專(zhuān)利名稱(chēng)：：蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制備治療由病毒引起的疾病的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制藥領(lǐng)域中的新用途，具體涉及蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制備治療由病毒引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：蓬莪術(shù)環(huán)二烯(furanodiene)的化學(xué)結(jié)構(gòu)最早是由日本的Hikino，H.等人于1968年報(bào)道的，其化學(xué)名稱(chēng)為(5E，9Z)-3，6，10-三甲基-4，7，8，ll-四氫化芳癸并[b]呋喃，英文化學(xué)名稱(chēng)為Cyclodeca[b]fu屋，4，7，8，ll_tetrahydro_3，6，10_trimethyl_(5E，9Z)?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)式為1575分子式為C15H2。0分子量為216.15本品的理化性質(zhì)白色結(jié)晶性粉末。無(wú)臭，無(wú)味，在無(wú)水乙醇，丙酮，氯仿中易溶，難溶于水。蓬莪術(shù)環(huán)二烯是存在于姜科植物蓬莪術(shù)(Curcumazedoaria(Berg)Rose)中的一種天然成分。從蓬莪術(shù)根莖中提取的揮發(fā)油稱(chēng)為莪術(shù)油，用莪術(shù)油制成的制劑用于治療早期宮頸癌有較好療效。臨床上莪術(shù)油葡萄糖注射液還可用于治療小兒病毒性肺炎。據(jù)報(bào)道，莪術(shù)油中的有效成分有莪術(shù)醇、莪術(shù)酮、莪術(shù)烯醇、莪術(shù)二酮、a-欖香烯，P-欖香烯和Y-欖香烯油，未見(jiàn)報(bào)道蓬莪術(shù)環(huán)二烯有抗腫瘤或抗病毒活性。莪術(shù)提取物經(jīng)過(guò)多次硅膠柱層析分離，可以得到純度較高的蓬莪術(shù)環(huán)二烯。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制備治療由病毒引起的疾病的藥物中的應(yīng)用，即在制藥中的新應(yīng)用。本發(fā)明還涉及蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制備治療由皰疹病毒、流感病毒、乙型肝炎病毒引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。適合本發(fā)明的口服制劑包括片劑(普通片、含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散3片、可溶片、泡騰片、腸溶片等)；膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊等)；丸劑(滴丸、糖丸、小丸)；口服液體制劑(糖漿劑、混懸劑、溶液劑、乳劑、合劑、露劑或茶劑)；顆粒劑(混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒等)或散劑等。適合本發(fā)明的外用制劑選自栓劑、氣霧劑、粉霧劑、噴霧劑、膜劑、凝膠劑、貼劑、膠齊U、貼膏劑、膏藥、軟膏齊U、搽齊U、洗齊U、涂抹劑或凝膏劑等制劑?？诜苿┗蛲庥弥苿┏Ｓ玫馁x形劑或輔料包括但不僅限于填充劑或稀釋劑、潤(rùn)滑劑或助流劑或抗粘著劑、分散劑、濕潤(rùn)劑、粘合劑、調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑等。粘合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃芪膠、纖維素及其衍生物、明膠漿、淀粉漿或聚乙烯吡咯烷酮，優(yōu)選的纖維素衍生物為微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、羥丙甲基纖維素；填充劑，例如乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纖維素及其衍生物、無(wú)機(jī)鈣鹽、山梨醇或甘氨酸，優(yōu)選無(wú)機(jī)鈣鹽為硫酸鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、沉降碳酸鈣；潤(rùn)滑劑，例如微粉硅膠、硬脂酸鎂、滑石粉、氫氧化鋁、硼酸、氫化植物油、聚乙二醇；崩解劑，例如淀粉及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纖維素，優(yōu)選的淀粉衍生物為羧甲基淀粉鈉、淀粉乙醇酸鈉、預(yù)膠化淀粉、改良淀粉、羥丙基淀粉、玉米淀粉；濕潤(rùn)劑，例如十二烷基硫酸鈉、水或醇等。所述注射用制劑的常用賦形劑或輔料包括但不僅限于抗氧劑，例如硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、二丁基苯酸或焦亞硫酸鈉等；抑菌劑，例如0.5%苯酚、0.3%甲酚、0.5%三氯叔丁醇；pH調(diào)節(jié)齊U，例如氫氧化鉀(鈉)、枸櫞酸鈉及緩沖劑磷酸二氧鈉和磷酸氫二鈉；乳化劑，例如聚山梨酯-80、沒(méi)酸山梨坦、普流羅尼克？_68，卵磷酯、豆磷脂；增溶劑，例如吐溫-80、甘油等。制備蓬莪術(shù)環(huán)二烯注射液取注射用植物油(茶油，大豆油等)1000ml，在15(TC干熱滅菌1小時(shí)，放冷至25°C，取出部分油液加入lg蓬莪術(shù)環(huán)二烯，攪拌使溶解，最后添加溶媒至全量，用干燥的6號(hào)垂溶漏斗過(guò)濾，灌封于lml干燥的滅菌安瓿中，IO(TC流通蒸汽滅菌30分鐘，制成每支安瓿lml含蓬莪術(shù)環(huán)二烯lmg的注射液。制備蓬莪術(shù)環(huán)二烯乳注射液先將磷脂溶解在大豆油中，加入主藥蓬莪術(shù)環(huán)二烯，攪拌使其溶解，再加入油酸攪拌均勻后，孔徑0.22iim的微孔濾膜過(guò)濾備用，加入注射用水至處方量，均漿機(jī)制成初乳，通過(guò)勻質(zhì)機(jī)使達(dá)到乳劑粒徑大小。通過(guò)孔徑0.22iim的微孔濾膜進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾，最后灌封于lml的干燥的滅菌安瓿中。制成每支安瓿lml含蓬莪術(shù)環(huán)二烯10mg的乳劑注射液。制備蓬莪術(shù)環(huán)二烯口服乳先將磷脂溶解在大豆油中，加入主藥蓬莪術(shù)環(huán)二烯，攪拌使其溶解，再加入油酸攪拌均勻后，孔徑0.22iim的微孔濾膜過(guò)濾備用，加入注射用水至處方量，均漿機(jī)制成初乳，通過(guò)勻質(zhì)機(jī)使達(dá)到乳劑粒徑大小。通過(guò)孔徑O.22ym的微孔濾膜進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾，最后灌裝到20ml的干燥的滅菌玻璃瓶中，加塞，扎蓋。制成每lml含蓬莪術(shù)環(huán)二烯20mg的供口服的乳劑。制備蓬莪術(shù)環(huán)二烯混懸口服液稱(chēng)取處方量的蓬莪術(shù)環(huán)二烯，加入處方量的吐溫80，再加入0.5%CMC-Na水溶液(即羧甲基纖維素鈉水溶液)至處方量，再用超聲粉碎機(jī)超聲15分鐘，至達(dá)到混懸液的要求。最后灌裝到20ml的干燥的滅菌玻璃瓶中，加塞，扎蓋。制成每lml含蓬莪術(shù)環(huán)二烯200mg的供口服的混懸液。為了更好地了解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，以下將蓬莪術(shù)環(huán)二烯的藥理毒理試驗(yàn)及結(jié)果來(lái)說(shuō)明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。1、蓬莪術(shù)環(huán)二烯的動(dòng)物藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)本試驗(yàn)選用SD大鼠進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究，采用高效液相色譜法檢測(cè)蓬莪術(shù)環(huán)二烯在體內(nèi)的血藥濃度動(dòng)態(tài)變化，以化學(xué)藥物非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則(CDE)為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并以中國(guó)藥理學(xué)會(huì)3P87程序在電腦上擬合曲線(xiàn)，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖實(shí)驗(yàn)結(jié)論按主藥蓬莪術(shù)環(huán)二烯進(jìn)行計(jì)算，絕對(duì)生物利用度F=53.73%t1/2=696.6805.8min2、蓬莪術(shù)環(huán)二烯的急性毒性試驗(yàn)小鼠試驗(yàn)NIH小鼠分別皮下注射(sc)蓬莪術(shù)環(huán)二烯注射液與口服灌胃蓬莪術(shù)環(huán)二烯乳劑溶液，各設(shè)5個(gè)劑量組，每組10只(雌雄各半)，觀(guān)察14天內(nèi)的死亡數(shù)，按Bliss氏法計(jì)算LD50。結(jié)果分別為皮下注射LD50=5S4mg/kg;口服灌胃LD50=965mg/kg。3、蓬莪術(shù)環(huán)二烯對(duì)多種病毒的體外抑制作用1)蓬莪術(shù)環(huán)二烯抗皰疹病毒I、II型篩選實(shí)驗(yàn)測(cè)試項(xiàng)目抗皰疹病毒I、II型(HSV-I、II)活性篩選實(shí)驗(yàn)測(cè)試原理以Vero(非洲綠猴腎)細(xì)胞為病毒宿主，測(cè)定樣品抑制皰疹病毒I、II型引起Vero細(xì)胞病變程度。測(cè)試材料和方法①.病毒株HSV-I，VR733株；HSV-II，SAV株；均由ATCC提供。②.樣品處理樣品臨用前溶于匿S0配成適當(dāng)濃度，檢測(cè)時(shí)用培養(yǎng)液作3倍稀釋?zhuān)?個(gè)稀釋度。③.陽(yáng)性對(duì)照藥無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷(ACV)，由湖北科益制藥廠(chǎng)生產(chǎn)。.測(cè)試方法Vero細(xì)胞種96孔培養(yǎng)板，24小時(shí)后分別感染皰疹病毒I型10-3(50倍TCID5。感染量、皰疹病毒II型10-4(17倍TCID5。感染量)，吸附2小時(shí)，棄病毒液，按以上稀釋度加入樣品及陽(yáng)性對(duì)照藥，同時(shí)設(shè)細(xì)胞對(duì)照孔和病毒對(duì)照孔，48小時(shí)觀(guān)察細(xì)胞病變程度(CPE)，用Reed-Muench法分別計(jì)算樣品對(duì)皰疹病毒I、II型的半數(shù)抑制濃度(IC50)。測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表一表一、蓬莪術(shù)環(huán)二烯抗皰疹病毒I、II型的實(shí)驗(yàn)研究<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注TC5。半數(shù)有毒濃度；IC5。對(duì)病毒半數(shù)抑制濃度；SI:選擇指數(shù)，SI=TC5。/結(jié)論樣品蓬莪術(shù)環(huán)二烯在Vero細(xì)胞上初篩結(jié)果顯示有抗皰疹病毒I型活性；有抗皰疹病毒II型活性。2)蓬莪術(shù)環(huán)二烯抗流感甲、乙型病毒篩選實(shí)驗(yàn)測(cè)試項(xiàng)目抗流感甲3型病毒90-15株和乙型病毒B/97-13株抑制作用活性篩選。測(cè)試原理以MDCK(狗腎)細(xì)胞為病毒宿主，測(cè)定樣品抑制流感病毒甲型和乙型病毒引起MDCK細(xì)胞病變程度。測(cè)試材料和方法①.病毒株甲3型病毒90-15株，乙型病毒B/97-13株②.樣品處理樣品臨用前溶于匿S0配成適當(dāng)濃度，檢測(cè)時(shí)用培養(yǎng)液作2倍稀釋?zhuān)?個(gè)稀釋度。③.陽(yáng)性對(duì)照藥利巴韋林(RBV)，由湖北科益制藥廠(chǎng)生產(chǎn)。.測(cè)試方法MDCK細(xì)胞種96孔培養(yǎng)板，24小時(shí)后感染A/濟(jì)防/90-15株10—4和B/97-13株10飛吸附3小時(shí)，棄病毒液，按以上稀釋度加入樣品及陽(yáng)性對(duì)照藥，同時(shí)設(shè)細(xì)胞對(duì)照孔和病毒對(duì)照孔，30小時(shí)觀(guān)察細(xì)胞病變程度(CPE)，用Reed-Muench法分別計(jì)算樣品對(duì)流感病毒甲型和乙型的半數(shù)抑制濃度(ic5。)。測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表二表二、蓬莪術(shù)環(huán)二烯抗流感甲、乙型病毒的體外實(shí)驗(yàn)研究<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>結(jié)論樣品蓬莪術(shù)環(huán)二烯在Vero細(xì)胞上初篩結(jié)果顯示有抗流感甲、乙型病毒活性。3)蓬莪術(shù)環(huán)二烯抗乙型肝炎病毒篩選實(shí)驗(yàn)測(cè)試項(xiàng)目抗乙型肝炎病毒活性篩選測(cè)試原理以2.2.15細(xì)胞為乙型肝炎病毒載體，測(cè)定樣品抑制乙型肝炎病毒進(jìn)行DNA復(fù)制和產(chǎn)生HBsAg、HBeAg的能力。測(cè)試材料和方法①.細(xì)胞株2.2.15細(xì)胞；由本室保存。②.樣品處理樣品臨用前溶于匿S0配成適當(dāng)濃度，檢測(cè)時(shí)用培養(yǎng)液作3倍稀釋?zhuān)?個(gè)稀釋度。③.陽(yáng)性對(duì)照藥拉米夫定(3TC)，由葛蘭素威康公司生產(chǎn)。.主要試劑乙肝病毒e抗原及s抗原放免檢測(cè)試劑盒，北京北方生物技術(shù)研究所提供；a32PdCTP，中國(guó)福瑞生物工程有限公司提供；⑤.測(cè)試方法2.2.15細(xì)胞種96孔培養(yǎng)板，36小時(shí)后按以上稀釋度分別加入樣品及陽(yáng)性對(duì)照藥，同時(shí)設(shè)細(xì)胞對(duì)照孔，加藥后96小時(shí)后分別更換含不同稀釋濃度樣品的培養(yǎng)液，于加藥后第8天分別收集細(xì)胞上清及2.2.15細(xì)胞，采用RIA法檢測(cè)細(xì)胞上清中HBsAg、HBeAg的分泌量，點(diǎn)雜交的方法檢測(cè)細(xì)胞中HBVDNA復(fù)制程度，分別計(jì)算IC5。及SI。測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表三表三、蓬莪術(shù)環(huán)二烯抗乙型肝炎病毒的體外實(shí)驗(yàn)研究樣品名稱(chēng)TC5。(ng/ml)HBsAgHBeAgDNA復(fù)制IC50(ng/ml)SIIC50(ng/ml)SI(ng/ml)SI蓬莪術(shù)環(huán)二烯353.56-—一—56.576.25ACV2000iig/ml-——一81.18ug/ml24.64注表中"-"表示樣品在最大無(wú)毒劑量無(wú)抗病毒活性。結(jié)論樣品蓬莪術(shù)環(huán)二烯對(duì)2.2.15細(xì)胞的HBVDNA復(fù)制有抑制作用，IC5。為56.57ng/ml;SI為6.25。其IC5。遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于陽(yáng)性對(duì)照藥拉米夫定的IC5。值(81.18yg/ml)。圖蓬莪術(shù)環(huán)二烯靜脈注射和口服灌胃藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)圖具體實(shí)施例方式下面將描述本發(fā)明的實(shí)施例，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。實(shí)施例1蓬莪術(shù)環(huán)二烯的制備取蓬莪術(shù)干燥的根莖lkg，切塊粉碎后通過(guò)水蒸汽蒸餾裝置進(jìn)行蒸餾，共得到185g油水混合物，用乙醚及石油醚進(jìn)行萃取，分離油層，棄取水層，并濃縮，得到莪術(shù)揮發(fā)油16.5g，用硅膠柱進(jìn)行分離，石油醚洗脫，每瓶100ml收集，合并2642組分，抽去溶劑，得7到黃色晶體8.6g，再上硅膠柱分離，石油醚洗脫，每瓶30ml，合并1628組分，抽去溶劑，得到白色結(jié)晶3.7g，HPLC分析該樣品的純度達(dá)到99.7%，高分辨質(zhì)譜分析正離子檢測(cè)表明樣品的準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+為217.1583，推斷其分子量為216.1505，檢元素匹配，其元素組成為Q晶。0，誤差小于5ppm，即表明該樣品的分子式為C15H2。0。核磁共振檢測(cè)顯示，在S7.228ppm，S4.996卯m，S4.691ppm，S3.378ppm，S3.107ppm，S2.211ppm，S2.104卯m，S1.874卯m，S1.760卯m，S1.559卯m，S1.200ppm處有吸收組峰，通過(guò)詳細(xì)歸屬解析，證明該分離物為蓬莪術(shù)環(huán)二烯。實(shí)施例2蓬莪術(shù)環(huán)二烯注射液處方蓬莪術(shù)環(huán)二烯lg，注射用植物油(茶油，大豆油等)加至1000ml制備工藝取注射用植物油，在15(TC干熱滅菌1小時(shí)，放冷至5(TC，取出部分油液加入蓬莪術(shù)環(huán)二烯，攪拌使溶解，最后添加溶媒至全量。用干燥的6號(hào)垂熔玻璃漏斗過(guò)濾，灌封于lml干燥的滅菌安瓿中，IO(TC流通蒸汽滅菌30分鐘，制成每支安瓿lml含蓬莪術(shù)環(huán)二烯lmg的注射液。用法用量肌肉注射，每次0.5lml。實(shí)施例3蓬莪術(shù)環(huán)二烯乳注射液處方蓬莪術(shù)環(huán)二烯lg大豆油15g磷脂7.油酸1.47g注射用水適量共計(jì)100ml制備工藝先將磷脂溶解在大豆油中，加入主藥蓬莪術(shù)環(huán)二烯，攪拌使其溶解，再加入油酸攪拌均勻后，孔徑0.22iim的微孔濾膜過(guò)濾備用，加入注射用水至處方量，均漿機(jī)制成初乳，通過(guò)勻質(zhì)機(jī)使達(dá)到乳劑粒徑大小。通過(guò)孔徑0.22iim的微孔濾膜進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾，最后灌封于lml的干燥的滅菌安瓿中。制成每支安瓿lml含蓬莪術(shù)環(huán)二烯10mg的乳劑注射液。用法用量靜脈注射，0.5lml.實(shí)施例4蓬莪術(shù)環(huán)二烯口服乳處方蓬莪術(shù)環(huán)二烯2g大豆油20g磷脂12g油酸1.85g注射用水適量共計(jì)100ml制備工藝先將磷脂溶解在大豆油中，加入主藥蓬莪術(shù)環(huán)二烯，攪拌使其溶解，再加入油酸攪拌均勻后，孔徑0.22iim的微孔濾膜過(guò)濾備用，加入注射用水至處方量，均漿機(jī)制成初乳，通過(guò)勻質(zhì)機(jī)使達(dá)到乳劑粒徑大小。通過(guò)孔徑0.22iim的微孔濾膜進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾，最后灌裝到20ml的干燥的滅菌玻璃瓶中，加塞，扎蓋。制成每1ml含蓬莪術(shù)環(huán)二烯20mg的供口服的乳劑。用法用量口服，每次510ml.實(shí)施例5制備蓬莪術(shù)環(huán)二烯混懸口服液處方蓬莪術(shù)環(huán)二烯20g吐溫800.5ml0.5%CMC-Na水溶液適量_共計(jì)100ml制備工藝稱(chēng)取處方量的蓬莪術(shù)環(huán)二烯，加入處方量的吐溫80，再加入0.5%CMC-Na水溶液(即羧甲基纖維素鈉水溶液)至處方量，再用超聲粉碎機(jī)超聲15分鐘，至達(dá)到混懸液的要求。最后灌裝到20ml的干燥的滅菌玻璃瓶中，加塞，扎蓋。制成每lml含蓬莪術(shù)環(huán)二烯200mg的供口服的混懸液。用法用量口服，每次510ml.實(shí)施例6制備蓬莪術(shù)環(huán)二烯片處方蓬莪術(shù)環(huán)二烯100g微晶纖維素80g羧甲基淀粉鈉10g微粉硅膠lg滑石粉2g10%淀粉槳適量_共計(jì)1000片制備工藝稱(chēng)取處方量的蓬莪術(shù)環(huán)二烯、微晶纖維素及一半處方量的羧甲基淀粉鈉，混合，過(guò)80目篩三次充分混勻。原輔料混勻后加入10%的淀粉漿適量，制成干濕適宜的軟材，18目篩制粒，405(TC烘干。用20目篩整粒。將處方量的微粉硅膠、滑石粉及一半處方量的羧甲基淀粉鈉加入顆粒中，充分混勻，壓片即得。每片含蓬莪術(shù)環(huán)二烯100mg。實(shí)施例7制備蓬莪術(shù)環(huán)二烯膠囊處方蓬莪術(shù)環(huán)二烯100g微晶纖維素80g羧甲基淀粉鈉10g10%淀粉槳適量_共計(jì)1000粒制備工藝稱(chēng)取處方量的蓬莪術(shù)環(huán)二烯、微晶纖維素及羧甲基淀粉鈉，混合，過(guò)80目篩三次充分混勻。原輔料混勻后加入10%的淀粉漿適量，制成干濕適宜的軟材，18目篩制粒，405(TC烘干。用20目篩整粒。將顆粒均勻的裝入膠囊殼中，共裝1000粒。包裝即得。每粒含蓬莪術(shù)環(huán)二烯100mg。10權(quán)利要求蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制備治療由病毒引起的疾病的藥物中的應(yīng)用，其中病毒是指皰疹病毒、流感病毒或乙型肝炎病毒。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，所述的蓬莪術(shù)環(huán)二烯藥物為口服制劑。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，所述的蓬莪術(shù)環(huán)二烯口服制劑為蓬莪術(shù)環(huán)二烯口服乳或蓬莪術(shù)環(huán)二烯混懸口服液。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，所述的蓬莪術(shù)環(huán)二烯藥物為注射制劑。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，所述的蓬莪術(shù)環(huán)二烯注射制劑為蓬莪術(shù)環(huán)二烯注射液或蓬莪術(shù)環(huán)二烯乳注射液。全文摘要本發(fā)明涉及蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制藥領(lǐng)域中的新用途，具體涉及蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制備治療由皰疹病毒、流感病毒、乙型肝炎病毒引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K31/343GK101697966SQ200910205079公開(kāi)日2010年4月28日申請(qǐng)日期2007年1月8日優(yōu)先權(quán)日2007年1月8日發(fā)明者吳春霞,吳耀東,孟昭珂,王向軍,郭殿武申請(qǐng)人:杭州民生藥業(yè)有限公司