用apoe肽治療癌癥的方法

專利名稱：用apoe肽治療癌癥的方法
技術領域：
本發明涉及通過施用至少一種衍生自載脂蛋白E(ApoE)的肽治療癌癥的方法。施 用ApoE肽誘導腫瘤細胞的細胞凋亡并減少腫瘤形成、腫瘤生長和腫瘤細胞的擴散。具體而 言，描述了治療多種類型白血病和乳腺癌的方法。
背景技術：
癌癥是其中一組細胞呈現不受控制的生長，侵襲并破壞鄰近組織，以及轉移(異 常細胞擴散至身體的其他部位的擴散)，或者其中細胞無法在合適的時間進行程序性細胞 死亡(例如，細胞凋亡)的一類疾病。癌癥造成所有死亡的約13%，且根據美國癌癥協會 (American Cancer Society)，在2007年全世界有760萬人死于癌癥。目前對癌癥的治療 取決于具體的癌癥類型和涉及的組織，包括手術、化學療法、放射療法、免疫療法和單克隆 抗體療法以及其他療法。盡管這些治療方法在一些情況下取得了成功，但是其受到有害副 作用或有限效力所妨礙。例如，通過手術移除腫瘤來消除癌組織的效力常常受限于癌癥侵 襲鄰近組織并轉移至身體其他位點的傾向。化學療法，以及放射療法，常常受限于對身體其 他組織的毒性和損害。因此，癌癥仍然是主要的健康憂慮(health concern)，且需要改進的 治療癌癥的方法。在美國對于男性和女性的兩種最常見的致命癌癥分別是白血病和乳腺癌。有四個 基本類別的白血病急性淋巴細胞性白血病(ALL)、急性髓細胞性白血病(AML)、慢性淋巴 細胞性白血病(CLL)以及慢性髓細胞性白血病(CML)。CLL是西方世界最常見的白血病，在 7個最大的工業化國家中有接近84，000個病例。CLL是一種惡性病狀，其主要由稱作細胞 凋亡的程序性細胞死亡過程中的缺陷導致。作為失調的(dysregulated)細胞凋亡的結果， 容易在制備血涂片時破壞的成熟單核B細胞在血中累積(Rozman等(1995)N. Engl. J. Med.， Vol. 333 :1052-1057)。在CLL中，惡性細胞為特征為表達大部分成熟B細胞呈遞的表面標 記而具有一些次要的異質性的小B淋巴細胞(Caligaris-Cappio和Janossy (198 kmin Hematol.，Vol. 22 :1-12)。惡性CLL細胞最顯著的表型特征是實質上無法檢測量的單克隆 表面免疫球蛋白和⑶5的表達，其為通常見于成熟T細胞但不見于成熟B細胞的表面標記 (Boumsell 等(1978)Eur. J. Immunol. ,Vol. 8 :900-904 ；Ternynck 等(1974)Blood，Vol. 43 789-7%)。CLL的臨床進程是異質的，其中一些患者可能遭受需要加強治療(intensive treatment)的攻擊性的進程，而另一些可能經歷較長的存活而從頭到尾無需治療。該疾病 是進行性的，因為惡性克隆獲得順次遺傳異常，其進行性地增加其惡性表現。CLL在較老的 男性中最為流行，且其診斷時的中位年齡為64歲。值得注意的是，CLL是唯一的不與暴露 于電離輻射或化學品相關的成人白血病，且其并不在罹患免疫缺陷綜合征的患者中以更高頻率發生。CML在世界范圍影響約15，000位患者，且其為具有兩個不同期的多能性造血干細 胞的病癥。延長的骨髓增生慢性期繼以迅速地致命性原始細胞危象。在CML中，染色體移 位導致BCR蛋白和Abl激酶之間的融合的產生，其導致Abl的組成型激活。該Abl的組成型 激活顯示足以誘導慢性期的CML。盡管在引入Gleevec和其他BCR/Abl抑制劑之后對CML 的治療取得進展，但是近來報道了 Gleevec抗性的CML而愈發可慮。考慮到對于每種具體類型癌癥的不同治療的數目以及上述治療潛在的嚴重副作 用，對于開發對于超過一種類型的癌癥有效并不導致對健康組織不受歡迎的毒性或損傷的 新的癌癥治療法存在需求。

發明內容
本發明基于ApoE肽可用于治療癌癥的發現。因此，本發明提供了在有所需要的受 試者中治療癌癥的方法，包括向所述受試者施用有效量的至少一種ApoE肽。在一個實施方 案中，所述ApoE肽的施用減少了受試者中腫瘤的形成。在另一個實施方案中，所述ApoE肽 的施用減少了受試者中腫瘤的大小。在另一個實施方案中，所述ApoE肽的施用在受試者中 誘導癌細胞的細胞凋亡。還在另一個實施方案中，所述ApoE肽的施用在受試者中減少了癌 細胞擴散至健康組織。所述ApoE肽可含有十個或更多天然ApoE全蛋白質的殘基。在本發明的一個實 施方案中，所述ApoE肽是C0G133(SEQ ID NO :1)。在另一個實施方案中，所述ApoE肽是 COGl 12 (SEQ ID NO 2)或C0G068 (SEQ ID NO :8)。還在另一個實施方案中，所述ApoE肽是 C0G133 衍生物如 C0G1410(SEQ IDNO :4)或 COG;345 (SEQ ID NO :6)。其他可用于本發明的 ApoE肽描述于美國申請公開2009/0042783A1號中，其以全文提述的方式并入本文。在一個實施方案中，所述ApoE肽可含有SEQ ID NO =USEQ ID NO :2或SEQ ID NO: 4或任何描述于美國申請公開2009/0042783A1號中的衍生物，其在N-端或C-端或N-端以 及C-端連接于一至五個其他氨基酸或氨基酸類似物，其中上述其他氨基酸并不有害地影 響所述肽的活性。所述含有SEQ IDNO :1或SEQ ID NO 2的ApoE肽或其他ApoE衍生的肽 可含有12或更多個氨基酸，13或更多個氨基酸，14或更多個氨基酸，15或更多個氨基酸， 16或更多個氨基酸，17或更多個氨基酸，18或更多個氨基酸，19或更多個氨基酸，20或更多 個氨基酸，25或更多個氨基酸，30或更多個氨基酸，35或更多個氨基酸或40或更多個氨基 酸。在一些實施方案中，所述ApoE肽基本上由SEQ IDNO =USEQ ID NO :2或SEQ ID NO 4 組成。在其他實施方案中，所述ApoE肽偶合于蛋白質轉導域以促進對細胞的穿透。所述蛋 白質轉導域可包括衍生自觸角蛋白(antermapedia)、TAT、SynBl、SynB3、SynB5和聚精氨酸 的肽。本發明還涵蓋了在有所需要的受試者中通過施用有效量的至少一種ApoE肽來治 療白血病的方法。在一個實施方案中，所述白血病是慢性淋巴細胞性白血病(CLL)。在另 一個實施方案中，所述白血病是慢性髓細胞性白血病(CML)。在一些實施方案中，所述ApoE 肽的施用可在受試者中減少CD5+B細胞的數量。在其他實施方案中，所述ApoE肽的施用可 減少受試者中BCR/ABL+細胞的生長。在某些實施方案中，所述ApoE肽的施用可減少受試 者中伊馬替尼(imatinib)或達沙替尼(dasatinib)-抗性BCR/ABL+細胞的生長。
本發明還涵蓋了在有所需要的受試者中治療乳腺癌的方法。在一個實施方案中， 所述方法包括向受試者施用有效量的至少一種ApoE肽。在另一個實施方案中，所述乳腺癌 以Her2表達為特征。在另一個實施方案中，所述乳腺癌以雌激素受體表達為特征。附圖簡述

圖1.在多種形式的癌癥中異常信號傳導級聯的概圖(A) PI-3激酶-Akt信號傳導 級聯的作用過度產生慢性髓細胞性白血病(CML)和乳腺癌中的持久的抗細胞凋亡狀態。由 異常受體激酶如BCR/Abl和Her2/NeU產生的該途徑的組成型激活導致Akt激酶持久的磷 酸化和激活。然后激活的Akt可磷酸化促細胞凋亡蛋白質(以綠色顯示)，包括胱天蛋白 酶-9和Bad，導致其失活。激活的Akt還激活I κ K，導致NF κ B轉錄活性的激活，其導致抗 細胞凋亡蛋白Al，Bcl-xL和誘導型一氧化氮合酶(以紅色顯示)的表達。PP2A的激活，例 如通過用ApoE肽的處理，通過直接將Akt、I κ K和Bad脫磷酸化而逆轉了該信號傳導途徑 的組成型激活。(B)B細胞慢性淋巴細胞性白血病(CLL)中的TCLl-Akt信號傳導途徑。生 長和存活因子通過其受體激活PI-3激酶。PI-I磷酸化位于質膜上的磷脂，誘導Akt激酶 移位至膜上，于此其在Thr308和kr473受磷酸化，由此激活該激酶。TCL1，其在CLL中的成 熟B細胞中過表達，結合Akt激酶，進一步增加其激酶活性。TCLl的過表達(如在CLL中) 增加了 Akt靶的磷酸化水平，導致對細胞凋亡的抗性和細胞存活的增加。圖2. COG肽抑制Akt/NF κ B信號傳導級聯的激活。㈧將BV2小神經膠質細胞在 6-孔板中在5μ M C0G133存在下用100ng/ml LPS處理。收獲細胞，將其在Laemmli樣品緩 沖液中裂解，在10%聚丙烯酰胺凝膠上運行，并在硝酸纖維素上進行Western印跡。用抗磷 酸-ΙκΒα抗體或同種抗ΙκΒα抗體探測印跡。⑶通過裂解來自受刺激的BV2小神經膠 質細胞的分離的核并用32Ρ末端標記的結合κ B的寡核苷酸溫育并在聚丙烯酰胺凝膠上運 行來監視NFk B的核易位。將凝膠干燥并對X射線膠片曝光。箭頭表示NFK B的位置。(C) 對探測從僅用LPS或在C0G112肽存在下刺激的小膠質細胞分離的磷酸-Akt激酶和肌動蛋 白的Western印跡的光密度分析。將來自磷酸化的Akt激酶的信號針對肌動蛋白信號標準 化。探測磷酸-Akt激酶的代表圖示于條形圖之下。(D)在COGl 12肽存在(實心方塊)或 不存在(空心方塊)下將YAMC細胞暴露于嚙齒類檸檬酸桿菌(C. rodentium)。通過ELISA 測定法在受刺激的細胞的細胞裂解液中在指明的時間測量I κ K活性。O時點代表未經嚙齒 類檸檬酸桿菌刺激的細胞。§ ρ < 0. 05，§ §對于僅嚙齒類檸檬酸桿菌，ρ < 0. 01 ;n = 3 個單獨實驗，每個重復進行兩次。圖3.通過用COGl 12處理激活PP2A。將細胞粗培養物用指明的化合物處理30分 鐘，然后在NP40裂解緩沖液中裂解。將PP2A免疫沉淀，并就其活性進行測定。圖4. COGl 12對于來自人類患者的CLL或PBMC的劑量應答曲線。CLL細胞分離自 7位CLL患者，而PBMC細胞分離自5個健康患者。分離人CLL細胞和PBMC，并在將其暴露 于多種濃度的C0G112之后就細胞毒性進行測定。圖5. C0G112對CLL細胞的細胞凋亡的劑量應答曲線。分離人CLL細胞并將其暴 露于濃度漸增的C0G112。細胞凋亡是通過用膜聯蛋白V-FITC和碘化丙錠對細胞進行染色 然后進行流式細胞術分析來測量的。將々皿^111-￥+/碘化丙錠+細胞的百分比針對0 112 濃度作圖。使用依托泊苷作為陽性對照。圖6. SET在CLL細胞中過表達。對于來自12位CLL患者(CLL)和5位正常患者(PBMC)的細胞樣品測量的SET/ β -肌動蛋白比例的散點圖顯示B-CLL細胞中SET表達的顯 著增加。對于SET和β -肌動蛋白代表性的Western印跡描述于該圖之下。圖 7. COGl 12 對 BCR/ABL+K562CML 細胞的作用。(A) COGl 12 對 K562CML 細胞的劑量 應答曲線。使用伊馬替尼作為陽性對照。(B)C0G112和伊馬替尼對K562CML細胞生長施加 協同作用。將BCR/Abl+K562CML細胞在所指明的化合物或化合物的組合物存在下生長，并 用錐蟲藍(Trypan Blue)染色。對經錐蟲藍染色的細胞進行計數，并針對其培養時間進行 作圖。圖8. A.針對未用化合物或用COGl 12以0. 5或1. 0 μ M的劑量處理M小時的Κ562 細胞的磷酸-BCR/ABL的Western印跡分析。B.用指明劑量的COGl 12處理M小時的K562 細胞的PP2A活性。圖9. JurkatT細胞白血病細胞在1 μ M COGl 12肽存在或不存在時的生長曲線。發明詳述本發明是基于ApoE肽可用于治療多種形式癌癥的發現。因此，本發明提供了通過 將至少一種ApoE肽施用于有所需要的受試者而在該受試者中治療癌癥的方法。ApoE肽，亦稱作COG肽，為衍生自天然ApoE全蛋白質的肽。在本發明的一個實施 方案中，所述ApoE肽可包含ApoE的殘基133-149。在另一個實施方案中，所述ApoE肽是 C0G133 (LRVRLASHLRKLRKRLL(SEQ ID NO :1))。之前證明了 C0G133可用于治療或減少腦缺血 或腦部炎癥。參見2002年9月23日提交的美國專利申請公開No. 2003/0077641A1號，其以 全文提述的方式并入本文。之前構建了大量ApoE 130-150肽的類似物且在抑制炎性細胞 因子和自由基的基于細胞的測定法和受體結合測定法中對其進行了檢測。Lynch等Q003) J.Biol. Chem. , Vol. 278 (4) =48529-33以及2002年9月23日提交的美國申請公開系列號 2003/0077641A1 ；2007年4月17日授權的美國專利7，205, 280號；以及1999年3月1日提 交的美國申請系列號09/260，430，其每一個的內容均以全文提述的方式并入本文。可用于 本發明方法中的ApoE肽可為含有十個或更多個來自天然ApoE蛋白的殘基的肽的衍生物， 包括具有非天然氨基酸(如氨基異丁酸和乙酰賴氨酸，以及其他增加所述肽α螺旋含量的 修飾)取代的衍生物。例如，適用于本發明方法的ApoE肽衍生物包括但不僅限于LRVRLASH- (We) -LRKLRKRLL-NH2(SEQIDNO
Ac--ASH-Aib-RKLRKRLL-NH2(SEQ ID NO:17)
Ac--AS-Aib-LRKLRKRLL-NH2(SEQ ID NO:18)
Ac--D S-Aib-LRKLRKRLL-NH2(SEQ ID NO:19)
Ac--ASHLRKL-Aib-KRLL-NH2(SEQ ID NO:20)
Ac--DR-Aib-ASHLRKLRKR-Aib-L-NH2(SEQIDNO
Ac--DS-Aib-LRKLRKR-Aib-L-NH2(SEQIDNO 22)
Ac--DR-Aib-ASHLRKL-Aib-KRLL-NH2(SEQIDNO 23)
Ac--DS-Aib-LRKL-Aib-KRLL-NH2(SEQIDNO 24)
Ac--DR-Aib-AS-Aib-LRKLRKRLL-NH2(SEQIDNO 25)
Ac--DR-Aib-ASHLRKLRKRLL-NH2(SEQIDNO 26)
Ac--CAS-Aib-LRKL-Aib-KRLL-NH2(SEQIDNO 27)
Ac--DS-Aib-LRKL-Aib-KRLL-NH2(SEQ IDNO:28)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-KRLV-NH2 (SEQ ID NO 29)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-KRLM-NH2(SEQ ID NO 30)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-KRLI-NH2 (SEQ ID NO 31)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-KRLA-NH2(SEQ ID NO 32)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-KALL-NH2(SEQ ID NO 33)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-K(orn)LL-NH2(SEQIDNO:34)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-K(narg)LL-NH2(SEQIDNO:35)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-K(harg)LL-NH2(SEQIDNO:36)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-K(dmarg)LL-NH2(SEQIDNO:37)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-ARLL-NH2(SEQ IDNO:38)
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Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-(azlys)RLL-NH2(SEQIDNO:40)
Ac-ASH-Aib-RKL-Aib-KRLL-NH2(SEQIDNO:41)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-KRL-(NLe)-NH2(SEQIDNO:42)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-KR-(NLe)-L-NH2(SEQIDNO:43)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-KR-(NLe) - (NLe)-NH2(SEQIDNO 44)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-K(orn)L-(NLe)-NH2(SEQIDNO:45)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-K(orn)-(NLe)-L-NH2(SEQIDNO:46)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-K(orn)-(NLe) - (NLe)-NH2 (SEQIDNO:47)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-K(harg)L-(NLe)-NH2(SEQIDNO:48)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-K(harg)-(NLe)-L-NH2(SEQIDNO:49)
Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-K(harg)-(NLe) - (NLe)-NH2(SEQIDNO:50)
Ac-AS-Aib-L(orn)KL-Aib-KRLL_NH2(SEQIDNO:51)
Ac-AS-Aib-L(orn)KL-Aib-K(orn)LL-NH2(SEQIDNO 52)
Ac-AS-Aib-L(orn)KL-Aib-KRL-(NLe)-NH2(SEQ IDNO:53)
Ac-AS-Aib-L(orn)KL-Aib-KRL-(NLe) - (NLe)-NH2 (SEQIDNO 54)
Ac-AS-Aib-L(orn)KL-Aib-K(orn)L-(NLe)-NH2 (SEQIDNO 55)
Ac-AS-Aib-L(orn)KL-Aib-K(orn)-(NLe) - (NLe)-NH2(SEQIDNO 56)
Ac-ASHLRKLRKRLL-NH2(apoel38_149)(SEQIDNO:57)
Ac-ASHCRKLCKRLL-NH2(SEQIDNO:58)
Ac-ASCLRKLCKRLL-NH2(SEQ IDNO:59)
Ac-CSHLRKLCKRLL-NH2(SEQ IDNO:60)
Ac-ASHLRKCRKRCL-NH2(SEQIDNO:61)
Ac-ASHCRKLRKRCL-NH2(SEQIDNO:62)其中(匪e)-L是N-甲基化亮氨酸，Aib是氨基異丁酸，(orn)是鳥氨酸，(narg)是 硝基精氨酸，(NLe)是正亮氨酸(neurleucine)，(harg)是高精氨酸，(dmarg)是二甲基精 氨酸，(aclys)是乙酰賴氨酸，(azlys)是氮雜賴氨酸(azalysine)而Ac是乙酰化羧基端。在一些實施方案中，所述ApoE肽可結合蛋白質磷酸酶2A的內源抑制劑_2 (I2PP2A)， 也稱作SET，如WO 2008/080082所述，其以全文提述的方式并入本文。在其他實施方案中，所述ApoE肽是C0G133的類似物或衍生物，C0G133是具有序列LRVRLASHLRKLRKRLL (SEQ ID NO 1)的肽。在另一個實施方案中，所述 ApoE 肽是 C0G1410 (Ac-AS-Aib-LRKL-Aib-KRLL-NH 2 (SEQ ID NO :4))。在另一個實施方案中，所述 ApoE肽是 C0G345(LRVRLAS-aib-LRKLRK(ac) RLL(SEQ ID NO :6))。在本發明的另一個實施方案中，C0G133和其他ApoE肽的效力可通過偶合于如 2005年9月2日提交的PCT申請WO 2006/(^9028 (其要求2004年9月2日提交的美國臨時 申請 60/606，506，2004年 9 月 9 日提交的 60/608，148，2004年9 月 2 日提交的 60/606，507 的優先權，其以全文提述的方式并入本文)所述的蛋白質轉導域(PTD)來改善。PTD為短的 堿性肽，其促進否則將無法或僅最低限穿過細胞膜的載荷(cargo)的胞內遞送。一些可偶 合于ApoE肽的PTD的非限定性實例包括觸角蛋白(antennapedia)、SynBU SynB3、SynB5、 TAT和聚精氨酸。例如，可偶合于本發明的ApoE肽的示例性的PTD序列包括GRKKRRQRRRPPQ(SEQ ID NO 9)RQIKIffFQNRRMKffKK(SEQ ID NO: 10)RRMKffKK (SEQ ID NO :11)RGGRLSYSRRRFSTSTGR(SEQ ID NO :12)RRLSYSRRRF(SEQ ID NO :13)RGGRLAYLRRRffAVLGR(SEQ ID NO :14)RRRRRRRR(SEQ ID NO :15)其他合適的載體公開于美國專利7，205，280號，其以全文提述的方式并入本文。 在一個優選實施方案中，所述ApoE肽偶合于觸角蛋白。在另一個優選實施方案中，所述 ApoE 肽是 C0G112(RQIKIWFQNRRMKWKKCLRVRLASHLRKLRKRLL(SEQ ID NO :2))。在一個實施方 案中，所述ApoE肽偶合于SynB3。在另一個實施方案中，所述ApoE肽是C0G068 (RRLSYSRRR FLRVRLASHLRKLRKRLL(SEQ ID NO :8))。此外，如C0G1410的試劑具有增強的效力，且表現更佳的治療指數。如本文中使用 的“治療指數”指無動物死亡的最高可容忍劑量除以損傷之后的表現比鹽水對照顯著更佳 的最低有效劑量。不愿拘于任何理論，本發明的發明人有理由相信C0G133及其衍生物為蛋白質磷 酸酶2A(PP2A)的激活劑。因此，在本發明的一個實施方案中，ApoE肽在受處理的細胞中增 加PP2A的活性。ApoE肽對PP2A的激活還可減少Akt激酶、I κ K激酶和NF κ B的活性，從 而促進誘導細胞凋亡。因此，在一些實施方案中，ApoE肽在受處理的細胞中減少Akt激酶 活性。在其他實施方案中，ApoE肽誘導受處理的細胞即癌細胞的細胞凋亡。本發明的肽可通過如本領域已知的標準技術產生。本發明的肽可附加多種標記部 分如放射性標記、重原子標記和熒光標記以供檢測和示蹤。熒光標記包括但不僅限于螢光 素(Iuciferin)、焚光素(fluorescein)、曙紅、Alexa Fluor、0regon Green、羅丹明 Green、 四甲基羅丹明、羅丹明RecUTexas Red、香豆素和NBD熒光團、QSY7、Dabcyl和Dabsyl生色 團、B0DIPY、Cy5 等。對本文中公開的肽的修飾以增強與這些肽相關的功能活性可容易地由本領域技 術人員達成。例如，用于本發明方法中的肽可經化學修飾或偶合于其他分子以增強如溶解 性、血清穩定性等參數，而保留功能活性。具體而言，本發明的肽可在N-端乙酰化和/或在C-端酰胺化，或偶合、復合或融合于增強其血清穩定性的分子，包括但不僅限于白蛋白、免 疫球蛋白及其片段、轉鐵蛋白、脂蛋白、脂質體、α-2-巨球蛋白和α-1-糖蛋白、PEG和右旋 糖酐。上述分子具體描述于US 6，762，169，其以全文提述的方式并入本文。本發明肽試劑的另一種變化是將一至十五個氨基酸或其類似物連接于所述治療 肽的N-端或C-端氨基酸。本發明肽的類似物還可通過將一至十五個另外的氨基酸添加至 活性肽的N-端、C-端或N-和C-端兩者來制備，其中上述氨基酸的添加并不不利地影響所 述肽在本發明的肽結合的位點結合受體的能力。例如，可通過將一至十五個另外的氨基酸 添加至所述活性肽的N-端、C-端或N-和C-端兩者來構建C0G133、C0G1410和C0G345變 體。本發明的ApoE肽還包括本文中所述肽的保守變體。如本文中使用的保守變體指 其氨基酸序列中的改變并不不利地影響所述肽的生物學功能。當取代、插入或缺失所改變 的序列阻止或破壞與所述肽相關的生物學功能時，則稱其為不利地影響所述肽。例如，可改 變所述肽的總體電荷、結構或疏水/親水特性而不不利地影響生物學活性。因此，可改變其 氨基酸序列，例如，以使得所述肽更加疏水或更加親水，而不不利地影響所述肽的生物學活 性。一般而言，所述肽的保守取代變體、類似物和衍生物具有與公開的序列SEQID NO :1,2, 4和6至少約55 %，至少約65 %，至少約75 %，至少約80 %，至少約85 %，至少約90 %，至少 約95 %，或至少約96 %至99 %相同的氨基酸序列。對于上述序列的同一性或同源性在本文 中定義為候選序列中與已知肽在將所述序列比對并視需要引入缺口以取得最大的同源性 百分比之后相同的氨基酸序列的百分比，且并不將任何保守取代考慮為序列同一性的一部 分。N-端、C-端或內部的延伸、缺失或對所述肽序列的插入不應視為影響同源性。因此，本發明的肽包括具有公開于SEQ ID NO :1、2、4或6中的氨基酸序列的分子； 其具有所述治療肽至少約3、4、5、6、10、15或更多個氨基酸殘基的連續序列的片段；上述肽 的氨基酸序列變體，其中氨基酸殘基被插入至所公開序列的N-或C-端或之內；和公開序列 的氨基酸序列變體或其由另一個殘基取代的如上所定義的片段。包含本發明肽序列的肽化 合物可為約 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、四、30、31、32、33、 34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49 或 50 或更多個氨基酸。考慮到的變 體還包括那些通過例如同源重組、定點或PCR誘變而包含預決突變的那些，以及其他動物 物種的相應肽，其中所述動物物種包括但不僅限于兔、大鼠、豬、牛、羊、馬和非人靈長類物 種，和包括其中的肽用除了天然存在的氨基酸之外的部分經取代、化學、酶或其他合適手段 而共價修飾的衍生物(例如，可檢測部分如酶或放射性同位素)。所述ApoE肽，包括但不僅限于C0G133、COGl 12及其衍生物，可為游離形式或鹽形 式，其中所述鹽是藥學上可接受的。這包括鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳等的無機鹽。 還可用包括但不僅限于乙酸、丙酸、丙酮酸、馬來酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂 酸、水楊酸等制備所述肽的多種有機鹽。在一個實施方案中，將本發明的肽與藥學上可接受的載體組合使用。因此，本發明 還提供了適用于施用于受試者的藥學組合物。上述組合物包含有效量的本發明的ApoE肽 與藥學上可接受的載體組合。所述載體可為液體，從而使得該組合物適用于腸胃外施用，或 可為固體，即配制用于口服的片劑或丸劑。此外，所述載體可為可噴霧的液體或固體形式， 從而使得所述組合物適用于吸入。當腸胃外施用時，所述組合物應不含致熱原，并載于可接受的腸胃外載體中。或者，活性劑可使用已知方法配制為包埋于脂質體中。用于鼻內施用 的本發明肽的制備可使用如本領域中已知的技術來實施。本發明的肽還可配制為供局部施 用，例如乳膏(cream)或凝膠的形式。局部制劑對于治療皮膚癌特別有用。在其他實施方 案中，所述ApoE肽可配制為供直腸施用，如栓劑的形式。在一些實施方案中，對于治療結腸 直腸癌，優選所述ApoE肽的直腸施用。本發明肽的藥物制備物可任選地包括藥學上可接受的稀釋劑或賦形劑。本發明的ApoE肽的有效量是與不存在該肽時會發生的相比減少至少一種與癌癥 相關的癥狀或病理(如腫瘤大小、腫瘤生長、癌細胞的擴散、癌細胞數和存活)的量。在一 個實施方案中，有效量的ApoE肽在受試者的細胞中調節Akt激酶活性或PP2A活性。所述 有效量(和施用模式)根據個體的情況確定，以及基于具體使用的肽并考慮到受試者(大 小、年齡、一般健康狀況)，受治療的具體癌癥(例如，CLL、CML、乳腺癌)，待治療的癥狀的嚴 重程度，尋求的結果，具體的載體或藥物制劑，施用途徑以及其他對于本領域技術人員顯而 易見的因素。本文中所述的治療有效量的肽可使用如本領域已知的體外測試、動物模型或 其他劑量應答研究來確定。施用本發明肽的另一種方法是通過向受試者施用攜帶編碼所述肽的核酸序列的 載體來實施的，其中所述載體能夠進入身體中的細胞從而使得所述肽表達并分泌。合適的 載體通常為病毒載體，包括DNA病毒、RNA病毒和逆轉錄病毒。利用載體遞送系統并實施基 因療法的技術在本領域是已知的。皰疹病毒載體、腺病毒載體、腺伴隨病毒載體和慢病毒載 體是可用于施用本發明化合物的具體類型的載體。本發明的肽可單獨用于治療癌癥或與其他通常用于治療癌癥的治療劑組合使用， 所述治療劑例如化療劑(苯丁酸氮芥、環磷酰胺)，皮質類固醇(潑尼松、潑尼松龍)，氟達 拉濱，噴司他丁，克拉屈濱，伊馬替尼(Gleevec)，達沙替尼(Sprycel)，激素療法(他莫昔 芬、芳香酶抑制劑)和輻射。本發明的肽可急性施用(即，在發病時或緊接著導致癌癥診斷的事件時)，或可預 防性施用(例如，在預定日程的手術之前，或在癌癥病征或癥狀出現之前)，或在癌癥發病 期間施用，以減輕或緩解否則將會發生的癥狀的進展。施用的時機和間隔根據受試者的癥 狀變動，且可由本領域技術人員確定以幾個小時至幾日的間隔，歷經數小時、數日、數周或 更長的時間進程來進行施用。通常的每日施用方案可為從每日約0. 01 μ g/kg體重，從每日約lmg/kg體重，從每 日約10mg/kg體重，從每日約100mg/kg體重，從每日約1000mg/kg體重。取決于具體待施 用的ApoE肽，劑量可為每日約1至約500mg/kg體重，優選每日約25至約400mg/kg體重， 或更優選每日約50至250mg/kg體重。本發明提供了通過施用有效量的至少一種本文中所述的ApoE肽在有所需要的哺 乳動物受試者中治療癌癥的方法。ApoE肽可減少一種或多種與癌癥相關的癥狀，包括但 不僅限于腫瘤形成、腫瘤生長、癌細胞數、癌細胞向健康組織的擴散以及減少的存活。可用 本發明的肽和方法治療的癌癥包括但不僅限于多種形式的白血病(CLL、CML、ALL、AML)、乳 腺癌、卵巢癌、宮頸癌、前列腺癌、結腸直腸癌、肺癌、胰腺癌、腦癌、皮膚癌(黑色素瘤和非 黑色素瘤)、頭部和頸部癌癥、膀胱癌、子宮內膜癌、腎細胞癌、甲狀腺癌、胃癌、食道癌、膽 囊癌、肝癌、淋巴瘤和肉瘤。在一個實施方案中，所述ApoE肽可減少信號傳導途徑如Akt/NFkB途徑的激活，其在多種形式的癌癥中異常激活(參見實施例1)。ApoE肽還可激活 PP2A(實施例2、。報道了 PP2A負調節內皮細胞運動性，其為癌癥中血管發生和腫瘤轉移 所必需(Gabel 等，1999，Otolaryngol Head Neck Surg. 121 :463-468 ；Young, MR.，1997， AdvExp Med Biol. 407 :311-318)。岡田酸對PP2A的抑制通過破壞細胞骨架網絡增加細胞 運動性從而增強了腫瘤細胞的侵襲性。因此，本發明的肽會通過激活PP2A減少腫瘤細胞轉 移和癌癥相關的血管形成。在本發明的一個實施方案中，ApoE肽的施用增加受試者的癌細 胞中的PP2A活性。在另一個實施方案中，ApoE肽的施用減少受試者的癌細胞中的Akt激酶 活性。在另一個實施方案中，ApoE肽的施用減少受試者的癌細胞中的I κ K激酶活性。在 另一個實施方案中，ApoE肽的施用減少受試者的癌細胞中的NF κ B激酶活性。還在另一個 實施方案中，ApoE肽的施用誘導受試者的癌細胞的細胞凋亡。本發明還提供了用于治療白血病的方法，包括將至少一種ApoE肽以與所述肽不 存在時會發生的相比減少疾病癥狀的量施用。在一個實施方案中，所述白血病是慢性髓細 胞性白血病(CML)。SET，一種PP2A的內源陰性調節劑，在CML中過表達并抑制PP2A，從而 保持致癌的BCR/ABL激酶途徑的激活(Neviani等(2005) Cancer Cell. 8 =355-368)。因此， ApoE肽如C0G133、C0G1410、COGl 12或任何其他ApoE類似物的施用會激活PP2A，然后其能 夠自由地將細胞增殖和存活的調節劑去磷酸化，以及抑制BCR/ABL激酶的致癌活性，從而 減少白血病發生。在一些實施方案中，ApoE肽的施用減少了受試者中BCR/ABL+細胞的生 長。在某些實施方案中，BCR/ABL+細胞對伊馬替尼(Gleevec)和/或達沙替尼(Sprycel) 具有抗性，即，上述伊馬替尼和/或達沙替尼抗性細胞的生長并不由這些化合物中的任一 所抑制。不愿拘于理論，相信ApoE肽可通過增加細胞內的PP2A活性(其隨即使BCR/ABL激 酶去磷酸化并失活)來有效地抑制伊馬替尼和/或達沙替尼抗性細胞。上述機理與伊馬替 尼或達沙替尼的機理不同，后者直接對BCR/ABL激酶起作用，并受所述激酶的突變影響。在 另一個實施方案中，所述白血病是慢性淋巴細胞性白血病(CLL)。在優選實施方案中，ApoE 肽的施用減少受試者中CD5+B細胞數。在另一個實施方案中，所述白血病是急性淋巴細胞 性白血病(ALL)。本發明還涵蓋了通過將有效量的至少一種ApoE肽施用于受試者而在受試者中治 療乳腺癌的方法。在一個實施方案中，所述乳腺癌以Her2表達為特征。在另一個實施方案 中，所述乳腺癌以雌激素受體表達為特征。ApoE肽的施用優選在其施用之后減少腫瘤生長。在某些實施方案中，本發明提供了包含至少一種ApoE肽的藥物組合物。在某些實 施方案中，本發明提供了包含至少一種ApoE肽與另一種用于治療、預防或緩解癌癥的藥物 的藥物組合物。本發明的肽的藥物組合物可以以下述方式提供使得其便于向有所需要的 受試者通過包括例如靜脈內、肌內、皮下或經皮施用。參見Remington，s Pharmaceutical Sciences, 19th ed. Remingtonand Gennaro, eds. Mack Publishing Co. , Easton, PA。其以 提述的方式并入本文。本發明的方法還提供了多種給藥日程，施用時機，治療的間隔和持續 時間，預防或緩解癌癥如CLL，CML和乳腺癌。還如本領域中已知的，包括了公開的肽的功能 性變體。與之一致，本發明還包括公開的肽及其功能性變體在制備用于如本文中所討論治 療多種形式的癌癥的藥物中的用途。列出下述實施例用于說明本發明，其不應視為對本發明的限制。實施例實施例1 :C0G肽調節Akt/NF κ B途徑多種類型的癌癥以磷脂酰肌醇-3激酶(PI_3K)/Akt途徑異常的組成型激活為特 征，該激活導致在癌細胞中建立抗細胞凋亡的環境，其與不良后果相關。當生長因子如胰 島素在質膜處激活PI3激酶時，磷酸肌醇發生磷酸化，導致Akt易位至質膜，于此其通過在 Thr308和kr473磷酸化而激活。一旦被激活，Akt通過兩個機理調節細胞存活必需的蛋白 質(圖1)。首先，Akt可通過藉由激酶介導的激活或抑制控制存活蛋白的功能來調節這些 存活蛋白。已經闡明了激活的Akt直接磷酸化胱天蛋白酶-9和Bad，從而使其失活。胱天 蛋白酶-9是在正常細胞凋亡級聯中早期激活的蛋白酶，而Bad是Bcl-2家族的促細胞凋亡 蛋白，其結合Bcl-xL并抑制其促存活功能。Akt對Bad的磷酸化抑制其促細胞凋亡活性， 并增加細胞中促生長的癌狀態。激活的Akt將細胞移向抗細胞凋亡狀態的第二種機理是通 過增加存活蛋白的轉錄和產生的信號傳導。例如，Akt激活通過激活I κ B激酶(I κ K)增 加Mcl-I的表達，其隨即磷酸化I κ B，NFkB的內源抑制劑，導致NFK B的釋放和激活。其 他調節NFk B的抗細胞凋亡基因包括Bcl-xL和Al，以及誘導型一氧化氮合酶(iNOS)。獨 立地顯示了 iNOS的上調與乳腺癌患者中的快速進展、復發的頻率和死亡率相關。在大約30%的乳腺癌中，組成型Akt激活可追蹤至HER2/Neu基因產物的增強表 達，所述產物為組成型激活的受體酪氨酸激酶，其激活PI-3激酶而導致Akt激活。PI-I 的類似激活導致BCR/Abl融合蛋白誘導慢性髓細胞性白血病(圖1A)。發現T細胞白血病 /淋巴瘤1癌基因(TCL1)，其涉及B細胞慢性淋巴細胞性白血病(B-CLL)的疾病發生，直 接結合 Akt 并增強 Akt 激酶活性(Pekarsky 等 Q000)Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 97 3028-3033)。因此，預計成熟B細胞中TCLl的表達產生增強的Akt激酶活性并增加多個抗 細胞凋亡因素的產生，導致CLL的下述特征，即細胞凋亡受破壞(圖1B)。為了確定COG肽是否調節PI-3激酶/Akt途徑以及NF κ B的后續激活，分析在COG 肽不存在和存在下暴露于細菌或細菌抗原(脂多糖)的細胞中該途徑中蛋白質的磷酸化狀 態。在第一系列的實驗中，將六孔板中的小鼠BV2小膠質細胞僅用lOOng/mL LPS或在5 μ M C0G133(SEQ ID NO :1)肽存在下用lOOng/mL LPS進行溫育。裂解細胞，并通過離心制備澄 清的提取物。將每泳道30 μ g的提取物上樣于聚丙烯酰胺凝膠，并在SDS緩沖液中運行。將 蛋白質從凝膠轉移至硝酸纖維素膜上，隨后用10%脫脂干奶粉(nonfat dry milk)對其進 行封閉。然后用抗磷酸-I κ Ba抗體對膜進行探測。用EnhancedChemiluminescence底物 (GE healthcare)對膜進行顯色，并通過膠片曝光顯影。然后剝去膜上的抗體，并使用非磷 酸特異性的抗I κ Ba抗體來重新探測總I κ B。將復制的印跡用抗GAPDH抗體探測。如圖 2A所示，C0G133肽減少LPS誘導的I κ B磷酸化。在去磷酸狀態，I κ B結合轉錄因子NFk B并阻止其易位至核而激活促存活蛋白的 轉錄。為了確定C0G133是否也減少NF κ B向核的易位，僅用LPS或在C0G133存在下用LPS 刺激BV2小膠質細胞，并從受刺激的細胞制備核提取物。將含有NFk B結合位點的放射性標 記的寡核苷酸添加至來自核提取物的蛋白質，并隨后通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離 所述蛋白質。存在于核提取物中的NFk B的量通過放射自顯影來檢測(圖2B)。在C0G133 存在下，核NF κ B減少，從而提供了該信號轉導級聯在用ApoE肽處理的細胞中被抑制的進 一步證據。
為了確定COG肽是否還可抑制上游Akt激酶的激活，將BV2小膠質細胞僅用IOng/ mL LPS或在ΙμΜ COGl 12 (SEQ ID NO 2)肽存在下用10ng/mLLPS處理。將細胞裂解液在 10%聚丙烯酰胺凝膠上運行，并隨后轉移至硝酸纖維素膜。用抗磷酸-Akt抗體或肌動蛋白 抗體探測印跡。進行Western印跡的光密度分析，并將從磷酸化Akt激酶獲得的信號相對 來自肌動蛋白的信號進行標準化。光密度分析的結果示于圖2C。COGl 12顯著地減少了 LPS 誘導的Akt激酶的磷酸化。Akt激酶可磷酸化并激活I K B激酶(I K K)，其導致I K B對NFK B的去阻抑 (de-pression)。如上所述，COG肽減少I κ B的磷酸化和隨后Toll樣受體4激動劑(LPS) 誘導的NFkB激活。為了確定COG肽是否還影響I κ K激活，在C0G112 (SEQ ID NO :2)存 在或不存在下暴露于嚙齒類檸檬酸桿菌細菌的年輕成年小鼠結腸(YAMC)細胞的胞質細胞 裂解液中評價I κ K活性。使用特定的ELISA測定法(K-LISATM檢測試劑盒，Calbiochem/ EMD Biosciences)測量I κ K活性。將胞質細胞提取物在96孔板的谷胱甘肽包被的孔中 用谷胱甘肽S轉移酶(GST)標記的ΙκΒ-α融合多肽底物溫育，所述底物包含和 Ser36lKB-a激酶磷酸化位點。磷酸化的GST-I κ Β_ α底物是使用辣根過氧化物酶偶合 的抗磷酸-ΙκΒ-α抗體來檢測的。在板讀數器中在450nm測量了與激酶活性成比例的吸 光度。由嚙齒類檸檬酸桿菌在COGl 12存在(實心方塊)或不存在(空心方塊)下誘導的 I κ K激活的時間進程示于圖2D。時間0表明細胞未用嚙齒類檸檬酸桿菌刺激。與C0G133 處理中觀察到的阻抑I κ B磷酸化和NF κ B激活類似，COGl 12實質性地減少了 I κ K活性。這些實驗的結果顯示COG肽能夠減少Akt激酶的激活，以及由刺激物誘導的下游 信號傳導，表明COG肽能夠有效地調節Akt/NF κ B信號傳導途徑的過度激活。實施例2 COGl 12 激活 PP2A將小鼠RAW巨噬細胞用2μ M COGl 12 (SEQ ID NO :2)或IOnM岡田酸(PP2A的抑制 劑)，或用R田酸以及C0G112溫育。在30分鐘之后，裂解細胞，并通過添加靶向PP2A催化 性C亞基的抗體將PP2A免疫沉淀。將一半的免疫沉淀通過SDS-PAGE分離，印跡至硝酸纖 維素上，并用抗PP2AC抗體探測。對剩下的部分通過將125 μ L含磷酸-蘇氨酸底物肽的測 定合劑添加至經免疫沉淀的酶來測定其活性。在37°C振蕩溫育之后，移取25 μ L等分試樣 并添加至鉬酸銨溶液(Upstate)，后者螯合游離的磷酸并在螯合物形成時變色。以多種時間 間隔移取等分試樣，并通過與磷酸標準曲線比較來確定從肽釋放的游離磷酸的量。磷酸釋 放的速率是通過線性擬合至時間進程數據來確定的，并用PP2A相對濃度進行標準化。通過 磷酸釋放測量的PP2A活性在C0G112存在下增加(圖3)，表明ApoE肽緩解了 PP2A活性的 基線抑制。如預想，在岡田酸單獨存在時，PP2A活性減少。然而，C0G112在岡田酸存在時增 加PP2A活性，表明在細胞中存在活性PP2A和無活性PP2A之間的平衡，且COGl 12可移動該 平衡以調節活性PP2A酶的量(圖幻。因此，細胞中PP2A的活性匯集可由ApoE肽調節。實施例3 :C0G112在體外殺滅B-CLL細胞認為B細胞在慢性淋巴細胞性白血病(B-CLL)中持久的抗細胞凋亡狀態是部分由 于Akt/NF κ B信號傳導級聯的過度激活。已知PP2A通過將Akt激酶和I κ K激酶去磷酸 化和失活來制衡該信號傳導途徑(Kuo等(2008) J Biol Chem.，Vol. 283 :1882-1892 ；Kray 等(2005) J Biol Chem.，Vol. 280 :35974-8 。PP2A還可通過將胱天蛋白酶去磷酸化和激 活來調節細胞凋亡途徑，胱天蛋白酶在細胞凋亡誘導的早期起作用。因此，細胞中減弱的(compromised)PP2A活性將促使Akt途徑的組成型激活，保持抗細胞凋亡狀態。事實上， 包含PPP2R1B基因一部分的Ilq22_q23處的缺失代表了 B-CLL中第二常見的染色體異常。 PPP2R1B基因編碼PP2A的Αβ恒定調節亞基，ΡΡ2Α通常作為腫瘤抑制劑為人所知。該缺失 導致PPP2R1B表達減少，并與B-CLL細胞中ΡΡ2Α活性的減少相關(Kalla等Q007)Eur J Cancer, Vol. 43 :1328-35)。這些患者以不良的存活為特征，且CLL腫瘤細胞顯示增加的存 活率。如實施例1和2中所示，COG肽可減少Akt/NFkB信號傳導級聯的激活，并激活 PP2A。為了確定COG肽是否能夠對抗B-CLL細胞中Akt/NFkB途徑的過度激活并有效地誘 導細胞凋亡，對從CLL患者新鮮分離的B-CLL細胞用COG肽進行了細胞毒性測試。收集來 自 CLL 患者的血，并使用B Cell Enrichment Cocktail 分離了 CD5+/ ⑶19+CLL細胞。該方法使用一種含有抗-⑶14、抗-⑶2和抗⑶16抗體的專利抗體合劑分別 耗盡了全血中的T細胞、單核細胞和NK細胞以去除T細胞、單核細胞和NK細胞。該抗體合 劑在人全血中與不需要的細胞交聯以倍增形成免疫花環(immunorosette)的紅血細胞，從 而增加了形成花環的細胞的密度，從而使得當用具有浮力的密度介質如Ficoll-Paque 離心時，其與游離的RBC —同沉淀。高度富集的B細胞或B-CLL細胞留在Ficoll和血漿的 界面處。將COG肽施與分離的B-CLL細胞(在96孔板中，0. 25 X IO6個細胞/孔)72小 時，之后，使用MTS測定法(Pharmacia)評價存活的細胞。確定了有效殺滅50%的輸入CLL 細胞的COG肽的濃度(ED50)。如表I所示，C0G133(SEQ ID NO 1)相對于C0G056 (SEQ ID NO 3)對照其活性略有改善。C0G056是與C0G133含有相同氨基酸組成但是具有消除了該 肽體內和體外活性的亂序序列的形式。C0G248 (SEQ ID NO :5)為C0G133的修飾形式，與 C0G133相比顯示增強的活性。由觸角蛋白同源框域蛋白質轉導域提供的細胞穿透的增加 導致C0G133(C0G112 ;SEQ ID NO :2)的EC50強烈地增加至2 士 120nM。有趣的是，相對于 C0G133顯示出改進的在小膠質細胞中抑制NO產生的效力的C0G1410(SEQ ID NO 4)在針 對B-CLL細胞的細胞毒性的效力方面未顯示區別。
權利要求
1.一種在有所需要的受試者中治療癌癥的方法，包括向所述受試者施用有效量的至少 一種ApoE肽。
2.權利要求1的方法，其中所述ApoE肽的施用減少受試者中至少一種癌癥癥狀。
3.權利要求1的方法，其中所述ApoE肽的施用增加受試者癌細胞中的PP2A活性。
4.權利要求1的方法，其中所述ApoE肽的施用減少受試者癌細胞中的Akt激酶、Iκ K 激酶或NF κ B活性。
5.權利要求1的方法，其中所述ApoE肽含有17個或更多個氨基酸。
6.權利要求1的方法，其中所述ApoE肽含有20個或更多個氨基酸。
7.權利要求1的方法，其中所述ApoE肽含有30個或更多個氨基酸。
8.權利要求1的方法，其中所述ApoE肽含有40個或更多個氨基酸。
9.權利要求1的方法，其中所述ApoE肽含有SEQID NO=I的序列。
10.權利要求1的方法，其中所述ApoE肽偶合于蛋白質轉導域。
11.權利要求10的方法，其中所述蛋白質轉導域選自下組來源于觸角蛋白、TAT、 SynBU SynB3, SynB5和聚精氨酸的肽。
12.權利要求11的方法，其中所述ApoE肽含有SEQID NO 2的序列。
13.權利要求1的方法，其中所述癌癥為白血病。
14.權利要求13的方法，其中所述白血病是慢性淋巴細胞性白血病(CLL)。
15.權利要求14的方法，其中所述ApoE肽的施用減少受試者中CD5+B細胞數。
16.權利要求13的方法，其中所述白血病是慢性髓細胞性白血病(CML)。
17.權利要求16的方法，其中所述ApoE肽的施用減少受試者中BCR/ABL+細胞的生長。
18.權利要求17的方法，其中所述BCR/ABL+細胞對伊馬替尼或達沙替尼有抗性。
19.權利要求13的方法，其中所述白血病是急性淋巴細胞性白血病(ALL)。
20.權利要求1的方法，其中所述癌癥是乳腺癌。
21.權利要求20的方法，其中所述乳腺癌以Her2表達為特征。
22.權利要求20的方法，其中所述乳腺癌以雌激素受體表達為特征。
全文摘要
公開了在受試者中通過施用ApoE肽治療慢性淋巴細胞性白血病、慢性髓細胞性白血病和乳腺癌的方法。
文檔編號A61K38/00GK102137680SQ200980133762
公開日2011年7月27日 申請日期2009年7月1日 優先權日2008年7月1日
發明者戴爾·J·克里斯滕森, 邁克爾·P·維特克 申請人:克格諾西有限公司