專利名稱：蘆丁的新用途的制作方法
技術領域：
本發明屬于醫藥領域，涉及蘆丁的新用途。
背景技術：
肝移植是治療終末期肝病最有效的手段，肝移植體低溫保存再灌注損傷是肝移植 術后肝原發性無功能(PFN)的重要原因，與細胞凋亡密切相關。目前人們針對凋亡發生的 各個環節，探索各種防治方法，從而減輕肝移植體保存再灌注損傷成為了研究的熱點。蘆丁，異名蕓香甙、維生素P、紫槲皮甙(Rutosidejiolaquereitrin)存在于蕓香 科植物蕓香Ruta graveolens L.全草揮發油；或豆科植物槐花kphora japonica L.果實 (槐角)的主要成分；或金絲桃科植物紅旱蓮Hypericum aseyron L.全草；或鼠李科植物 光枝勾兒茶 Berchemia polyphylla Wall, var leioclada Hand. -Mazζ.；或大戟科植物野 梧桐的葉；或蓼科植物蕎麥I^agopyrum esculentum Moench籽苗中。具有抗炎作用；維生素 P樣作用，即具有維持血管抵抗力、降低其通透性、減少脆性等作用，對脂肪浸潤的肝有祛脂 作用，與谷胱甘酞合用祛脂效果更明顯；抗病毒作用；抑制醛糖還原酶作用。目前尚無報道 稱蘆丁具有保肝作用。
發明內容
本發明所解決的技術問題是提供蘆丁的新用途，即蘆丁在制備治療保肝藥中的用 途。通過藥學實驗證明蘆丁可以有效地減輕肝移植體的低溫保存再灌注損傷，對供肝有保 護作用。應用時是以蘆丁為活性成分，加入藥學上可接受的輔料制備而成的制劑，可制成 片劑、膠囊劑或口服液。蘆丁每日服用量為0. 5-2mgo
具體實施例方式以下通過對藥理實驗證明蘆丁如何發揮保肝作用的。一、材料與方法1、材料封閉群雄性SD大鼠1 只，供體體重200 250g，受體體重340 380g， 實驗動物購于四川大學實驗動物中心。SSW-3X顯微外科手術器械包。Q550CW自動病理圖 像分析儀。蘆丁。Bcl-2、Bax免疫組化試劑盒、AST、ALT、LDH試劑盒(北京中山生物技術 有限公司)。2、實驗分組及處理封閉群SD大鼠(n = 126)隨機分為3個組Α組(n = 6，假手 術組)、B組(n = 30 X 2，肝移植對照組)、C組(n = 30 X 2，TMP干預組)；B、C組再根據再 灌注后0. 5h,3h,6h,24h,48h不同時相，又分為5個亞組。3、制備大鼠肝移植模型參照Delriviere和Kamada等[1]方法建立大鼠肝移植 模型。安體醚吸入麻醉，供體肝上上腔靜脈結扎，供體肝下上腔靜脈與受體右腎靜脈按照 Delriviere等[2]方法行袖套吻合(套管內徑為2. 0-2. 2mm、外徑為2. 8-3. 0mm)；供肝門靜脈與受體門靜脈行袖套吻合(套管內徑為1. 5-1. 8mm、外徑為2. 0-2. 2mm)；結扎受體肝固有 動脈；最后將供肝膽管與受體膽管采用套管法重建(內徑為0. 65mm、外徑0. 96mm硬膜外導 管)。B組灌洗及保存液為4°C冷平衡鹽溶液(含肝素鈉5u/ml) ；C組灌洗及保存液為冷 平衡鹽溶液中加TMP(320g/L) ；A組開腹后游離肝周韌帶，分離膽總管及門靜脈，關腹。4、標本的采集和檢測B、C組觀察術后的一般情況，并分別于肝移植再灌注后 0. 5h,3h,6h,24h,48h取腹主動脈血待測肝功能(AST、ALT、LDH)，同時取移植肝一小塊肝組 織待制石蠟標本；A組于關腹后池取標本作為正常對照。采用全自動生化分析儀進行肝功 能測定；利用免疫組織化學染色的方法結合病理圖像分析測定各切片中細胞凋亡調控基因 Bcl-2、BaX表達情況。取部分切片進行常規HE染色，光鏡下觀察肝組織的病理形態學變化。5、免疫組化染色方法石蠟切片常規脫蠟至水；3%過氧化氫阻斷內源性過氧化酶 活性；微波修復抗原，加封閉用羊血清，37°C孵育15min ；加1 50 Bcl_2或1 50 Bax抗 體工作液，4°C孵育過夜；滴加生物素的羊抗兔IgM(l 100)，37°C孵育30min;每張切片滴 加50 μ 1 SP復合物，于37°C孵育30min ；以新鮮配制的DAB顯色，蘇木素復染，封片，顯微鏡 下觀察。鏡下可見陽性染色主要位于胞漿內，少數為核膜，呈淺黃、棕黃或棕褐色顆粒。每 張切片內中外隨機選取6個視野，運用病理圖像分析儀顯微鏡下觀察并測定陽性細胞的輝 度值(與Bcl-2、Bax表達成反比)。6、統計學方法所有計量資料數據以均數士標準差(χ士 S)表示，在計算機上用 SPSS11. 0軟件包處理，方差齊性分析后，組間比較用均數t檢驗，組內比較用單因素方差分 析，組內不同時點間兩兩比較采用q檢驗，指標間相關分析用直線相關分析，P < 0. 05為差 異有顯著性。二、結果1、一般情況本實驗肝移植60例，供體手術時間、血管袖套準備時間、受體手術時 間、無肝期分別為(29. 65士3. 18)min、(9. 05士2. 12)min、(42. 64士4. 07)min、(5. 18士 1. 23) min。手術成功率為88. 33% (53/60)。本實驗發現，肝移植TMP干預組較肝移植對照組在 供肝恢復血流后，其表面很快呈鮮紅色，無花斑狀表現，門靜脈不擴張，肝臟無腫脹，腸管無 淤血，腸系膜動脈搏動有力，膽汁源源不斷流出，上述表現明顯優于肝移植對照組。2、肝組織形態學變化假手術組(A組)無明顯形態學改變；肝移植對照組(B組) 術后肝組織隨著再灌注時間的延長，病理變化逐漸加重肝細胞排列紊亂，細胞濁腫，變性 呈顆粒狀，肝竇變窄，中性粒細胞附壁，繼而出現細胞核染色加深及部分核濃縮，部分還出 現點狀或小片狀壞死，以術后他最嚴重，他后，病理變化隨著再灌注時間的延長逐漸減輕； 肝移植TMP干預組(C組)病理變化較B組相應時點明顯減輕輕度的組織水腫，肝竇內皮 滲出較少，小葉結構基本完好，炎癥細胞浸潤較少。3、大鼠各組AST、ALT、LDH含量與A組比較，B、C組各時點AST、ALT、LDH含量均顯 著性增加(P < 0. 01)；與B組相應的時點比較，C組各時點AST、ALT、LDH含量顯著性降低 (P < 0. 01) ；B、C組內各時點間AST、ALT、LDH含量單因素方差分析差異顯著(P < 0. 01)， 且每兩個時點間q檢驗有顯著性時效關系。4、各組Bcl-2、Bax表達輝度值變化與A組比較，B、C組于肝移植缺血再灌注后 0. 5h、3h、6h Bcl-2表達顯著性增加(P < 0. 01)，Bax表達顯著性降低(P < 0. 01) ’與B組 比較，C組0. 5h、3h、6h Bcl-2表達顯著性上調(P < 0. 01)，Bax表達差異無顯著性；并且B、C組內各時點Bcl-2、Bax表達差異有非常顯著性(P < 0. 01)，且每兩個時點間q檢驗有顯 著性時效關系(24h與48h間例外)。5、肝功能(AST、ALT、LDH)水平與Bcl_2、Bax表達的相關性AST、ALT、LDH水平與 Bcl-2的表達呈顯著性負相關，r值分別為-0. 39 (P < 0. 05)、-0. 51 (P < 0. 01)、-0. 52 (P < 0.01) ；AST、ALT、LDH水平與Bax的表達呈顯著性正相關，r值分別為0. 71、0. 54、 0. 75，P < 0. 01 ；AST、ALT、LDH水平與Bcl-2/Bax表達呈顯著性負相關，r值分別 為-0. 73、-0. 72、-0. 86，P < 0. 01。綜上所述，蘆丁可以通過上調Bcl-2或Bcl-2/Bax表達而有效地減輕肝移植體的 低溫保存再灌注損傷，對供肝有保護作用。但其上調Bcl-2或Bcl-2/Bax表達的具體機制 尚有待進一步研究。參考文獻1、Kamada N, Calne RY. Orthotopic liver transplantation in the rat techniqueusing cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation,1979, 28(1) :47-50.。2、Delriviere L,Kamada N,Goto S,et al. Retransplantation of the liver in therat. Microsurgery,1993,14(S) :416_419。
權利要求
1.蘆丁在制備治療保肝藥中的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其特征是所述保肝藥是以蘆丁為活性成分，加入藥學 上可接受的輔料制備而成的制劑。
3.根據權利要求2所述的用途，其特征是所述制劑是片劑、膠囊劑或口服液。
4.根據權利要求1所述的用途，其特征是每日服用蘆丁 0. 5-2mgo
全文摘要
本發明屬于醫藥領域，涉及蘆丁的新用途。即蘆丁在制備治療保肝藥中的用途。通過藥學實驗證明蘆丁可以有效地減輕肝移植體的低溫保存再灌注損傷，對供肝有保護作用，每日服用量為0.5-2mg。
文檔編號A61K31/7048GK102068449SQ20091021633
公開日2011年5月25日 申請日期2009年11月25日 優先權日2009年11月25日
發明者馮科 申請人:馮科