專利名稱：：杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法，屬于對藥材進行質(zhì)量控制的
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：我國傳統(tǒng)的中藥及其制劑大多缺乏嚴密的質(zhì)量標準和科學(xué)的檢測手段，難以有效的控制其內(nèi)在質(zhì)量，不能保證用藥的安全、有效，也不符合國際醫(yī)藥市場的要求，嚴重制約了我國中藥行業(yè)的發(fā)展。加強中藥材質(zhì)量控制研究是中藥規(guī)范化、標準化的關(guān)鍵問題。只有對中藥材進行科學(xué)的質(zhì)量控制，才能保證中藥質(zhì)量，實現(xiàn)中藥的"安全、有效、穩(wěn)定、可控"。杠板歸為蓼科蓼屬植物杠板歸PolygonumperfoliatumLinn.的干燥全草；生于山谷、灌木叢中或水溝旁；主產(chǎn)于貴州、江蘇、浙江、福建、江西、廣東、廣西、四川、湖南。夏季開花時采割，曬干。別名河白草、蛇倒退、梨頭刺、蛇不過等。杠板歸為常用中藥材，也是常用苗藥。性味功能與主治酸；苦；性平；有清熱解毒；利濕消腫；散瘀止血之功效，常用于治療疔瘡癰腫；丹毒；癱腮；乳腺炎；聘耳；喉蛾；感冒發(fā)熱；肺熱咳嗽；百日咳;瘰疬；痔疾；魚口便毒；瀉??；黃疸；臌脹；水腫；淋濁；帶下；瘧疾；風(fēng)火赤眼；跌打腫痛；吐血；便血；蛇蟲咬傷。眾所周知，杠板歸藥材成分復(fù)雜，主要包括以下幾類生物堿、苦味素、苯并色原酮類、萜類、黃酮、香豆精、木脂素、留類化合物、揮發(fā)油和有機酸類。研究表明，杠板歸的多種化學(xué)成分有各種具體的藥理作用。但其質(zhì)量控制方法文獻報道很少，僅在《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準》2003年版中以咖啡酸為對照進行了薄層色譜鑒別研究。因此，為了使杠板歸的臨床應(yīng)用更加安全、有效、科學(xué)、合理，必須加強其質(zhì)量控制。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法。本發(fā)明通過對杠板歸中槲皮素的含量進行定量研究并以槲皮素和槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯為對照進行薄層色譜研究，完善了杠板歸藥材的質(zhì)量檢測標準，彌補了現(xiàn)有質(zhì)量檢測技術(shù)的不足，使杠板歸藥材的質(zhì)量檢測技術(shù)更為科學(xué)、合理。本發(fā)明所述質(zhì)量檢測方法包括性狀、鑒別、檢査、含量測定項目中的部分或全部，所述鑒別包括以槲皮素對照品為對照、以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.5i.5:o.2o.7為展開劑的薄層色譜法和/或以槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品為對照、以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6為展開劑的薄層色譜法；含量測定是對藥材中所含槲皮素的含量測定，槲皮素的含量測定方法是以槲皮素對照品為對照、以有機相水相=1040:9060的高效液相色譜法。具體的薄層色譜鑒別方法為(1)取杠板歸藥材2g，用7090。/。乙醇回流提取l2h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇12mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇制成0.10.5mgml—1的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各25uL，分別點于同一硅膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.51.5:o.2o.7為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點；(2)取杠板歸藥材2g，用70%90%乙醇回流提取1211，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇12mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇制成O.10.5mgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-{3-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各25yL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點。具體的槲皮素含量測定方法為照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以有機相水相=1040:9060為流動相；柱溫為2535。C;檢測波長為340370nm;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每lmL含O.010.05mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取杠板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入37呢鹽酸無水乙醇溶液2050mL，稱定重量，加熱回流提取36小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液l5mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各520uL，注入液相色譜儀，觀使，即得；杠板歸按干燥品計算，含槲皮素C巧Hw07重量不得少于0.20%。以上所述的有機相為乙腈或甲醇，所述的水相為質(zhì)量濃度0.001%5%的甲酸、乙酸或磷酸水溶液。流動相中的有機相優(yōu)選為乙腈，水相優(yōu)選為質(zhì)量濃度O.02%磷酸溶液，有機相與水相的體積比優(yōu)選為30:70。本發(fā)明最全面的質(zhì)量檢測方法包括以下項目性狀莖略呈方形，有棱角，多分枝，直徑達0.2cm，表面紫紅色、棕黃色或黃綠色，棱角上有倒鉤刺，節(jié)略膨大，節(jié)間長26cm，斷面纖維性，黃白色，有髓或中空；葉互生，有長柄，盾狀著生；葉片多皺縮，展開后呈近等邊三角形，灰綠色至紅棕色，下表面葉脈及葉柄均有倒生鉤刺；托葉鞘包于莖節(jié)上或脫落；短穗狀花序頂生或生于上部葉腋，苞片圓形，花小，多萎縮或脫落；氣微，莖味淡，葉味酸；鑒別(1)莖橫切面表皮為一列厚壁細胞，內(nèi)含紅棕色物質(zhì)；皮層薄，35列細胞;嫩莖中柱鞘纖維束連續(xù)成環(huán)層，老莖被射線割斷成斷續(xù)環(huán)層，細胞壁厚，木化；韌皮部老莖具韌皮纖維，壁厚木化，形成層明顯；木質(zhì)部導(dǎo)管大，單個或35個成群；髓部細胞大，有的中空；老莖在皮層、韌皮部、射線及髓部可見多數(shù)草酸鈣簇晶，嫩莖則少見或無；(2)葉的表面觀上表皮細胞不規(guī)則多角形，垂周壁近平直或微彎曲；其下有類圓形的分泌細胞，直徑65um;腺毛少數(shù)，頭部2-8細胞，柄短；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲；氣孔平軸式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多為單細胞；主脈和葉緣疏生由多列斜方形或長方形細胞組成的鉤狀刺；葉肉細胞含草酸鈣簇晶，直徑17-62um;(3)取杠板歸藥材2g，用7090。/。乙醇回流提取l2h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇12mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇制成0.10.5mgml—1的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各25uL，分別點于同一硅膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.51.5:o.2o.7為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點；(4)取杠板歸藥材2g，用70%90%乙醇回流提取1211，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇12mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇制成O.10.5mgml—i的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-{3-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各25yL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%;(2)總灰分照《中國藥典》一部附錄IXK測定，不得超過10.0%;(3)浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少于11.0%;含量測定照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以有機相水相=1040:9060為流動相；柱溫為2535。C;檢測波長為340370nm;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每lmL含O.010.05mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取杠板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入37呢鹽酸無水乙醇溶液2050mL，稱定重量，加熱回流提取36小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液l5mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各520uL，注入液相色譜儀，觀使，即得；杠板歸按干燥品計算，含槲皮素C巧Hw07重量不得少于0.20%。優(yōu)選的質(zhì)量檢測方法包括以下項目性狀莖略呈方形，有棱角，多分枝，直徑達0.2cm，表面紫紅色、棕黃色或黃綠色，棱角上有倒鉤刺，節(jié)略膨大，節(jié)間長26cm，斷面纖維性，黃白色，有髓或中空；葉互生，有長柄，盾狀著生；葉片多皺縮，展開后呈近等邊三角形，灰綠色至紅棕色，下表面葉脈及葉柄均有倒生鉤刺；托葉鞘包于莖節(jié)上或脫落；短穗狀花序頂生或生于上部葉腋，苞片圓形，花小，多萎縮或脫落；氣微，莖味淡，葉味酸；鑒別(1)莖橫切面表皮為一列厚壁細胞，內(nèi)含紅棕色物質(zhì)；皮層薄，35列細胞;嫩莖中柱鞘纖維束連續(xù)成環(huán)層，老莖被射線割斷成斷續(xù)環(huán)層，細胞壁厚，木化；韌皮部老莖具韌皮纖維，壁厚木化，形成層明顯；木質(zhì)部導(dǎo)管大，單個或35個成群；髓部細胞大，有的中空；老莖在皮層、韌皮部、射線及髓部可見多數(shù)草酸鈣簇晶，嫩莖則少見或無；(2)葉的表面觀上表皮細胞不規(guī)則多角形，垂周壁近平直或微彎曲；其下有類圓形的分泌細胞，直徑65um;腺毛少數(shù)，頭部2-8細胞，柄短；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲；氣孔平軸式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多為單細胞；主脈和葉緣疏生由多列斜方形或長方形細胞組成的鉤狀刺；葉肉細胞含草酸鈣簇晶，直徑17-62um;(3)取杠板歸藥材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇制成0.lmgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各5uL，分別點于同一硅膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=8:2:l:0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點；(4)取杠板歸藥材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇制成0.lmgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各5yL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以甲醇甲酸水=9:0.5:0.4為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點；檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%;(2)總灰分照《中國藥典》一部附錄IXK測定，不得超過10.0%;(3)浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少于11.0%;含量測定照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈0.02%磷酸溶液=30:70為流動相；柱溫為25'C;檢測波長為370nm;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每lmL含O.02mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取杠板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入5%鹽酸無水乙醇溶液25mL，稱定重量，加熱回流提取4小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液2mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20uL，注入液相色譜儀，測定，即得；杠板歸按干燥品計算，含槲皮素C巧Hw07重量不得少于0.20%。杠板歸(Polygo皿mperfoliatumL.)藥材收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準》2003年版，該標準對杠板歸的性狀、莖葉的顯微鑒別進行了描述，同時采用咖啡酸為對照品，建立了杠板歸的薄層色譜鑒別方法。這些方法均是從定性的角度建立的，已經(jīng)不能滿足杠板歸應(yīng)用發(fā)展的需要，為此，本發(fā)明人對其質(zhì)量標準進行了提升研究。通過査閱國內(nèi)外文獻資料發(fā)現(xiàn)杠板歸的化學(xué)成分研究報道很少，活性成分不明確，為此，發(fā)明人對杠板歸的化學(xué)成分進行了系統(tǒng)的研究，研究結(jié)果表明黃酮類化合物是其主要化學(xué)成分。黃酮類化合物具有抗氧化、清除氧自由基作用；調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)作用；抗炎免疫及抗衰老等作用。為了更有效的控制藥材質(zhì)量，根據(jù)杠板歸所含的主要成分之一槲皮素的特點，采用高效液相色譜法進行了含量測定，并對含量測定進行了方法學(xué)研究。以下是本發(fā)明人對杠板歸的質(zhì)量檢測方法進行實驗研究并優(yōu)選的過程一、檢査項目l.水分照水分測定法(《中國藥典》一部附錄IXH第一法)測定。發(fā)明人測定了20個不同產(chǎn)地的杠板歸藥材中水分的含量，結(jié)果見表l:表l不同產(chǎn)地杠板歸藥<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>各產(chǎn)地杠板歸藥材的水分含量平均值為11.9%，最高值為13.5%。由于不同產(chǎn)地的地域差異性，暫定水分含量不得超過14.0%，將其列入質(zhì)量檢測標準。2.灰分照灰分測定法《中國藥典》一部附錄IXK測定，發(fā)明人測定了20個不同產(chǎn)地的杠板歸藥材中灰分的含量，結(jié)果見表2:表2不同產(chǎn)地杠板歸藥j<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>各產(chǎn)地杠板歸藥材的灰分含量平均值為8.06%，最高值為8.8%。由于不同產(chǎn)地的地域差異性，暫定灰分含量不得超過IO.0%，將其列入質(zhì)量檢測標準。3.浸出物按照浸出物測定法項下的冷浸法(《中國藥典》一部附錄XA)分別對杠板歸的水溶性浸出物和醇溶性浸出物進行了測定，測定結(jié)果如下(1)水溶性浸出物照水溶性浸出物測定法項下的冷浸法(《中國藥典》一部附錄XA)分別測定了20個不同產(chǎn)地的杠板歸藥材，測定結(jié)果見表3:表3不同產(chǎn)J也杠板歸藥材水溶性浸出物測定結(jié)果表(n=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>各產(chǎn)地杠板歸藥材的水溶性浸出物含量平均值為16.61%，由于不同產(chǎn)地的地域差異性，按平均值下浮20%作為水溶性浸出物的最低限，g卩16.61%X(1-20%)=13.29%^13.0%，將其列入質(zhì)量檢測標準。(2)醇溶性浸出物照醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法(《中國藥典》一部附錄XA)，以乙醇作為溶劑，分別測定了20個不同產(chǎn)地的杠板歸藥材，測定結(jié)果見表4:表4不同產(chǎn)地杠板歸藥材醇溶性浸出物測定結(jié)果表(n=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>各產(chǎn)地杠板歸藥材的醇溶性浸出物含量平均值為13.56%，由于不同產(chǎn)地的地域差異性，按平均值下浮20%作為醇溶性浸出物的最低限，g卩13.56%X(1-20%)=10.85%^11.0%，將其列入質(zhì)量檢測標準。二、薄層色譜鑒別方法的建立l.試藥薄層層析硅膠G254，分析純(青島海洋化工廠)；聚酰胺薄層層析板(安徽皖西硅源材料廠);定量毛細管(DrummondScientificCo.USA.);槲皮素和槲皮素-3-0-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯(自制)通過波譜解析技術(shù)(IR、"H-NMR、"C-NMR、MS)分析，鑒定其結(jié)構(gòu)；甲醇、氯仿、醋酸乙酯等均為分析純。2.實驗材料共收集了20批樣品，來自貴州花溪、牛郎關(guān)大興田、貴州沿河、貴州貞豐、河南省光山縣文殊鄉(xiāng)、湖南辰溪等地，經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院何順志研究員鑒定為Polygo皿mperfoliatumL.。3.方法與結(jié)果3.1方法取杠板歸藥材(三號篩)2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液。另分別精密稱取槲皮素和槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，分別用甲醇制成O.lmgml4的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各5uL，分別點于同一硅膠G254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酉^甲醇-甲酸(8:2:1:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-0-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各5yL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以甲醇-甲酸-水(9:0.5:0.4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-O-{3-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點。3.2結(jié)果供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點。同時不同產(chǎn)地的杠板歸藥材在薄層色譜上有所區(qū)別。三、槲皮素含量測定方法的建立1.儀器與試藥高效液相色譜儀AglientIIOO高效液相色譜儀(四元泵，DAD檢測器，自動進樣器);CT0-10Asvp柱溫箱(美國)；十萬分之一天平(梅特勒托利多)。色譜乙腈(天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心)；水(重蒸水，臨用前制備)；鹽酸、磷酸等(分析醇)；槲皮素對照品(中國生物制品鑒定所，批號110257-200201);杠板歸藥材(20個不同產(chǎn)地)。2.色譜條件色譜柱HypersilODS(4.6X250mm)柱，乙腈-0.02%磷酸(30:70)為流動相，流速為lmlmin—\檢測波長370nm，柱溫25。C。3.提取條件的選擇(1)提取溶劑的選擇取同一批杠板歸(貴州黔西縣)藥材3份，每份lg，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，分別精密加入無水乙醇(含5%鹽酸)、50%甲醇(含5%鹽酸)、甲醇(含5%鹽酸)各25mL，稱定重量，超聲提取30min，分別用所加溶劑補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液2mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，即得。按上述含量測定方法測定，計算，結(jié)果見表5。表5提取溶劑的選擇<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>由表5可知，各種不同溶劑的提取效果相比較，無水乙醇效果最好，甲醇次之，50%甲醇最差，故選擇無水乙醇作為提取溶劑。(2)提取方法考査方法一超聲提取取同一批杠板歸(貴州黔西縣)藥材lg，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇(含5%鹽酸)25mL，稱定重量，超聲提取2次，每次30min，濾過，合并濾液，濃縮，用無水乙醇定容至25mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液2mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，即得。方法二回流提取取同一批杠板歸(貴州黔西縣)藥材lg，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇(含5%鹽酸)25mL，稱定重量，回流提取3小時，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液2mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，即得。按上述含量測定方法測定，計算，結(jié)果見表6。表6提取方法白<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>由表6可知，回流提取效果明顯優(yōu)于超聲提取，故采用回流提取作為提取方法。(3)回流時間的考査取同一批杠板歸(貴州黔西縣)藥材5份，每份lg，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇(含5%鹽酸)25mL，稱定重量，分別回流提取2、3、4、5、6小時，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液2mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，即得。按上述含量測定方法測定，計算，結(jié)果見表7。表7回流時間考査結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>由表7可知，回流提取4小時即可將杠板歸中的槲皮素提取完全。(4)提取溶劑酸度考査取同一批杠板歸(貴州黔西縣)藥材4份，每份lg，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，分別精密加入無水乙醇25mL(無水乙醇中含鹽酸的濃度分別為4%、5%、6%、7%)，稱定重量，回流提取4小時，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液2mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，即得。按上述含量測定方法測定，計算，結(jié)果見表8。表8提取溶劑酸度考査結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>由表8結(jié)果可知，選擇5.0%的鹽酸無水乙醇作為提取溶劑，提取效果與6.0%及7.0%的鹽酸無水乙醇相似，沒有明顯差異，考慮到實際情況，選擇5.0%的鹽酸無水乙醇作為提取溶劑(5)藥材粒度的考察取同一批杠板歸(貴州黔西縣)藥材4份，分別粉碎成粗粉、中粉、細粉、最細粉，稱取各種規(guī)格的藥粉約lg，分別精密加入無水乙醇(含5%鹽酸)25mL，稱定重量，回流提取4小時，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液2mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，制備成供試品溶液，按照本發(fā)明所述的色譜條件測定槲皮素的含量，結(jié)果表明，把杠板歸藥材粉碎成中粉后測定其中槲皮素的含量最為適宜，試驗結(jié)果見<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>4.系統(tǒng)適應(yīng)性試驗分別精密吸取槲皮素對照品溶液、杠板歸藥材供試品溶液和試劑空白溶液各20uL，注入液相色譜儀，測定，槲皮素的保留時間約為11.7分鐘，本試驗條件下槲皮素與其他組分峰的分離度大于1.5，陰性無干擾，理論板數(shù)按槲皮素峰計均高于3000，故規(guī)定理論板數(shù)按槲皮素峰計不低于3000。5.檢測波長的選擇在液相色譜儀上，于200400nm范圍內(nèi)進行全波掃描，結(jié)果顯示槲皮素的最大吸收波長為370nm，故選定370nm為杠板歸中槲皮素的檢測波長。6.槲皮素的純度檢査經(jīng)過面積歸一化法計算，其純度為99.78%。7.線性關(guān)系的考察精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的槲皮素對照品IO.26mg置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每lmL含槲皮素O.1026mg的對照品貯備液。分別精密吸取該對照品貯備液O.5mL、l.OmL、1.5mL、2.OmL、2.5mL、3.OmL、3.5mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成系列對照品溶液。分別精密吸取該對照品系列溶液各20uL，注入高效液相色譜儀，按本發(fā)明所述色譜條件測定峰面積，記錄色譜圖，結(jié)果見表IO，并以對照品的進樣量X(yg)為橫坐標，峰面積值Y為縱坐標，繪制標準曲線，結(jié)果表明，槲皮素在O.10260.7182yg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。表IO槲皮素線性關(guān)系考査結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>回歸方程y=3817.60x-110.86，g=0.9998。經(jīng)擬合過原點的方程為y=3601.50x，相關(guān)系數(shù)g4.9997。將一樣品的峰面積代入上兩式，結(jié)果相對偏差為0.14%，可認為截距為零，可用外標一點法計算含量，槲皮素在O.10260.7182yg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。8.精密度試驗精密量取槲皮素對照品溶液(濃度0.4104mg/mL)20uL，重復(fù)進樣6次，記錄色譜圖，結(jié)果列于表ll，其RSD為0.05y。，說明該方法具有良好的精密度。表ll槲皮素精密度實驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>9.重復(fù)性試驗取同一批杠板歸(貴州黔西縣)藥材中粉各lg，共6份，按本發(fā)明所述含量測定方法中供試品溶液的制備方法制備供試液。精密吸取供試品溶液各20yL，注入高效液相色譜儀，按本發(fā)明所述色譜條件測定槲皮素峰面積積分值，計算含量，求相對標準偏差。結(jié)果表明，此方法測定槲皮素的重現(xiàn)性良好，RSD=1.89%。結(jié)果見表12。表12重現(xiàn)性試驗結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>io.穩(wěn)定性試驗取同一批杠板歸(貴州黔西縣)藥材中粉lg，按本發(fā)明所述含量測定方法中供試品溶液的制備方法制備供試液，在室溫下按表13規(guī)定時間進樣，測定槲皮素峰面積，求相對標準偏差。結(jié)果表明，槲皮素至少在36小時內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD=1.2%。結(jié)果見表13。表13槲皮素穩(wěn)定性實驗結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>ll.準確度試驗采用加樣回收試驗，取已知含量的重復(fù)性試驗的同一批樣品(貴州黔西縣，槲皮素平均含量為O.264%，g卩2.64mg/g)9份，精密稱取各約O.5g，13份分別加入槲皮素對照品溶液(0.50mg/mL)2.OmL，46份分別加入槲皮素對照品溶液(0.50mg/mL)2.6mL，79份分別加入槲皮素對照品溶液(0.50mg/mL)3.2mL，按供試品溶液的制備方法制備成供試品溶液，照上述色譜條件，進樣、測定，記錄色譜圖，計算含量，求相對標準偏差。結(jié)果表明，此方法具有較好的加樣回收率，結(jié)果見表14。表14回收率試驗結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>12.耐用性試驗取同一批杠板歸(貴州黔西縣)藥材中粉lg，共3份，按本發(fā)明所述方法處理樣品，得供試品溶液，備用，進行以下色譜條件的對比考査研究流動相組成及比例變化、不同色譜柱比較、不同柱溫比較、不同流速比較、不同檢測波長比較，考査結(jié)果見表15-19。表15流動相組成及比例變化考査結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表18不同流速比較考査結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>13.樣品測定按本發(fā)明所述方法制備供試品和對照品溶液，分別進樣，記錄色譜圖，計算槲皮素的含量，結(jié)果見表20。表2020批藥材中槲皮素含量測定結(jié)果表(n=2)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過建立杠板歸藥材中槲皮素的含量測定方法和以槲皮素及槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯為對照的薄層色譜鑒別方法，完善了杠板歸藥材的質(zhì)量檢測標準，彌補了現(xiàn)有質(zhì)量檢測技術(shù)的不足，使杠板歸藥材的質(zhì)量檢測技術(shù)更為科學(xué)、合理；本發(fā)明所述質(zhì)量檢測方法的精密度高，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性好，回收率高，測量結(jié)果準確，可有效控制杠板歸藥材的質(zhì)量，從而確保其臨床應(yīng)用的安全性和有效性。具體實施例方式以下通過實施例進一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。本發(fā)明的實施例l:杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法包括以下項目性狀莖略呈方形，有棱角，多分枝，直徑達0.2cm，表面紫紅色、棕黃色或黃綠色，棱角上有倒鉤刺，節(jié)略膨大，節(jié)間長26cm，斷面纖維性，黃白色，有髓或中空；葉互生，有長柄，盾狀著生；葉片多皺縮，展開后呈近等邊三角形，灰綠色至紅棕色，下表面葉脈及葉柄均有倒生鉤刺；托葉鞘包于莖節(jié)上或脫落；短穗狀花序頂生或生于上部葉腋，苞片圓形，花小，多萎縮或脫落；氣微，莖味淡，葉味酸。鑒別(1)莖橫切面表皮為一列厚壁細胞，內(nèi)含紅棕色物質(zhì)；皮層薄，35列細胞;嫩莖中柱鞘纖維束連續(xù)成環(huán)層，老莖被射線割斷成斷續(xù)環(huán)層，細胞壁厚，木化；韌皮部老莖具韌皮纖維，壁厚木化，形成層明顯；木質(zhì)部導(dǎo)管大，單個或35個成群；髓部細胞大，有的中空；老莖在皮層、韌皮部、射線及髓部可見多數(shù)草酸鈣簇晶，嫩莖則少見或無。(2)葉的表面觀上表皮細胞不規(guī)則多角形，垂周壁近平直或微彎曲；其下有類圓形的分泌細胞，直徑65um;腺毛少數(shù)，頭部2-8細胞，柄短；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲；氣孔平軸式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多為單細胞；主脈和葉緣疏生由多列斜方形或長方形細胞組成的鉤狀刺；葉肉細胞含草酸鈣簇晶，直徑17-62um。(3)取杠板歸藥材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇制成0.lmgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各5uL，分別點于同一硅膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=8:2:1:0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點。(4)取杠板歸藥材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇制成0.lmgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各5yL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以甲醇甲酸水=9:0.5:0.4為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點。檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%。(2)總灰分照《中國藥典》一部附錄IXK測定，不得超過10.0%。(3)浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少于11.0%。含量測定照《中國藥典》2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈0.02%(質(zhì)量濃度)磷酸溶液=30:70為流動相；柱溫為25。C;檢測波長為370nm;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每lmL含O.02mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取杠板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入5%鹽酸無水乙醇溶液25mL，稱定重量，加熱回流提取4小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液2mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20uL，注入液相色譜儀，測定，即得。杠板歸按干燥品計算，含槲皮素(C15H1907)重量不得少于0.20%。本發(fā)明的實施例2:杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法可以僅含以下項目鑒別(1)莖橫切面表皮為一列厚壁細胞，內(nèi)含紅棕色物質(zhì)；皮層薄，35列細胞;嫩莖中柱鞘纖維束連續(xù)成環(huán)層，老莖被射線割斷成斷續(xù)環(huán)層，細胞壁厚，木化；韌皮部老莖具韌皮纖維，壁厚木化，形成層明顯；木質(zhì)部導(dǎo)管大，單個或35個成群；髓部細胞大，有的中空；老莖在皮層、韌皮部、射線及髓部可見多數(shù)草酸鈣簇晶，嫩莖則少見或無。(2)取杠板歸藥材2g，用80。/。乙醇回流提取lh，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇制成0.3mgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各2uL，分別點于同一硅膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=10:3:1.5:0.7為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點。檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%。(2)浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少于11.0%。含量測定照《中國藥典》2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈0.01%(質(zhì)量濃度)乙酸溶液=35:65為流動相；柱溫為3(TC;檢測波長為350nm;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每lmL含O.Olmg的溶液，即得。供試品溶液的制備取杠板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入4%鹽酸無水乙醇溶液35mL，稱定重量，加熱回流提取3小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液3mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各8uL，注入液相色譜儀，觀使，即得杠板歸按干燥品計算，含槲皮素(C15H1907)重量不得少于0.20%。本發(fā)明的實施例3:杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法可以僅含以下項目鑒別(1)葉的表面觀上表皮細胞不規(guī)則多角形，垂周壁近平直或微彎曲；其下有類圓形的分泌細胞，直徑65um;腺毛少數(shù)，頭部2-8細胞，柄短；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲；氣孔平軸式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多為單細胞；主脈和葉緣疏生由多列斜方形或長方形細胞組成的鉤狀刺；葉肉細胞含草酸鈣簇晶，直徑17-62ym。(2)取杠板歸藥材2g，用80。/。乙醇回流提取lh，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇制成0.3mgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各2yL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以甲醇甲酸水=11:0.8:o.e為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點。檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%。(2)總灰分照《中國藥典》一部附錄IXK測定，不得超過10.0%。含量測定照《中國藥典》2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以甲醇0.03%(質(zhì)量濃度)甲酸溶液=20:80為流動相；柱溫為35。C;檢測波長為360nm;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每lmL含O.03mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取杠板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入6%鹽酸無水乙醇溶液45mL，稱定重量，加熱回流提取5小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液4mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各15uL，注入液相色譜儀，測定，即得。杠板歸按干燥品計算，含槲皮素(C15H1907)重量不得少于0.20%。本發(fā)明的實施例4:杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法可以含以下項目性狀莖略呈方形，有棱角，多分枝，直徑達0.2cm，表面紫紅色、棕黃色或黃綠色，棱角上有倒鉤刺，節(jié)略膨大，節(jié)間長26cm，斷面纖維性，黃白色，有髓或中空；葉互生，有長柄，盾狀著生；葉片多皺縮，展開后呈近等邊三角形，灰綠色至紅棕色，下表面葉脈及葉柄均有倒生鉤刺；托葉鞘包于莖節(jié)上或脫落；短穗狀花序頂生或生于上部葉腋，苞片圓形，花小，多萎縮或脫落；氣微，莖味淡，葉味酸。鑒別(1)取杠板歸藥材2g，用70。/。乙醇回流提取1.5h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇1.5mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇制成0.5mgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各5uL，分別點于同一硅膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=3:1:0.5:0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點。(2)取杠板歸藥材2g，用70。/。乙醇回流提取1.5h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇1.5mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇制成0.5mgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各5yL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以甲醇甲酸水=7:0.2:0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點。檢査浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少于11.0%。含量測定照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈0.05%(質(zhì)量濃度)磷酸溶液=25:75為流動相；柱溫為25。C;檢測波長為340nm;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每lmL含O.05mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取杠板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入3%鹽酸無水乙醇溶液30mL，稱定重量，加熱回流提取6小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10uL，注入液相色譜儀，測定，即得。杠板歸按干燥品計算，含槲皮素(C15H1907)重量不得少于0.20%。權(quán)利要求1.一種杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法，所述質(zhì)量檢測方法包括性狀、鑒別、檢查、含量測定項目中的部分或全部，其特征在于所述鑒別包括以槲皮素對照品為對照、以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸＝2～10∶1～3∶0.5～1.5∶0.2～0.7為展開劑的薄層色譜法和/或以槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品為對照、以甲醇∶甲酸∶水＝7～11∶0.2～0.8∶0.2～0.6為展開劑的薄層色譜法；含量測定是對藥材中所含槲皮素的含量測定，槲皮素的含量測定方法是以槲皮素對照品為對照、以有機相∶水相＝10～40∶90～60的高效液相色譜法。2.按照權(quán)利要求l所述杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于具體的薄層色譜鑒別方法為(1)取杠板歸藥材2g，用7090。/。乙醇回流提取l2h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇12mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇制成0.10.5mgml-l的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各25uL，分別點于同一硅膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.51.5:o.2o.7為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點；(2)取杠板歸藥材2g，用70%90%乙醇回流提取1211，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇l2mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-O-6-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇制成O.10.5mgml-l的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各25yL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點。3.按照權(quán)利要求l所述杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于具體的槲皮素含量測定方法為照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以有機相水相=1040:9060為流動相；柱溫為2535。C;檢測波長為340370nm;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每lmL含O.010.05mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取杠板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入37呢鹽酸無水乙醇溶液2050mL，稱定重量，加熱回流提取36小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液l5mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各520uL，注入液相色譜儀，測定，即得；杠板歸按干燥品計算，含槲皮素C15H1907重量不得少于0.20%。4按照權(quán)利要求3所述杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述的有機相為乙腈或甲醇，所述的水相為質(zhì)量濃度O.001%5%的甲酸、乙酸或磷酸水溶液。5按照權(quán)利要求3或4所述杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:流動相中的有機相為乙腈，水相為質(zhì)量濃度O.02%磷酸溶液，有機相與水相的體積比為30二706按照權(quán)利要求l、2或3所述杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述質(zhì)量檢測方法包括以下項目性狀莖略呈方形，有棱角，多分枝，直徑達0.2cm，表面紫紅色、棕黃色或黃綠色，棱角上有倒鉤刺，節(jié)略膨大，節(jié)間長26cm，斷面纖維性，黃白色，有髓或中空；葉互生，有長柄，盾狀著生；葉片多皺縮，展開后呈近等邊三角形，灰綠色至紅棕色，下表面葉脈及葉柄均有倒生鉤刺；托葉鞘包于莖節(jié)上或脫落；短穗狀花序頂生或生于上部葉腋，苞片圓形，花小，多萎縮或脫落；氣微，莖味淡，葉味酸；鑒別(1)莖橫切面表皮為一列厚壁細胞，內(nèi)含紅棕色物質(zhì)；皮層薄，35列細胞;嫩莖中柱鞘纖維束連續(xù)成環(huán)層，老莖被射線割斷成斷續(xù)環(huán)層，細胞壁厚，木化；韌皮部老莖具韌皮纖維，壁厚木化，形成層明顯；木質(zhì)部導(dǎo)管大，單個或35個成群；髓部細胞大，有的中空；老莖在皮層、韌皮部、射線及髓部可見多數(shù)草酸鈣簇晶，嫩莖則少見或無；(2)葉的表面觀上表皮細胞不規(guī)則多角形，垂周壁近平直或微彎曲；其下有類圓形的分泌細胞，直徑65ym;腺毛少數(shù)，頭部2-8細胞，柄短；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲；氣孔平軸式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多為單細胞；主脈和葉緣疏生由多列斜方形或長方形細胞組成的鉤狀刺；葉肉細胞含草酸鈣簇晶，直徑17-62um;(3)取杠板歸藥材2g，用7090。/。乙醇回流提取l2h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇12mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇制成0.10.5mgml-l的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各25uL，分別點于同一硅膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.51.5:o.2o.7為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點；(4)取杠板歸藥材2g，用70%90%乙醇回流提取1211，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇l2mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-O-6-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇制成O.10.5mgml-l的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各25yL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點；檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%;(2)總灰分照《中國藥典》一部附錄IXK測定，不得超過10.0%;(3)浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少于11.0%;含量測定照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以有機相水相=1040:9060為流動相；柱溫為2535。C;檢測波長為340370nm;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每lmL含O.010.05mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取杠板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入37呢鹽酸無水乙醇溶液2050mL，稱定重量，加熱回流提取36小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液l5mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各520uL，注入液相色譜儀，測定，即得；杠板歸按干燥品計算，含槲皮素C15H1907重量不得少于0.20%。7.按照權(quán)利要求6所述杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述質(zhì)量檢測方法包括以下項目性狀莖略呈方形，有棱角，多分枝，直徑達0.2cm，表面紫紅色、棕黃色或黃綠色，棱角上有倒鉤刺，節(jié)略膨大，節(jié)間長26cm，斷面纖維性，黃白色，有髓或中空；葉互生，有長柄，盾狀著生；葉片多皺縮，展開后呈近等邊三角形，灰綠色至紅棕色，下表面葉脈及葉柄均有倒生鉤刺；托葉鞘包于莖節(jié)上或脫落；短穗狀花序頂生或生于上部葉腋，苞片圓形，花小，多萎縮或脫落；氣微，莖味淡，葉味酸；鑒別(1)莖橫切面表皮為一列厚壁細胞，內(nèi)含紅棕色物質(zhì)；皮層薄，35列細胞;嫩莖中柱鞘纖維束連續(xù)成環(huán)層，老莖被射線割斷成斷續(xù)環(huán)層，細胞壁厚，木化；韌皮部老莖具韌皮纖維，壁厚木化，形成層明顯；木質(zhì)部導(dǎo)管大，單個或35個成群；髓部細胞大，有的中空；老莖在皮層、韌皮部、射線及髓部可見多數(shù)草酸鈣簇晶，嫩莖則少見或無；(2)葉的表面觀上表皮細胞不規(guī)則多角形，垂周壁近平直或微彎曲；其下有類圓形的分泌細胞，直徑65um;腺毛少數(shù)，頭部2-8細胞，柄短；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲；氣孔平軸式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多為單細胞；主脈和葉緣疏生由多列斜方形或長方形細胞組成的鉤狀刺；葉肉細胞含草酸鈣簇晶，直徑17-62um;(3)取杠板歸藥材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇制成0.lmgml-l的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各5uL，分別點于同一硅膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=8:2:l:0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點；(4)取杠板歸藥材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇制成0.lmgml-l的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各5yL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以甲醇甲酸水=9:0.5:0.4為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點；檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%;(2)總灰分照《中國藥典》一部附錄IXK測定，不得超過10.0%;(3)浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少于11.0%;含量測定照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈0.02%磷酸溶液=30:70為流動相；柱溫為25'C;檢測波長為370nm;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每lmL含O.02mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取杠板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入5%鹽酸無水乙醇溶液25mL，稱定重量，加熱回流提取4小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液2mL，水浴揮干，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20uL，注入液相色譜儀，測定，即得；杠板歸按干燥品計算，含槲皮素C15H1907重量不得少于0.20%。全文摘要本發(fā)明公開了一種杠板歸藥材的質(zhì)量檢測方法，所述質(zhì)量檢測方法包括性狀、鑒別、檢查、含量測定項目中的部分或全部，所述鑒別包括以槲皮素對照品和/或以槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品為對照的薄層色譜法；含量測定是對藥材中所含槲皮素的含量測定，槲皮素的含量測定方法是以槲皮素對照品為對照、以有機相∶水相＝10～40∶90～60的高效液相色譜法。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過建立杠板歸中槲皮素的含量測定方法和以槲皮素及槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸正丁酯為對照的薄層色譜鑒別方法，完善了杠板歸藥材的質(zhì)量檢測標準，彌補了現(xiàn)有質(zhì)量檢測技術(shù)的不足，使杠板歸藥材的質(zhì)量檢測技術(shù)更為科學(xué)、合理，可有效確保其臨床應(yīng)用的安全性和有效性。文檔編號A61P7/10GK101549021SQ20091030286公開日2009年10月7日申請日期2009年6月3日優(yōu)先權(quán)日2009年6月3日發(fā)明者欣周,超趙,趙鴻賓,陳華國申請人:貴州師范大學(xué)