專利名稱：檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的毛細管電泳方法
技術領域：
本發明屬于分析檢測技術領域，特別涉及一種同時檢測何首烏中二苯乙 烯苷和蒽醌類成分的毛細管電泳方法。
背景技術：
毛細管電泳是20世紀80年代以來興起的一種新的分離分析技術，具有 分辨率高、分析時間短、溶劑和樣品消耗量少、樣品預處理簡單，可同時分 離測定多組分樣品等優點，在藥物分析檢測中的應用日益廣泛。
中藥何首烏為蓼科植物何首烏的干燥塊根，主產于我國廣東、四川、湖 南、貴州等地，具有補肝腎、益精血、烏須發、強筋骨等功效。研究表明何 首烏主要活性成分為二苯乙烯苷和蒽醌類物質。目前，中國藥典(2005年版) 何首烏質量標準中僅對二苯乙烯苷進行定量控制，而何首烏的許多藥理活性 卻與其含有的蒽醌類成分密切相關。目前，已有多種分別檢測何首烏中二苯 乙烯苷和蒽醌類化合物的方法，如可采用薄層色譜法、液相色譜法、分光光 度法、酶化學發光法和毛細管電泳法等進行二苯乙烯苷的檢測，而蒽醌類成 分的分析方法主要有分光光度法、薄層掃描法、薄層比色法、紙層析法、液 相色譜法和毛細管電泳法等。但迄今尚未見同時分離檢測何首烏中二苯乙烯 苷和蒽醌類成分的報道。對何首烏有效活性成分的同時檢測，可以綜合地反 映出何首烏的質量，能夠更有效地對何首烏進行質量控制。
發明內容
為了解決上述現有技術的不足之處，本發明的首要目的在于提供一種能 夠快速、高效地同時分離檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的毛細管電 泳方法。
本發明的目的通過下述技術方案實現 一種同時分離檢測何首烏中二苯 乙烯苷和蒽醌類成分(大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚)的毛細管電泳方法，該方法的檢測步驟如下
(1) 將二苯乙烯苷對照品、大黃素對照品、蘆薈大黃素對照品、大黃 酸對照品、大黃酚對照品和大黃素甲醚對照品溶于甲醇中，制成上述各種對 照品濃度均為50 //g/mL的對照品混合液；采用膠束電動毛細管色譜法，在 最佳檢測條件下，對對照品混合液進行毛細管電泳分析，獲得對照品混合液 的電泳圖譜；
(2) 采用膠束電動毛細管色譜法，在最佳檢測條件下，對何首烏樣品
提取液進行毛細管電泳分析，獲得樣品液的電泳圖譜，-
(3) 分別根據二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚或 大黃素甲醚的校正曲線方程，根據步驟(2)所得電泳圖譜中各對應物質峰 面積，計算出何首烏提取液中二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、 大黃酚或大黃素甲醚的濃度；
所述最佳檢測條件是內徑為75 ;/m、有效長度為50 cm的未涂層熔融 石英毛細管、電泳緩沖液組成為15 mmol/L硼砂-30 mmol/L十二烷基硫酸鈉 -體積比10%甲醇、pH為9.6、分離電壓為25kV、檢測溫度為25 'C、進樣 壓力為0.5 psi、進樣時間為10秒和檢測波長為254 nm。
步驟(2)中所述何首烏樣品提取液是按以下操作步驟進行將何首烏 的干燥塊根粉碎，過80 120目篩，取粉末0.2 1.0g，加入甲醇30 60mL， 用甲醇超聲提取15 30min，過濾，得濾液和濾渣；將濾渣用5 15 mL甲 醇洗滌2 4次，將洗滌液和上述濾液合并，減壓蒸發除去溶劑后加入5 mL 甲醇溶解，搖勻，經0.22/mi濾膜過濾，得到何首烏樣品提取液。
所述超聲提取是采用60 W的超聲提取。
對毛細管進行以下處理
Cl)毛細管在第一次使用前，按以下的程序進行預處理先用甲醇沖洗 10 min，去離子水沖洗2 min，接著用0.1 mol/L鹽酸沖洗10 min，去離子水 沖洗2 min，最后用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液沖洗10 min，去離子水沖洗2 min。
(2)每次操作之前，毛細管依次分別用0.1 mol/L鹽酸、去離子水、0.1 mol/L氫氧化鈉、去離子水沖洗5 min，然后再用電泳緩沖液沖洗5 min。 連續檢測時，每次進樣前毛細管用電泳緩沖液沖洗2min。
在最佳檢測條件下，二苯乙烯苷和蒽醌類成分在18 min內達到基線分離；遷移時間和峰面積的日內RSD值分別為0.43 0.79%和0.98 1.87°/0; 遷移時間和峰面積在6天內的日間RSD值分別為0.74 1.53和1.18 2.39o/。； 檢測限(信噪比S/N=3)為0.26 0.56 〃g/mL;加標回收率為98.5 104.0%。
本發明相對現有技術，具有如下的優點及有益效果(l)本發明為何首
烏藥材及其相關制劑的質量控制提供技術支持；(2)能夠同時分析檢測何首 烏中的二苯乙烯苷和蒽醌類成分，方法簡單、快速和高效；(3)環境友好 所用的緩沖液主要是水溶液，無需大量使用有機溶劑，比液相色譜法更環保 和有利于檢測者的身體健康，污染小；(4)分析成本低所需的溶劑和樣品
圖1為對照品混合液的電泳圖譜，其中1為二苯乙烯苷；2為大黃素；3 為戸薈大黃素；4為大黃酸；5為大黃酚；6為大黃素甲醚。
圖2為德慶何首烏樣品提取液的電泳圖譜，其中l為二苯乙烯苷；2為 大黃素；3為蘆薈大黃素；4為大黃酚。
圖3為峨眉山何首烏樣品提取液的電泳圖譜，其中1為二苯乙烯苷；2 為大黃素；3為蘆薈大黃素；4為大黃酸；5為大黃酚。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不 限于此。
所用儀器裝置為內徑為75/mi、有效長度為50 cm的未涂層熔融石英 毛細管；P/ACETMMDQ毛細管電泳儀，配有二極管陣列檢測器；
所用試劑為二苯乙烯苷對照品、大黃素對照品、蘆薈大黃素對照品、
大黃酸對照品、大黃酚對照品和大黃素甲醚對照品；何首烏對照品；0.1 mol/L 的氫氧化鈉溶液；5 mol/L的氫氧化鈉溶液；0.1 mol/L的鹽酸；甲醇；十二 垸基硫酸鈉；硼砂；去離子水；配制好的溶液在使用之前均經0.22//m濾膜 過濾。
實施例1 :
1)最佳檢測條件的確定(O電泳緩沖液的配制
用去離子水分別配制濃度均為100 mmol/L的硼砂和十二垸基硫酸鈉母
液；
a、 利用濃度為100 mmol/L的硼砂和十二垸基硫酸鈉母液，配制十二烷 基硫酸鈉濃度分別為10mmol/L、 20 mmol/L、 30 mmol/L、 40 mmol/L和50 mmol/L的15 mmol/L硼砂-十二烷基硫酸鈉-體積比10%甲醇緩沖液，用5 mmol/L的氫氧化鈉溶液和鹽酸調節pH為9.6;
b、 利用濃度為100 mmol/L的硼砂和十二垸基硫酸鈉母液，配制硼砂濃 度分別為5 mmol/L、 10謹ol/L、 15 mmol/L、 20 mmol/L禾卩25 mmol/L的硼 砂-30 mmol/L十二烷基硫酸鈉-體積比10%甲醇緩沖液，用5 mmol/L的氫氧 化鈉溶液和鹽酸調節pH為9.6;
c、 利用濃度為100 mmol/L的硼砂和十二垸基硫酸鈉母液，配制甲醇體 積比濃度分別為0%、 5%、 10%、 15%和20%的15 mmol/L硼砂-30 mmol/L十 二烷基硫酸鈉-甲醇緩沖液，用5 mmol/L的氫氧化鈉溶液和鹽酸調節pH為
9.6;
d、 利用濃度為100 mmol/L的硼砂和十二垸基硫酸鈉母液，配制緩沖液 15 mmol/L硼砂-30 mmol/L十二烷基硫酸鈉-體積比10%甲醇，用5 mmol/L 的氫氧化鈉溶液和鹽酸調節pH分別為8.8、 9.2、 9.6、 10.0和10.4。
(2) 二苯乙烯苷、大黃素、盧薈大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲 醚對照品混合液的配制
分別將二苯乙烯苷對照品、大黃素對照品、蘆薈大黃素對照品、大黃酸 對照品、大黃酚對照品和大黃素甲醚對照品溶于甲醇中，制成二苯乙烯苷對 照品儲備液、大黃素對照品儲備液、蘆薈大黃素對照品儲備液、大黃酸對照 品儲備液、大黃酚對照品儲備液和大黃素甲醚對照品儲備液，濃度均為400 //g/mL，儲備液于4 r冰箱保存。將上述各種對照品儲備液混合在一起，制 成二苯乙烯苷對照品、大黃素對照品、戶薈大黃素對照品、大黃酸對照品、 大黃酚對照品和大黃素甲醚對照品濃度均為50//g/mL的對照品混合液。
(3)毛細管電泳法同時分離檢測二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大 黃酸、大黃酚和大黃素甲醚對照品混合液的條件，并在此條件下進行上述各 物質線性范圍和檢測限的考察將步驟(2)所得對照品混合液進行毛細管電泳分析采用膠束電動毛
細管色譜法，在進樣壓力為0.5psi、進樣時間為10秒、檢測波長為254nm、 檢測溫度為25 °C的條件下，在5—25 mmol/L之間調節硼砂-30 mmol/L十二 烷基硫酸鈉-體積比10%甲醇緩沖液中硼砂的濃度，在10—50 mmol/L之間 調節15 mmol/L硼砂-十二烷基硫酸鈉-體積比10%甲醇緩沖液中十二烷基硫 酸鈉的濃度，在體積百分含量0—20%之間調節15 mmol/L硼砂-30 mmol/L 十二烷基硫酸鈉-甲醇緩沖液中甲醇的濃度;在8.8 —10.4之間調節15 mmol/L 硼砂-30 mmol/L十二垸基硫酸鈉-體積比10%甲醇緩沖液的pH值；在15 — 25kV之間調節分離電壓。
綜合分離度、峰形、靈敏度、重現性等方面確定靈敏度高、峰形對稱無 明顯峰展寬、分離度及重現性好的檢測條件為最佳條件，獲得最佳檢測條件 為內徑為75;/m、有效長度為50cm的未涂層熔融石英毛細管，電泳緩沖 液組成為15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸鈉-10%甲醇(體積比)， pH為9.6，分離電壓為25kV，檢測溫度為25 °C，進樣壓力為0.5 psi，進 樣時間為10秒，檢測波長為254 nm。
2) 二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚 對照品的同時分離檢測
將對照品混合液，采用最佳檢測條件進行毛細管電泳分析，18min內二 苯乙烯苷、大黃素、戸薈大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚可同時得到 分離檢測(電泳圖譜如圖1所示)。 3)校正曲線的制定
將二苯乙烯苷對照品儲備液稀釋為400〃g/mL、 300//g/mL、 200//g/mL、 100//g/mL、 50/^/11^和5/^/11^的二苯乙烯苷標準溶液；大黃素對照品儲 備液稀釋為300 〃g/mL、 200 〃g/mL、 100 〃g/mL、 50 〃g/mL、 25 〃g/mL和5 //g/mL的大黃素標準溶液；盧薈大黃素對照品儲備液稀釋為300//g/mL、 200 //g/mL、 100//g/mL、 50//g/mL、 25//g/mL和5//g/mL的蘆薈大黃素標準溶 液；大黃酸對照品儲備液稀釋為300 〃g/mL、 200 //g/mL、 100 〃g/mL、 50 //g/mL、 25//g/mL和5//g/mL的大黃酸標準溶液；大黃酚對照品儲備液稀釋 為200 ^g/mL、 150 //g/mL 、 100 〃g/mL、 50 //g/mL、 25 〃g/mL禾口 5 〃g/mL 的大黃酚標準溶液；大黃素甲醚對照品儲備液稀釋為200 //g/mL、 150//g/mL 、 100//g/mL、 50//g/mL、 25 〃g/mL和5 〃g/mL的大黃素甲醚標準溶液。在最佳檢測條件下，對上述一系列二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚的標準溶液進行毛細管電泳分析。以分析物的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制校正曲線，獲得二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚的校正曲線方禾呈、線性相關系數、線性范圍和檢測下限如表1所示。
表1六種分析物的校正曲線回歸分析及檢測限
分析物校正曲線方程線性相關系數 (R2)線性范圍 Og/mL)檢測限 C"g/mL)
二苯乙烯苷y=356.7x—6312.80.99745-4000.26
大黃素y:=1026.1x—2706.70.99545-2000.44
蘆薈大黃素y=1197.5x—875.10.99485-2000.35
大黃酸y =:4082.1x—46596.00.99555-2000.38
大黃酚y:=1692.8x—2069.20.99425-1000.43
大黃素甲醚y =2502.2x —16579.00.99995-1000.56
4) 重現性實驗
在最佳檢測條件下考察重現性將二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚均分別吸取濃度為5mg/L、 50mg/L、 100mg/L的對照品溶液在一天內連續進樣測定6次，記錄其遷移時間和峰面積，考察日內精密度。將上述每種物質均分別吸取濃度為5 mg/L、 50 mg/L、 100 mg/L的對照品溶液每天進樣檢測，連續測定6天，記錄其遷移時間和峰面積，考察日間精密度。遷移時間和峰面積的日內RSD值分別為0.43 0.79%和0.98 1,87%，遷移時間和峰面積在6天內的日間RSD值分別為0.74 1.53和1.18 2.39%。實驗證明本發明方法的峰面積日內精密度及日間精密度均能夠達到藥物分析RSD在10°/。以內的要求；日內遷移時間和日間遷移時間的RSD控制在5%內。
5) 空白何首烏對照品提取液及含二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚對照品的加標何首烏對照品提取液的制備和檢測加標何首烏對照品提取液的制備將何首烏的干燥塊根粉碎，過80目
篩，取粉末0.2§，加入甲醇30mL，用甲醇超聲提取15min，過濾，得濾液和濾渣；將濾渣用5mL甲醇洗滌2次，將洗滌液和上述濾液合并，減壓蒸發除去溶劑后加入5 mL甲醇溶解，搖勻，經0.22//m濾膜過濾，得到空白何首烏樣品提取液。取空白何首烏對照品提取液2mL，分別將lmL的二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚儲備液加入空白何首烏對照品提取液中配成二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚對照品濃度均為50 //g/mL的加標何首烏對照品提取液；
在最佳檢測條件下，獲得空白何首烏對照品提取液及含二苯乙烯苷、大黃素、戸薈大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚對照品的加標何首烏對照品提取液的電泳圖譜；根據電泳圖譜和步驟3)所得校正曲線方程，計算得到二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚的加標回收率及其相對標準偏差(RSD)分別為104°/。， 2.6%; 103%， 2.7%; 101%，1.20/0; 98.50/0， 2.90/0; 98.60/0， 2.20/0; 99.90/0， 2.6%。
在實驗過程中，為保證獲得較高的信號響應和較好的檢測重現性，需對
毛細管進行適當的處理
A、 毛細管在第一次使用前，按以下的程序進行預處理先用甲醇沖洗10 min，去離子水沖洗2 min，接著用0.1 mol/L鹽酸沖洗10 min，去離子水沖洗2 min，最后用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液沖洗10 min， 去離子水沖洗2 min;
B、 每次操作之前，毛細管依次分別用0.1 mol/L鹽酸、去離子水、0.1mol/L氫氧化鈉、去離子水沖洗5 min，然后再用緩沖液沖洗5 min;連續檢測時，每次進樣前毛細管用緩沖液沖洗2min。
實施例2
對一種產地為廣東德慶的何首烏中的二苯乙烯苷和蒽醌類成分進行分析，所用儀器和溶液處理方法如前所述，檢測步驟如下(1)提取液的制備
將何首烏的干燥塊根粉碎，過100目篩，取粉末0.6g，加入甲醇50mL，用甲醇超聲提取20min，過濾，得濾液和濾渣；將濾渣用10mL甲醇洗滌3次，將洗滌液和上述濾液合并，減壓蒸發除去溶劑后加入5 mL甲醇溶解，搖勻，經0.22/zm濾膜過濾，得到何首烏樣品提取液。(2) 15 mmol/L硼砂-30 mmol/L十二烷基硫酸鈉-體積比10%甲醇，pH9.6緩沖溶液的配制
先用去離子水分別配制濃度為100 mmol/L的硼砂和十二垸基硫酸鈉母液，濃度為5 mol/L的氫氧化鈉溶液；然后利用硼砂和十二烷基硫酸鈉母液配制15mmol/L硼砂-30mmol/L十二垸基硫酸鈉-體積比10%甲醇緩沖液，最后用5 mmol/L的氫氧化鈉溶液和鹽酸調節pH為9.6。
(3) 何首烏提取液中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的檢測
將步驟(1)所得何首烏提取液進行毛細管電泳分析，檢測條件同實施例1所得最佳檢測條件電泳緩沖液組成為15 mmol/L硼砂-30 mmol/L十二烷基硫酸鈉-10%甲醇(體積比)，pH為9.6，分離電壓為25 kV，檢測溫度為25 °C，進樣壓力為0.5psi，進樣時間為10秒，檢測波長為254 nm。在該條件下，以圖1為對照，檢測到提取液中含有二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素和大黃酚(電泳圖譜見圖2);根據表1的校正曲線方程計算出二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素和大黃酚的含量分別為12.02 mg/g、 2.16mg/g、1.16mg/g和0.58 mg/g。
在實驗過程中，為保證獲得較高的信號響應和較好的檢測重現性，需對
毛細管進行適當的處理
a、 毛細管在第一次使用前，按以下的程序進行預處理先用甲醇沖洗10
min，去離子水沖洗2min，接著用0.1 mol/L鹽酸沖洗10 min，去離子水沖洗2 min，最后用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液沖洗10 min，去離子水沖洗2 min。
b、 每次操作之前，毛細管依次分別用0.1 mol/L鹽酸、去離子水、0.1mol/L氫氧化鈉、去離子水沖洗5min，然后再用緩沖液沖洗5 min。
實施例3
對一種產地為四川峨眉山的何首烏中的二苯乙烯苷和蒽醌類成分的分
析，所用儀器和溶液處理方法如前所述，檢測步驟如下
(1)提取液的制備
將峨眉山何首烏的干燥塊根粉碎，過120目篩，取粉末1.0g，加入甲醇60mL,用甲醇超聲提取30 min，過濾，得濾液和濾渣；將濾渣用15mL甲醇洗滌4次，將洗滌液和上述濾液合并，減壓蒸發除去溶劑后加入5 mL甲醇溶解，搖勻，經0.22;/m濾膜過濾，得到何首烏樣品提取液。
(2) 15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸鈉-10。/。甲醇(體積比)，pH9.6緩沖溶液的配制
先用去離子水分別配制濃度為100 mmol/L的硼砂和十二烷基硫酸鈉母液，濃度為5 mol/L的氫氧化鈉溶液；然后利用硼砂和十二烷基硫酸鈉母液配制15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸鈉-10%甲醇(體積比)緩沖液，最后用5 mmol/L的氫氧化鈉溶液和鹽酸調節pH為9.6。(3)對何首烏提取液中二苯乙烯苷和蒽醌類成分進行檢測
將步驟(1)所得何首烏樣品提取液進行毛細管電泳分析，檢測條件同實施例1所得最佳檢測條件電泳緩沖液組成為15mmol/L硼砂-30mmol/L十二垸基硫酸鈉-10%甲醇(體積比)，pH為9.6，分離電壓為25kV，檢測溫度為25 。C，進樣壓力為0.5psi，進樣時間為10秒，檢測波長為254 nm。在該最佳條件下，以圖1為對照，檢測到提取液中含有二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸和大黃酚(電泳圖譜見圖3)。根據表1的校正曲線方程計算出二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸和大黃酚的含量分別為10.01 mg/g、 2.45mg/g、 1.91 mg/g、 3.08 mg/g和0.32 mg/g。
在實驗過程中，為保證獲得較高的信號響應和較好的檢測重現性，需對
毛細管進行適當的處理
(1) 、毛細管在第一次使用前，按以下的程序進行預處理先用甲醇沖洗
10min，去離子水沖洗2min，接著用0.1 mol/L鹽酸沖洗10 min，去離子水沖洗2 min，最后用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液沖洗10 min，去離子水沖洗2 min。
(2) 、每次操作之前，毛細管依次分別用0.1mol/L鹽酸、去離子水、0.1mol/L氫氧化鈉、去離子水沖洗5min，然后再用緩沖液沖洗5 min。
上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發明的保護范圍之內。
權利要求
1、一種同時分離檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的毛細管電泳方法，其特征在于包括如下步驟(1)將二苯乙烯苷對照品、大黃素對照品、蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃酚對照品和大黃素甲醚對照品溶于甲醇中，制成上述各種對照品濃度均為50μg/mL的對照品混合液；采用膠束電動毛細管色譜法，在最佳檢測條件下，對對照品混合液進行毛細管電泳分析，獲得對照品混合液的電泳圖譜；(2)采用膠束電動毛細管色譜法，在最佳檢測條件下，對何首烏樣品提取液進行毛細管電泳分析，獲得樣品液的電泳圖譜；(3)分別根據二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚或大黃素甲醚的校正曲線方程，根據步驟(2)所得電泳圖譜中各對應物質峰面積，計算出何首烏提取液中二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚或大黃素甲醚的濃度；所述最佳檢測條件是內徑為75μm、有效長度為50cm的未涂層熔融石英毛細管、電泳緩沖液組成為15mmol/L硼砂-30mmol/L十二烷基硫酸鈉-體積比10％甲醇、pH為9.6、分離電壓為25kV、檢測溫度為25℃、進樣壓力為0.5psi、進樣時間為10秒和檢測波長為254nm。
2、 根據權利要求1所述的一種同時分離檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽 醌類成分的毛細管電泳方法，其特征在于步驟(2)中所述何首烏樣品提 取液是按以下操作步驟進行將何首烏的干燥塊根粉碎，過80 120目篩， 取粉末0,2 1.0g，加入甲醇30 60 mL，用甲醇超聲提取15 30 min，過 濾，得濾液和濾渣；將濾渣用5 15mL甲醇洗滌2 4次，將洗滌液和上述 濾液合并，減壓蒸發除去溶劑后加入5 mL甲醇溶解，搖勻，經0.22//111濾 膜過濾，得到何首烏樣品提取液。
3、 根據權利要求2所述的一種同時分離檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽 醌類成分的毛細管電泳方法，其特征在于所述超聲提取是采用60 W的超 聲提取。
4、 根據權利要求1所述的一種同時分離檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的毛細管電泳方法，其特征在于對毛細管進行以下處理(1) 毛細管在第一次使用前，按以下的程序進行預處理先用甲醇沖洗10min，去離子水沖洗2min，接著用0.1 mol/L鹽酸沖洗10 min，去離子水 沖洗2 min，最后用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液沖洗10 min，去離子水沖洗2 min。(2) 每次操作之前，毛細管依次分別用0.1 mol/L鹽酸、去離子水、0.1 mol/L氫氧化鈉、去離子水沖洗5min，然后再用電泳緩沖液沖洗5 min。
5、根據權利要求1所述的一種同時分離檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽 醌類成分的毛細管電泳方法，其特征在于在最佳檢測條件下，二苯乙烯苷 和蒽醌類成分在18 min內達到基線分離；遷移時間和峰面積的日內RSD值 分別為0.43 0.79%和0.98 1.87%;遷移時間和峰面積在6天內的日間RSD 值分別為0.74 1.53和U8 2.39°/。；檢測限為0.26 0.56 //g/mL;加標回 收率為98.5 104.0%。
全文摘要
本發明屬于分析檢測技術領域，公開了一種同時分離檢測何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的毛細管電泳方法。該方法采用膠束電動毛細管色譜法對何首烏提取液進行分析檢測，獲得二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚或大黃素甲醚的電泳圖譜；根據校正曲線方程計算出二苯乙烯苷、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚或大黃素甲醚的濃度。本發明能夠同時分析檢測何首烏中的二苯乙烯苷和蒽醌類成分，方法簡單、快速和高效；所用的緩沖液主要是水溶液，無需大量使用有機溶劑，污染小，環境友好；所需的溶劑和樣品量少，分析成本低。
文檔編號A61K36/704GK101658559SQ200910192208
公開日2010年3月3日 申請日期2009年9月9日 優先權日2009年9月9日
發明者葉秋芳, 虹 吳, 宗敏華 申請人:華南理工大學