患有輕度認(rèn)知障礙需要治療的患者的鑒定方法以及這種患者的治療的制作方法

專利名稱：患有輕度認(rèn)知障礙需要治療的患者的鑒定方法以及這種患者的治療的制作方法
患有輕度認(rèn)知障礙需要治療的患者的鑒定方法以及這種患
者的治療本發(fā)明涉及患有輕度認(rèn)知障礙的患者的新的體外風(fēng)險(xiǎn)度分層方法，目的在于當(dāng)患 者處于其最初的輕度認(rèn)知障礙惡化和發(fā)生有臨床表現(xiàn)的阿茨海默氏癡呆型神經(jīng)變性疾病 的風(fēng)險(xiǎn)增加時(shí)，鑒定需要治療的患者，以及目的在于給這種需要治療的患者提供某些藥物， 這些藥物對(duì)于與此相關(guān)的治療目的的適合性所組成的知識(shí)，形成了本發(fā)明的基本部分。本發(fā)明還涉及在生物標(biāo)志物測(cè)量基礎(chǔ)上鑒定到的患有輕度認(rèn)知障礙的某些風(fēng)險(xiǎn) 患者的預(yù)防性治療方法，所述治療方法使用心血管藥劑以預(yù)防或延遲有臨床表現(xiàn)的阿茨海 默氏癡呆型神經(jīng)變性疾病的發(fā)生，或在這種方法中心血管藥劑的活性物質(zhì)的應(yīng)用和ANP受 體拮抗劑的應(yīng)用，以及用于所述預(yù)防或延遲有臨床表現(xiàn)的阿茨海默氏癡呆型神經(jīng)變性疾病 的發(fā)生的藥物的生產(chǎn)方法。在本申請(qǐng)的框架內(nèi)，對(duì)于被診斷患有“輕度認(rèn)知障礙”(縮寫為MCD)的患者來 說，對(duì)他們后來發(fā)生被證實(shí)的有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的初始風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了回顧性評(píng)估， 此外從他們的既往病史(病歷)確定了經(jīng)回顧證明能改善預(yù)后的因素。在英語文獻(xiàn)中， 用于證實(shí)“輕度認(rèn)知障礙”的標(biāo)準(zhǔn)最近已被置于術(shù)語“輕度認(rèn)知損害”(縮寫為MCI)下處 理。關(guān)于這一點(diǎn)，可以參考例如Serge Gauthier等在Lancet 2006，367 1262-1270中 的“輕度認(rèn)知損害”(Mild cognitive impairmen)，以及 Ronald C. Petersen 等在 Arch Neurol. 1999，56 303-308中的“輕度認(rèn)知損害，臨床特征和結(jié)果” (Mild Cognitive Impairment, CIinicalCharacterization and Outcome),或 Ronald C. Petersen 等在 Arch Neurol. 2001 ；58 :1985_1992 中的“輕度認(rèn)知損害的當(dāng)前概念” (Current Conceptsin Mild Cognitive Impairment)。有關(guān)確定患者的MCD或MCI狀態(tài)所使用的一種測(cè)試方法，檢查 了被評(píng)估的人的被稱為“簡(jiǎn)易智力狀態(tài)”(Mini Mental State, MMS)的參數(shù)，參見Marshal F. Folstein等在J. Psychiat. Res.，1975，189-198中的“簡(jiǎn)易智力狀態(tài)——臨床醫(yī)生對(duì) 患者的認(rèn)知狀態(tài)進(jìn)行分級(jí)的實(shí)用方法”(MINI-MENTAL STATE-apractical method for grading the cognitive state of patients for theclinician)。在那些在某個(gè)時(shí)間點(diǎn)，在自我觀察或?qū)λ麄兊沫h(huán)境觀察的基礎(chǔ)上，已經(jīng)確定了 “輕 度認(rèn)知障礙”(MCD)的患者中，或在滿足“輕度認(rèn)知損害”(MCI)的標(biāo)準(zhǔn)的患者中，已知只有 某些患者將被觀察到其狀況的進(jìn)行性惡化。只有某些患者逐漸發(fā)生神經(jīng)變性疾病、例如阿 茨海默氏癡呆(AD)型的全部臨床癥狀。在其他患者中，發(fā)生了不同類型的癡呆，例如血管 性癡呆。還有的其他MCD或MCI患者沒有發(fā)生任何可注意到的惡化，有時(shí)最初的癥狀甚至 消失。發(fā)生了神經(jīng)變性疾病的第一組，也被稱為“向阿茨海默氏病轉(zhuǎn)變者”(轉(zhuǎn)變者)組，而 后面的組是“非轉(zhuǎn)變者”組。根據(jù)所述的初始狀況，在被診斷患有“輕度認(rèn)知障礙”的患者組中，能夠在診斷時(shí) 評(píng)估個(gè)體是否可能屬于“向阿茨海默氏病轉(zhuǎn)變者”組的風(fēng)險(xiǎn)將是理想的，以便如果測(cè)定到高 風(fēng)險(xiǎn)，能夠啟動(dòng)早期預(yù)防或治療性措施(如果這種措施存在的話)，而當(dāng)僅僅測(cè)定到這種轉(zhuǎn) 變的低風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，能夠避免不必要的措施，并解除患者相當(dāng)大的心理負(fù)擔(dān)。為向阿茨海默氏病轉(zhuǎn)變的風(fēng)險(xiǎn)增加的患者提供保證在避免或延遲轉(zhuǎn)變的意義上有長(zhǎng)期功效的治療，也將是理想的。本發(fā)明的目的是提供一種方法，所述方法允許以高的統(tǒng)計(jì)概率鑒定向阿茨海默氏 病轉(zhuǎn)變者組，并且也為決定是否向鑒定到的轉(zhuǎn)變者提供有效的預(yù)防性治療，產(chǎn)生了基礎(chǔ)。這些目的通過本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員可以從權(quán)利要求書中收集到方法及其優(yōu)選 實(shí)施方案來實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的一個(gè)方面體現(xiàn)了體外分析方法，在臨床發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上被診斷患有“輕度 認(rèn)知障礙”的患者組中，所述方法允許在診斷時(shí)鑒定具有后續(xù)向阿茨海默氏病轉(zhuǎn)變的高風(fēng) 險(xiǎn)的患者，也允許對(duì)這些患者進(jìn)行具體的治療推薦。在本發(fā)明的框架內(nèi)，作為第一階段，使用體外分析方法測(cè)定患者樣品(血漿、血 清)中循環(huán)相關(guān)的肽生物標(biāo)志物的濃度，并且在發(fā)現(xiàn)測(cè)定濃度與相應(yīng)的參比濃度相比升高 的情況下，推薦對(duì)所述患者用心血管藥劑、更具體來說是抗高血壓藥劑進(jìn)行治療，或使用 ANP受體拮抗劑進(jìn)行治療，正如下面描述的評(píng)估所顯示的，使用抗高血壓藥劑或使用ANP受 體拮抗劑進(jìn)行的治療降低了鑒定到的輕度認(rèn)知障礙惡化成明顯的阿茨海默氏癡呆(AD)型 神經(jīng)變性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。因此，本發(fā)明的主題是患有輕度認(rèn)知障礙需要治療的患者的體外鑒定方法，在所 述方法中 在來自被診斷患有輕度認(rèn)知障礙的患者的循環(huán)的生物學(xué)流體樣品中測(cè)定至少 一種循環(huán)相關(guān)的肽生物標(biāo)志物，并且 所述至少一種循環(huán)相關(guān)的肽生物標(biāo)志物的濃度超過所述標(biāo)志物通常在輕度認(rèn) 知障礙病例中濃度的濃度值范圍中設(shè)置的生物標(biāo)志物特異性閾值(截止值)，則被指定為 發(fā)生有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加。對(duì)于具有測(cè)定到的較高風(fēng)險(xiǎn)的患者，可以推薦使用下面的藥物進(jìn)行治療。根據(jù)本發(fā)明的體外方法，樣品優(yōu)選為血清或血漿樣品。優(yōu)選循環(huán)相關(guān)的肽生物標(biāo)志物選自利尿鈉肽ANP和/或BNP和/或腎上腺髓質(zhì)素 (ADM)，或選自它們的相關(guān)激素原pro-ANP、pro-BNP或pro-ADM的片段。優(yōu)選本發(fā)明方法的特征還在于推薦使用抗高血壓藥劑類的心血管藥劑進(jìn)行治療， 所述抗高血壓藥劑選自用于降血壓的“血管緊張素轉(zhuǎn)換酶”的抑制劑(ACE抑制劑)、血管緊 張素II受體拮抗劑(“沙坦(sartans) ”)、0 -阻斷劑或利尿劑。或者，可以推薦使用ANP 受體拮抗劑或腺苷受體拮抗劑進(jìn)行治療。在優(yōu)選實(shí)施方案中，測(cè)定使用免疫診斷測(cè)定方法進(jìn)行。相對(duì)于實(shí)際的循環(huán)相關(guān)肽 來說生理效應(yīng)降低或測(cè)不到的循環(huán)相關(guān)肽，測(cè)定其激素原前體片段，也是優(yōu)選的。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法的特征在于測(cè)定了含有pro-ANP的中間部分 的pro-ANP片段(MR-pro-ANP)和/或含有前腎上腺髓質(zhì)素原的45-92位氨基酸的中段 pro-ADM 片段(MR-proADM)的濃度。在本發(fā)明的情況下，優(yōu)選的閾值對(duì)于MR-ProANP來說是50-1 OOpmo 1 /1，優(yōu)選為 60-90pmol/l，對(duì)于 MR-ProADM 來說是 0. 4-0. 8nmol/l，優(yōu)選為 0. 5-0. 7nmol/l。本發(fā)明的另一個(gè)主題是使用循環(huán)相關(guān)肽生物標(biāo)志物、特別是利尿鈉肽ANP、BNP和 /或腎上腺髓質(zhì)素(ADM)或其片段或其相關(guān)激素原pro-ANP、pro-BNP或pro-ADM的片段， 對(duì)患有輕度認(rèn)知障礙、轉(zhuǎn)變成有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加的患者進(jìn)行分層或鑒
5定。另一方面，本發(fā)明涉及對(duì)患有輕度認(rèn)知障礙的患者進(jìn)行預(yù)防性治療的方法，在所 述患者中測(cè)定到了其狀況惡化成有臨床表現(xiàn)的阿茨海默氏型神經(jīng)變性疾病的顯著風(fēng)險(xiǎn)(AD 風(fēng)險(xiǎn)患者)，所述治療方法使用了含有心血管藥劑、更具體來說是抗高血壓藥劑的一種或多 種活性物質(zhì)的藥物，以及含有一種或多種ANP受體拮抗劑的藥物。另一方面，本發(fā)明涉及心血管藥劑的一種或多種活性物質(zhì)以及一種或多種ANP受 體拮抗劑、更具體來說是抗高血壓藥劑在預(yù)防性治療AD風(fēng)險(xiǎn)患者或生產(chǎn)預(yù)防性治療AD風(fēng) 險(xiǎn)患者的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的主題是藥物，所述藥物包含心血管藥劑的一種或多種活性物質(zhì)，所述心 血管藥劑選自ACE抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑、3 -阻斷劑和抗高血壓利尿劑及其 組合，所述藥物用于治療患有輕度認(rèn)知障礙的患者，以便延遲或預(yù)防有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變 性疾病的發(fā)生，或者改善或維持輕度認(rèn)知障礙的狀態(tài)。此外，本發(fā)明的主題是含有心房利尿鈉肽受體(ANP受體)拮抗劑的藥物，用于治 療患有輕度認(rèn)知障礙的患者，以便延遲或預(yù)防有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的發(fā)生，或者改 善或維持輕度認(rèn)知障礙的狀態(tài)。因此，本發(fā)明的主題是含有心房利尿鈉肽受體拮抗劑的藥物在生產(chǎn)藥物來治療患 有輕度認(rèn)知障礙的患者，以便延遲或預(yù)防有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的發(fā)生或者改善或維 持輕度認(rèn)知障礙的狀態(tài)中的應(yīng)用。本發(fā)明的主題還是用于治療患有輕度認(rèn)知障礙的患者的治療性方法，其中施用治 療有效量的ANP受體拮抗劑，以便延遲或預(yù)防有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的發(fā)生，或者改 善或維持輕度認(rèn)知障礙的狀態(tài)。此外，本發(fā)明的主題是含有腺苷受體拮抗劑的藥物，所述藥物用于治療患有輕度 認(rèn)知障礙的患者，以便延遲或預(yù)防有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的發(fā)生，或者改善或維持輕 度認(rèn)知障礙的狀態(tài)。因此，本發(fā)明的主題是含有腺苷受體拮抗劑的藥物在生產(chǎn)藥物來治療患有輕度認(rèn) 知障礙的患者，以便延遲或預(yù)防有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的發(fā)生或者改善或維持輕度認(rèn) 知障礙的狀態(tài)中的應(yīng)用。因此，本發(fā)明的主題還是藥物，所述藥物包含心血管藥劑的一種或多種活性物質(zhì)， 所述心血管藥劑選自ANP受體拮抗劑、腺苷受體拮抗劑、ACE抑制劑、血管緊張素II受體 拮抗劑、0 -阻斷劑和抗高血壓利尿劑及其組合，所述藥物用于治療患有輕度認(rèn)知障礙的患 者，以便延遲或預(yù)防有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的發(fā)生，或者改善或維持輕度認(rèn)知障礙的 狀態(tài)。本發(fā)明的主題還是用于治療患有輕度認(rèn)知障礙的患者的治療性方法，其中施用治 療活性量的腺苷受體拮抗劑，以便延遲或預(yù)防有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的發(fā)生，或者改 善或維持輕度認(rèn)知障礙的狀態(tài)。腺苷受體是一類嘌呤能的G-蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)，其內(nèi)源配體是腺苷?？梢詤^(qū)分 出四種類型A1、A2A、A2B和A3，其在體內(nèi)的分布和功能有部分交疊和部分不同。腺苷受體 亞型彼此之間在生物化學(xué)效應(yīng)和信號(hào)途徑方面也有差別。這些亞型每一種的激動(dòng)劑和拮抗 劑都是已知的，其中某些激動(dòng)劑和拮抗劑是非特異性的，對(duì)所有腺苷受體顯示出效應(yīng)。
本發(fā)明的主題還是治療患有輕度認(rèn)知障礙的患者的治療性方法，其中施用治療活 性量的心血管藥劑的一種或多種活性物質(zhì)，以便延遲或預(yù)防有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的 發(fā)生，或者改善或維持輕度認(rèn)知障礙的狀態(tài)。這樣的心血管藥劑具體選自ACE抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑、0 -阻斷劑 和抗高血壓利尿劑及其組合。本發(fā)明的ANP受體拮抗劑是可治療性施用的物質(zhì)，它與ANP受體結(jié)合，從而阻止或 減少了天然配體ANP的結(jié)合，并且不引起鳥苷酸環(huán)化酶的活化，導(dǎo)致cGMP不增加或少增加， 從而降低了內(nèi)源性ANP的排鈉利尿效應(yīng)。本發(fā)明的腺苷受體拮抗劑是可治療性施用的物質(zhì)，它與腺苷受體結(jié)合，從而阻止 或減少了天然配體腺苷的結(jié)合，并且不引起鳥苷酸環(huán)化酶的活化，導(dǎo)致cGMP不增加或少增 加，從而降低了內(nèi)源性腺苷的效應(yīng)。在上述本發(fā)明的特別優(yōu)選實(shí)施方案中，ANP受體拮抗劑是葡萄糖己酸聚合物(葡 萄糖己酸，更具體是用己酸酯化的0 1 — 6葡聚糖)。ANP受體拮抗劑的特別重要的代表是 HS-142-1 (US 5，132，112)。在US 5，132，112中提到的所有拮抗劑構(gòu)成了本說明書的一部 分，都是本發(fā)明的ANP受體拮抗劑。在US 5，132，112中，HS-142-1化合物被表征如下這些化合物包含用己酸酯化的直鏈0 1 — 6葡聚糖，其中D-葡萄糖殘基的數(shù)量是 28，己酸殘基的數(shù)量是11。這些化合物基本上具有下列物理化學(xué)性質(zhì)1)外觀白色粉末2)熔點(diǎn):175-185°C3)分子式C234H39201524)質(zhì)譜(負(fù)FAB質(zhì)譜)發(fā)現(xiàn)值M/Z5536. 5 (M-H)“計(jì)算值:M/Z5637. 35)比旋[a ]24D = -29. 4° (c 0. 24，水性溶液)6)紅外吸收光譜(KBr片方法)cm—1 =3420,2930,1730，1635，1455，1380，1250，1170，10457)紫外吸收光譜(水性溶液)只有末端吸收可見。8)屯-匪1 波譜(500MHz，在020 中)如 US 5，132，112 的圖 1 中所示。9)顏色反應(yīng)與茴香醛、硫酸和碘化物反應(yīng)陽性。與茚三酮、二硝基苯胼、氯化鐵、溴甲酚綠和Dragendorffs試劑反應(yīng)陰性。此外，在W0 89/00428中提到了 ANP受體拮抗劑，也作為本說明書的一部分。也已 知道，某些ANP衍生物能夠表現(xiàn)出拮抗性質(zhì)(JP-A-225399/88)，這些拮抗劑也作為本說明 書的一部分。脂質(zhì)寡糖例如HS-142-1已知是ANP受體的拮抗劑，這些拮抗劑及其生產(chǎn)描述在Yi Qiu 等，Biosci. Biotech, Biochem, 60 (8) 1308-1316，1996 中，在此以其生產(chǎn)的范疇引為參 考。具體來說，這包括龍膽己糖基(gentiohexaosyl)衍生物作為ANP受體拮抗劑。這樣的 衍生物的實(shí)例是HS-142-1，0-(3-0-己酰-D-吡喃葡萄糖基)_(1 — 6)-
2-D-吡喃 葡萄糖⑴，0-(3-0_己基-3-D-吡喃葡萄糖基)_(1 — 6)-
2-D-吡喃葡萄糖⑷和 0-(3-0-己酰 _2，4，6_ 三-0-甲基-3-D-吡喃葡萄糖基)_(1 — 6)]2-2，3，4_ 三-0-甲 基-D-吡喃葡萄糖⑵。HS-142-1是ANP拮抗劑，是用己?；鶊F(tuán)(數(shù)量為5_15)部分乙?；? _1 — 6寡 聚葡萄糖苷(DP:10-30)的混合物。在上述發(fā)明的特別優(yōu)選實(shí)施方案中，腺苷受體拮抗劑是1，3- 二丙基-8- (3-降金 剛烷基)黃嘌呤。ANP受體拮抗劑施用的濃度能夠以下述方式增加利尿鈉肽、更具體為ANP的效應(yīng)。 通過增加配體在ANP受體上的結(jié)合(沒有相應(yīng)的激活)，阻斷了受體與其天然配體的結(jié) 合。如果用有限濃度的拮抗劑進(jìn)行治療(最多95%、優(yōu)選最多90%的受體被結(jié)合，最優(yōu)選 80%)，由被占據(jù)的受體誘導(dǎo)的新的受體合成導(dǎo)致游離受體的總數(shù)高于治療前。然后受體的 增加由于游離配體與結(jié)合配體的平衡移向有利于產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)的結(jié)合配體，導(dǎo)致內(nèi)源性 激素的排鈉利尿效應(yīng)上調(diào)。如果至少50%、優(yōu)選70%、最優(yōu)選80%但是不超過95%的受體被拮抗劑占據(jù)，將 發(fā)生這種效應(yīng)。在HS-142-1的情況下，這通常相當(dāng)于O.Olmg到0. lmg HS 142_l/kg體重、 優(yōu)選為0. 05mg/kg的劑量。本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員知道，拮抗劑、包括ANP受體拮抗劑的濃度范圍取決于拮 抗劑的親和性。在測(cè)定到的受體占有率和受體親和性的基礎(chǔ)上，本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員能 夠確定相關(guān)拮抗劑的相關(guān)劑量。(這種確定也能通過pro-ANP的血漿濃度來指導(dǎo)，例如在 > 74pmol/l (血漿濃度)下，可以確定lx Pro-ANP-100x Pro-ANP的范圍，即在4升血漿和 100pmol/l的Pro-ANP值下，每次施用在400pmol-40nmol拮抗劑的范圍內(nèi)。)當(dāng)至少50%、優(yōu)選70%、最優(yōu)選80%但是不超過95%的受體被拮抗劑占據(jù)時(shí)，將 發(fā)生腺苷受體拮抗劑的所需效應(yīng)。一般來說，在優(yōu)選的1，3_ 二丙基-8-(3-降金剛烷基) 黃嘌呤的情況下，這相當(dāng)于0. 025到lmg/kg體重、優(yōu)選0. 5mg/kg的劑量。如果有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病是阿茨海默氏癡呆類型，上述藥物將特別有用。因此，在優(yōu)選實(shí)施方案中，活性物質(zhì)是ANP受體拮抗劑，并以至少50%、優(yōu)選70%、 最優(yōu)選80 %但是不超過95 %的ANP受體被占據(jù)的劑量施用。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，活性物質(zhì)是腺苷受體拮抗劑，并以至少50%、優(yōu)選 70 %、最優(yōu)選80 %但是不超過95 %的腺苷受體被占據(jù)的劑量施用。在優(yōu)選實(shí)施方案中，這些藥物被用于治療特定的患者組，其中所選擇的患者組，在 其循環(huán)中測(cè)量到的循環(huán)相關(guān)肽生物標(biāo)志物升高的基礎(chǔ)上，可以被鑒定為發(fā)生臨床明顯形式 的阿茨海默氏癡呆的風(fēng)險(xiǎn)增加的患者。在下面還描述了一種體外方法，用于篩選被具體鑒 定為發(fā)生有臨床表現(xiàn)的阿茨海默氏癡呆的風(fēng)險(xiǎn)增加的患者的患者組。在這些患者中，特別 推薦使用本發(fā)明的上述ANP拮抗劑進(jìn)行治療。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，治療是預(yù)防性治療。通過篩選方法能夠鑒定其他的ANP受體拮抗劑，它們也形成了本發(fā)明的主題。因 此，本發(fā)明的主題是用于鑒定心房利尿鈉肽受體的拮抗劑的篩選方法，方法包括下列階段〇進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性受體分析以鑒定潛在的拮抗劑，〇測(cè)試潛在拮抗劑阻斷ANP誘導(dǎo)的cGMP形成的能力，以及〇鑒定心房利尿鈉肽受體的拮抗劑。潛在的ANP受體拮抗劑候選物可以在例如放射受體分析法或放射免疫分析法的 基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)，在這些分析法中鑒定了抑制放射活性標(biāo)記的ANP的候選物。這些分析法對(duì)于 本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員來說是已知的，并描述在例如Capper等，(1990)Clin. Chem. 36/4， 656的文獻(xiàn)中。然后測(cè)試潛在候選物阻斷ANP誘導(dǎo)的cGMP形成的能力。適合的分析對(duì)于本技術(shù) 領(lǐng)域的專業(yè)人員來說是已知的，可以從例如CisBiointernational公司獲得(http://www. htrf. com/products/gpcr/cgmp/)。對(duì)于本發(fā)明來說，ANP受體拮抗劑是在下面描述的放射受體分析法中具有低于 lOnmol/1、優(yōu)選低于lOpmol/1的IC5(1值，并在ANP誘導(dǎo)的cGMP阻斷分析法中具有低于 lOnmol/1、優(yōu)選低于lOpmol/1的IC5(1值的化合物。IC50值是觀察到從ANP受體上置換配體(ANP)的最大值的一半或阻斷ANP誘導(dǎo)的 cGMP形成的最大值的一半時(shí)(潛在)拮抗劑(抑制劑)的濃度。放射受體分析法是基于放射活性標(biāo)記的ANP衍生物被(潛在)拮抗劑從ANP受體 的結(jié)合位點(diǎn)上的置換，在本發(fā)明中如下進(jìn)行1.將來自于具有天然或重組ANP受體(鳥苷酸環(huán)化酶A或B)的動(dòng)物或人類組織 (優(yōu)選為腎細(xì)胞制備物)或適合的細(xì)胞系的重構(gòu)膜結(jié)合ANP受體，以100-100，000個(gè)細(xì)胞/ 分析的細(xì)胞計(jì)數(shù)提供在PH 7. 5的50mM PBS緩沖溶液中。2.加入lfM到100nM的(潛在)拮抗劑2000-100，OOOcpm放射活性標(biāo)記的ANP 1-28，所述ANP 1-28在Tyr 28上以約2200Ci/mmol用放射性碘標(biāo)記(放射性碘標(biāo)記利用 本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員已知的氯胺T方法進(jìn)行)，使得ANP/ANP受體的比例在100 1到 1 100之間。3.在室溫溫育90分鐘。4.離心(30分鐘，4°C，2000g)以分離受體和上清液5.通過使用Y計(jì)數(shù)器檢測(cè)放射活性來測(cè)定游離(上清液)和受體結(jié)合的(沉淀) 放射活性標(biāo)記的ANP肽的濃度。6.從受體結(jié)合的放射活性標(biāo)記的ANP肽濃度作為添加的拮抗劑濃度的函數(shù)，確定 IC5o 值。HTRF (均相時(shí)間分辨熒光)cGMP 阻斷分析(CisBio international, Bagnols-sur-CSze，法國(guó))是基于(潛在)拮抗劑對(duì)ANP誘導(dǎo)的cGMP形成的抑制。利用了 膜結(jié)合的鳥苷酸環(huán)化酶(1型)被ANP激活這一事實(shí)。在cGMP阻斷分析中，在存在各種不 同濃度的(潛在)拮抗劑的情況下，測(cè)定了通過存在的ANP受體形成的cGMP。在競(jìng)爭(zhēng)性免 疫分析中，將每種情況下形成的cGMP的量與已知濃度的熒光標(biāo)記的cGMP進(jìn)行比較，則也通 過熒光標(biāo)記的抗cGMP抗體進(jìn)行測(cè)定。在本發(fā)明中，HTRF cGMP分析如下進(jìn)行1.將來自于具有天然或重組ANP受體(鳥苷酸環(huán)化酶)的動(dòng)物或人類組織(優(yōu)選
9為腎細(xì)胞制備物)或適合的細(xì)胞系的膜結(jié)合ANP受體，以100-100，000個(gè)細(xì)胞/分析的細(xì) 胞計(jì)數(shù)提供在PH 7. 2的50mM PBS，0. 2% BSA中。2.加入lfM到100nM的(潛在)拮抗劑和5-100，OOOpM的人類ANP 1-28。3 在37°C溫育30分鐘。4.通過在裂解緩沖液中加入cGMP_d2和在競(jìng)爭(zhēng)性免疫分析中加入抗cGMP穴合物 (抗cGMP抗體在裂解緩沖液中)，測(cè)定了形成的cGMP的濃度。cGMP濃度與665/620nm處熒 光強(qiáng)度的比率成正比。從形成的cGMP對(duì)相關(guān)拮抗劑濃度的依賴性，確定了 IC5(I值。通過測(cè)定例如相關(guān)患者的血清或血漿樣品中的循環(huán)相關(guān)(血管活性)肽而診 斷(以該術(shù)語的廣義定義)神經(jīng)變性疾病的方法，描述在本申請(qǐng)人較早的申請(qǐng)中，更具 體來說是DE 102006023175A1和W02007/131775A1中，其中證實(shí)了神經(jīng)變性疾病的嚴(yán) 重性與患者樣品中可測(cè)量到的利尿鈉肽濃度之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)的關(guān)聯(lián)性，以及描述在 DE102006027818A1和W0 2007/144194A1中，其中描述了如果同時(shí)考慮一種以上血管活性 肽，更具體來說采取一方面是患者樣品中血管舒張肽、另一方面是血管收縮肽的濃度的組 合的形式，可以獲得甚至更好的、統(tǒng)計(jì)學(xué)上更相關(guān)的關(guān)聯(lián)性。在所述較早申請(qǐng)中描述的測(cè)量，使用已經(jīng)被診斷為患有“高級(jí)神經(jīng)變性疾病”的患 者、或至少懷疑患有這種疾病的早期形式的患者的樣品(更具體為血漿樣品)來進(jìn)行。測(cè)量沒有進(jìn)行預(yù)后目的的評(píng)估，因?yàn)閷?duì)其樣品被測(cè)量的個(gè)體患者的進(jìn)一步醫(yī)學(xué)發(fā) 展沒有進(jìn)行較長(zhǎng)期的跟蹤，并且沒有與以前測(cè)量到的生物標(biāo)志物濃度相關(guān)聯(lián)。但是，所述較早的申請(qǐng)包含了不同類型的神經(jīng)變性疾病的已接受的臨床定義和它 們的正確診斷問題的詳細(xì)討論。因?yàn)楸旧暾?qǐng)至少部分基于這兩個(gè)被引用申請(qǐng)中的檢查發(fā) 現(xiàn)，因此本技術(shù)領(lǐng)域的有興趣的專業(yè)人員，除了下面的陳述之外，可以特別參考這兩份較早 申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容。正如已經(jīng)陳述的，神經(jīng)變性疾病(癡呆病)一般傾向于是緩慢發(fā)展的非感染性病 源慢性疾病。做出可靠診斷所需的長(zhǎng)觀察期，不僅在其診斷和預(yù)后上，而且對(duì)于研究所述疾 病和開發(fā)有效的預(yù)防和治療策略方面，都構(gòu)成了相當(dāng)大的難題。通常被稱為癡呆病(癡呆)的病癥，其共同特點(diǎn)是作為腦損傷的結(jié)果喪失了獲得 性智力能力，尤其是記憶和正常的人格水平。如果癡呆癥狀不是發(fā)生在老年而是在中年，則 被稱為早老性癡呆。在典型癥狀和死后確定的病理性腦部異常的基礎(chǔ)上，癡呆癥由各種不同的疾病或 疾病群構(gòu)成其中，阿茨海默氏癡呆(阿茨海默氏病)是最常見的神經(jīng)變性癡呆病。它占所有 癡呆癥病例的2/3，在實(shí)踐中是本發(fā)明的最重要的應(yīng)用領(lǐng)域。AD的特點(diǎn)在于有三個(gè)重要特 征，但是只能通過驗(yàn)尸確定來確定淀粉樣斑塊和神經(jīng)原纖維束的形成以及神經(jīng)細(xì)胞的喪 失(也參見上述較早申請(qǐng)的說明書的介紹)。其他在本發(fā)明的框架中重要性較低因此沒有在本文中詳細(xì)討論的癡呆病是所謂 的血管性癡呆(VAD)，其中癡呆通過腦中的血液供應(yīng)障礙而發(fā)生。有不同類型的VAD，其中 多發(fā)性梗死性癡呆(MID)和皮層下VAD(也稱為Binswanger' s病)是最常見的形式。此 外，為了完整起見，應(yīng)該提到路易體癡呆(DBL)和也稱為Pick’ s病的額顳癡呆(FTD)。各種不同癡呆病典型的腦部變化當(dāng)然不能在活著的患者中直接確定，使用例如x-射線或磁共振成像進(jìn)行腦功能的技術(shù)檢查又是繁瑣而昂貴的。因此，即使到今天，癡呆病 也是診斷不足或診斷不準(zhǔn)確的，預(yù)后和治療可能性也相應(yīng)差。因此，本申請(qǐng)人的工作旨在通 過開發(fā)使用相對(duì)簡(jiǎn)單的測(cè)量方法，提高神經(jīng)變性疾病的診斷和預(yù)后可能性、特別是AD的診 斷，作為所述測(cè)量方法的一部分，在來自患者的血液循環(huán)的樣品中，鑒定了可容易地測(cè)量的 生物標(biāo)志物。本發(fā)明的有希望的生物標(biāo)志物包括各種循環(huán)相關(guān)肽生物標(biāo)志物，作為本發(fā)明的方 法的一部分，從中確定了具有血管舒張劑作用的肽形式的生物標(biāo)志物，更具體來說是利尿 鈉肽例如ANP、BNP和/或CNP和/或肽腎上腺髓質(zhì)素(ADM)。例如，通過測(cè)定ANP的濃度顯示了利尿鈉肽濃度的測(cè)定。ANP在本申請(qǐng)人的鑒定 proANP中段(MR-proANP)的分析法的幫助下，優(yōu)選被測(cè)定為pro-ANP片段的濃度。這種類 型的分析法描述在EP 1562984B1和Nils G. Morgenthaler等，“用于在人類血漿中測(cè)定心 房利尿鈉肽原中段的免疫發(fā)光分析法”(Immunoluminometric Assay for theMidregion of Pro-Atrial Natriuretic Peptide in Human Plasma), ClinicalChemistry 50:1,2004, 234-236 中。腎上腺髓質(zhì)素(ADM)的濃度優(yōu)選被測(cè)定為中段proADM片段(MR-proADM)的濃度， 該片段包含前腎上腺髓質(zhì)素原的45-92位氨基酸。適合的分析法描述在EP 1488209B1和 W0 2004/090546以及Nils G. Morgenthaler等，“使用免疫發(fā)光分析法測(cè)量血漿中的中段 腎上腺髓質(zhì)素原” (Measurement of Midregional Proadrenomedul 1 in in Plasmawith an Immunoluminometric Assay), Clinical Chemistry 51 :10,2005,1823-1829 中。如果在本申請(qǐng)中使用了例如“肽生物標(biāo)志物的濃度”這樣的術(shù)語或類似術(shù)語，這不 僅僅意味著限制性均衡意義上生物樣品中可測(cè)量的實(shí)際血管活性肽的靜態(tài)濃度。在本發(fā)明的文本中討論的最重要的病理生理釋放的實(shí)際血管活性肽，僅以可自由 或不受限制地測(cè)量的形式少量存在于生物流體中。相當(dāng)大部分病理生理釋放的實(shí)際血管活 性肽，通過與受體和其他膜或血管結(jié)構(gòu)結(jié)合，從生物流體中快速移除和/或降解。從同樣的前體肽原形成的無活性共肽(co-p印tide)的測(cè)量，在本發(fā)明的情況中 優(yōu)選使用申請(qǐng)人的所述分析法進(jìn)行，與生物流體中可測(cè)量到的瞬時(shí)濃度相反，反映出的是 血管活性肽在“活性濃度”意義上在較長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)的釋放，并允許也間接地同時(shí)記錄最初釋放 的血管活性肽的結(jié)合的或快速降解的部分。連同這類共肽的更高的穩(wěn)定性，這產(chǎn)生了在生 物流體例如血清或血漿中目標(biāo)分析物的更高的可測(cè)量的絕對(duì)濃度值。在疾病傾向于具有慢性過程而沒有患者狀況的突然惡化或改善的情況下，正如癡 呆癥的通常情況下，有相當(dāng)大的可能性是，對(duì)于各種不同的疾病相關(guān)分析物來說，將產(chǎn)生僅 僅輕微的變化、僅僅緩慢改變的靜態(tài)整體狀況。因此，在患者的生物流體中可靜態(tài)測(cè)量的肽 生物標(biāo)志物類型的活性分析物、在本情況下是血管活性肽的濃度，可能與相同分析物在較 長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)的病理生理釋放量基本上成正比，正如可以測(cè)量生理無活性的共肽形式。這意味 著與在本發(fā)明的無活性共肽的優(yōu)選測(cè)定中測(cè)定的健康人的對(duì)照值的偏差，以及這些偏差的 疾病典型過程，也反映在活性肽的一般較低的靜態(tài)濃度中，使得對(duì)測(cè)量到的“分析物濃度” 的具體選擇，將不對(duì)診斷評(píng)估具有決定性的定性影響。作為本發(fā)明的一部分，為了測(cè)量目的，可以使用患者血漿樣品的集合，它們包括在 被診斷患有“輕度認(rèn)知障礙”時(shí)(t = 0) ( “MCD患者”)獲得的患者血漿樣品。然后在為期6年中記錄個(gè)體患者健康狀態(tài)的后續(xù)發(fā)展。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在MCD患者血漿中檢測(cè)的生物標(biāo)志物的濃度，與沒有認(rèn)知障礙的對(duì)照 者相比平均升高了，并且在發(fā)現(xiàn)的濃度范圍內(nèi)可以確定截止?jié)舛戎?，該值允許將以后轉(zhuǎn)變 成AD的風(fēng)險(xiǎn)低的MCD患者，與以后轉(zhuǎn)變成AD的風(fēng)險(xiǎn)相當(dāng)高的MCD患者區(qū)分開。通過同時(shí) 考慮兩種生物標(biāo)志物，進(jìn)一步增加了患者組之間的差異。正如將在實(shí)驗(yàn)部分中顯示的，當(dāng)發(fā)明人也根據(jù)記錄的病史檢查結(jié)果，以觀察在發(fā) 展出有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病(阿茨海默氏癡呆)的意義上沒有發(fā)生或明顯延遲發(fā)生 的后續(xù)轉(zhuǎn)變的患者，是否出于其他原因已經(jīng)經(jīng)歷了使用某些藥物或藥物類型的治療時(shí)，他 能夠顯示，顯然使用心血管藥劑、更具體來說是抗高血壓藥劑的治療，對(duì)于預(yù)后具有正面影 響，其形式為避免或延遲了 “向AD的轉(zhuǎn)變”。這顯示出，對(duì)于患有輕度認(rèn)知障礙的患者來說，不僅可能在診斷時(shí)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)度分 層，而且能夠向測(cè)定到向AD轉(zhuǎn)變的風(fēng)險(xiǎn)增高的患者推薦合理的新療法，這種療法目前還沒 有構(gòu)成重要專家的療法總匯中的一部分，即使用心血管藥劑、更具體來說是抗高血壓藥劑 的療法，或使用ANP受體拮抗劑或腺苷受體拮抗劑的療法。上述的心血管藥劑和抗高血壓藥劑是已知的經(jīng)歷了廣泛臨床試驗(yàn)的藥劑。目前常 規(guī)治療性使用和/或作為預(yù)防的抗高血壓藥劑基本上表現(xiàn)為四種不同類型的藥物，即血管 緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACE抑制劑)、血管緊張素II受體拮抗劑(“沙坦”)、0 -阻斷劑和 用于降低血壓的利尿劑類型的藥劑。關(guān)于目前使用的這些藥劑類型以及廣泛處方的所述活性物質(zhì)類別代表的進(jìn)一步 詳細(xì)情況，可以在涉及降低高血壓患者血壓的非常廣泛的專業(yè)文獻(xiàn)中發(fā)現(xiàn)。僅作為例子列出的ACE抑制劑是藥物卡托普利、依那普利、賴諾普利和雷米普利， 作為血管緊張素II受體亞型1拮抗劑(ATI拮抗劑；沙坦)的代表是藥物氯沙坦、纈沙坦、 坎地沙坦、厄貝沙坦、替米沙坦、依普羅沙坦和奧美沙坦，作為利尿劑、特別是所謂的噻嗪利 尿劑的是例如氫氯噻嗪和噻嗪類似物例如Clorthalidon、氯帕胺(Clopramid)、吲達(dá)帕胺、 美托拉腙、希帕胺和美夫西特。下面的表1簡(jiǎn)要概括了關(guān)于各種不同類型藥劑及其作用機(jī)制的基本信息表1:
1權(quán)利要求
一種藥物，其包含一種或多種心血管藥劑活性物質(zhì)，所述一種或多種心血管藥劑活性物質(zhì)選自ANP受體拮抗劑、腺苷受體拮抗劑、ACE抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑、β 阻斷劑和抗高血壓利尿劑及其組合，所述藥物用于治療患有輕度認(rèn)知障礙的患者，以便延遲或預(yù)防有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的發(fā)生，或者改善或維持輕度認(rèn)知障礙的狀態(tài)。
2.權(quán)利要求1的藥物，其中ANP受體拮抗劑是葡萄糖_己酸聚合物。
3.權(quán)利要求1的藥物，其中腺苷受體拮抗劑是1，3_二丙基-8-(3-降金剛烷基)黃嘌呤。
4.權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)的藥物，其中活性物質(zhì)是ANP受體拮抗劑，并且所述拮抗劑以 至少50 %的ANP受體被占據(jù)的劑量施用。
5.權(quán)利要求1或3任一項(xiàng)的藥物，其中活性物質(zhì)是腺苷受體拮抗劑，并且所述拮抗劑以 至少50%的腺苷受體被占據(jù)的劑量施用。
6.權(quán)利要求1到5任一項(xiàng)的藥物，其中有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病是阿茨海默氏癡呆型。
7.權(quán)利要求1到6任一項(xiàng)的藥物，其中用于治療，選擇一組患者，所述患者基于在其循 環(huán)系統(tǒng)中能測(cè)量到的循環(huán)相關(guān)肽生物標(biāo)志物的升高，可以被鑒定為發(fā)生有臨床表現(xiàn)的阿茨 海默氏癡呆形式的風(fēng)險(xiǎn)增加的患者。
8.一種鑒定患有輕度認(rèn)知障礙需要治療的患者的體外方法，所述方法包括_在來自被診斷患有輕度認(rèn)知障礙的患者的循環(huán)系統(tǒng)的生物流體樣品中，測(cè)定至少一 種循環(huán)相關(guān)肽生物標(biāo)志物，和-發(fā)生有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加被指定為至少一種循環(huán)相關(guān)的肽生物 標(biāo)志物的濃度超過在所述標(biāo)志物通常濃度值范圍內(nèi)設(shè)置的生物標(biāo)志物特異性閾值(截止 值)。
9.權(quán)利要求8的體外方法，其中對(duì)于具有被確定的較高風(fēng)險(xiǎn)的患者，推薦使用權(quán)利要 求1到6的藥物進(jìn)行治療。
10.權(quán)利要求8或9的方法，其特征在于樣品是血清或血漿樣品。
11.權(quán)利要求8到10任一項(xiàng)的方法，其特征在于循環(huán)相關(guān)肽生物標(biāo)志物選自利尿鈉肽 ANP和/或BNP和/或腎上腺髓質(zhì)素(ADM)，或選自其相關(guān)的激素原pro_ANP、pro-BNP或 pro-ADM的片段。
12.權(quán)利要求8到11任一項(xiàng)的方法，其特征在于推薦使用抗高血壓藥劑類的心血管藥 劑進(jìn)行治療，所述抗高血壓藥劑選自用于降血壓的“血管緊張素轉(zhuǎn)換酶”的抑制劑(ACE抑 制劑)、血管緊張素II受體拮抗劑(“沙坦”)、β -阻斷劑和利尿劑。
13.權(quán)利要求11的方法，其特征在于測(cè)定使用免疫診斷測(cè)定方法進(jìn)行，并且測(cè)定相對(duì) 于實(shí)際的循環(huán)相關(guān)肽來說具有減弱的或不能檢測(cè)的生理效應(yīng)的循環(huán)相關(guān)肽的激素原前體 片段。
14.權(quán)利要求13的方法，其特征在于測(cè)定含有pro-ANP的中間部分的pro-ΑΝΡ片 段(MR-pro-ANP)和/或含有前腎上腺髓質(zhì)素原的45-92位氨基酸的中段pro-ADM片段 (MR-proADM)的濃度。
15.一種鑒定心房利尿鈉肽受體拮抗劑的篩選方法，所述方法包括下列階段〇進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性受體分析以確定潛在的拮抗劑，〇測(cè)試潛在拮抗劑阻斷ANP誘導(dǎo)的cGMP形成的能力，以及 〇鑒定心房利尿鈉肽受體的拮抗劑。
16.循環(huán)相關(guān)肽生物標(biāo)志物、更具體是利尿鈉肽ANP、BNP和/或腎上腺髓質(zhì)素(ADM)或 其片段或其相關(guān)激素原pro-ANP、pro-BNP或pro-ADM的片段在對(duì)患有輕度認(rèn)知障礙表現(xiàn)出 向有臨床表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病轉(zhuǎn)變的風(fēng)險(xiǎn)增加的患者進(jìn)行分層或鑒定中的應(yīng)用。
17.—種ANP受體拮抗劑，其用作藥物。
18.權(quán)利要求17的ANP受體拮抗劑，其中ANP受體拮抗劑是葡萄糖-己酸聚合物。
全文摘要
一種用于鑒定需要治療的患者的方法，以及對(duì)這種患有輕微認(rèn)知障礙的患者進(jìn)行預(yù)防性治療的方法，其中在先期風(fēng)險(xiǎn)度分層過程中，作為可以在所述患者的循環(huán)中測(cè)量到的循環(huán)相關(guān)肽生物標(biāo)志物增加的結(jié)果，可以確定所述患者發(fā)生有臨床表現(xiàn)的阿茨海默氏病的風(fēng)險(xiǎn)增加，所述治療使用含有心血管藥劑的一種或多種活性成分的藥物，所述心血管藥劑選自ACE抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑、β-阻斷劑和降血壓利尿劑及其組合，或使用含有一種或多種ANP受體拮抗劑或者一種或多種腺苷受體拮抗劑的藥物。
文檔編號(hào)A61K31/00GK101977594SQ200980110223
公開日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2009年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月1日
發(fā)明者安德烈亞斯·貝格曼 申請(qǐng)人:B.R.A.H.M.S有限公司