水溶性磷酸單酯衍生物及其應用的制作方法

專利名稱：：水溶性磷酸單酯衍生物及其應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及藥物學領域，更具體而言，涉及一類具有良好水溶性的磷酸單酯衍生物及其在制備治療腫瘤或與TNFa、CAMP水平相關疾病的藥物中的應用。
背景技術：
：癌癥的發(fā)病率正在不斷地上升，已成為嚴重威脅人類生命的常見病，其死亡率在所有疾病中居第2位。隨著分子生物學的飛速發(fā)展，人們逐漸認識到細胞內促增殖系統(tǒng)成分的過度表達與抑增殖系統(tǒng)成分的缺失是導致細胞癌變的主要原因，同時對腫瘤細胞內的信號轉導、周期調控、細胞凋亡及血管生成等過程和機理也在被逐步闡明。由于信號轉導通路的關鍵組分在正常細胞與腫瘤細胞之間一般存在較大的差異，這一差異為抗腫瘤藥物研發(fā)的焦點從選擇性低、副作用大、作用于DNA、RNA和微管蛋白等傳統(tǒng)細胞毒類藥物轉移到針對腫瘤細胞內信號轉導通路的新型抗腫瘤藥物提供了可靠的理論依據(jù)，靶向這些組分的抗腫瘤藥物比傳統(tǒng)抗腫瘤藥物具有選擇性強、療效好、毒性小等優(yōu)點。導致細胞癌變的原因是非常復雜的，到目前為止，人們尚未能完全清楚地闡明其發(fā)病的機理和機制，但是許多被證實與腫瘤細胞信號轉導通路相關的關鍵酶的發(fā)現(xiàn)，為選擇性作用于特定靶點的新型抗癌藥物的研究開發(fā)指明了方向。例如，百時美施貴寶公司開發(fā)的Brivanib是一種口服血管內皮生長因子受體(vascularendothelialgrowthfactorrec印tor，VEGFR)酪氨酸激酶和纖維細胞生長因子受體(fibroblast-growthfactorrec印tor，F(xiàn)GFR)通路雙重抑制劑，主要用于防治實體瘤、結腸直腸癌和肝癌等疾病(JournalofMedicinalChemistry,2006，49(7):2143-2146;中國專利申請?zhí)?3816201.6);Enzastaurin是由美國禮來公司開發(fā)的一種雙噴哚馬來酰亞胺類抗癌藥，能選擇性地抑制蛋白激酶C-P(proteinkinaseC_P，PKC-P)(W09517182,1995-06-29)，主要用于防治的神經膠質瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小細胞(型)肺癌、前列腺癌、實體瘤、結腸直腸癌、乳腺癌和卵巢癌等疾病。天然藥物對腫瘤防治具有獨特的效果，可以增強很多耐藥腫瘤細胞對常規(guī)化療藥物的敏感性，如染料木黃酮(genistein)類似物Triphendiol(W02005/049008,2005-06-02)和Phenoxodiol(中國專利申請?zhí)?7198690.8)，對肺癌、實體瘤、子宮癌、前列腺癌、卵巢癌、基底細胞癌、非白血性白血病、鱗狀細胞癌、腎癌等疾病有較好的療效(ExpertOpin.Investig.Drugs,2009，18(4):469-479)。此外，"老藥新用"也是目前尋找新藥的另一途徑，如從市場退出的具有嚴重致畸性的沙利度胺(Thalidomide),目前研究表明其擁有降低TNFa水平和/或提高CAMP水平構成治療很多炎癥炎癥、感染性、免疫學和惡性疾病的用途。來那度胺(Lenalidomide)和Pomalidomide是沙利度胺的衍生物，降低了沙利度胺的嚴重不良反應，同時在治療某些難治性疾病方面具有更好的療效，如多發(fā)性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合癥、肺癌、胰腺癌、實體瘤、腎癌、胃腸癌、結腸直腸癌、免疫調節(jié)劑、軟組織肉瘤、移巻曲(核)淋巴細胞性淋巴瘤、鐮狀細胞性貧血、非霍奇金淋巴瘤、骨髓纖維化癥、植物抗宿主病等疾病(Bioorganic3&MedicinalChemistryLetters,1999，9:1625-1630;Bioorganic&MedicinalChemistryLetters，2007，17:5819-5824;中國專利申請?zhí)?7180299.8)。但是以上這些藥物的水溶性非常差，如Brivanib在pH=6.5的水溶液中不溶，其溶解度小于1Pg/mL，沙利度胺在水中幾乎不溶，其溶解度約為12iig/mL。為了增加藥物的水溶性，可以在藥物的結構中引入親水性基團，如來那度胺和Pomalidomide等在其結構中引入了親水性的氨基，但是它們的水溶性增加不明顯，如來那度胺的溶解度即使在酸性的水溶液中也只有微溶，其溶解度僅為0.4mg/ml左右，而人體的pH值為7.4左右，呈弱堿性，其溶解度會更小。由于水溶性較小的藥物，口服給藥后由于藥物的溶解度小導致其溶解速度慢，不利于藥物的吸收，會導致藥物吸收緩慢、生物利用度較低或達峰時間較長等缺點，嚴重限制了其臨床應用的前景。因此，本領域迫切需要開發(fā)抗腫瘤或與TNFa、CAMP水平相關疾病活性好和水溶性大的藥用化合物。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供一類抗腫瘤或與TNFa、CAMP水平相關疾病活性好具有良好水溶性的藥用化合物。本發(fā)明人經過研究發(fā)現(xiàn)，將水溶性差的母體藥物Brivanib、Triphendiol、phenoxodiol、沙利度胺、來那度胺、Pomalidomide和Enzastaurin制備為磷酸或甲基磷酸前體藥物，其具有良好的水溶性和穩(wěn)定性，在血漿中能被磷酸酯酶迅速水解釋放出母體藥物，因此可以提高藥物的生物利用度，增加療效和減少胃腸道等毒副作用，特別是適合于不宜口服的病人。本發(fā)明提供通式I的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中R選自具有以下結構的基團<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>或其所有可能的可藥用鹽、晶型、或水合物，其中優(yōu)選的可藥用鹽為鈉、鉀、或鈣鹽，最優(yōu)選的可藥用鹽為鈉鹽。與上述基團a—i相X寸應的藥物是a禾口c是Brivanib(由Bristol—MyersSquibb公司研發(fā));b和d是Triphendiol和e是Phenoxodiol(由MarshallEdwards公司研發(fā));f、g和h分別是由Celgene公司研發(fā)的沙利度胺、來那度胺和Pomalidomide;i是由EliLilly公司石開發(fā)的Enzastaurin。本發(fā)明還提供通式II的化合物,0、，OH》\0HII其中^選自具有以下結構的基團或其所有可能的可藥用鹽、異構體、晶型、水合物或溶劑化物。本發(fā)明還提供通式in的化合物R2vO\,O-R，々P\O、0-R2III其中化選自具有以下結構的基團或其所有可能的可藥用鹽、異構體、晶型、水合物或溶劑化物本發(fā)明還提供通式IV的化合物0、《0《HOO0,,\0HIV其中R,選自具有以下結構的基團5或其所有可能的可藥用鹽、異構體、晶型、水合物或溶劑化物。優(yōu)選的通式I化合物選自(1)(R)-1-(4-(4-氟-2-甲基_1H_噴哚基_5_氧基)_5_甲基吡咯并[1，2_f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-基磷酸；(2)(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-噴哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][l，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二鈉鹽；(3)(3-(l，3-二氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二鈉(4)(3-(4-氨基-l-氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二鈉鹽；及其所有可能的異構體、可藥用鹽、晶型、水合物或溶劑化物。本發(fā)明還提供通式I所示化合物合適的可藥用的鹽、水合物或溶劑化物，其中可藥用的鹽包括但并不限于通式I化合物與堿金屬或堿土金屬或質子化胺或質子化氨基酸等形成金屬或胺鹽，如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣、鋇、鋅和鋁鹽。優(yōu)選的鹽為鈉、鉀和鈣鹽。本發(fā)明化合物可與無機酸如鹽酸、硫酸、磷酸、亞磷酸、氫溴酸和硝酸所成的鹽以及與各種有機酸，如馬來酸、蘋果酸、延胡索酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、乙酸、乳酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、棕櫚酸等所成的鹽。本發(fā)明中的一些化合物可能用水或各種有機溶劑結晶或重結晶，在這種情況下，可能形成各種溶劑化物。本發(fā)明包括那些化學計量的溶劑化物，包括水合物，也包括在用低壓升華干燥法制備時形成的包含可變量水的化合物。本發(fā)明還涉及通式I化合物的各種異構體。本發(fā)明化合物的異構體包括互變異構體、順反異構體、構象異構體、內消旋化合物和具有對映或非對映關系的光學異構體。本發(fā)明中化合物可能以順反異構體、光學異構體或互變異構體的形式存在，本發(fā)明包括其所有存在形式，特別是純異構體的形式。不同的異構體形式可以以各種常規(guī)的手段與其它形式的異構體分離或拆分開，或者某種異構體可以各種常規(guī)的合成方法或立體專一或不對稱合成的方法得到。既然通式I化合物是以藥用為目的，可以理解它們最好以純的形式提供，例如至少60%的純度，更合適的75%，更好的85%，最好至少98%的純度(％是指重量百分比)。不純化合物的制備方法可用來用于藥用組合物中更純的形式。這些不夠純的產物中至少含有1%，更適合的5%，更好的至少10%的如通式I所示的化合物或其可藥用的衍生物。本發(fā)明還提供制備通式I化合物或其可藥用的鹽、水合物或溶劑化物的制備方法，下面針對通式I亞結構(通式II和通式III)分別加以描述，其中R、&、和!^具有如上所述的定義。1.通式II化合物的制備方法如下在磷酸三甲酯的溶液中，加入&OH。氮氣保護下，冰浴下加入三氯氧化磷，室溫下攪拌反應4小時。反應完畢后，加入冰水，有固體析出，過濾得到通式II磷酸化合物。此磷6酸化合物與酸或堿反應可以制備通式II可藥用鹽。1)poci3,h20r,0\,0hR，-/\OHRl2)酸或堿n2.通式III化合物的制備方法如下在無水N，N-二甲基甲酰胺溶液中，加入R2H和氫化鈉，攪拌30min，依次加入四丁基溴化銨、碘化鉀和磷酸二芐基氯代甲基酯，攪拌反應12小時。反應完畢，加入水、二氯甲烷萃取得到中間體3。在中間體3的甲醇溶液中，加入10%的鈀/炭。通入氫氣(latm)，攪拌反應3小時。過濾除去鈀/炭，減壓蒸干得通式III磷酸化合物。此磷酸化合物與酸或堿反應可以制備通式III可藥用鹽。R0OHH+C、0\"NaH磨Ro、"DP,oP\oHR;+。~"^c/\0Bn2)酸或堿23HI通式II和通式III化合物的制備方法可以參考文獻JournalofMedicinalChemistry，2000，43(3):440-448、JournalofMedicinalChemistry,2004，47(1):188-195禾卩Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,2003，13:3669—3672，其中中間體2的制備方法可以參考文獻Tetrahedron,1971，27:3163-3170。通式II和通式111化合物的堿性鹽或酸性鹽可以通過本領域技術人員所知的常規(guī)技術制備。關于制備通式I化合物更詳盡的資料見實施例。本發(fā)明還提供一種藥用組合物，包含通式I化合物，或其異構體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物和可藥用輔助劑、稀釋劑或載體。本發(fā)明化合物的藥物組合物，可以以下方面的任意方式施與口服、噴霧吸入、直腸給藥、鼻腔給藥、陰道給藥、局部給藥、非腸道給藥如皮下、靜脈、肌內、腹膜內、鞘內、心室內、胸骨內或顱內注射或輸入，或借助一種外植的儲器用藥，其中優(yōu)選靜脈或肌內非腸道給藥和口服。本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥。給藥劑型可以是固體劑型、液體劑型。液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如凍干粉針劑、水針、片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、包合物、埋植劑、貼劑、擦劑等，其中優(yōu)選凍干粉針劑或水針等針劑、片劑和膠囊。另外需要指出，本發(fā)明化合物針對不同患者的特定使用劑量和使用方法決定于諸多因素，包括患者的年齡，體重，性別，自然健康狀況，營養(yǎng)狀況，化合物的活性強度，服用時間，代謝速率，病癥的嚴重程度以及診治醫(yī)生的主管判斷。這里優(yōu)選使用劑量介于0.01-100mg/Kg體重/天。必須認識到，通式I化合物的最佳給藥劑量和間隔是由化合物性質和諸如給藥的形式、路徑和部位等外部條件決定的，而這一最佳給藥劑量可用常規(guī)的技術確定。同時也必7須認識到，最佳的療程，即通式I化合物在額定的時間內每日的劑量，可用本領域內公知的方法確定。本發(fā)明進一步提供了上述化合物，或其異構體、可藥用鹽、晶型、水合物或溶劑化物在用于制備治療和/或預防腫瘤和/或降低腫瘤壞死因子a(TNFa)水平和/或提高3'，5'-環(huán)-磷酸腺苷(CAMP)水平相關疾病的藥物中的應用。所述腫瘤包括但不局限于肝癌、肺癌、腎癌、胃腸癌、實體瘤、乳腺癌、子宮癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、結腸直腸癌、神經膠質瘤、小細胞肺癌、基底細胞癌、鱗狀細胞癌、軟組織肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤、非白血性白血病、鐮狀細胞性貧血、骨髓增生異常綜合癥、移巻曲(核)淋巴細胞性淋巴瘤等；所述的降低TNFa水平和/或提高CAMP水平相關疾病包括但不局限于濃毒性休克、濃毒癥、內毒素性休克，血液動力學休克和濃毒綜合癥、梗塞后再灌注損傷、瘧疾、分支桿菌感染、腦脊膜炎、牛皮癬、充血性心力衰竭、纖維化疾病、惡病質、移植物排斥、癌原性或癌性病癥、哮喘、自身免疫性疾病、AISD的機會行感染、風濕性關節(jié)炎、多發(fā)性硬化、全身紅斑狼瘡、麻風中的ENL、放射損傷、癌原性病癥和高氧性肺泡損傷、植物抗宿主病和骨髓纖維化癥等疾病。本發(fā)明具有以下有益效果本發(fā)明所提供化合物的活性和母體藥物相當或更強，特別是水溶性遠遠大于母體藥物，可以通過注射給藥來避免藥物口服給藥后被胃酸或各種胃腸道酶所破壞、吸收進入肝門靜脈又往往會受〃肝腸循環(huán)〃、〃首過效應〃的影響，療效低起效慢等缺點，且適合不宜口服的病人。具體實施例方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍?；衔锏娜埸c由RY-1熔點儀測定，溫度計未較正。1H-NMR由JNM-ECA-400超導NMR儀測定，工作頻率"H-NMR400MHz。質譜由MicromassZabSpec質譜儀測定。色譜條件(儀器Agilent1100系列高效液相色譜儀(VWD檢測器)；色譜柱SupelcosilLC-18柱(4.6X250mm，5iim);流動相甲醇，10mM磷酸氫二鉀溶液(磷酸調pH6.8);進樣量10iU;流速lml/min)。Carlo-Erba1122型微量元素分析儀。實施例1(R)-1-(4-(4-氟-2-甲基_1H_吲哚基_5_氧基)_5_甲基吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-基磷酸(化合物1)的制備將(R)-l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-噴哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-醇(741mg，2mmol，其制備方法參考文獻JournalofMedicinalChemistry，2006，49(7):2143-2146)加入到40ml的磷酸三甲酯溶液中，氮氣保護下，冰浴下緩慢加入三氯氧化磷(0.31ml，3.Ommol))，加完后升溫至室溫，攪拌反應12小時。反應完畢后，加入冰水40ml，攪拌，有固體析出，過濾，濾餅用水(20mlX2)洗滌，將濾餅溶于20ml溶有碳酸鈉(212mg)的水溶液中，分別用乙酸乙酯(15ml)和乙醚(15ml)萃取，水層用鹽酸酸化pH二l，有固體析出，過濾，濾餅用水(10mlX2)洗滌，真空干燥過夜，得到粉末狀固體154mg，收率17.1X，HPLC含量為99.4%。Elementalanalysis:(C19H2。FN406P):Calcd:C，50.67;H，4.48;N，12.44;Found:C，50.49;H，4.56;N，12.52。'HNMlUCDsOD)，S(ppm):1.40(d，J=6.6Hz，3H)，2.41(s，3H)，2.45(s，3H)，4.03-4.28(m，2H)，4.96(m，81H)，6.35(m，1H)，6.96(d，J=7.1Hz，1H)，7.14(d，J=7.lHz，1H)，7.61(s，1H)，7.82(s，1H)。ESI-MS:451.1(M+1)。實施例2(1)-(1-(4-(4-氟-2-甲基_1H_吲哚基_5_氧基)_5_甲基吡咯并[1，2-f][l，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二鈉鹽(化合物2)的制備步驟l.(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-噴哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][1，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二芐酯的制備冰浴氮氣保護下，向(R)-1-(4-(4-氟-2-甲基_1H_吲哚基_5_氧基)_5_甲基吡咯并[l，2-f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-醇(741mg，2翻l)的無水N，N-二甲基甲酰胺(15ml)溶液中加入氫化鈉(48mg，2mmol)，攪拌30分鐘，依次加入四丁基溴化銨(100mg，0.3mmol)、碘化鉀(50mg，0.3mmo1)，緩慢滴加磷酸二節(jié)基氯代甲基酯(978mg，3mmo1)的無水N，N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液，攪拌反應24小時。反應完畢，加入水40ml稀釋、二氯甲烷60ml萃取，用水(30ml)洗滌3次，用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸除溶劑。將殘余物用硅膠快速色譜柱純化(環(huán)己烷/乙酸乙酯=16:1，和環(huán)己烷/乙酸乙酯=8:l)，得到455mg粉末狀固體，收率34.5%，熔點59-62°C。'HNMR(DMS0)，S(ppm):1.43(d，J=6.6Hz，3H)，2.34(s，3H)，2.38(s，3H)，4.03-4.28(m，2H)，4.90-5.43(m，7H)，6.35(m，1H)，6.96(d，J=7.1Hz，1H)，7.14-7.40(m，llH)，7.61(s，lH)，7.82(s，lH)。ESI—MS:661.2(M+l)。步驟2.(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-噴哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][1，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二鈉鹽的制備向(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-噴哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][l，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二節(jié)酯(661mg，lmmo1)的甲醇(30ml)中，加入10%的鈀/炭(100mg)，通入氫氣(latm)，攪拌反應3小時。通過硅藻土過濾除去鈀炭，將濾液用碳酸鈉(101mg，0.95mmo1)的水(10.Oml)溶液，減壓蒸除甲醇，殘余的水溶液用乙醚(5X2ml)萃取，將水溶液凍干的白色固體，真空干燥過夜，再用乙醚(3X4ml)洗滌，真空干燥，得到白色粉末固體472mg，收率90X，HPLC含量為99.3%。Elementalanalysis:(C20H20FN4Na207P):Calcd:C，45.81;H，3.84;N，10.69;Found:C，45.57;H，4.05;N，10.42。ESI-MS:480.1(M-2Na+l)。實施例3(3-(l，3-二氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二鈉鹽(化合物3)的制備步驟l.(3-(l，3-二氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二芐酯的制備采用與實施例2步驟1類似的方法制備，將3-(1，3_二氧代異二氫吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮(2.58g，10.Ommol，該化合物的制備方法參考文獻Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,1999，9:1625-1630)、氫化鈉(240mg，lOmmol)、四丁基溴化銨(500mg，1.5,1)、碘化鉀(250mg，1.5,1)，滴加磷酸二節(jié)基氯代甲基酯(4.89g，15mmo1)反應，得到2.26g粉末狀固體，收率41.2%，熔點50-52°C。^NMR(DMS0)，S(ppm):2.11-2.19(m，1H)，2.52—2.69(m，1H)，2.82—2.91(m，1H)，3.02—3.21(m，1H)，4.95—5.48(m，7H)，7.33(m，10H)，7.85-7.99(m，4H)。ESI-MS:549.1(M+l)。步驟2(3-(l，3-二氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二鈉鹽的制備9采用與實施例2步驟2類似的方法制備，向(3-(l，3-二氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二芐酯(2.20g，4mmo1)的甲醇(120ml)中，加入10%的鈀/炭(400mg)，通入氫氣(latm)脫除保護基節(jié)基，再與碳酸鈉(403mg，3.8mmo1)的水(40ml)溶液反應，得到白色粉末固體1.36g，收率91.9%，HPLC含量為99.6%。Elementalanalysis:(C14HuN2Na208P):Calcd:C，40.79;H，2.69;N，6.80;Fo皿d:C，40.57;H，2.53;N，6.93。ESI-MS:368.0(M_2Na+l)。實施例4(3_(4-氨基-1-氧代異二氫吲哚_2-基)_2，6_二氧代哌啶_1_基)甲基磷酸二鈉鹽(化合物4)的制備步驟l.(3-(4-氨基-l-氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二芐酯的制備采用與實施例2步驟1類似的方法制備，將3-(4-氨基-l-氧代異二氫吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮(2.07g，8.Ommol，該化合物的制備方法參考文獻Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,1999，9:1625-1630)、氫化鈉(192mg，8,1)、四丁基溴化銨(400mg，l.2mmol)、碘化鉀(200mg，1.2mmo1)，滴加磷酸二節(jié)基氯代甲基酯(3.91g，12,1)反應，得到1.96g粉末狀固體，收率44.5%。丄匪R(DMS0)，S(卯m):2.00-2.14(m，1H)，2.22-2.49(m，1H)，2.59-2.68(m，1H)，2.83-3.05(m，1H)，4.06-4.28(m，2H)，4.92-5.48(m，9H)，6.81(d，J=7.6Hz，1H)，6.92(d，J=7.6Hz，1H)，7.21(t，J=7.6Hz，1H)，7.33(m，10H)。ESI-MS:550.2(M+l)。步驟2.(3-(4-氨基-l-氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二鈉鹽的制備采用與實施例2步驟2類似的方法制備，向(3-(4-氨基-l-氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二芐酯(1.65g，3mmo1)的甲醇(90ml)中，加入10%的鈀/炭(300mg)，通入氫氣(latm)脫除保護基節(jié)基，再與碳酸鈉(302mg，2.9mmo1)的水(30ml)溶液反應，得到白色粉末固體1.36g，收率91.9%，HPLC含量為99.2%。Elementalanalysis:(C14H14N3Na207P):Calcd:C，40.69;H，3.41;N，10.17;Found:C，40.76;H，3.33;N，10.31。ESI-MS:369.1(M-2Na+l)。實驗例5所制化合物的溶解度、在緩沖液和血漿中的研究前藥是指指用化學方法將有活性的母體藥物轉變成無活性或活性低，在體內經酶促或非酶促反應釋放出原藥而發(fā)揮治療作用的藥物。其中對于磷酸酯類前藥而言，一般在體內經酶或者化學水解釋放出母體藥物。同時基于本發(fā)明的磷酸單酯類前藥主要是增加藥物的水溶性，因此，一般在體外考察其在水中的溶解度、緩沖液和血漿中的水解情況。1、所制備化合物在水中的溶解度稱取研成細粉的待測樣品，加入10ml容量瓶中，再加入10ml水，每隔5分鐘強力振搖30秒，觀察30分鐘內的溶解情況，如無目視可見的溶質顆粒，即視為完全溶解，見表1。表1室溫下所制化合物及其母體藥物在水中的溶解度(mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2、所制備的化合物1和2在磷酸緩沖液和血漿中的水解情況儲備液50iig/ml水溶液人血漿取健康人血(加肝素)，離心，取上清液，分裝冷凍冰箱中備用pH7.4磷酸緩沖液稱取磷酸二氫鉀0.68g，加0.lmol/1氫氧化鈉溶液39.5ml，用水稀釋至100ml方法將人血漿和pH7.4磷酸緩沖液0.8ml分別加入到二個2ml的塑料管中，放入37t:恒溫水浴中保溫半小時，加入以上儲備液O.2ml，渦旋20秒，取樣0.lml，繼續(xù)在37。C保溫半小時。向所取0.lml樣品中力口0.4ml冷凍(_30°C)甲醇，離心3分鐘(4000轉/min)，取上清液進行HPLC分析。此后分別在0.5，l，2，4和8h分別取樣，后處理同前。不同時間的化合物面積百分比=不同時間的積分面積/0時的積分面積*100%。表2化合物1和2在血漿和磷酸緩沖液中的水解情況化合物l化合物2<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>從表1和表2可以看出，磷酸單酯衍生物在水溶液中具有良好的溶解度，比其相應的母體藥物增大1000倍以上，而且在水溶液中穩(wěn)定，在人血漿中能被迅速酶解釋放出母體藥物，由于具有良好的水溶性和穩(wěn)定性，可以制備成注射劑，具有起效快，療效好、副作用小、不受胃腸道影響的優(yōu)點。實驗例6鼠體內移植瘤抑瘤作用的藥理活性評價1、實驗材料與方法1.1、動物與細胞株健康清潔級昆明小鼠，雌雄不限，體重1822g(軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心)；小鼠肝癌H22(軍事醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所)。1.2、實驗方法1.2.1建立小鼠實體瘤模型選擇腹腔接種79d，生長良好的H22肝癌的小鼠，無菌抽取腹水，以無菌生理鹽水稀釋成2.5X107個/mL瘤細胞懸液，充分混勻，消毒小鼠右前肢腋窩部位，接種于健康小鼠右前肢腋部皮下，每只0.2mL，接種56只。1.2.2動物分組及給藥小鼠接種24小時后隨機分為7組模型組(生理鹽水)，Brivanib組(30mg/kg)，化合物1和2組分別給藥38和40mg/kg(摩爾數(shù)相當于Brivanib30mg/kg)，沙利度胺組(50mg/kg)，化合物4和5組71mg/kg(摩爾數(shù)相當于沙利度胺組50mg/kg)，每組8只，每日腹腔注射給藥1次，每次0.15ml/10g體重，連續(xù)給藥7天，由于Brivanib難溶于生理鹽水，按劑量無法注射給藥，因此采用灌胃給藥。1.2.3計算抑瘤率接種后第8天，稱體重后處死小鼠，剝離皮下瘤塊，稱重，計算抑瘤率。抑瘤率=(對照組瘤重_實驗組瘤重)/對照組瘤重*100%，結果見表4。表4對荷瘤小鼠生長和腫瘤的影響G±s)組別劑量/mg/kg/d小鼠個數(shù)小鼠增重/g瘤重抑制率/%模型組—88.05±1.231.85±0.37—Brivanib3086.59±3,031.06±0.40*42.7化合物l3887.77±2.840.42±0,26*77,3化合物24087,06±2.390.45±0.29*75.7沙利度胺5083.70±2.251.52±0.24*17.8化合物37184.08±1.921,46±0.31*21.1化合物47184,76±2.831.3U0.28*29.1注與模型組比較，*P<0.012、對小鼠體內移植性腫瘤H22的影響從表4可知各組對荷瘤小鼠生長和腫瘤影響的平均數(shù)及標準差，與模型組比較，Brivanib、沙利度胺、化合物1、2、3和4都能顯著抑制H22實體瘤生長作用(P<0.01)，其中化合物1(77.3%)和2(75.7%)對腫瘤的抑制作用大至相當，但顯著大于Brivanib(42.7%)，而沙利度胺(17.8%)、化合物3(21.1%)和4(29.1%)對腫瘤的抑制作用相對較弱，但是化合物3和4的活性優(yōu)于沙利度胺?；衔?和2的抗腫瘤活性顯著強于其母體藥物Brivanib，化合物3的活性也優(yōu)于其母體藥物沙利度胺，且都具有良好的水溶性，可以作為更好的抗腫瘤藥物。實驗例710mg/瓶規(guī)格，1000支化合物110g甘露醇10g注射用水加至2000ml，其制成IOOO支按實施例7制劑處方，稱取化合物110g，置容器中，加水1800ml注射用水，并加入甘露醇10g，攪拌至溶解，用0.lmol/LNaOH調pH至6.67.0，加入針用炭lg，5060°C攪拌30分鐘，脫炭后，加注射用水至2000ml，在無菌條件下，用0.22ym微孔濾膜過濾除菌，濾液分轉10ml西林瓶中，每瓶2ml，加塞，凍干，充氮氣，壓塞，包裝。1權利要求下述通式I的化合物，或其可藥用鹽、晶型或水合物其中R選自具有以下結構的基團F2009102592703C00011.tif,F2009102592703C00012.tif2.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物為(1)(R)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[1，2_f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-基磷酸；(2)(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚基-5-氧基)_5_甲基吡咯并[l，2_f][1，2，4]三嗪_6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二鈉鹽；(3)(3-(1，3-二氧代異二氫吲哚_2-基)-2，6-二氧代哌啶-1-基)甲基磷酸二鈉鹽；(4)(3-(4-氨基-l-氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二鈉及其可藥用鹽、晶型或水合物。3.根據(jù)權利要求l-2任一項所述的化合物，其特征在于，所述化合物的可藥用鹽為與酸或堿所形成的鹽。4.包含權利要求l-3任一項所述的化合物的藥物組合物。5.根據(jù)權利要求4所述的組合物，其特征在于，該組合物還包含藥學上可接受的輔料或載體。6.根據(jù)權利要求4或5所述的組合物，其特征在于，該組合物為片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑、分散劑、糖漿劑、口服液、注射劑或栓劑。7.權利要求l-6任一項所述的化合物，或其異構體、可藥用鹽、晶型、水合物或溶劑化物在用于制備治療和/或預防腫瘤和/或與腫瘤壞死因子a(TNFa)水平和/或3'，5'-環(huán)磷酸腺苷(CAMP)水平相關疾病的藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明提供通式I的水溶性磷酸單酯衍生物及其所有可能的異構體、可藥用鹽、晶型、水合物、溶劑化物以及藥物組合物。本發(fā)明還提供了本發(fā)明化合物在制備腫瘤疾病、降低TNFα水平和/或提高CAMP水平相關疾病的防治藥物中的應用，所述藥物并有良好的水溶性，療效高、起效快并且適合不宜口服給藥的患者。文檔編號A61P33/00GK101735276SQ200910259270公開日2010年6月16日申請日期2009年12月17日優(yōu)先權日2009年12月17日發(fā)明者孫玉琦,廖國超,曲昌海,謝寅省申請人:廖國超