后由人角質形成細胞形成的表皮。類似地，已經證明，當這一皮膚替代物應用在低級和非感染性神經病性潰瘍時，其顯著地與損害的更大更快的愈合相關(Veves A.，等(2001) Graftskin,a human skin equivalent,is effective in the management of noninfected neuropathic diabetic foot ulcers :a prospective randomized multicenter clinical trial (Graftskin，一種人皮膚等價物，有效護理非感染性神經病性糖尿病足部潰瘍預期的隨機化多中心臨床試驗).Diabetes Care (糖尿病護理)24 :290_5)。在III期隨機化雙盲安慰劑對照的臨床試驗中，證明凝膠形式的血小板來源的生長因子(PDGF)對于治療具有良好的血液灌注的患有神經病性潰瘍的糖尿病患者的治療是有效和安全的(Wieman TJ.，等(1998) Clinical efficacy of beclapermin (rh PDGF-BB) gel (貝卡普勒明(rhPDGF-BB)凝膠的臨床功效).Diabetes Care (糖尿病護理)21 (5) :822_7)。依據測面積學評估，該研究中所包括的大部分患者(95% )具有面積< IOcm2的潰瘍。與安慰劑相比較，100 μ g/g的貝卡普勒明凝膠，顯著增加完全的損害閉合比例43% (50相對35%，ρ = 0. 007)，并且縮短獲得所述作用的時間32% (86相對127天，ρ = 0. 013)。使用PDGF或貝卡普勒明(Regranex. )的令人滿意的結果致使它們被核準用于治療糖尿病患者下肢的神經病性潰瘍，所述潰瘍延伸到皮下組織或更深層，并且具有適當的血液流動(Brem H.， Sheehan P. ,Boulton AJ. (2004) Protocol for treatment of diabetic foot ulcers (糖尿病足部潰瘍的治療方法).Am. J.Surg.(美國手術雜志)187 (5A) =IS-IOS) 0然而，幾個月后，FDA在接收到表明在將強生(Johnson&Johnson)的局部生長因子Regranex . 直接應用到糖尿病足部和腿部潰瘍上的糖尿病患者中存在較高的癌癥危險的研究數據后進行了安全性評估，因此，這種治療性備選物目前處于評估中，并且限制性用于不具有易患任何類型的腫瘤的傾向的患者。關于通過局部的腸胃外途徑的治療，幾年前公開了施用修補劑(healing agent) 如表皮生長因子(EGF)的方法，其由通過幾次注射的方式將生物分子溶液滲透至損害中組成(W0 03053458)。已經證明這種治療有效用于防止糖尿病足的截肢，但是由于將注射施用到損害中非常痛，并且每次治療必須施用幾次注射持續幾周，其具有對于患者是創傷性的缺點。此外，文獻EP 1499317公布了使用1型鈉-氫交換劑(NHE-I)抑制劑治療糖尿病并發癥如糖尿病足的方法，國際公布WO 02077155描述了角質形成細胞生長因子(KGF-2)促進或者加速損害的愈合。最后，國際公布W02007087759涉及一種用于腸胃外施用給具有慢性皮膚病癥如糖尿病足部潰瘍的患者的藥物組合物，其包含具有表皮生長因子的微球體。許多其它專利已經集中在加速愈合范圍的其它方法上。然而，這些方法無一證明是廣泛有效的。另外，非專利文獻中已經公開了一些研究，其公開了基于肝素是已知的抗血栓形成劑和消炎劑，可以改善血管微循環，使用低分子量肝素(LMWHs)治療的糖尿病足患者的某些有希望白勺結果。在"Effect ofDalteparin of healing of chronic foot ulcers in diabetic patients with peripheral arterial occlusive disease (達月干素治愈具有外周動脈閉塞疾病的糖尿病患者的慢性足部潰瘍中的作用)”，Diabetes Care(糖尿病護理)，卷26 (9)，2003年9月中，以及在M. Kalani，A.等同組的公布中，題目為“Beneficial effects of dalteparin on haemostatic function and local tissue oxygenation in patients with diabetes，severe vascular disease and foot ulcers (達月干素對具有糖尿病、嚴重血管疾病和足部潰瘍的患者中的止血功能和局部組織氧化的有益作用)”， Thrombosis Research.(血栓形成研究)120，653-661，2007中，描述了證明低分子量肝素 (LMWH)如達肝素(dalteparin)改善具有外周動脈閉塞疾病的患者的糖尿病足部潰瘍的進展的臨床試驗。然而，令人吃驚的是，在這些文獻中，患者用乙酰水楊酸聯合治療，即， 暗示聯合具有抗凝集作用的兩種活性成分如何協同性地有助于具有外周動脈閉塞疾病的患者的糖尿病足部潰瘍的進展。“Low molecular weight heparin seem to improve local capillary circulation and healing of chronic foot ulcers in diabetic patients (低分子量肝素似乎改善局部毛細循環和糖尿病患者中慢性足部潰瘍的治愈)”， VASA, Brand 22，1993，FET 2也公開了評估達肝素在具有糖尿病足部潰瘍的患者中的功效的雙盲安慰劑對照的臨床試驗。該研究的初步結果表明，達肝素可能對預防這種類型的傷口具有有益的作用，盡管總是以預防劑量，即，由于在以較高劑量的治療過程中預見到出血，決不使用大于2500IU/天的達肝素劑量，而在具有糖尿病足部潰瘍的患者的情形中，這一增加，并不包括更大的功效。這是由于在現有技術領域中通常相信糖尿病患者比不具有該疾病的患者具有更高的出血危險(Adverse impact of bleeding on prognosis in patients with acute coronary syndromes (出血對具有急性冠狀動脈綜合征的患者預后的不利影響)，Eikelboom JW等.Circulation(循環).2006年8 月 22 日；114(8) :774_82)。發明簡述在慢性潰瘍、特別是糖尿病足部潰瘍的治療中使用糖胺聚糖，并且特別是使用一些低分子量肝素用于這一目的，目前已經概略地描述用于具有嚴重循環病癥的患者，因為這些低分子量肝素具有抗血栓形成和抗凝集活性，表示為抗激活的因子X(Xa)作用和抗因子IIa作用。然而，因為在以較高劑量的治療中包含的出血危險，它們通常不用于患有糖尿病足部潰瘍但無外周動脈閉塞疾病的糖尿病患者。這是由于這種類型的化合物的抗因子Xa 作用，其轉化為抗血栓形成作用，并且其與在形成低分子量和極低分子量肝素的糖結構中存在的特異性五糖的類肝素結構內的含量具有直接關系，并且由于抗因子Xa/抗因子IIa 作用比例。因為在總結構中的五糖的量越大，抗因子Xa活性越大，合成的五糖(磺達肝素 (fondaparinux))成為最有選擇性的因子Xa抑制劑，并且因此成為以選擇性方式具有最大抗血栓形成能力的分子，確定這一比例。因此，磺達肝素的抗血栓形成活性是對因子Xa的選擇性抑制的結果，該選擇性抑制由抗凝血酶III (ATIII)介導。由于其與ATIII的選擇性結合，磺達肝素將ATIII對因子 Xa固有的中和提高300倍。因子Xa的中和中斷血液凝集級聯，并且抑制凝血酶形成和血栓發展(參見
圖1)。考慮到技術現狀，開始可能認為結構中的大量五糖對于獲得治愈(非減輕)作用是必需的。然而，如上文所示，由于在以較大劑量的治療中包括的出血危險，沒有進行這一方法。本發明的發明人已經克服了現有技術的偏見，因為他們設法證實了，盡管五糖處于較小的比例或以選擇性方式被化學或酶學改變，但治愈和再生作用不受影響，因為在糖胺聚糖結構中真正重要的是不包含五糖的多糖鏈的比例。此外，本發明的研究者已經能夠實驗確定，在認為是慢性的任何類型的潰瘍中一一不僅是在糖尿病足部潰瘍中一一施用具有較少量的五糖的糖胺聚糖的有益治愈作用，并且所述施用通過三種主要施用途徑是有效的腸胃外，口服和局部途徑。由于Lindahl和Choay小組在20世紀八十年代初期進行的工作(Choay J，Lormeau JC,Petitou M, Sinag P 和 Fareed J.Ann NY Acad Sci (紐約科學學會年度雜志)1981 ；370 644-649 ；Thunberg L，Backstr5mG和 Lindahl U. Carbohydr Res (碳水化合物研究)1982 ； 100 :393-410)，提出了這樣的假說在肝素鏈內存在與五糖對應的特異性序列，其與抗凝血酶III選擇性相互作用。這種五糖的結構如下(式1):式權利要求
1.用于治療慢性潰瘍的糖胺聚糖藥物組合物，所述藥物組合物在藥用介質中包括至少下列單糖，其中百分數為占所述組合物總單糖百分數的百分數a)N-磺基-D-葡糖胺25-50%b)D-葡糖醛酸3-25%其特征在于，與N-磺基-3-磺基-D-葡糖胺結合的二糖單元D-葡糖醛酸的比例不大于 20%。
2.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，與N-磺基-3-磺基-D-葡糖胺結合的二糖單元D-葡糖醛酸的比例不大于所述組合物總單糖百分數的10%。
3.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，與N-磺基-3-磺基-D-葡糖胺結合的二糖單元D-葡糖醛酸的比例不大于所述組合物總單糖百分數的5%。
4.根據前述權利要求1-3中任一項所述的組合物，其特征在于，其還包括多至占所述組合物總單糖百分數的10%的N-乙酰-D-葡糖胺比例。
5.根據前述權利要求1-4中任一項所述的組合物，其特征在于，其還包括多至占所述組合物總單糖百分數的35%的L-艾杜糖醛酸比例。
6.根據前述權利要求5所述的組合物，其特征在于，L-艾杜糖醛酸的比例占所述組合物總單糖百分數的多至10%。
7.根據前述權利要求中任一項所述的組合物，其特征在于，其還包括占所述組合物總單糖百分數的多至50%比例的2-硫酸化L-艾杜糖醛酸。
8.根據權利要求7所述的組合物，其特征在于，2-硫酸化L-艾杜糖醛酸的比例處于占所述組合物總單糖百分數的15-50%范圍內。
9.根據前述權利要求中任一項所述的組合物，其特征在于，其包括低分子量肝素。
10.根據前述權利要求9所述的組合物，其中所述低分子量肝素是平均分子量小于 8,000道爾頓的肝素。
11.根據前述權利要求1-8中任一項所述的組合物，其特征在于，其包括極低分子量的肝素。
12.根據前述權利要求1-8中任一項所述的組合物，其特征在于，其包括未分級分離的肝素。
13.根據前述權利要求1-12中任一項的組合物在制備用于治療慢性潰瘍的醫藥產品中的應用。
14.根據權利要求13所述的應用，其中所述慢性潰瘍是糖尿病足部潰瘍。
15.根據權利要求13所述的應用，其中所述慢性潰瘍是壓力性潰瘍。
16.根據權利要求13-15中任一項所述的應用，其特征在于，所述組合物包括低分子量肝素，并且特征在于，所提及的肝素的血漿半衰期和以IU為單位的劑量之間的比例為 1 800-1 5000。
17.根據權利要求13-15中任一項所述的應用，其特征在于，所述組合物包括具有 5. 2-5. 4小時的血漿半衰期的低分子量肝素，并且特征在于，所提及的肝素的血漿半衰期和以IU為單位的劑量之間的比例為1 900-1 1200。
18.根據權利要求13-15中任一項所述的應用，其特征在于，所述組合物包括具有 4. 0-4. 4小時的血漿半衰期的低分子量肝素，并且特征在于，所提及的低分子量肝素的血漿半衰期和以IU為單位的劑量之間的比例為1 1000-1 2500。
19.根據權利要求18所述的應用，其特征在于，所提及的低分子量肝素的血漿半衰期和以IU為單位的劑量之間的比例約為1 2000。
20.根據前述權利要求13-19中任一項所述的應用，其中所述低分子量肝素通過靜脈內途徑施用。
21.根據前述權利要求13-19中任一項所述的應用，其中所述低分子量肝素通過皮下途徑施用。
22.根據前述權利要求13-19中任一項所述的應用，其中所述低分子量肝素通過口服途徑施用。
23.根據前述權利要求13-19中任一項所述的應用，其中所述低分子量肝素通過局部途徑施用。
全文摘要
本發明涉及用于治療糖尿病足部潰瘍的糖胺聚糖組合物。更具體地，本發明涉及低分子量肝素(LMWHs)和極低分子量肝素(VLMWHs)用于治療慢性潰瘍、特別是糖尿病足部潰瘍，并且更特別用于制備治療慢性潰瘍、特別是糖尿病足部潰瘍和壓力性潰瘍的藥物。
文檔編號A61K9/08GK102176915SQ200980133863
公開日2011年9月7日 申請日期2009年6月30日 優先權日2008年7月1日
發明者伊萬·洛佩斯-貝爾蒙特·恩西納, 埃萊娜·塞瓦德拉·米蘭達, 瑪麗亞德洛斯·安赫萊斯·卡納萊斯·馬約多莫 申請人:羅維實驗室制藥股份公司