專利名稱：抗動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成的化合物在制備用于治療血管障礙的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及血栓烷_前列腺素(TP)受體的特異性拮抗劑在制備用于在先前患有 腦血管意外(CVA)的患者中治療血管障礙，特別是用于在先前患有腦缺血意外(CIA)或短 暫性缺血發(fā)作(TIA)的患者中減少腦血管和心血管事件的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
血栓烷A2 (TXA2)為花生四烯酸的不穩(wěn)定代謝物，在許多心血管障礙的發(fā)病機(jī)理中 涉及到它。 TXA2和其它的花生四烯酸代謝物如內(nèi)過氧化物(PGG2/PGH2) 、 HETE和異構(gòu)前列腺 素(isoprostanes)是被稱為TP受體(血栓烷-前列腺素_內(nèi)過氧化物)的共同受體的配 體。它們與TP受體的結(jié)合帶來(lái)有害的作用血小板活化和凝集、內(nèi)皮功能異常、血管收縮和 細(xì)胞增生。 動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎癥疾病，造成炎癥反應(yīng)的有害活性劑為以氧化形式在 內(nèi)皮下積聚的LDL膽固醇。在動(dòng)脈粥樣硬化的過程中在幾個(gè)水平上涉及炎癥l)內(nèi)皮和單 淋巴細(xì)胞募集的活化；2)促炎細(xì)胞因子的局部和全身性生成；3)造成纖維帽蛋白質(zhì)的降解 和斑塊的去穩(wěn)定化的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白酶(金屬蛋白酶)的生成；4)斑塊細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)和 促凝血性脂核的形成。 所形成的動(dòng)脈粥樣硬化斑在局部炎癥和氧化應(yīng)激的剌激下可破裂，引起血小板在 表面的凝聚，從而導(dǎo)致阻塞。斑塊上血栓形成的出現(xiàn)被稱為"動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成"。
破裂主要(但不僅僅)涉及擁有大的脂核(占斑塊總體積的40%以上)和富含巨 噬細(xì)胞而平滑肌細(xì)胞含量很少的纖維帽的斑塊。它是由于纖維帽經(jīng)受的血液動(dòng)力學(xué)應(yīng)激和 控制它對(duì)抗破裂的內(nèi)固性之間存在不平衡的結(jié)果。 在近來(lái)的對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化的治療策略中，針對(duì)斑塊中的炎癥似乎是重要的。動(dòng)
脈粥樣硬化斑的穩(wěn)定化需要降低它的炎癥組分以有利于它的纖維組分。 近來(lái)，以預(yù)防與心血管和神經(jīng)血管系統(tǒng)中血栓烷^的大量生成有關(guān)的現(xiàn)象為目
的，進(jìn)行了大量的研究。在這些拮抗劑中，那些在專利說(shuō)明書EP648741中描述的拮抗劑已
被證實(shí)是TP受體的強(qiáng)大的和選擇性的拮抗劑，其通過口服途徑施用是有活性的，并擁有長(zhǎng)
的作用時(shí)間。 更具體地，以外消旋形式或以旋光純異構(gòu)體形式以及其可藥用鹽形式存在的式 (I)的3-{6-[(4-氯苯基磺?；?氨基]_2-甲基-5，6，7，8-四氫萘-1-基}丙酸
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(I) 是一種特異性的TP受體拮抗劑，已發(fā)現(xiàn)其具有強(qiáng)大的抗動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成 作用。 式(I)化合物通過阻滯由血栓烷A2和其它的TP受體配體誘導(dǎo)的血小板聚集起作 用，而不管它們的來(lái)源如何(血小板或血小板外)。它還通過抑制由血栓烷4誘導(dǎo)的血管 收縮和通過對(duì)抗血管壁的內(nèi)皮功能異常、增生和炎癥而進(jìn)一步起作用。 式(I)化合物相應(yīng)地具有抗血小板凝集、抗血栓形成、抗炎、抗增生和抗血管收縮 的性質(zhì)。 它在動(dòng)脈粥樣硬化癥中的有益作用可能是由于抑制單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn) 入斑塊的結(jié)果，這可能是通過抑制血管粘著分子的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。由于這些炎癥細(xì)胞影響 著斑塊的穩(wěn)定性，在長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)降低單核細(xì)胞募集入血管壁可穩(wěn)定斑塊。除此之外，該化 合物的抗血栓形成作用還可降低血管炎癥以及通過血小板粘附于內(nèi)皮而控制的內(nèi)皮活化， 并可降低血小板、內(nèi)皮、平滑肌細(xì)胞和單核細(xì)胞之間的促凝血和促氧化相互作用，該相互作 用在本質(zhì)上是炎癥性的。 在歐洲專利說(shuō)明書EP 0 648 741中，已經(jīng)描述了 3-{6-[(4_氯苯基磺酰基)氨 基]-2-甲基-5， 6， 7， 8-四氫萘-1-基}丙酸，它的鹽和它的旋光異構(gòu)體、其制備和其在治 療學(xué)上的用途。
發(fā)明內(nèi)容
本申請(qǐng)人現(xiàn)已令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，以光學(xué)活性異構(gòu)體形式和鹽形式存在的式(I)化
合物，優(yōu)選構(gòu)型(R)和鈉鹽形式，具有有價(jià)值的性質(zhì)，使得它可用于在患有先前的腦血管意 外的患者中治療血管障礙，特別是在患有先前的CIA或TIA的患者中降低腦血管和心血管 事件的發(fā)生。 令人驚奇地，優(yōu)選以鈉鹽形式存在的(R)構(gòu)型的式(I)化合物的作用與其它的抗 血小板凝集劑有所不同的確，在低劑量時(shí)，阿司匹林并不具有直接的抗動(dòng)脈粥樣硬化或抗 動(dòng)脈粥樣硬化的作用。它并不抑制新血管內(nèi)膜的形成和炎癥細(xì)胞在血管壁的聚積。對(duì)于氯 吡格雷來(lái)說(shuō)，也沒有提出其在人類中的血管作用。作為氯吡格雷的靶的P2Y12受體在內(nèi)皮 細(xì)胞中并不存在。 我們已經(jīng)令人驚奇地證實(shí)了式(I)化合物在動(dòng)物模型(鈉負(fù)載的SHR-SP大鼠) 中的次級(jí)保護(hù)性質(zhì)。令人驚奇地，這些性質(zhì)似乎與化合物的引起氧化應(yīng)激降低作用有關(guān)。 在許多出版物中已經(jīng)證實(shí)了在腦病理學(xué)中氧化應(yīng)激的重要性(Margaill I， Plotkine M， Le麗et D， Free Radical Biology &Medicine， 2005， 39， 429-443 ;Crack PJ， Taylor肌 Free Radical Biology&Medicine， 2005， 38， 1433-1444)。在腦血管病理學(xué)中式(I)化合物 對(duì)氧化應(yīng)激的作用的發(fā)現(xiàn)提示它在如本發(fā)明所述的研究中的可能用途。
SHR-SP大鼠代表著原發(fā)性高血壓的比較明確的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。這些大鼠形成了嚴(yán)重 的自發(fā)性高血壓，這迅速地導(dǎo)致了腦損傷的形成。它們對(duì)富鹽飲食高度敏感，富鹽飲食可導(dǎo) 致惡性腎硬化的產(chǎn)生(Griffin KA， ChurchillPC， Picken， Webb RC， Kurtz TW， Bidani AK， Am. J. Hypertens. ，2001,14(4 Pt 1) :311-20)，導(dǎo)致動(dòng)脈壓和氧化應(yīng)激的升高(Park JB， Touyz RM， Chen X， Schiffrin EL， Am. J. Hypertens. ， 2002， 15 (lPtl) :78-84 ;Ma皿ingRD， Meng S， Tien N， Acta Physiol. Scand. ， 2003， 179 :243—250)并加重了血管損傷和心臟肥 大(Kyselovic J，Morel N， Wibo M，Godfraind T， J. Hypertens. ，1998，16(10) :1515-22)。 此外，SHR-SP大鼠是可自發(fā)產(chǎn)生復(fù)雜性腦血管障礙的唯一動(dòng)物模型(Volpe M， Russo R， Veccione C， Savoia C， Piras 0， Gigante B， Lindpaintner K， Rubattu S， J. Hypertens.， 1998,16 :S31-S35 ;Guerrini U， Sironi L， Tremoli E， Cimino M， Polio B， Calvio AM， Paoletti R，Asdente M， Stroke, 2002， 33 (3) :825-30)。通過ESR(電子自旋共振)光譜進(jìn) 行的SHR-SP大鼠腦分析表明與血壓正常的WKY大鼠相比氧化應(yīng)激的水平升高了 (Miyazaki H，Shoji H，Lee MC，Redox R印.，2002， 260-2657)。有人提出氧化應(yīng)激的升高可能導(dǎo)致血腦 屏障的石皮壞(Kim_Mitsuyama S，Yamamoto E，Tanaka T，Zhan Y， Izumi Y， Izumiya Y， Ioroi T，Wanibuchi H， Iwao H， Stroke, 2005， 36 :1077-1082)，其是由過氧化作用和DNA及蛋白質(zhì) 損傷導(dǎo)致的細(xì)胞脂質(zhì)膜的損傷引起的。這些腦的障礙經(jīng)常與導(dǎo)致動(dòng)物死亡的腦血管意外發(fā) 生之前的臨床行為體征(昏睡或挑釁、驚厥、肢體癱瘓)有關(guān)。 在急性腦意外的預(yù)防中，鈉負(fù)載的SHR-SP大鼠模型似乎是評(píng)價(jià)式(I)化合物的一 個(gè)良好的靶。的確，選擇10至15周之間的治療期提供了腦發(fā)作的復(fù)發(fā)事件的極好的模型。 在10周之前，大鼠已經(jīng)經(jīng)歷了非致命的腦發(fā)作(例如昏睡、驚厥)，作為結(jié)果，我們可以分析 是否式(I)化合物可預(yù)防或延緩繼發(fā)的腦意外的發(fā)生。 在這一方面，該大鼠模型類似于人的情況，更具體地，類似于在本專利申請(qǐng)說(shuō)明書
中描述的研究的情況，在該情況中，患者已經(jīng)有了第一次腦意外，且研究涉及用式(I)的化
合物進(jìn)行治療以預(yù)防有生命危險(xiǎn)的第二次事件(腦或心血管)的作用。 相應(yīng)地，本發(fā)明涉及以光學(xué)活性異構(gòu)體形式并優(yōu)選以鹽形式存在的式(I)化合物
在制備用于在患有先前的腦血管意外的患者中治療血管障礙，特別是在患有先前的CIA或
TIA的患者中降低腦血管和心血管事件的發(fā)生的藥物組合物中的用途。 在式(I)化合物的加成鹽中，可以提到但不僅限于與可藥用堿的加成鹽，例如鈉
鹽、鉀鹽、叔丁胺鹽、二乙胺鹽等。 優(yōu)選地，使用的鹽是鈉鹽。 在根據(jù)本發(fā)明的組合物中，式(I)化合物優(yōu)選具有絕對(duì)構(gòu)型(R)。 將以適用于口服、腸胃外、經(jīng)皮、鼻腔、直腸和經(jīng)舌的途徑施用的形式提供藥物組
合物，特別是可注射的制劑、片劑、舌下片、glossettes、明膠膠囊、膠囊、錠劑、栓劑、乳膏、
軟膏、皮膚凝膠等形式。 根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物包含一種或多種選自稀釋劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑、 吸收劑、著色劑、甜味劑等的賦形劑或載體。 使用的劑量不根據(jù)患者的性別、年齡或體重、障礙的性質(zhì)或任何相關(guān)的治療而變 化。 使用式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽進(jìn)行研究。
在根據(jù)本發(fā)明的組合物中，對(duì)于式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽而言，活性成分 的量為5至100mg。優(yōu)選地，式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽的日劑量為30mg每天。
圖1顯示了與載體相比，用式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽進(jìn)行處理對(duì)動(dòng)物存 活率的影響。 圖2顯示了與載體相比，用式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽進(jìn)行處理對(duì)動(dòng)物心 臟肥大的影響。 圖3顯示了與載體相比，用式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽進(jìn)行處理對(duì)動(dòng)物氧 化應(yīng)激的影響。 圖4顯示了與載體相比，用式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽進(jìn)行處理對(duì)動(dòng)物急 性炎癥的影響。
具體實(shí)施方式
臨床前資料 式(I)化合物(R)異構(gòu)體的鈉鹽的抗血栓形成作用在頸動(dòng)脈血栓形成的多種模型 中得到證實(shí)，體內(nèi)血管電解作用(狗)、機(jī)械損傷(豚鼠)和電剌激(大鼠)，在體外(ex Vivo):通過玻璃毛細(xì)管的頸動(dòng)脈-頸動(dòng)脈動(dòng)脈旁路式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽以 劑量依賴的方式延長(zhǎng)了阻塞時(shí)間。
在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭刑剿餍匝芯苛耸?I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽的抗增生、抗動(dòng)脈 粥樣硬化和抗炎作用它顯著地降低了動(dòng)脈粥樣硬化損傷的表面積，血管壁的厚度和內(nèi)膜 /中膜比值而沒有降低血清膽固醇的水平。它也抑制了巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)入血管壁和粘著分 子特別是標(biāo)志物如內(nèi)皮素、ICAM和VCAM的表達(dá)。
動(dòng)物模型鈉負(fù)載的SHR-SP大鼠
材料和方法
動(dòng)物的監(jiān)察 將在它們的飲用水中含有1 % NaCl的10周齡雄性SHR-SP大鼠(Charles River) 隨機(jī)分成兩組，并用含有式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽(30mg/kg/天)的飼料或不含 該化合物的飼料進(jìn)行處理。 在第一個(gè)研究中，通過計(jì)算在開始治療后每天的動(dòng)物存活百分?jǐn)?shù)確定每組的存 活。 在第二個(gè)研究中，將10至15周齡之間的大鼠監(jiān)察5周，然后處死以定量氧化應(yīng)激 的尿標(biāo)志物(8-OH-dG)和反映急性炎癥的血漿標(biāo)志物(T-激肽原(thiostain)，在大鼠中其 是CRP的等同物)并確定心臟肥大。
生理學(xué)參數(shù) 在監(jiān)察的最后24小時(shí)，將動(dòng)物置于單個(gè)的代謝籠中并在無(wú)菌試管(200 的2mM EDTA)中收集尿液。測(cè)量尿液并通過ELISA測(cè)定(Oxis， Bioxytech)定量8-羥基-2'-脫 氧鳥苷(8-0H-dG)的生成。 通過腹膜注射戊巴比妥鈉(50mg/kg， Ceva laboratories)將大鼠麻醉。從頸動(dòng)脈取血樣(將樣品置于5000IU/ml的肝素中)以通過ELISA測(cè)定(LifeDiagnostics)測(cè)量 T-激肽原的生成。將心臟切除，擦干并稱重，通過將每只動(dòng)物的心臟干重與體重相除實(shí)現(xiàn)測(cè)
量的標(biāo)準(zhǔn)化，通過這一方法確定心臟的肥大。
統(tǒng)計(jì) 將結(jié)果以均值±S. E. M.報(bào)告。如果Student's t檢驗(yàn)的P < 0. 05則認(rèn)為差別是 顯著的。動(dòng)物的存活在Kaplan-Meier圖上表示，在log-rank檢驗(yàn)后P < 0. 05則認(rèn)為是顯 著的。 題 1)動(dòng)物的存活百分?jǐn)?shù)(圖1) 計(jì)算兩組大鼠的動(dòng)物存活百分?jǐn)?shù)。對(duì)于載體組，一半的大鼠在開始監(jiān)察后57天死 亡，而在用式(I)的化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽進(jìn)行處理的組，一半的大鼠在處理的99天 后死亡。 該結(jié)果表明式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽可預(yù)防動(dòng)物瀕臨死亡并因而提高了 存活百分?jǐn)?shù)。 2)心臟肥大(圖2) 在載體組的大鼠中心臟的質(zhì)量有很大的增加，這一點(diǎn)可從該器官的大小的增加或 肥大中得到反映。當(dāng)將這些動(dòng)物用式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽進(jìn)行處理時(shí)，心臟的 肥大較不顯著。 該結(jié)果表明式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽可減慢心臟肥大的速度。 [OO57] 3)氧化應(yīng)激(圖3) 載體組的大鼠呈現(xiàn)出氧化應(yīng)激，其可通過尿標(biāo)志物如8-0H-dG而確定。與載體組 的動(dòng)物相比，接受式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽組的動(dòng)物在24小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)在尿中的 8-0H-dG的總量得到降低。 這一結(jié)果表明式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽可以降低氧化應(yīng)激的水平。
4)急性炎癥(圖4) T-激肽原是在炎癥急性階段產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。該蛋白質(zhì)在載體組大鼠的血漿中顯著 增加。當(dāng)用式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽處理動(dòng)物時(shí)，血漿中T-激肽原的量較低。
該結(jié)果表明式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽可減慢急性炎癥的確立。
臨床資料 還在缺血性CVA的高?；颊咧性u(píng)價(jià)了式(I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽的體外 (ex vivo)抗血栓形成活性，在給藥IO天后式(I)化合物優(yōu)于阿司匹林的優(yōu)越性在灌注室 模型的主要參數(shù)中得到證實(shí)(血栓的總表面積和密集表面積，％粘著)。在本研究中，式 (I)化合物的(R)異構(gòu)體的鈉鹽對(duì)于被測(cè)定的炎癥標(biāo)志物(sVCAM、 sPAI-l、 sP-選擇蛋白、 凝血調(diào)節(jié)蛋白)也有作用。 給具有高的心血管風(fēng)險(xiǎn)和異常充血試驗(yàn)且正用阿司匹林治療的動(dòng)脈粥樣硬化患 者單次或慢性施用式(I)的化合物的外周血管運(yùn)動(dòng)反應(yīng)研究證實(shí)了式(I)化合物在通過激 發(fā)的充血試驗(yàn)(橈動(dòng)脈的生理剌激)評(píng)價(jià)的內(nèi)皮依賴性血管舒張中優(yōu)于安慰劑。該優(yōu)越性 無(wú)論何種劑量，無(wú)論是單次施用或重復(fù)施用(15天)均可觀察到，該血管舒張作用是在施用 藥物后約2小時(shí)評(píng)價(jià)的。
: (R)異構(gòu)體形式的式(I)化合物、優(yōu)選鈉鹽形式，具有抗血小板凝集、抗血栓形成、 抗炎、抗增生和抗血管收縮的性質(zhì)，因此可作為抗動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成劑在動(dòng)脈粥樣硬 化血栓形成疾病中、特別是在具有先前的腦缺血意外的患者中用于心血管意外的次級(jí)預(yù) 防。
權(quán)利要求
包含旋光異構(gòu)體或其可藥用鹽形式的式(I)的3-{6-[(4-氯苯基磺?；?氨基]-2-甲基-5，6，7，8-四氫萘-1-基}丙酸用于制備在患有先前的腦血管意外的患者中治療血管障礙的藥物的藥物組合物
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征在于式(I)的3-{6-[(4-氯苯基磺酰基)氨 基]-2-甲基-5，6，7，8-四氫萘-1-基}丙酸以構(gòu)型(R)的旋光異構(gòu)體形式存在。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物組合物，其特征在于構(gòu)型(R)的式(I)的3-{6-[(4-氯 苯基磺?；?氨基]_2-甲基-5， 6， 7， 8-四氫萘-1-基}丙酸以鈉鹽形式存在。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任何一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于式(I)化合物的(R)異 構(gòu)體的鈉鹽的量為5至100mg。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任何一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于式(I)化合物的(R)異 構(gòu)體的鈉鹽的量為30mg每天。
全文摘要
抗動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成的化合物在制備用于治療血管障礙的藥物中的用途。本發(fā)明涉及TP受體的特異性拮抗劑在制備用于在先前患有腦血管意外的患者中治療血管障礙，特別是用于在先前患有腦缺血意外(CIA)或短暫性缺血發(fā)作(TIA)的患者中減少腦血管和心血管事件的藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61P9/10GK101693025SQ20091020503
公開日2010年4月14日 申請(qǐng)日期2007年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月7日
發(fā)明者A·呂潘, A·德科爾杜, G·拉維埃勒, L·勒龍, M-D·弗拉塔奇, T·韋伯朗 申請(qǐng)人:瑟維爾實(shí)驗(yàn)室;