專利名稱：嵌合利尿鈉多肽和抑制心臟重構的方法
技術領域：
本申請文件涉及包含利尿鈉多肽的組合物，和利用利尿鈉肽來防止、降低和/或 抑制心臟重構以及防止、降低和/或抑制心肌梗死(MI)后的缺血損傷的方法。
背景技術：
利尿鈉肽家族包括心激素心房利尿鈉肽(ANP)、B-型利尿鈉肽(BNP)、C-型利尿 鈉肽(CNP)和樹眼鏡蛇屬(Dendroaspis)利尿鈉肽(DNP)，所有這些都通過充分表征的微 粒鳥苷酸環化酶受體(即，NPR-A用于ANP和BNP ；NPR-B用于CNP)和第二信使環3’ 5’ 鳥苷單磷酸(cGMP)發揮作用(Kuhn(2003)Circ Res 93 :700_709 ;Tawaragi 等，(1991) Biochem Biophys Res Commun 175 :645_651 ；禾口 Komatsu 等，(1991)Endocrinology 129 1104-1106)。CNP具有有益的血管和抗增殖特性。由于缺乏腎臟作用，CNP降低血壓的作用 小于ANP和BNP，但由于具有靜脈舒張作用因此能降低心臟負載。DNP是一種能顯著降低血 壓的有效的利尿鈉肽和利尿肽。CNP和DNP通過獨立的鳥苷酸環化酶受體發揮作用。發明概述本申請文件部分基于鑒定出了將兩種單獨利尿鈉肽的有益特性加以組合的嵌 合肽組合物和方法。如本文所述，CNP(GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC ;SEQ ID NO :1)與DNP 的15-AA線性C-末端(PSLRDPRPNAPSTSA ;SEQ ID NO 2)融合得到了一種合成的嵌合肽 (CD-NP)，其在體內具有利尿鈉和利尿、增強GFR、降低心臟負載、抑制腎素、以及極輕微降低 血壓的特性。此外，在利用心臟成纖維細胞(CF)進行的體外研究證實，CD-NP具有活化cGMP 和抗增殖特性。此外，根據本發明的描述，可使用其他利尿鈉多肽和嵌合多肽。本文披露的 發現促成了利尿鈉肽藥物研發領域中一項革命性的設計策略，從而能夠產生具有優于天然 利尿鈉肽的特性，同時在治療諸如急性心力衰竭(AHF)、急性心肌梗死(AMI)、再灌注損傷、 缺血損傷和心臟重構等心腎疾病狀態時具有潛在有益功效且安全的治療肽。一方面，本申請文件的特征在于一種降低被鑒定為有此需要的對象的心臟重構的 方法，所述方法包括給予所述對象包含藥學上可接受的載體和能夠升高所述對象尿液和血 漿cGMP水平的多肽的組合物，其中，所述組合物的給予量能使一個或多個心臟重構參數的 水平相比給予所述組合物之前所述一個或多個參數的水平有效改變至少10個百分點，其 中所述一個或多個參數選自下組心臟負載降低、腎小球濾過率升高、醛固酮水平降低、血 漿腎素活性降低、血管緊張素II水平降低、心臟成纖維細胞增殖降低、左心室質量降低、左 心室肥大減輕、心室纖維化減輕、射血分數升高、左心室收縮末期內徑降低、肺毛細血管楔壓降低、右房壓降低、和平均動脈壓降低。所述多肽可以是利尿鈉多肽。所述利尿鈉多肽可以是嵌合利尿鈉多肽，其包含(a) 第一利尿鈉多肽的環結構或所述第一利尿鈉多肽環結構的變體，和(b)第二利尿鈉多肽的 氨基酸序列或所述第二利尿鈉多肽所述氨基酸序列的變體。所述利尿鈉多肽可以包含SEQ ID NO 3所示氨基酸序列，但相對于SEQ ID NO 3所示序列可具有1、2、3、4、或5個氨基酸 取代。所述多肽能夠結合NPR-B受體和NRP-A受體。所述多肽在給予所述對象后的消除半 衰期為至少15分鐘。所述方法可包括以連續靜脈輸注方式給予所述組合物(例如，1-7天)。所述方法 可包括以連續靜脈輸注形式給予所述組合物1-7天，隨后皮下給予所述組合物5-30天。所 述方法可包括以約0. Ing多肽/千克體重/分鐘至約30ng多肽/千克體重/分鐘的劑量 以連續靜脈輸注形式給予所述組合物，隨后以約IOng多肽/千克體重/天至約30ng多肽/ 千克體重/天的劑量皮下給予所述組合物。所述方法可包括以約0. Ing多肽/千克體重/ 分鐘至約30ng多肽/千克體重/分鐘的劑量以連續靜脈輸注形式給予所述組合物約3小 時至約7天，隨后以約IOng多肽/千克體重/天至約30ng多肽/千克體重/天的劑量皮 下給予所述組合物約5-約30天。所述對象被鑒定患有急性心力衰竭或急性心肌梗死。所述方法可包括在再灌注開 始時或大致開始時或在再灌注開始后約3小時開始給予所述連續靜脈輸注。所述組合物可 在再灌注后約3小時至約12小時給予。所述方法可包括以約Ing多肽/千克體重/分鐘 至約30ng多肽/千克體重/分鐘(例如，約IOng多肽/千克體重/分鐘、約12. 5ng多肽 /千克體重/分鐘、約15ng多肽/千克體重/分鐘、約17. 5ng多肽/千克體重/分鐘、或 約20ng多肽/千克體重/分鐘)的劑量給予所述組合物。所述方法可進一步包括監測所 述對象中一個或多個心臟重構參數的水平。另一方面，本發明的特征在于一種包含藥學上可接受的載體和多肽的組合物，其 中所述多肽能夠升高對象的尿液和血漿cGMP水平，其中所述組合物當被給予鑒定為有此 需要的對象時導致心臟重構降低，其中所述降低的或抑制的心臟重構通過選自下組的一個 或多個參數水平的改變來表示心臟負載降低、腎小球濾過率升高、醛固酮水平降低、血漿 腎素活性降低、血管緊張素Π水平降低、心臟成纖維細胞增殖降低、左心室質量降低、左心 室肥大減輕、心室纖維化減輕、射血分數升高、左心室收縮末期內徑降低、肺毛細血管楔壓 降低、右房壓降低、和平均動脈壓降低，且其中所述一個或多個參數的水平相比所述給藥之 前所述一個或多個參數的水平改變至少10個百分點。所述多肽是利尿鈉多肽。所述利尿鈉多肽可以是嵌合利尿鈉多肽，其包含(a)第 一利尿鈉多肽的環結構或所述第一利尿鈉多肽環結構的變體，和(b)第二利尿鈉多肽的氨 基酸序列或所述第二利尿鈉多肽所述氨基酸序列的變體。所述利尿鈉多肽可以包含SEQ ID NO :3所示氨基酸序列，但相對于SEQ ID N0:3所示序列可具有1、2、3、4、或5個氨基酸取 代。所述多肽能夠結合NPR-B受體和NRP-A受體。所述多肽在給予所述對象后的消除半衰 期為至少15分鐘。所述利尿鈉多肽可包含與SEQ ID NO :3所述氨基酸序列有91-98%相同 的氨基酸序列。所述利尿鈉多肽可以包含SEQ ID NO :3所示氨基酸序列，但相對于SEQ ID NO 3所示序列可具有1、2、3、4、或5個氨基酸取代。所述對象被鑒定患有急性心力衰竭或 急性心肌梗死。所述藥物載體可以是生理鹽水或者葡萄糖和水。
除非另有限定，在本文中使用的所有技術和科學術語具有和本領域普通技術人員 共知的相同含義。雖然在實踐本發明時可以采用類似于或等同于本文所述的那些方法和材 料，但是，下面描述了合適的方法和材料。本文中述及的所有出版物、專利申請、專利和其他 文獻都全文參考結合于本文。在矛盾時，以本說明書(包括定義)為準。此外，材料、方法 和例子都只是說明性的，并不構成限制。在附圖和下述描述中詳細描述了本發明的一種或多種實施方式。通過詳述和附圖 以及權利要求書，不難了解本發明的其它特征、目的和優點。
圖 1 是 CNP (SEQ ID NO 1) ,DNP (SEQ ID NO 17) ,37-AA 嵌合利尿鈉肽、CD-NP (SEQ ID NO 3)、和被稱為CNP-C的27-AA “轉化”CNP(SEQ ID NO 4)的氨基酸序列和結構的示意圖。圖2中的兩張圖顯示了 DNP的C-末端對正常犬(η = 6)的鈉泌尿排泄(UNaV ；圖 2Α)和尿流量(UV;圖2Β)的作用的實施例。數據表示為平均值士SE。C-末端，42ng/kg/分 鐘靜脈輸注C-末端。*相比基線P < 0. 05。圖3中的一系列圖顯示了⑶-NP對正常犬(η = 6)的平均動脈壓(MAP ；圖3Α)、 右房壓(RAP ；圖3B)和肺毛細血管壓(PCWP ；圖3C)的作用的實施例。數據表示為平均值 + SE0 CD-NP 10，劑量為 CD-NP 10ng/kg/分鐘；CD-NP 50，劑量為 CD-NP 50ng/kg/分鐘; CD-NP 100，劑量為 CD-NP 100ng/kg/ 分鐘。* 相比基線 P < 0. 05。圖4中的一系列圖顯示了⑶-NP對正常犬(η = 6)的鈉泌尿排泄(UNaV圖4Α)、尿 流量(UV ；圖4Β)和腎小球濾過率(GFR ；圖4C)的作用的實施例。數據表示為平均值士SE。 CD-NP 10，劑量為 CD-NP 10ng/kg/ 分鐘；CD-NP 50，劑量為 CD-NP 50ng/kg/ 分鐘；CD-NP 100，劑量為CD-NP 100ng/kg/分鐘。*相比基線P <0.05。圖5中的兩張圖顯示了⑶-NP對正常犬(η = 6)的近端鈉重吸收分數(PFRNa ；圖 5Α)和遠端鈉重吸收分數(DFRNa ；圖5Β)的作用的實施例。數據表示為平均值士SE。⑶-NP 10，劑量為 CD-NP 10ng/kg/分鐘；CD-NP 50，劑量為 CD-NP 50ng/kg/分鐘；CD-NP 100，劑 量為CD-NP 100ng/kg/分鐘。*相比基線P <0.05。圖6中的兩張圖顯示了兩種劑量的⑶-NP和等摩爾劑量的人BNP在兩組正常犬 (每組η = 6)中的作用的實施例。圖6Α顯示了⑶-NP對平均動脈壓(MAP)的作用，圖6B 顯示了⑶-NP對腎小球濾過率(GFR)的作用。實心條是⑶-NP，空心條是BNP。數據表示 為平均值士SE。⑶-NP 10，劑量為⑶-NP lOng/kg/分鐘，或者在另一組中為等摩爾劑量的 BNP KD-NP 50，劑量為⑶-NP 50ng/kg/分鐘或者在另一組中為等摩爾劑量的BNP。*相比 基線P < 0. 05。f兩組之間的P < 0. 05。圖7中的兩張圖顯示了⑶-NP對人CF的作用的實施例。圖7A顯示了⑶-NP對 人CF中cGMP生成的作用。數據表示為平均值士SE。*相比未處理P < 0.05 相比 CP-NP IiT11M P < 0. 05 ；+ 相比 CD-NP ICT8M P < 0. 05。圖 7B 顯示了 CD-NP 對人 CF 的抗增 殖作用的實施例，如通過比色法測得的用光密度單位表示的BrdU攝取所示。對照，未處理 的人心臟成纖維細胞；心臟營養素-1，心臟營養素-1作用下成纖維細胞的增殖；心臟營養 素-1+⑶-NP，加入心臟營養素-1的⑶-NP刺激成纖維細胞。數據表示為平均值士SE。*相比對照P < 0. 05。圖8顯示了一個實施方式中心肌梗死(MI)三周后大鼠的左心室(LV)質量。MI， 未處理；MI+CDNP，MI 后用 1. 7xl(T7g/kg/ 分鐘 CD-NP 處理 2 周。圖9A中的一系列圖顯示了如圖所示用⑶-NP或CNP處理的犬的血漿cGMP水 平(左圖)、尿cGMP排泄(中圖)以及cGMP的凈腎臟生成(右圖)。數值表示為平均值 士SEM(CD-NP，η = 9-10 ；CNP, η = 7-9)。相比輸注前進行了組內比較(平均值士SEM，P < 0. 05% P < 0.011·)，并進行了組間比較(P <0.00111)。時間表示清除率中值。圖9Β中的兩 張圖顯示了如圖所示用⑶-NP或CNP處理的犬的尿流量(左圖)和尿鈉排泄(右圖)。數 值表示為平均值士SEM。相比輸注前進行了組內比較(平均值士SEM，P < 0. 05*,P < 0.01卞 )，并進行了組間比較(Ρ<0.05$，Ρ<0.001η) (CD-NP，n = 10 ；CNP,n = 7)。時間表示清除 率中值。圖10A-10D顯示了如圖所示用⑶-NP或安慰劑處理的人的血漿cGMP水平(圖 10A)、尿cGMP排泄(圖10B)、尿鈉排泄反應(圖10C)以及血壓反應(圖10D)。相比輸注 前進行了組內比較(平均值士SEM，P < 0. 05*,P < 0.011·)，并進行了組間比較(P = 0.0111)。 圖IOE顯示了在分離的犬腎小球中在不存在或存在NPR-A拮抗劑(1 μ M)時cGMP對CD-NP 的反應。*相比空白P < 0. 05，1"相比空白P < 0.0001。發明詳述化合物本申請文件提供了利尿鈉化合物，所述化合物可用于在有此需要的對象中提高 cGMP水平和減低心臟重構。如本文所述，該化合物可結合NPR-A受體和/或NPR-B受體，并 且，在某些情況下結合NPR-C受體。此外，在給予對象后所述化合物的消除半衰期長于天然 NP。在一些實施方式中，本文提供的化合物可以是多肽。例如，本申請文件描述了示例性的分離的利尿鈉多肽，所述多肽能夠抑制或降低 AHF、AMI、再灌注損傷、缺血損傷和心臟重構。在一些實施方式中，利尿鈉肽可用于治療、抑 制、和/或預防心臟重構和缺血損傷，尤其是在AMI和/或AHF之后。文中，術語“利尿鈉多 肽”或“NP”包括天然(天然形成的，野生型)NP (例如，ANP、BNP、CNP、DNP和尿擴張素)，天 然NP的一個或多個部分，天然NP的變體，或天然NP的嵌合肽，天然NP的部分，或者天然NP 或天然NP的部分的變體。在一些實施方式中，NP僅包括天然NP成熟形式的一部分。含有 來自CNP和DNP的氨基酸序列的NP尤其有用，但其他天然和嵌合NP也可考慮用于本文。CNP是一種與ANP和BNP有結構同源性但在遺傳上不同的22-氨基酸肽。與 ANP或BNP不同，CNP缺乏C-末端氨基酸延伸，這可能部分解釋了它缺乏利尿鈉特性的原 因(Clavell 等，(1993) Am Heart J 1104-1106 ；和 Hunt 等，(1994) J Clin Endocrinol Metab 78:1428-1435)。CNP 主要是一種內皮細胞延伸肽(Stingo 等，(1992)Am Heart J H1318-1321 ；Ogawa 等，(1992)Hypertension 19 809-813 ；Doi 等，(2001)Arterioscler Thromb Vasc Biol 21 930-936 ；Naruko φ, (2005) Atherosclerosis 181 241-250 ；Horio 等，(2003)Endocrinology 144 :2279_2284 ;Langenickel 等，(2006)Proc Natl Acad Sci USA 103 :4735-4740 ；和Scotland等，(2005)Proc Natl Acad Sci USA 102:14452-14457)。 在分離的靜脈環和動脈環中，CNP激活靜脈中的NPR-B受體，而ANP和BNP同時結合動脈和 靜脈內的NPR-A受體。這與CNP的降低血壓的作用弱于ANP和BNP —致(Wei等，(1993) AmJ Physiol 264 :H71_73 ；Igaki 等，(1998)Hypertens Res 21 :7_13 ；和 LaVilla 等，(1998) Clin Sci(Lond)95 :595-602)。除了靜脈舒張特性，CNP在CF中的抗增殖能力和膠原抑制特性強于ANP和 BNP(Horio等，同上)。例如，研究顯示，給患有AMI的嚙齒動物連續14天輸注CNP能顯 著減輕心室擴張、心臟纖維化和心肌細胞肥大(Soeki等，(2005) J Am Coll Cardiol 45: 608-616)。慢性輸注CNP不導致降低血壓的作用。不同于ANP和BNP，當給人輸注時CNP缺乏顯著的利尿鈉和利尿作用。這可以解 釋CNP對諸如AHF的鈉和水阻擋綜合征無效，盡管它具有突出的靜脈舒張和抗纖維化特性 (Igaki等，同上；和La Villa等，同上)。DNP最初分離自綠色樹眼鏡蛇。DNP在體內顯著利尿鈉和利尿，并具有降低心 臟負載的作用，但具有顯著降低血壓的特性(Schweitz等，(1992)J Biol Chem 267 13928-13932 ;Lisy 等，(1999)Kidney Int 56 :502_508 ；和 Lisy 等，(2001)Hypertension 37 1089-1094)。與ANP和BNP —樣，DNP通過NPR-A受體發揮作用，即被ANP飽和將顯著 降低DNP在培養的人內皮細胞內對cGMP的活化作用。其實，包括利鈉作用和降血壓作用在 內的DNP的體內作用與NPR-A的活化一致，這種作用密切模擬ANP和BNP的特性，但不同于 CNP。實際上，與ANP和BNP相比，DNP在人心肌中已顯示出對NPR-A受體具有較高親和力 (Singh 等，(2006) Circ Res 99:183-190)。DNP具有已知利尿鈉肽中最長的C-末端，由15個氨基酸構成，相比之下ANP為5 個，BNP為6個，而CNP沒有。DNP的長C-末端使得DNP對中性肽鏈內切酶(NEP)的降解 具有較高耐性，因此有助于增強其利尿鈉和利尿作用(Chen等，(2002) J Am Coll Cardiol 40:1186-1191)。此外，CNP缺乏C-末端也解釋了在三種已知的內源利尿鈉肽中CNP最易 于被NEP降解。缺乏C-末端也可以解釋CNP的腎臟作用，因為NEP在腎臟中具有最高表達 (Kenny 和 Stephenson(1988)FEBS Lett 232 :1_8)。尿擴張素是一種具有強利尿鈉和利尿活性的NPR-A受體的ANP-樣激動劑。尿擴 張素定位在腎臟內，是從與ANP相同的前體差異加工得到的，并分泌到尿液中。尿擴張素的 32氨基酸序列包括ANP的完整的28氨基酸序列，并在其N-末端有4個氨基酸延伸。術語“心臟重構”表示可與MI、AHF或其他征狀一起發生的對心臟的影響。其中包 括，例如，心臟膨脹、肌細胞肥大和心臟纖維化(即間質成纖維細胞增殖)。本文提供的NP 可抑制或防止與AMI或AHF —起發生的心臟重構。在一些實施方式中，表示降低的心臟重 構的參數可包括以下一個或多個心臟負載降低(即，心臟壓力降低)，腎小球濾過率升高 (GFR)，血漿腎素活性降低(PRA)，血管緊張素II水平降低，心臟成纖維細胞增殖降低，左心 室(LV)肥大減輕，LV質量降低(表示纖維化和肥大減輕)，肺毛細血管楔壓降低(PWCP;左 心房壓力的間接度量)，右房壓降低，平均動脈壓降低，醛固酮水平降低(預示抗纖維化作 用)，心室纖維化減輕，射血分數升高，以及LV收縮末期內徑減小。為確定NP是否能夠抑制 或降低心臟重構，可采用本領域已知的和/或本文所述的方法評價這些參數中的一個或多 個(例如，在用NP治療之前和之后)。諸如AMI和AHF等征狀可導致腎損傷以及心臟損傷。在一些實施方式中，本文提 供的NP還能保護腎臟免遭AMI和AHF損傷。表示腎臟保護作用的參數包括，例如，近端鈉 重吸收分數(PFRNa)降低，遠端鈉重吸收分數(DFRNa)降低，尿鈉排泄(UNaV)升高以及尿
8流量(UV)增加。可評價這些參數中的任何一個或多個(例如，在給予NP之前和之后)以 確定NP是否具有腎臟保護作用。評價這些參數的方法是本領域已知的，并在本文中描述。術語“分離的多肽”表示滿足以下條件的多肽(1)與天然發現的蛋白質無關，(2) 不含相同來源的其他蛋白質(例如，不含人蛋白質)，(3)由來自不同物種的細胞表達，或 (4)不是天然產生的。本文提供的分離的多肽通常含有10個或更多(例如，12個或更多、 15個或更多、或者20個或更多)氨基酸殘基。分離的多肽可以，例如，由DNA或RNA，包括 合成的DNA或RNA，或它們的某些組合編碼。嵌合NP可包括兩個多個個體NP的氨基酸序列。在一些實施方式中，嵌合多肽可 包括CNP和DNP的氨基酸序列。此外，在一些情況下，嵌合NP可包括環結構和半胱氨酸鍵 (例如，ANP、BNP、CNP或DNP的環結構和半胱氨酸鍵)與其他NP的一個或多個氨基酸區段 的組合。例如，嵌合CD-NP可包括CNP的完整22-AA序列(GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC ；SEQ ID NO 1)以及 DNP 的 15-AA C-末端(PSLRDPRPNAPSTSA ;SEQ ID NO :2)，因此可具有 SEQ ID NO 3 所述氨基酸序列(GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTSA)。在一些實施方式中， 嵌合NP可包括CNP和尿擴張素的氨基酸序列。例如，嵌合⑶-NP可包括CNP的環結構和二 硫鍵(CFGLKLDRIGSMSGLGC ；SEQ ID NO 5)以及尿擴張素的 10氨基酸N-末端(TAPRSLRRSS ； SEQ ID NO 6)和 5 氨基酸 C-末端(NSFRY ；SEQ ID NO 7)，因此可具有序列 TAPRSLRRSSCF GLKLDRIGSMSGLGCNSFRY(SEQ ID NO :8)。在一些情況下，嵌合NP可在SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :8的一個或多個位置(例 如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個位置)上包括突變(例如，取代、添加或缺失)。變體NP，例 如，相對于天然NP氨基酸序列具有一個或多個氨基酸取代的變體，可按照本文所述進行制 備和修飾。在一些情況下，可通過選擇不顯著改變以下情況的取代制造氨基酸取代(a)被 取代區域的肽主鏈的結構，(b)靶位點上分子的電荷或疏水性，或(c)側鏈的大小(bulk)。 例如，天然殘基根據側鏈特性可分成以下幾組(1)疏水性氨基酸(正亮氨酸、甲硫氨酸、丙 氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸)；(2)中性親水性氨基酸(半胱氨酸、絲氨酸和蘇氨酸)； (3)酸性氨基酸(天冬氨酸和谷氨酸)；(4)堿性氨基酸(天冬酰胺、谷氨酰胺、組氨酸、賴 氨酸和精氨酸)；(5)影響鏈取向的氨基酸(甘氨酸和脯氨酸)；和(6)芳香性氨基酸(色 氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸)。用這些基團進行的取代可被認為是保守性取代。有用的取代的 非限制性的例子包括但不限于，用纈氨酸取代丙氨酸，用賴氨酸取代精氨酸，用谷氨酰胺取 代天冬酰胺，用谷氨酸取代天冬氨酸，用絲氨酸取代半胱氨酸，用天冬酰胺取代谷氨酰胺， 用天冬氨酸取代谷氨酸，用脯氨酸取代甘氨酸，用精氨酸取代組氨酸，用亮氨酸取代異亮氨 酸，用異亮氨酸取代亮氨酸，用精氨酸取代賴氨酸，用亮氨酸取代甲硫氨酸，用亮氨酸取代 苯丙氨酸，用甘氨酸取代脯氨酸，用蘇氨酸取代絲氨酸，用絲氨酸取代蘇氨酸，用酪氨酸取 代色氨酸，用苯丙氨酸取代酪氨酸，和/或用亮氨酸取代纈氨酸。變體⑶-NP的非限制性例子包括PLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTSA(SEQ ID NO 9),GISKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTSA(SEQ ID NO: 10)，GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTTA(SEQ ID NO: 11)，GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTSV(SEQ ID NO: 12)，GLTKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTSA(SEQ ID NO: 13)，
原始殘基示例性取代優選取代AlaVal, Leu, lieValArgLys, Gin,AsnLysAsnGin, His，Lys, ArgGlnAspGluGluCysSerSerGlnAsnAsnGluAspAspGlyProProHisAsn，Gin, Lys, ArgArgIleLeu, Val, Met，Ala，Phe，正亮氨酸LeuLeuNorleucine，lie, Val, Met，Ala，PhelieLysArg，Gin, AsnArgMetLeu, Phe, lieLeuPheLeu, Val, lie, AlaLeuProGlyGlySerThrThrThrSerSerTrpTyrTyrTyrTrp, Phe, Thr, SerPhe
10
GLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSTSA(SEQ ID NO: 14)， GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPSSSA(SEQ ID NO: 15)，禾口 GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGCPSLRDPRPNAPTTSA(SEQ ID NO 16). 可在CD-NP內任何位置進行的保守性取代的其它例子列在表1中。 表1
保守性氨基酸取代的例子
權利要求
1.一種降低被鑒定為有此需要的對象的心臟重構的方法，所述方法包括給予所述對象 包含藥學上可接受的載體和能夠升高所述對象尿液和血漿環3’5’鳥苷單磷酸(cGMP)水平 的多肽的組合物，其中，所述組合物的給予量能使一個或多個心臟重構參數的水平相比給 予所述組合物之前所述一個或多個參數的水平有效改變至少10個百分點，其中所述一個 或多個參數選自下組心臟負載降低、腎小球濾過率升高、醛固酮水平降低、血漿腎素活性 降低、血管緊張素II水平降低、心臟成纖維細胞增殖降低、左心室質量降低、左心室肥大減 輕、心室纖維化減輕、射血分數升高、左心室收縮末期內徑降低、肺毛細血管楔壓降低、右房 壓降低、和平均動脈壓降低。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述多肽是利尿鈉多肽。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述利尿鈉多肽是嵌合利尿鈉多肽，其包含 (a)第一利尿鈉多肽的環結構或所述第一利尿鈉多肽環結構的變體，和(b)第二利尿鈉多 肽的氨基酸序列或所述第二利尿鈉多肽所述氨基酸序列的變體。
4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述利尿鈉多肽包含SEQID N0:3所示氨 基酸序列，但相對于SEQ ID N0:3所示序列具有1、2、3、4、或5個氨基酸取代。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述多肽能夠結合NPR-B受體和NRP-A受體。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述多肽在給予所述對象后的消除半衰期 為至少15分鐘。
7.如權利要求1所述的方法，包括以連續靜脈輸注形式給予所述組合物。
8.如權利要求7所述的方法，包括給予所述連續靜脈輸注1-7天。
9.如權利要求1所述的方法，包括以連續靜脈輸注形式給予所述組合物1-7天，隨后皮 下給予所述組合物5-30天。
10.如權利要求1所述的方法，包括以約0.Ing多肽/千克體重/分鐘至約30ng多肽 /千克體重/分鐘的劑量以連續靜脈輸注形式給予所述組合物，隨后以約IOng多肽/千克 體重/天至約30ng多肽/千克體重/天的劑量皮下給予所述組合物。
11.如權利要求1所述的方法，包括以約0.Ing多肽/千克體重/分鐘至約30ng多肽 /千克體重/分鐘的劑量以連續靜脈輸注形式給予所述組合物約3小時至約7天，隨后以 約IOng多肽/千克體重/天至約30ng多肽/千克體重/天的劑量皮下給予所述組合物約 5-約30天。
12.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述對象被鑒定患有急性心力衰竭或急性 心肌梗死。
13.如權利要求12所述的方法，包括在再灌注開始時或大致開始時給予所述連續靜脈輸注。
14.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述組合物在再灌注開始后約3小時時開始給予。
15.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述組合物在再灌注后約3小時至約12 小時給予。
16.如權利要求1所述的方法，包括以約Ing多肽/千克體重/分鐘至約30ng多肽/ 千克體重/分鐘的劑量給予所述組合物。
17.如權利要求1所述的方法，還包括監測所述對象的所述一個或多個心臟重構參數 的水平。
18.—種包含藥學上可接受的載體和多肽的組合物，其中所述多肽能夠升高對象的尿 液和血漿cGMP水平，其中所述組合物給予鑒定為有此需要的對象時導致心臟重構降低，其 中所述降低的或抑制的心臟重構通過選自下組的一個或多個參數水平的改變來表示心臟 負載降低、腎小球濾過率升高、醛固酮水平降低、血漿腎素活性降低、血管緊張素Π水平降 低、心臟成纖維細胞增殖降低、左心室質量降低、左心室肥大減輕、心室纖維化減輕、射血分 數升高、左心室收縮末期內徑降低、肺毛細血管楔壓降低、右房壓降低、和平均動脈壓降低， 且其中所述一個或多個參數的水平相比所述給藥之前所述一個或多個參數的水平改變至 少10個百分點。
19.如權利要求18所述的組合物，其特征在于，所述多肽是利尿鈉多肽。
20.如權利要求19所述的組合物，其特征在于，所述利尿鈉多肽是嵌合利尿鈉多肽，其 包含(a)第一利尿鈉多肽的環結構或所述第一利尿鈉多肽環結構的變體，和(b)第二利尿 鈉多肽的氨基酸序列或所述第二利尿鈉多肽所述氨基酸序列的變體。
21.如權利要求19所述的組合物，其特征在于，所述利尿鈉多肽包含SEQID NO :3所 示氨基酸序列，但相對于SEQ ID N0:3所示序列具有1、2、3、4、或5個氨基酸取代。
22.如權利要求18所述的組合物，其特征在于，所述多肽能夠結合NPR-B受體和NRP-A 受體。
23.如權利要求18所述的組合物，其特征在于，所述多肽在給予所述對象后的消除半 衰期為至少15分鐘。
24.如權利要求18所述的組合物，其特征在于，所述利尿鈉多肽包含與SEQID NO :3所 示氨基酸序列有91-98%相同的氨基酸序列。
25.如權利要求18所述的組合物，其特征在于，所述利尿鈉多肽包含SEQID NO :3所 示氨基酸序列，但相對于SEQ ID N0:3所示序列具有1、2、3、4、或5個氨基酸取代。
26.如權利要求18所述的組合物，其特征在于，所述對象被鑒定患有急性心力衰竭或 急性心肌梗死。
27.如權利要求18所述組合物，其特征在于，所述藥物載體是生理鹽水或葡萄糖與水。
全文摘要
材料和方法涉及包含CNP的氨基酸序列和DNP的C-末端序列的嵌合多肽。與BNP相比，所述多肽具有利尿鈉和利尿、增強GFR、降低心臟負載、抑制腎素以及不顯著降低血壓的特性。所述多肽還抑制心臟成纖維細胞增殖。
文檔編號A61P9/10GK102143757SQ200980128932
公開日2011年8月3日 申請日期2009年6月3日 優先權日2008年6月6日
發明者J·C·伯內特, O·里斯, 陳鴻豪 申請人:梅約醫學教育與研究基金會