一種治療糖尿病腎病的藥物組合物及其制備方法

專利名稱：一種治療糖尿病腎病的藥物組合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物組合物及其制備方法，特別是涉及一種治療糖尿病腎病的藥物組合物及其制備方法。

背景技術：
糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(diabetes mellitus，DM)常見的微血管并發癥，是導致終末期腎病(ESRD)的主要原因，也是糖尿病導致死亡的主要因素，在歐美已成為導致終末期腎病的首要原因。在我國，糖尿病患者達4000萬，其中約20～30％進展為DN，嚴重危害人類健康，近年來隨著糖尿病的日益流行，DN發病率也呈迅速增長，成為目前的研究熱點之一。腎小球基底膜增厚及系膜區細胞外基質(extraeellular matrix，ECM)進行性積聚導致的結節性或彌漫性腎小球硬化是其主要的特征性病理改變，因此又稱糖尿病腎小球硬化癥。研究發現DN的發生可能與生化代謝紊亂(多元醇途徑、蛋白質非酶糖化及脂質代謝異常等)，蛋白激酶C活化、糖基化終末產物沉積，多種細胞因子異常分泌、腎小球血流動力學異常、氧化應激及遺傳等多種因素密切相關。但是，對DN發病機理尚不完全清楚， 西醫治療糖尿病腎病主要采取降糖、降脂、血管緊張素轉化酶抑制劑及血管緊張素受體阻斷劑等藥物進行治療，這些治療藥物雖然對DN有一定療效，可以延緩病情發展，但療效并不十分理想，而且藥物的不良反應較多，患者仍然會不可避免地發展至慢性腎衰，導致透析或死亡。中醫藥在DN的治療中依據傳統中醫理論，根據患者具體病情進行辨證論治，具有明顯特色與優勢，本發明提取物以益氣養陰，活血化瘀為主要治則，吸收與總結名老中醫經驗，通過長期臨床實踐而研制，對于DN有良好療效。


發明內容
本發明目的在于提供一種治療糖尿病腎病的藥物組合物。
本發明目的在于提供一種治療糖尿病腎病的藥物組合物的制備方法。
本發明目的是通過如下技術方案實現的 本發明所述一種治療糖尿病腎病的藥物組合物是由如下原料藥制成的 黃芪200-400重量份，生地50-200重量份，三七6-60重量份，制大黃20-100重量份，衛矛80-280重量份，山萸肉40-150重量份，枳殼30-180重量份。
上述治療糖尿病腎病的藥物組合物優選如下原料藥制成的 黃芪250-350重量份，生地80-160重量份，三七10-50重量份，制大黃30-90重量份，衛矛100-200重量份，山萸肉60-120重量份，枳殼50-150重量份。
更優選地，本發明藥物組合物是由如下原料藥制成的 黃芪300重量份，生地120重量份，三七30重量份，制大黃60重量份，衛矛150重量份，山萸肉90重量份，枳殼100重量份。
更優選地，本發明藥物組合物是由如下原料藥制成的 黃芪260重量份，生地150重量份，三七20重量份，制大黃80重量份，衛矛120重量份，山萸肉110重量份，枳殼60重量份。
更優選地，本發明藥物組合物是由如下原料藥制成的 黃芪340重量份，生地90重量份，三七50重量份，制大黃40重量份，衛矛180重量份，山萸肉70重量份，枳殼140重量份。
衛矛記載于1963年藥典一部。
本發明還提供了上述中藥組合物制劑的制備方法，該方法為原料藥按上述比例經常規工藝方法提取后加入藥學可接受的輔料制成藥劑學可接受的任意常規劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑、口服液或滴丸劑；所述常規工藝方法包括水提取或醇提取或先水提取再醇提取或先醇提取后再水提取，經上述常規提取后還可以過大孔樹脂柱進一步富集有效成分；上述常規工藝水提取方法可以為提取1-4次，每次0.5-3小時，每次加水8-30重量倍；上述常規工藝醇提取方法可以為提取1-4次，每次提取0.5-2小時，每次加5-100％乙醇4-15重量倍；所述過大孔樹脂柱方法為水提取或醇提取液濾過，濾液通過大孔樹脂，先用4-6倍量水或20％以下濃度的乙醇洗脫，洗脫液棄取，再用10-90％乙醇1-10倍洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，得純化提取液。
優選地，本發明提供該藥物組合物制備方法為黃芪、生地、三七、制大黃、衛矛、山萸肉、枳殼七味藥加水煎煮1-3次，每次加水8-12倍量，煎煮0.5-2小時，合并煎煮液，濾過，減壓濃縮得稠膏；按照常規工藝，加入常規輔料制成丸劑、散劑、糖漿劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、貼膏劑、合劑、滴丸劑、栓劑、氣霧劑、軟膏劑、注射劑等劑型。
更優選地，本發明藥物組合物制備方法為黃芪、生地、三七、制大黃、衛矛、山萸肉、枳殼七味藥加水煎煮2次，每次加水10倍量，煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，減壓濃縮得稠膏。按照常規工藝，加入常規輔料制成丸劑、散劑、糖漿劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、貼膏劑、合劑、滴丸劑、栓劑、氣霧劑、軟膏劑、注射劑等劑型。
上述藥學可接受的輔料為填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質等。填充劑包括淀粉、預膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括甜味劑及各種香精；防腐劑包括尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質包括PEG6000，PEG4000，蟲蠟等。
本發明還提供上述中藥組合物在制備治療糖尿病腎病藥物中的應用。所述治療糖尿病為治療1型或2型糖尿病。
下述實驗例及實施例對本發明做進一步解釋，但不構成本發明的限制。實驗例1本發明藥物組合物治療1型糖尿病腎病的療效研究 一、材料及方法 1實驗動物 Wistar大鼠60只，SPF級，雄性，8周齡，體重180～220g，北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號SCXK(京)2007-0001.飼養于中日友好醫院動物室屏障系統，許可證號SYXK(京)2005-0019.實驗期間，大鼠給予普通飼料(中國醫學科學院實驗動物研究所提供)，自由飲水、進食. 2實驗藥物 本發明藥物組合物制備為本發明提取物的方法為黃芪300g，生地120g，三七30g，制大黃60g，衛矛150g，山萸肉90g，枳殼100g加水煎煮3次，每次加10倍量，煎煮1小時，合并提取液，減壓濃縮得稠膏，干燥，粉碎，得干粉；以蒸餾水按1.33g/kg和2.67g/kg的給藥劑量配制成兩種不同濃度的溶液，4℃保存，有效期3天，灌胃給藥前取出放置至室溫。
蒙諾片(福辛普利鈉片，中美合資上海施貴寶制藥有限公司，10mg/片×14片/盒，批號0704091)，使用時將藥片研為細粉，用蒸餾水按0.833mg/kg的給藥劑量配制成所需濃度的混懸液，4℃保存，有效期3天，灌胃給藥前取出放置至室溫。
3主要試劑 血糖試紙強生公司，批號2846475 考馬斯亮藍G250Sigma公司，批號128K1109 水合氯醛北京化學試劑公司，分析純，批號T20070725 甲醛溶液國藥集團化學試劑有限公司，分析純，批號20080203 肌酐試劑盒北京北化康泰臨床試劑公司，批號20071108 鏈脲佐菌素美國Sigma公司，批號060326 4實驗動物模型的建立 60只動物購入后適應性喂養1周，進行基礎狀態測定，剔除血糖與尿蛋白異常的動物3只，其余動物先按體重隨機分為假手術組和手術組，假手術組10只，手術組47只。
假手術組大鼠以3.3ml/kg腹腔注射10％水合氯醛麻醉，背部進行術前備皮，常規消毒，背部切口1～1.5cm，充分暴露右腎，剝離腎臟脂肪包膜，縫合切口。術后1周以4ml/kg的劑量腹腔注射0.1mmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
手術組大鼠麻醉、備皮及消毒處理同假手術組，背部切口1～1.5cm，暴露右腎，剝離腎臟脂肪及腎上腺，結扎右腎門血管，切除右腎，縫合切口。術后動物恢復1周后，按40mg/kg腹腔注射1％的鏈脲佐菌素，72小時后尾尖采血測血糖，以血糖高于16.7mmol/L做為模型成功標準。
5分組與給藥 造模成功動物40只，按體重和血糖隨機分為模型組，發明提取物大劑量組，發明提取物小劑量組和蒙諾組，具體分組與給藥方案如下
各組大鼠分籠飼養，自由飲食進水，給藥方式為灌胃給藥，每日1次，于上午進行，連續給藥20周。
6標本采集 造模后第0，4，8，12，16，20周，大鼠尾尖采血測血糖，同時將大鼠轉入代謝籠內，禁食不禁水，收集24h尿液。于20周末禁食不禁水12h，以3.3ml/kg的劑量腹腔注射10％的水合氯醛麻醉動物，腹主動脈取血，分為兩份，一份用EDTA抗凝管保存，一份離心后取血清，同時取出左腎，剝離腎包膜，縱剖為兩片，取一片固定于10％中性甲醛溶液以進行組織病理學檢查，另一片置液氮中保存。
7指標檢測 7.1一般狀態動物每周稱體重，密切觀察動物精神狀態，反應性，毛發色澤，飲食及排泄狀況。
7.2血生化指標用血糖儀測定各時間點血糖值，取血清，用全自動血生化分析儀測定血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)。
7.3血液流變學指標用EDTA抗凝管保存的血漿用血液流變儀測定全血粘度(高切)、全血粘度(低切)及血漿粘度。
7.4尿蛋白/肌酐將各時間點收集的尿液以3000轉/分離心10min，吸取上清，用考馬斯亮藍法檢測尿蛋白濃度；苦味酸不除蛋白法檢測尿肌酐濃度，計算尿蛋白/肌酐。
7.5組織病理學指標腎組織經10％福爾馬林固定24h后，常規脫水，透明，石蠟包埋，經切片機分別切為3μm厚切片，進行PAS、Masson染色，光鏡下觀察腎組織病理學變化，并采用評分法對其進行半定量分析。
腎小球硬化指數每份樣本在400倍光學顯微鏡下隨機觀察40個腎小球，根據腎小球損害程度進行半定量評分，正常腎小球記為0分，輕微腎小球損害，局部增生系膜基質和/或透明性變等硬化病變占整個小球25％以下記為1分，硬化病變占整個小球26～50％計為2分，51～75％記為3分，76～100％記為4分，腎小球硬化指數按下式計算 腎小球硬化指數＝(1×N1+2×N2+3×N3+4×N4)/(N0+N1+N2+N3+N4)Nx為腎小球硬化得分相應的腎小球的數目. 1.腎小管間質纖維化指數]每份標本100倍鏡下隨機觀察不連續的10個腎小管間質視野，根據腎小管間質炎性細胞浸潤、纖維化、腎小管擴張或萎縮及蛋白管型等損害程度，按照文獻(1、Thallas-bonke V，Thorpe S R，Coughlan M T，et al.Inhibition of NADPH oxidase prevents advancedglycation end product-mediated damage in diabetic nephropathy througha protein kinase C-alpha-dependent pathway.[J].Diabetes，2008，57(2)460-469；2、Sebekova K，Eifert T，Klassen A，etal.Renal effects of S18886(Terutroban)，a TP receptor antagonist，in an experimental model of type 2 diabetes.[J].Diabetes，2007，56(4)968-974.)進行半定量評分，即小管間質無病變損傷為0分，上述病變輕度或相應視野區域＜25％者為1分，中度或相應視野區域為26％～50％者為2分，廣泛或重度，相應視野區域＞50％者為3分。腎小管間質纖維化指數按下式計算 腎小管間質纖維化指數＝(1×N1+2×N2+3×N3)/(N0+N1+N2+N3)Nx為腎小管間質纖維化得分相應的視野區域數目。
8數據處理所有計量資料以均數±標準差(x±s)表示，應用統計軟件SPSS13.0進行One-Way ANOVA單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗，P＜0.05表示組間差異有統計學意義。
二、實驗結果 1一般狀態 整個試驗期間空白組大鼠精神狀態良好，活動自如，反應靈敏，毛發有光澤，體重隨實驗時間穩步增長；模型組大鼠出現多飲多尿、多食，精神萎糜，反應遲鈍，動作遲緩，毛發散亂無光澤，體型消瘦等癥狀，部分動物還出現局部潰瘍，陰囊水腫及白內障等病理表現，體重從造模成功第0周開始與空白組比即有顯著性差異，P＜0.01，隨實驗周期延長差異進一步加大，在實驗結束第20周時體重差異達最高點，有3只動物因衰竭死亡；各給藥組精神狀況、活動及反應靈敏程度均明顯優于模型組，且發明提取物小劑量組大鼠體重從實驗第4周起至第20周與模型組相比顯著增加，除第8周時P＜0.05外，其余時間點均為P＜0.01，發明提取物大劑量組和蒙諾組與模型組相比體重有增加趨勢，但無統計學意義，實驗過程中本發明組合物大劑量死亡1只，小劑量死亡2只，蒙諾組死亡1只。詳細體重結果見附圖1。
2.大鼠血糖的變化 造模成功后，即實驗第0周模型組大鼠血糖與空白組相比顯著升高(P＜0.01)，在之后的第4，8，12，16，20周各時間點均與空白組有極顯著差異，均為P＜0.01；本發明組合物大、小劑量組及蒙諾組與模型組相比，血糖水平有降低趨勢，但無統計學意義，實驗結果見附圖2。
3大鼠血脂水平的變化 由表1可見，與空白組比較，模型組血清TC(總膽固醇)與TG(甘油三酯)水平均顯著升高(P＜0.01).本發明組合物大、小劑量組能顯著降低模型組的TC與TG水平，蒙諾組TG水平與模型組相比有顯著性差異，P＜0.05.而TC水平與模型組相比僅有降低趨勢，而無顯著性差異，表明本發明組合物在改善DN(糖尿病腎病)伴發的血脂紊亂方面效果優于蒙諾. 表1大鼠血脂水平的變化(x±s)
與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01 4大鼠血液流變學指標的變化 各實驗組大鼠全血粘度高切與低切均無顯著性差異；模型組血漿粘度與空白組相比顯著升高，P＜0.01，本發明組合物大劑量組能顯著降低模型組大鼠的血漿粘度水平，P＜0.05，本發明組合物小劑量組和蒙諾組血漿粘度水平與模型組相比無統計學意義，結果見表2。
表2大鼠血液流變學指標的變化(x±s)
與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01 5.大鼠尿蛋白/肌酐的變化 從附圖3可以看出，與空白組比較，模型組尿蛋白/肌酐從實驗第12周起開始顯著升高(P＜0.01)，隨實驗周期的延長差異進一步加大，本發明組合物大劑量組和蒙諾組從第16周起能顯著降低模型組的尿蛋白肌酐比值，均為P＜0.01，本發明組合物小劑量組在實驗結束第20周時尿蛋白肌酐比值與模型組相比有顯著性差異，P＜0.01。
6.大鼠血清總蛋白、白蛋白及腎功能的變化 各實驗組血清總蛋白、白蛋白及肌酐水平無顯著性差異，模型組血清尿素氮水平與空白組相比顯著升高(P＜0.01)，各給藥組對模型組大鼠血尿素氮水平無顯著性影響，結果見表3。
表3大鼠血清蛋白及腎功能的變化(x±s)
與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01 7.大鼠腎組織病理改變 空白組腎小球結構清晰，未見系膜基質增生及基底膜增厚，皮質和髓質腎小管結構正常，排列整齊，間質無炎癥和纖維化。模型組大鼠腎臟明顯增大，皮質變窄，髓質增寬。鮑曼氏囊囊壁明顯增厚，腎小球球囊部分粘連，囊腔增大，腎小球內系膜基質中度至重度增生，呈彌漫性或結節狀，基底膜增厚，部分區域出現局灶性腎小球硬化，腎小球毛細血管叢有分葉現象；皮質腎小管上皮細胞玻璃滴樣和空泡變性，部分腎小管擴張，部分管腔內可見蛋白樣物質或蛋白管型，腎小管上皮細胞脫落，微絨毛脫落，部分區域出現腎小管萎縮。髓質腎小管部分擴張或萎縮，間質可見散在或成片淋巴細胞和單核細胞浸潤及纖維化。發明提取物大劑量組腎小球改變輕微，系膜輕度增生，少數皮質腎小管輕度擴張，皮質腎小管上皮細胞玻璃滴樣和空泡變性較模型組明顯減輕。少數散在髓質腎小管輕度擴張或萎縮，個別區域少量炎性細胞浸潤，偶見蛋白管型，未見明顯纖維化形成。發明提取物小劑量組與蒙諾組腎小球系膜輕至中度增生，部分腎小球球囊輕度粘連，少數腎小球有毛細血管分葉現象。皮質和髓質腎小管部分明顯擴張，輕度灶狀炎性細胞浸潤，腎小管上皮細胞玻璃滴樣和空泡變性程度界于模型組和發明提取物大劑量組之間，少數區域可見有小管萎縮。間質纖維化區域與模型組相比有所減輕，但沒有發明提取物大劑量組改變明顯(見附圖4)。
8.腎組織病理評分結果 模型組大鼠腎小球硬化指數及腎小管纖維化指數與空白組相比顯著升高，均為P＜0.01，本發明組合物大、小劑量組與蒙諾組均可顯著降低模型組大鼠的腎小球硬化指數及腎小管纖維化指數，P＜0.01；結果見表4。
表4大鼠腎組織病理評分結果(x±s)
與模型組比，**P＜0.01 實驗例2本發明藥物組合物治療2型糖尿病腎病的療效研究 一、材料及方法 1.實驗材料 1.1動物 雄性OLETF及LETO大鼠，SPF級，4周齡，體重90-110g，日本大冢制藥有限公司德島研究所惠贈；飼養于中日友好醫院動物室屏障系統，許可證號SYXK(京)2005-0019。實驗期間，大鼠給予普通飼料(中國醫學科學院實驗動物研究所提供)，自由飲水、進食。
1.2藥物與試劑 本發明藥物組合物制備為本發明藥物組合物提取物的方法為黃芪300g，生地120g，三七30g，制大黃60g，衛矛150g，山萸肉90g，枳殼100g加水煎煮2次，每次加10倍量，煎煮1小時，合并提取液，減壓濃縮得稠膏。干燥，粉碎，得干粉；以蒸餾水按1.60g/kg的給藥劑量配制成溶液，4℃保存，有效期3天，灌胃給藥前取出放置至室溫。
蒙諾片(福辛普利鈉片，中美合資上海施貴寶制藥有限公司，10mg/片×14片/盒，批號0704091)，使用時將藥片研為細粉，用蒸餾水按1.00mg/kg的給藥劑量配制成所需濃度的混懸液，4℃保存，有效期3天，灌胃給藥前取出放置至室溫。
1.3主要試劑 同實驗例1。
1.4主要溶液的配制 同實驗例1。
1.5儀器 同實驗例2。
2.實驗方法 2.1分組與給藥 大鼠適應性喂養2周后進行基礎狀態測定，將OLETF大鼠隨機分為3組，LETO大鼠作為空白對照組，具體分組及給藥劑量如下所示，各組動物從12周齡起進行灌胃給藥，分別連續給藥24周與44周。實驗期間大鼠自由飲食飲水。
表5動物分組及給藥情況
2.2標本采集 動物從給藥開始每4周大鼠尾尖采血，測血糖值；將大鼠轉入代謝籠內，收集24h尿液并記錄尿量，進行24小時尿蛋白定量。給藥24周空白組取10只，其余各組取7只，處死取材，進行各項指標測定；給藥44周時各組剩余動物再行處死取材，取材前大鼠禁食不禁水12h，以3.33ml/kg劑量腹腔注射10％水合氯醛麻醉動物，腹主動脈取血分兩份，一份用EDTA抗凝管保存，一份離心后取血清，備用；取左腎從腎門處縱剖為2片，一片固定于10％中性甲醛溶液，另一片置液氮中保存。
2.3指標檢測 2.3.1一般狀態 動物每周稱體重，密切觀察動物精神狀態，反應性，毛發色澤，飲食及排泄狀況。
2.3.224h尿蛋白定量 將各時間點收集的尿液混勻，取約1ml 3000r/min離心10min，取上清，用考馬斯亮藍法測定尿蛋白濃度；并根據動物24h尿量進行24h尿蛋白定量。
2.3.3血生化 用血糖儀測定各時間點血糖；取材血清用自動血生化分析儀測定血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)。
2.3.4血液流變學指標 用EDTA抗凝管保存的血漿用血液流變儀測定全血粘度及血漿粘度。
2.3.5組織病理學 腎組織經10％福爾馬林固定24h后，常規脫水，透明，石蠟包埋，經切片機分別切為3μm厚切片，進行PAS、Masson染色，光鏡下觀察腎組織病理學變化，并采用評分法對其進行半定量分析(同實驗例1)。
3.統計學處理 所有計量資料以均數±標準差(x±s)表示，應用統計軟件SPSS13.0進行One-Way ANOVA單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗，P＜0.05表示組間差異有統計學意義。
二、實驗結果 1.一般狀態 模型組動物從6周齡開始，體重與空白組相比即有顯著性差異，隨實驗進行，動物出現多食，飲水量增加，肥胖，活動減少，毛發發黃，體重在40周齡時與空白組差異達最大，隨后模型組與空白組體重差異減小，至52周齡時兩組體重差異無統計學意義，但模型組動物狀態較前期相比更差，毛發散亂，飲食與飲水量持續增加，尿量增加，少動，有2只動物出現潰瘍，有3只動物死亡，發明提取物組在40，44及48周齡時與模型組相比體重顯著降低。發明提取物與蒙諾組動物狀態較模型組明顯改善，發明提取物組死亡2只，蒙諾組死亡3只，結果見附圖5。
2.大鼠血糖變化 模型組血糖水平與模型組比從6周齡起即顯著升高，隨實驗周期的延長兩組間血糖差異不斷加大，至52周齡時差異達最高，發明提取物在52周齡和56周齡時對模型組血糖水平由顯著降低作用，均為P＜0.01，而蒙諾組僅在52周齡時能顯著降低模型組血糖水平，P＜0.05，表明發明提取物對模型大鼠糖代謝的改善作用優于蒙諾，結果見附圖6。
3.大鼠24h尿蛋白變化 與空白組相比，模型組大鼠24h尿蛋白水平從6周齡起顯著升高，且隨時間推移不斷升高，至56周齡實驗結束時達到高峰，發明提取物組從36周齡起的各個時間點均能顯著降低模型組大鼠24h尿蛋白，而蒙諾組在24周齡、36周齡和44周齡時有顯著降低作用，其他時間點僅有降低趨勢而無統計學差異，結果見附圖7。
4.大鼠血脂水平的變化 模型組血清TC水平36周齡時與空白組相比無顯著性差異，發明提取物組和蒙諾組對模型組TC無明顯影響，56周齡時模型組血清TC水平與空白組相比顯著升高，P＜0.01；發明提取物能顯著降低模型組TC水平，P＜0.01，蒙諾組無降低趨勢；在36周齡和56周齡兩個時間點，模型組大鼠血清TG均顯著升高，P＜0.01，蒙諾組在36周齡TG水平與模型組比顯著降低，但在56周齡無統計學意義，發明提取物組對模型組大鼠TG水平僅有降低趨勢，無統計學差異，結果見表6. 表6各實驗組大鼠血脂的變化(x±s)
與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01 5.大鼠血液流變學指標變化 各實驗組在36周齡時全血粘度高切和全血粘度低切無顯著性差異，56周齡時，模型組全血粘度高切、全血粘度低切與空白組相比顯著升高，均為P＜0.01，發明提取物組能顯著降低模型組大鼠全血粘度高切與全血粘度低切水平，蒙諾組對此兩項指標無明顯改善。模型組血漿粘度在36周齡和56周齡均顯著高于空白組，均為P＜0.01，發明提取物組對模型組血漿粘度有顯著降低作用，分別為P＜0.05，P＜0.01，蒙諾組血漿粘度與模型組比無明顯差異，結果見表7。
表7各實驗組大鼠血液流變學指標變化(x±s)
與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01 6.大鼠血清總蛋白及白蛋白的變化 實驗結果顯示，各實驗組大鼠在36周齡血清總蛋白和白蛋白水平無統計學差異，但模型組該兩項指標有降低趨勢。在56周齡時，模型組大鼠大鼠血清總蛋白與白蛋白水平與空白組相比顯著降低，分別P＜0.01，P＜0.05；發明提取物組可顯著升高模型組大鼠血清總蛋白與白蛋白水平，均為P＜0.01，蒙諾組僅有降低趨勢，但無統計學意義，見表8。
表8各實驗組大鼠血清總蛋白及白蛋白變化(x±s)
與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01 7.大鼠腎功變化 由表9可以看出，36周齡時各實驗組大鼠血清BUN無明顯差異，56周齡時模型組BUN水平與空白組相比有顯著性差異，P＜0.01，發明提取物組對模型組大鼠BUN僅有降低趨勢，蒙諾組與模型組相比，BUN水平無差異。模型組血清肌酐水平在36周齡和56周齡均顯著低于空白組，各給藥組與模型組相比血清肌酐水平無顯著性差異。
表9各實驗組大鼠腎功變化(x±s)
與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01 8.大鼠病理形態學改變 空白組腎小球結構清晰，腎小管結構正常，排列整齊，間質無炎癥和纖維化。模型組大鼠在36周齡時鮑曼氏囊囊壁明顯增厚，腎小球內系膜基質中度增生，呈彌漫性或結節狀，基底膜增厚，部分區域出現局灶性腎小球硬化，皮質腎小管上皮細胞玻璃滴樣和空泡變性，部分腎小管擴張或萎縮，管腔內可見蛋白樣物質或蛋白管型，間質可見散在淋巴細胞和單核細胞浸潤及纖維化。發明提取物組與蒙諾組腎小球改變輕微，系膜輕度增生，少數皮質腎小管輕度擴張，少數散在髓質腎小管輕度擴張或萎縮，個別區域少量炎性細胞浸潤，偶見蛋白管型。56周齡時模型組腎小球系膜基質重度增生，出現彌漫型腎小球硬化，鮑曼氏囊增厚非常顯著，腎小球纖維蛋白帽形成，多數區域出現腎小管明顯擴張，萎縮，嚴重者出現壞死，蛋白管型多見，出現成片的炎性細胞浸潤及纖維化，與36周齡相比，腎組織病變加重明顯，發明提取物組與蒙諾組病變與模型組相比明顯減輕(見附圖8)。
9.大鼠腎組織病理評分結果 與空白組相比，模型組大鼠腎小球硬化指數在36周齡時即有顯著性差異，P＜0.01，到56周齡時差異進一步加大，發明提取物組、蒙諾組與模型組比腎小球硬化指數顯著降低，均為P＜0.01；模型組腎小管間質纖維化指數在36周齡和56周齡均明顯高于空白組，且56周齡時的差異要大于36周齡，在36周齡和56周齡發明提取物組腎小球硬化指數與模型組相比均顯著降低，P＜0.05，蒙諾組僅有降低趨勢，但無統計學意義。
表10各實驗組大鼠腎組織病理評分結果(x±s)
與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01


圖1治療1型糖尿病大鼠體重的變化結果，與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01 圖2治療1型糖尿病大鼠血糖的變化，與模型組比，**P＜0.01 圖3大鼠尿蛋白/肌酐的變化與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01 圖4各實驗組腎臟病理改變(腎小管間質病理改變)，第一組4張照片為PAS，400倍；第二組4張照片為PAS，200倍； 圖5治療2型糖尿病大鼠體重的變化結果與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01 圖6治療2型糖尿病大鼠血糖的變化與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01 圖7大鼠尿蛋白變化，*P＜0.05，**P＜0.01 圖8各實驗組腎臟病理改變(腎小管間質病理改變)，第一組4張照片為36周齡腎小球病理改變PAS，400倍；第二組4張照片為36周齡腎小管間質病理改變PAS，200倍；第三組4張照片為56周齡腎小球病理改變PAS，400倍；第四組4張照片為56周齡腎小管間質病理改變PAS，200倍。
下述實施例均能實現上述實驗例的效果。

具體實施例方式 實施例1 黃芪300g，生地120g，三七30g，制大黃60g，衛矛150g，山萸肉90g，枳殼100g加水煎煮3次，每次加8倍量，煎煮0.5小時，合并提取液，減壓濃縮得稠膏，干燥，粉碎，得干粉，加入1.4倍量的糊精，混勻，加75％乙醇適量制粒，干燥，制成顆粒劑，口服一次8g，每日2次。
實施例2 黃芪260g，生地150g，三七20g，制大黃80g，衛矛120g，山萸肉120g，枳殼60g加12倍量水煎煮1次，煎煮1.5小時，合并提取液，減壓濃縮得稠膏，干燥，粉碎，得干粉，加入適量輔料，制成片劑，口服每日3次，每次3-6片。
實施例3 黃芪350g，生地90g，三七50g，制大黃40g，衛矛180g，山萸肉60g，枳殼140g加水煎煮2次，每次加10倍量，煎煮1小時，合并提取液，減壓濃縮得稠膏，干燥，粉碎，得干粉，加入適當輔料，制成軟膠囊，口服每次2-4粒，每日3次. 實施例4 黃芪250g，生地80g，三七20g，制大黃20g，衛矛120g，山萸肉60g，枳殼70g加水煎煮3次，每次加10倍量，煎煮1小時，合并提取液，減壓濃縮得稠膏，干燥，粉碎，得干粉，加入1.4倍量的糊精，混勻，加75％乙醇適量制粒，干燥，裝膠囊，制成膠囊劑，每日3次，每次3-6粒。
實施例5 黃芪330g，生地100g，三七40g，制大黃50g，衛矛180g，山萸肉80g，枳殼120g，按照常規工藝，加入常規輔料制成丸劑。
實施例6 黃芪260g，生地140g，三七50g，制大黃70g，衛矛190g，山萸肉80g，枳殼140g，按照常規工藝，加入常規輔料制成丸糖漿劑。
實施例7 黃芪350g，生地80g，三七40g，制大黃40g，衛矛160g，山萸肉100g，枳殼130g，按照常規工藝，加入常規輔料制成滴丸劑。
實施例8 黃芪280g，生地150g，三七60g，制大黃80g，衛矛120g，山萸肉100g，枳殼150g，按照常規工藝，加入常規輔料制成氣霧劑。
實施例9 黃芪240g，生地150g，三七20g，制大黃80g，衛矛120g，山萸肉100g，枳殼60g，按照常規工藝，加入常規輔料制成顆粒劑。
實施例10 黃芪360g，生地85g，三七40g，制大黃40g，衛矛180g，山萸肉80g，枳殼70g，按照常規工藝，加入常規輔料制成顆粒劑。
實施例11 黃芪360g，生地85g，三七40g，制大黃40g，衛矛180g，山萸肉80g，枳殼70g， 50％乙醇5重量倍提取2次，每次提取1.5小時，按照常規工藝，加入常規輔料制成顆粒劑。
實施例12 黃芪240g，生地150g，三七20g，制大黃80g，衛矛120g，山萸肉100g，枳殼60g， 30％乙醇6重量倍提取2次，每次提取1.5小時，按照常規工藝，加入常規輔料制成顆粒劑。
實施例13 黃芪280g，生地150g，三七60g，制大黃80g，衛矛120g，山萸肉100g，枳殼150g， 上述原料加水煎煮2次，每次加10倍量，煎煮1小時，合并提取液，提取液濾過，濾液通過大孔樹脂，先用5倍量水洗脫，洗脫液棄取，再用30％乙醇3倍洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，得純化提取液，按照常規工藝，加入常規輔料制成丸糖漿劑。
實施例14 黃芪300g，生地120g，三七30g，制大黃60g，衛矛150g，山萸肉90g，枳殼100g加水煎煮3次，每次加8倍量，煎煮0.5小時，合并提取液，提取液濾過，濾液通過大孔樹脂，先用15％乙醇洗脫，洗脫液棄取，再用40％乙醇3倍洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，得純化提取液，按照常規工藝，加入常規輔料制成丸糖漿劑.
權利要求
1.一種治療糖尿病腎病的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料組成為
黃芪200-400重量份，生地50-200重量份，三七6-60重量份，制大黃20-100重量份，衛矛80-280重量份，山萸肉40-150重量份，枳殼30-180重量份。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料組成為
黃芪250-350重量份，生地80-160重量份，三七10-50重量份，制大黃30-90重量份，衛矛100-200重量份，山萸肉60-120重量份，枳殼50-150重量份。
3.如權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料組成為
黃芪300重量份，生地120重量份，三七30重量份，制大黃60重量份，衛矛150重量份，山萸肉90重量份，枳殼100重量份。
4.如權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料組成為
黃芪260重量份，生地150重量份，三七20重量份，制大黃80重量份，衛矛120重量份，山萸肉110重量份，枳殼60重量份。
5.如權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料組成為
黃芪340重量份，生地90重量份，三七50重量份，制大黃40重量份，衛矛180重量份，山萸肉70重量份，枳殼140重量份。
6.如權利要求1-5任一所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法包括如下方法中的任意一種
方法1水提取1-4次，每次加水8-30重量倍，提取0.5-3小時；或，
方法2乙醇提取1-4次，每次加5-100％乙醇4-15重量倍，提取0.5-2小時；或，
方法3方法1所述的水提取或方法2所述的醇提取液濾過，濾液通過大孔樹脂，先用4-6倍量水或20％以下濃度的乙醇洗脫，洗脫液棄取，再用10-90％乙醇1-10倍洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，得純化提取液。
7.如權利要求1-5任一所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為
黃芪、生地、三七、制大黃、衛矛、山萸肉、枳殼七味中藥，加水煎煮1-4次，每次加8-12倍量，煎煮0.5-2.0小時，合并煎煮液，濾過，減壓濃縮得稠膏；按照常規工藝，加入常規輔料制成丸劑、散劑、糖漿劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、貼膏劑、合劑、滴丸劑、栓劑、氣霧劑、軟膏劑或注射劑。
8.如權利要求7所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為
黃芪、生地、三七、制大黃、衛矛、山萸肉、枳殼七味中藥，加水煎煮2次，每次加10倍量，煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，減壓濃縮得稠膏；按照常規工藝，加入常規輔料制成顆粒劑、丸劑、散劑、糖漿劑、片劑、膠囊劑、貼膏劑、合劑、滴丸劑、栓劑、氣霧劑、軟膏劑。
9.如權利要求1-5任一所述的藥物組合物在治療糖尿病腎病藥物中的應用。
10.如權利要求9所述的應用，其特征在于糖尿病為1型或2型糖尿病。
全文摘要
本發明涉及一種治療糖尿病腎病的藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物的原料組成為黃芪200-400重量份，生地50-200重量份，三七6-60重量份，制大黃20-100重量份，衛矛80-280重量份，山萸肉40-150重量份，枳殼30-180重量份；制備方法為加水煎煮1-4次，每次加水8-12倍量，煎煮0.5-2小時，合并煎煮液，濾過，減壓濃縮得稠膏，加入常規輔料制成丸劑、散劑、糖漿劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、貼膏劑、合劑、滴丸劑、栓劑、氣霧劑、軟膏劑等劑型；本發明組合物具有益氣養陰、活血化瘀之功效，治療糖尿病腎病療效很好。
文檔編號A61P3/10GK101703617SQ200910241369
公開日2010年5月12日 申請日期2009年12月7日 優先權日2009年12月7日
發明者李平, 張浩軍, 馮建春, 李靖, 高菁 申請人:中日友好醫院