專利名稱：一種線葉菊黃酮及其提取分離的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種從線葉菊藥材中提取的線葉菊黃酮及其提取分離的方法。
背景技術(shù)：
隨著抗生素在臨床上長(zhǎng)期廣泛的應(yīng)用，也相繼產(chǎn)生了各種耐藥菌株，而且成為當(dāng) 今常規(guī)藥物無(wú)能為力的棘手問(wèn)題。20世紀(jì)80年代后期以來(lái)，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 (methicillin-resistantStaphylococcus aureus, MRSA)居醫(yī)院內(nèi)感染病原菌首位，并在 90年代迅速擴(kuò)散。2002年美國(guó)兒科年會(huì)報(bào)告醫(yī)院外耐藥性金黃色葡萄球菌感染已達(dá)70% 。 近期在荷蘭、加拿大、新加坡等地發(fā)現(xiàn)豬和牧場(chǎng)主都帶有(ST)398MRSA，因此家畜可能成為 社區(qū)獲得性MRSA的重要傳染源。由于MRSA對(duì)多種抗菌藥物具有廣泛耐藥性，對(duì)其可用的 僅為萬(wàn)古霉素等糖肽類抗菌藥物，但該類藥物毒副作用較大，臨床應(yīng)用受到限制。特別是 在90年代后期又出現(xiàn)了耐萬(wàn)古霉素MRSA，開始表現(xiàn)為中介度耐萬(wàn)古霉素金黃色葡萄球菌 (VISA)，美、英、德、意大利、韓國(guó)等相繼報(bào)道檢出了VISA。 2002年美國(guó)密執(zhí)安州及賓夕法尼 亞州先后報(bào)道了完全耐萬(wàn)古霉素MRSA(VRSA) ， 2004年美國(guó)報(bào)道了第3株VRSA，并為美國(guó)感 染性疾病控制中心確證。臨床上對(duì)耐藥性金黃色葡萄球菌治療可選用的藥物越來(lái)越少，使 得MRSA成為國(guó)內(nèi)外臨床上最關(guān)注的一類耐藥菌。因此，尋找抗耐藥菌株的藥物就成為當(dāng)今 醫(yī)藥界最迫切的任務(wù)之一。 正當(dāng)人類對(duì)耐藥細(xì)菌感染無(wú)可奈何之時(shí)，中蒙藥作為新的抗菌藥物脫穎而出，以 其劑型方便、作用迅速、毒副作用小而受到廣大患者的青睞。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)大量的中蒙藥 進(jìn)行了抑菌作用的篩選，在實(shí)驗(yàn)和臨床研究中都有很大進(jìn)展，有的甚至已深入到分子和基 因水平，但是大部分中蒙藥的抗菌機(jī)制尚不明確。對(duì)一些藥敏性低的耐藥細(xì)菌，目前多應(yīng)用 抗生素，而中蒙藥方面的研究較少。 線葉菊[Filifolium sibiricum(L. )Kitam.]又名兔毛蒿、西伯利亞艾蒿、消疔草 等，是菊科線葉菊屬植物，主產(chǎn)于黑龍江、遼寧、吉林、內(nèi)蒙古等地，資源極為豐富，其地上部 分入藥，具有清熱解毒，涼血，安神，鎮(zhèn)"赫依"之功效，用于治療"粘"性熱，血瘀剌痛，月經(jīng)不 調(diào)，臁瘡，心悸失眠，疔瘡癰腫等癥。將其制成膏劑，外敷治療各種化膿性感染，效果顯著。
線葉菊黃酮又稱線葉菊總黃酮，是指線葉菊中所含的兩個(gè)苯環(huán)通過(guò)中央三個(gè) 碳原子相互聯(lián)結(jié)而成的一系列化合物，主要包括兔毛蒿素(Filifolin)、北美圣草素 (Eriodictgol)禾口萬(wàn)壽菊黃素3， 6_ 二甲醚(3， 6-dimethoxyquercetagetin)等。
目前提取分離線葉菊黃酮的方法缺乏相關(guān)資料及報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種工藝簡(jiǎn)單、成本低、效率高、適合工業(yè)化生產(chǎn)的 提取分離線葉菊黃酮的方法。通過(guò)從線葉菊中提取，堿溶與酸沉方法分離，精制，得到線葉
菊黃酮。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種純度較高的線葉菊黃酮，可大量應(yīng)用于藥品企業(yè) 生產(chǎn)。 本發(fā)明的第一個(gè)目的由如下技術(shù)方案實(shí)施 —種提取分離線葉菊黃酮的方法，其包括如下步驟，(1)提取工序、(2)分離工序 和(3)精制工序，即制得成品，其中 (1)提取工序稱取線葉菊粉末置容器中，采用提取方法得到提取液，抽濾后濃縮 濾液至稠膏狀，得到浸膏； (2)分離工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏，再依次經(jīng)過(guò)(a)堿溶工序和 (b)酸沉工序得粗品線葉菊黃酮和母液；其中 (a)堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量4一30 倍量的水及0. 005—0. 01倍量的硼砂，加熱至60—9(TC ，在攪拌下用堿液調(diào)PH = 7—12，在 60—9(TC下保持1一30分鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣；
將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊 粉末重量l一8倍量的水及0. 005-0. 01倍量的硼砂，加熱至60—9(TC，在攪拌下用堿液調(diào) PH = 7—12，在60—9(TC下保持1一30分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；
合并各次所得濾液得到合并濾液； (b)酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至60—9(TC，在攪拌下，加入濃酸調(diào)ra = 2—6，放置析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液； (3)精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量1一40倍量的蒸餾 水，煮沸至全部溶解后抽濾，所述濾液在2—25t:下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃 酮，所剩濾液為母液。 —種提取分離線葉菊黃酮的方法，所述提取方法可以采用熱水提取法、超聲波提 取法、滲漉法、冷浸法、索氏提取法、回流法、或微波萃取法的任一種。 —種提取分離線葉菊黃酮的方法，所述提取方法采用乙醇回流提取法，S卩加入所 述線葉菊粉末重量4-30倍量的30—100%濃度乙醇，加熱回流提取l一6次，每次提取所用 時(shí)間為l一5小時(shí)，趁熱抽濾，合并濾液，回收濾液至無(wú)醇，水液濃縮至稠膏狀得到浸膏。
—種提取分離線葉菊黃酮的方法，所述乙醇回流提取法的優(yōu)選方案為采用加入所 述線葉菊粉末重量8倍量的70%濃度乙醇，加熱回流提取3次，每次提取所用時(shí)間為2小 時(shí)，趁熱抽濾，合并濾液，回收濾液至無(wú)醇，水液濃縮至稠膏狀得到浸膏。
—種提取分離線葉菊黃酮的方法，所述步驟(2)的堿溶工序的優(yōu)選方案為將步 驟(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量4一8倍量的水及0. 005-0. 01倍 量的硼砂，加熱至70—8(TC，在攪拌下用堿液調(diào)PH = 7—9，在70—8(TC下保持15分鐘，趁 熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣； 將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊 粉末重量l一6倍量的水及0. 005-0. 01倍量的硼砂，加熱至70—8(TC，在攪拌下用堿液調(diào) PH = 7—9，在70—8(TC下保持15分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；
合并各次所得濾液得到合并濾液； —種提取分離線葉菊黃酮的方法，所述步驟(2)的酸沉工序的優(yōu)選方案為將所 述合并濾液加熱至70—8(TC ，在攪拌下，加入濃酸調(diào)ra = 4—5，放置析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液； —種提取分離線葉菊黃酮的方法，所述步驟(3)的精制工序的優(yōu)選方案為所述
粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量2—12倍量的蒸餾水，煮沸至全部溶解后抽濾，
所述濾液在2—2(TC下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾液為母液。 —種提取分離線葉菊黃酮的方法，所述步驟(3)的精制工序的優(yōu)選方案為所述
粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量6倍量的蒸餾水，煮沸至全部溶解后抽濾，所述
濾液在2—『C下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾液為母液。 —種提取分離線葉菊黃酮的方法，所述母液可用于步驟(2)分離工序中替代全部
或部分水。 本發(fā)明的第二目的由如下技術(shù)方案實(shí)施 由本發(fā)明所公開的提取分離線葉菊黃酮的方法制備的線葉菊黃酮。 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是所用設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，提取分離費(fèi)用低，大大降低了線葉菊
黃酮藥品的生產(chǎn)成本，適合應(yīng)用于制藥企業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)。通過(guò)本發(fā)明公開的線葉菊中黃酮
的提取分離方法，可得到原藥材最高可達(dá)3%以上的線葉菊黃酮提取物，其純度最高可達(dá)
80%以上，為線葉菊黃酮藥品的生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)的原料。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，這些實(shí)施例僅用于舉例說(shuō)明的目的，并沒(méi)有
限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1 : —種提取分離線葉菊黃酮的方法，其包括如下步驟，(1)提取工序、(2)分離工序 和(3)精制工序，即制得成品，其中 (1)提取工序稱取線葉菊粉末置容器中，采用乙醇回流提取法，S卩加入所述線葉 菊粉末重量30倍量的30%濃度乙醇，加熱回流提取1次，提取時(shí)間為5小時(shí)，趁熱抽濾，回 收濾液至無(wú)醇，水液濃縮至稠膏狀得到浸膏； (2)分離工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏，再依次經(jīng)過(guò)(a)堿溶工序和 (b)酸沉工序得粗品線葉菊黃酮和母液；其中 (a)堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量4倍
量的水及0. 005倍量的硼砂，加熱至9(TC，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 7，在9(TC下保持30分 鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣； 將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊 粉末重量2倍量的水及0. 005倍量的硼砂，加熱至90°C ，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 7，在90°C 下保持30分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；
合并各次所得濾液得到合并濾液； (b)酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至90°C ，在攪拌下，加入濃酸調(diào)ra = 2，放置 析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液；所述母液可用于步驟(2)分離工序 中替代全部或部分水。
(3)精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量1倍量的蒸餾水，煮
沸至全部溶解后抽濾，所述濾液在25t:下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾
6液為母液。所述母液可用于步驟(2)分離工序中替代全部或部分水。
實(shí)施例2: —種提取分離線葉菊黃酮的方法，其包括如下步驟，(1)提取工序、(2)分離工序 和(3)精制工序，即制得成品，其中 (1)提取工序稱取線葉菊粉末置容器中，采用乙醇回流提取法，S卩加入所述線葉 菊粉末重量4倍量的100%濃度乙醇，加熱回流提取6次，每次提取所用時(shí)間為1小時(shí)，趁熱 抽濾，合并濾液，回收濾液至無(wú)醇，水液濃縮至稠膏狀得到浸膏； (2)分離工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏，再依次經(jīng)過(guò)(a)堿溶工序和 (b)酸沉工序得粗品線葉菊黃酮和母液；其中 (a)堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量15倍
量的水及0. 01倍量的硼砂，加熱至6(TC，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 12，在6(TC下保持1分 鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣； 將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊 粉末重量2倍量的水及0. 005倍量的硼砂，加熱至60°C ，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 12，在60°C 下保持1分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；
合并各次所得濾液得到合并濾液； (b)酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至60°C ，在攪拌下，加入濃酸調(diào)ra = 6，放置 析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液；所述母液可用于步驟(2)分離工序 中替代全部或部分水。
(3)精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量40倍量的蒸餾水，
煮沸至全部溶解后抽濾，所述濾液在2t:下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾
液為母液。所述母液可用于步驟(2)分離工序中替代全部或部分水。
實(shí)施例3 : —種提取分離線葉菊黃酮的方法，其包括如下步驟，(1)提取工序、(2)分離工序 和(3)精制工序，即制得成品，其中 (1)提取工序稱取線葉菊粉末置容器中，采用乙醇回流提取法，S卩加入所述線葉 菊粉末重量8倍量的70%濃度乙醇，加熱回流提取3次，每次提取所用時(shí)間為2小時(shí)，趁熱 抽濾，合并濾液，回收濾液至無(wú)醇，水液濃縮至稠膏狀得到浸膏。 (2)分離工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏，再依次經(jīng)過(guò)(a)堿溶工序和 (b)酸沉工序得粗品線葉菊黃酮和母液；其中 (a)堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量6倍
量的水及0. 008倍量的硼砂，加熱至9(TC，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 8，在9(TC下保持5分 鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣； 將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊 粉末重量8倍量的水及0. 01倍量的硼砂，加熱至90°C ，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 8，在90°C 下保持5分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；
合并各次所得濾液得到合并濾液； (b)酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至80°C ，在攪拌下，加入濃酸調(diào)ra = 5，放置 析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液；所述母液可用于步驟(2)分離工序
7中替代全部或部分水。
(3)精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量6倍量的蒸餾水，煮
沸至全部溶解后抽濾，所述濾液在5t:下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾液
為母液。所述母液可用于步驟(2)分離工序中替代全部或部分水。
實(shí)施例4 : —種提取分離線葉菊黃酮的方法，其包括如下步驟，(1)提取工序、(2)分離工序 和(3)精制工序，即制得成品，其中 (1)提取工序稱取線葉菊粉末置容器中，采用熱水提取法得到提取液，抽濾后濾 液濃縮至稠膏狀得到浸膏； (2)分離工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏，再依次經(jīng)過(guò)(a)堿溶工序和 (b)酸沉工序得粗品線葉菊黃酮和母液；其中 (a)堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量8倍
量的水及0. 005倍量的硼砂，加熱至8(TC，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 9，在8(TC下保持15分 鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣； 將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊 粉末重量6倍量的水及0. 005倍量的硼砂，加熱至80°C ，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 9，在80°C 下保持15分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；
合并各次所得濾液得到合并濾液； (b)酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至70°C ，在攪拌下，加入濃酸調(diào)ra = 4，放置 析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液；所述母液可用于步驟(2)分離工序 中替代全部或部分水。
(3)精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量2倍量的蒸餾水，煮
沸至全部溶解后抽濾，所述濾液在8t:下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾液
為母液。所述母液可用于步驟(2)分離工序中替代全部或部分水。
實(shí)施例5 : —種提取分離線葉菊黃酮的方法，其包括如下步驟，(1)提取工序、(2)分離工序 和(3)精制工序，即制得成品，其中 (1)提取工序稱取線葉菊粉末置容器中，加入有機(jī)溶劑，采用超聲波提取法得到 提取液，抽濾后合并濾液，回收有機(jī)溶劑，濃縮至稠膏狀得到浸膏； (2)分離工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏，再依次經(jīng)過(guò)(a)堿溶工序和 (b)酸沉工序得粗品線葉菊黃酮和母液；其中 (a)堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量4倍
量的水及0. 01倍量的硼砂，加熱至7(TC，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 7，在7(TC下保持15分 鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣； 將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊
粉末重量6倍量的水及0. 01倍量的硼砂，加熱至7(TC，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 9，在70°C 下保持15分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；
合并各次所得濾液得到合并濾液； (b)酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至75°C ，在攪拌下，加入濃酸調(diào)ra = 2，放置析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液；所述母液可用于步驟(2)分離工序 中替代全部或部分水。
(3)精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量12倍量的蒸餾水，
煮沸至全部溶解后抽濾，所述濾液在2t:下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾
液為母液。所述母液可用于步驟(2)分離工序中替代全部或部分水。
實(shí)施例6 : —種提取分離線葉菊黃酮的方法，其包括如下步驟，(1)提取工序、(2)分離工序 和(3)精制工序，即制得成品，其中 (1)提取工序稱取線葉菊粉末置容器中，加入有機(jī)溶劑，采用滲漉法得到提取 液，抽濾后合并濾液，回收有機(jī)溶劑，濃縮至稠膏狀得到浸膏； (2)分離工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏，再依次經(jīng)過(guò)(a)堿溶工序和 (b)酸沉工序得粗品線葉菊黃酮和母液；其中 (a)堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量30倍
量的水及0. 01倍量的硼砂，加熱至6(TC，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 8，在6(TC下保持30分 鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣； 將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊 粉末重量8倍量的水及0. 01倍量的硼砂，加熱至60°C ，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 12，在60°C 下保持30分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；
合并各次所得濾液得到合并濾液； (b)酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至65°C ，在攪拌下，加入濃酸調(diào)ra = 4，放置 析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液；所述母液可用于步驟(2)分離工序 中替代全部或部分水。 (3)精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量35倍量的蒸餾水， 煮沸至全部溶解后抽濾，所述濾液在25t:下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩 濾液為母液。所述母液可用于步驟(2)分離工序中替代全部或部分水。
實(shí)施例7 : —種提取分離線葉菊黃酮的方法，其包括如下步驟，(1)提取工序、(2)分離工序 和(3)精制工序，即制得成品，其中 (1)提取工序稱取線葉菊粉末置容器中，加入有機(jī)溶劑，采用冷浸法得到提取 液，抽濾后合并濾液，回收有機(jī)溶劑，濃縮至稠膏狀得到浸膏； (2)分離工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏，再依次經(jīng)過(guò)(a)堿溶工序和 (b)酸沉工序得粗品線葉菊黃酮和母液；其中 (a)堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量20倍
量的水及0. 01倍量的硼砂，加熱至8(TC，在攪拌下用堿液調(diào)ra = ll，在9(TC下保持2分 鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣； 將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊 粉末重量4倍量的水及0. 009倍量的硼砂，加熱至90°C ，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 11 ，在90°C 下保持2分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；
合并各次所得濾液得到合并濾液；
9
(b)酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至80°C ，在攪拌下，加入濃酸調(diào)HI = 4，放置 析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液；所述母液可用于步驟(2)分離工序 中替代全部或部分水。
(3)精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量30倍量的蒸餾水，
煮沸至全部溶解后抽濾，所述濾液在3t:下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾
液為母液。所述母液可用于步驟(2)分離工序中替代全部或部分水。
實(shí)施例8 : —種提取分離線葉菊黃酮的方法，其包括如下步驟，(1)提取工序、(2)分離工序 和(3)精制工序，即制得成品，其中 (1)提取工序稱取線葉菊粉末置容器中，加入有機(jī)溶劑，采用索氏提取法得到提 取液，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮至稠膏狀得到浸膏； (2)分離工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏，再依次經(jīng)過(guò)(a)堿溶工序和 (b)酸沉工序得粗品線葉菊黃酮和母液；其中 (a)堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量6倍
量的水及o. 009倍量的硼砂，加熱至85t:，在攪拌下用堿液調(diào)ra = ll，在85t:下保持5分
鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣； 將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊 粉末重量5倍量的水及0. 01倍量的硼砂，加熱至85 °C ，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 11，在85°C 下保持5分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；
合并各次所得濾液得到合并濾液；(b)酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至85t:，在攪拌下，加入濃酸調(diào)ra = 3，放置
析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液；所述母液可用于步驟(2)分離工序 中替代全部或部分水。 (3)精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量15倍量的蒸餾水， 煮沸至全部溶解后抽濾，所述濾液在l(TC下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩 濾液為母液。所述母液可用于步驟(2)分離工序中替代全部或部分水。
實(shí)施例9: —種提取分離線葉菊黃酮的方法，其包括如下步驟，(1)提取工序、(2)分離工序 和(3)精制工序，即制得成品，其中 (1)提取工序稱取線葉菊粉末置容器中，加入有機(jī)溶劑，采用回流法得到提取 液，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮至稠膏狀得到浸膏； (2)分離工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏，再依次經(jīng)過(guò)(a)堿溶工序和 (b)酸沉工序得粗品線葉菊黃酮和母液；其中 (a)堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量30倍
量的水及0. 005倍量的硼砂，加熱至7(TC，在攪拌下用堿液調(diào)ra = IO，在7(TC下保持6分 鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣； 將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊
粉末重量i倍量的水及o. 005倍量的硼砂，加熱至70°c ，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 10，在70°C
下保持6分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；
合并各次所得濾液得到合并濾液； (b)酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至7(TC，在攪拌下，加入濃酸調(diào)ra = 5，放置 析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液；所述母液可用于步驟(2)分離工序 中替代全部或部分水。
(3)精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量4倍量的蒸餾水，煮
沸至全部溶解后抽濾，所述濾液在25t:下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾 液為母液。所述母液可用于步驟(2)分離工序中替代全部或部分水。
實(shí)施例10 : —種提取分離線葉菊黃酮的方法，其包括如下步驟，(1)提取工序、(2)分離工序 和(3)精制工序，即制得成品，其中 (1)提取工序稱取線葉菊粉末置容器中，加入有機(jī)溶劑，采用微波萃取法得到提 取液，提取液回收有機(jī)溶劑，濃縮至稠膏狀得到浸膏； (2)分離工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏，再依次經(jīng)過(guò)(a)堿溶工序和 (b)酸沉工序得粗品線葉菊黃酮和母液；其中 (a)堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量6倍
量的水及0. 005倍量的硼砂，加熱至8(TC，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 7，在8(TC下保持15分 鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣； 將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊 粉末重量8倍量的水及0. 005倍量的硼砂，加熱至90°C ，在攪拌下用堿液調(diào)ra = 7，在90°C 下保持1分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；
合并各次所得濾液得到合并濾液； (b)酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至8(TC，在攪拌下，加入濃酸調(diào)ra = 5，放置 析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液；所述母液可用于步驟(2)分離工序 中替代全部或部分水。 (3)精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量25倍量的蒸餾水，
煮沸至全部溶解后抽濾，所述濾液在2t:下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾
液為母液。所述母液可用于步驟(2)分離工序中替代全部或部分水。
實(shí)施例11 : 下面將通過(guò)動(dòng)物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明本發(fā)明涉及的線葉菊黃酮對(duì)耐藥金黃色葡萄球
菌的治療作用。
(1)藥效學(xué)研究 線葉菊黃酮對(duì)耐藥金黃色葡萄球菌致小鼠死亡的保護(hù)作用。 取純系昆明種小鼠20只，隨機(jī)分成細(xì)菌感染對(duì)照組、線葉菊黃酮組，共2組，每組 IO只，雌雄各半。用含有5%的胃膜素稀釋耐藥金黃色葡萄球菌為每毫升1.0xl09，每只鼠 腹腔注射菌液0. 5ml，同時(shí)，治療組按442mg/kg的劑量灌胃給藥，12小時(shí)后第二次灌胃給 藥。觀察并記錄感染后72h小鼠的死亡數(shù)，小鼠感染耐藥金黃色葡萄球菌后，24小時(shí)內(nèi)動(dòng)物 9只死亡。給藥組48小時(shí)內(nèi)未見(jiàn)有小鼠死亡，超過(guò)48小時(shí)后死亡4只，提示線葉菊黃酮可 抑制耐藥金黃色葡萄球菌所致小鼠的死亡，實(shí)驗(yàn)證明線葉菊黃酮在體內(nèi)有抗菌作用。
(2)急性毒性試驗(yàn)研究
11
選擇昆明種體重20 22g清潔級(jí)小鼠24只，隨機(jī)分為4組，每組6只，雌雄各半。 分別為線葉菊黃酮100%、20%和2% 3個(gè)濃度組及對(duì)照組。禁食12小時(shí)，對(duì)各組小鼠按 0. 5ml/20g(體重)，24小時(shí)內(nèi)分多次灌胃給藥。給藥后觀察試驗(yàn)動(dòng)物中毒表現(xiàn)和死亡情況， 連續(xù)觀察14天。無(wú)一死亡，存活小鼠解剖未發(fā)現(xiàn)異常。
(3)長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究 挑選大鼠80只，雌雄各半，長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)分高，中，低三個(gè)劑量組和空白對(duì)照組 (lml蒸餾水)灌胃，每天給藥一次，連續(xù)給藥90天，給藥期間注意觀察大鼠的活動(dòng)、毛色、進(jìn) 食、體重等情況，給藥90天后停藥，進(jìn)行病理檢驗(yàn)，給藥高、中、低劑量組與空白對(duì)照組比較 為發(fā)現(xiàn)顯著性差異，30天后，重復(fù)上述檢查，亦未發(fā)現(xiàn)毒副作用，表明線葉菊黃酮毒性小，臨 床用藥安全、可靠。
權(quán)利要求
一種提取分離線葉菊黃酮的方法，特征在于，其包括如下步驟，(1)提取工序、(2)分離工序和(3)精制工序，即制得成品，其中(1)提取工序稱取線葉菊粉末置容器中，采用提取方法得到提取液，抽濾后濃縮濾液至稠膏狀，得到浸膏；(2)分離工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏，再依次經(jīng)過(guò)(a)堿溶工序和(b)酸沉工序得粗品線葉菊黃酮和母液；其中(a)堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量4--30倍量的水及0.005--0.01倍量的硼砂，加熱至60--90℃，在攪拌下用堿液調(diào)PH＝7--12，在60--90℃下保持1--30分鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣；將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊粉末重量1--8倍量的水及0.005--0.01倍量的硼砂，加熱至60--90℃，在攪拌下用堿液調(diào)PH＝7--12，在60--90℃下保持1--30分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣；合并各次所得濾液得到合并濾液；(b)酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至60--90℃，在攪拌下，加入濃酸調(diào)PH＝2--6，放置析出沉淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液；(3)精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量1--40倍量的蒸餾水，煮沸至全部溶解后抽濾，所述濾液在2--25℃下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾液為母液。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取分離線葉菊黃酮的方法，其特征在于所述提取方 法可以采用熱水提取法、超聲波提取法、滲漉法、冷浸法、索氏提取法、回流法、或微波萃取 法的任一種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取分離線葉菊黃酮的方法，其特征在于所述提取方法采用乙醇回流提取法，即加入所述線葉菊粉末重量4-30倍量的30-100%濃度乙醇，加 熱回流提取l一6次，每次提取所用時(shí)間為l一5小時(shí)，趁熱抽濾，合并濾液，回收濾液至無(wú) 醇，水液濃縮至稠膏狀得到浸膏。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種提取分離線葉菊黃酮的方法，其特征在于所述乙醇回 流提取法采用加入所述線葉菊粉末重量8倍量的70%濃度乙醇，加熱回流提取3次，每次提 取所用時(shí)間為2小時(shí)，趁熱抽濾，合并濾液，回收濾液至無(wú)醇，水液濃縮至稠膏狀得到浸膏。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種提取分離線葉菊黃酮的方法，其特征在于，所述步驟(2)的 堿溶工序?qū)⒉襟E(1)提取工序所得到的浸膏加入所述線葉菊粉末重量4一8倍量的水及 0. 005—0. 01倍量的硼砂，加熱至70—8(TC，在攪拌下用堿液調(diào)PH = 7—9，在70—8(TC下 保持15分鐘，趁熱抽濾得到第一次濾液和第一次濾渣；將所述第一次濾渣再進(jìn)行堿溶步驟1次即將所述第一次濾渣再加入所述線葉菊粉末重量l一6倍量的水及0. 005—0. 01倍量的硼砂，加熱至70—8(TC ，在攪拌下用堿液調(diào)PH = 7—9，在70—8(TC下保持15分鐘，趁熱抽濾得到第二次濾液和第二次濾渣； 合并各次所得濾液得到合并濾液。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種提取分離線葉菊黃酮的方法，其特征在于，所述步驟(2)的 酸沉工序?qū)⑺龊喜V液加熱至70—8(TC，在攪拌下，加入濃酸調(diào)PH二 4一5，放置析出沉 淀，抽濾，收集沉淀，得粗品線葉菊黃酮和母液。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種提取分離線葉菊黃酮的方法，其特征在于，所述步驟(3)的 精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量2—12倍量的蒸餾水，煮沸至全 部溶解后抽濾，所述濾液在2—2(TC下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾液為 母液。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種提取分離線葉菊黃酮的方法，其特征在于，所述步驟(3)的 精制工序所述粗品線葉菊黃酮加入所述線葉菊粉末重量6倍量的蒸餾水，煮沸至全部溶 解后抽濾，所述濾液在2—『C下放置，析出結(jié)晶，干燥后即得線葉菊黃酮，所剩濾液為母液。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1、6、7或8所述的一種提取分離線葉菊黃酮的方法，其特征在于所 述母液可用于步驟(2)分離工序中替代全部或部分水。
10. 根據(jù)權(quán)利要求l一9所述的任一種提取分離線葉菊黃酮的方法制備的線葉菊黃酮。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種線葉菊黃酮的提取分離方法及其通過(guò)該方法制備的線葉菊黃酮，通過(guò)從線葉菊中提取，堿溶與酸沉方法分離，精制，得到線葉菊黃酮。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是所用設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，提取分離費(fèi)用低，可得到原藥材最高可達(dá)3％以上的線葉菊黃酮提取物，線葉菊黃酮純度最高可達(dá)80％以上，適合應(yīng)用于制藥企業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P31/00GK101716210SQ200910259419
公開日2010年6月2日 申請(qǐng)日期2009年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月22日
發(fā)明者喬俊纏, 侯峰, 張旭紅, 楊麗敏, 滿達(dá) 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院