多價疫苗組合物的制作方法

專利名稱：：多價疫苗組合物的制作方法多價疫苗組合物本發明為2001年6月27日申請的申請號為01814619.8，名稱為"多價疫苗組合物"的分案申請。本發明涉及新組合疫苗制劑。為了將提供對多種病原體的保護作用的所需免疫次數減至最低、降低給藥成本以及增加接受率和覆蓋率，非常需要組合疫苗(該疫苗提供抵抗多種病原體的保護作用)。許多文獻證實抗原性競爭(或干擾)現象使多組分疫苗的研制復雜化。抗原性干擾是指觀察到給予多種抗原常常導致相對于某些抗原單獨給予時觀察到的免疫應答而言，所述抗原應答減弱。已知組合疫苗可以預防百日咳博德特氏菌(Bordetellapertussis)、破傷風梭菌(Clostridiumtetani)、白喉棒桿菌(Corynebacteriumdiphtheriae)，以及任選予頁防乙型肝炎病毒(H印atitisBvirus)禾口/或流感嗜血菌b型(Haemophilusinfluenzaetypeb)(參見例如W093/24148和W097/00697)。本發明涉及生產迄今為止最渴望得到的可以預防或治療百日咳博德特氏菌、破傷風梭菌、白喉棒桿菌、乙型肝炎病毒、流感嗜血菌和腦膜炎奈瑟氏球菌(N.meningitidis)感染、最好也可以預防或治療甲型肝炎病毒和/或脊髓灰質炎病毒感染的多價疫苗，其中所述疫苗組分不顯著干擾所述疫苗中任一組分的免疫學功效，本發明還涉及所述多價疫苗的使用。因此，一方面，本發明提供一種多價免疫原性組合物，所述組合物給宿主提供保護作用以抵抗由百日咳博德特氏菌、破傷風梭菌、白喉棒桿菌、乙型肝炎病毒、流感嗜血菌和腦膜炎奈瑟氏球菌引起的疾病，所述組合物包含(a)或者滅活全細胞百日咳博德特氏菌(Pw)，或者兩種或更多種非細胞百日咳組分(Pa)[優選前者]，(b)破傷風類毒素(TT)，(c)白喉類毒素(DT)，(d)乙型肝炎表面抗原(H印B)，(e)載體蛋白和流感嗜血菌B型(Hib)的莢膜多糖的綴合物，禾口(f)載體蛋白和選自腦膜炎奈瑟氏球菌A型(MenA)和腦膜炎奈瑟氏球菌C型(MenC)的細菌的莢膜多糖的一種或多種綴合物。破傷風類毒素(TT)的制備方法是本領域眾所周知的。例如，TT最好通過從破傷風梭菌培養物純化所述毒素后接化學解毒來制備，一種替代的方法是通過純化所述毒素的重組或遺傳解毒的類似物來制備(例如，如EP209281中所述)。"破傷風類毒素"也包括全長蛋白的免疫原性片段(例如片段C-參見EP478602)。白喉類毒素(DT)的制備方法也是本領域眾所周知的。例如，DT最好通過從白喉棒桿菌培養物純化所述毒素后接化學解毒來制備，一種替代的方法是通過純化所述毒素的重組或遺傳解毒的類似物來制備(例如在US4，709，017、US5，843，711、US5，601，827和US5，917，017中所述的CRM197或其它突變體)。非細胞百日咳組分(Pa)是本領域眾所周知的。實例包括百日咳類毒素(PT)、絲狀血細胞凝集素(FHA)、pertactin(PRN)以及凝集原2和3。這些抗原部分純化或高度純化。優選在所述疫苗中使用2種或更多種非細胞百日咳組分。更優選在所述疫苗中摻入2、3、4或全部5種上述實例非細胞百日咳組分。最優選包括PT、FHA和PRN。PT可以通過各種方法來生產，所述方法例如從百日咳博德特氏菌培養物純化所述毒素后接著化學解毒，或者通過純化PT的遺傳解毒的類似物(例如，如US5，085，862中所述)。W093/24148公開了適用于本發明的制備滅活全細胞百日咳博德特氏菌(Pw)的方法，其也是生產DT-TT-Pw-H印B和DT-TT-Pa-H印B疫苗的合適配制方法。細菌莢膜多糖綴合物可以包含任何含至少一種T輔助細胞表位的載體肽、多肽或蛋白。所使用的載體蛋白最好選自破傷風類毒素、白喉類毒素、CRM197、重組白喉毒素(如US4，709，017、W093/25210、W095/33481或WO00/48638中任一個中所述)、得自肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)的肺炎球菌溶血素(最好是化學解毒或解毒突變體)、得自腦膜炎奈瑟氏球菌的OMPC和得自流感嗜血菌的D蛋白(PD)(EP594610)。由于已知的載體抑制效應，如果在本發明的每種組合物中將其中所含有的多糖抗原('n'抗原)與一種以上的載體綴合將是有利的。因此，可在一種載體上(獨立地)攜帶(n-l)種多糖和在不同載體上攜帶1種多糖，或在一種載體上攜帶(n-2)種多糖和在兩種不同的載體上攜帶2種多糖等等。例如，在含有4種細菌多糖綴合物的疫苗中，可以將1種、2種或全部4種與不同的載體綴合。然而，在本發明的組合物中最好將D蛋白作為載體使用，因為在組合物中可以將其用于各種(2、3、4或更多種)多糖而沒有顯著的載體抑制效應。最優選Hib為TT綴合物，而MenA、MenC、MenY和MenW或者是TT綴合物或者是PD綴合物。D蛋白也是有用的載體，因為其提供抵抗流感嗜血菌的保護作用的另一抗原。可以用任一已知方法(例如Likhite的美國專利4，372，945和Armor等的美國專利4，474，757)，將所述多糖與所述載體蛋白連接。最好是進行CDAP綴合(W095/08348)。在CDAP中，最好用氰化(cyanylating)試劑四氟硼酸1_氰基_二甲氨基吡啶鎗(CDAP)合成多糖-蛋白綴合物。所述氰化反應可以在相對溫和條件下進行，避免堿敏感性多糖水解。該合成允許直接與載體蛋白偶聯。上述免疫原性組合物還可以包含選自以下列舉組分中的l種、2種、3種、4種、5種、6種或7種組分腦膜炎奈瑟氏球菌Y型多糖[MenY](最好是綴合型)、腦膜炎奈瑟氏球菌W型多糖[MenW](最好是綴合型)、傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphi)的Vi多糖、腦膜炎奈瑟氏球菌(最好是血清型B)外膜小泡、一種或多種腦膜炎奈瑟氏球菌(最好是血清型B)外膜(表面暴露)蛋白、滅活減毒甲型肝炎病毒(H印A-最好是稱為'HavrixTM'的制品[SmithKlineBeechamBiologicals])和滅活脊髓灰質炎病毒(IPV-優選包含1型、2型和3型，其為疫苗領域標準技術，最優選Salk脊髓灰質炎疫苗)，而對于所述組合物中的任一抗原不存在顯著干擾問題。本發明的免疫原性組合物最好配制為用于體內給予宿主的疫苗，其配制方式使得所述組合物的各個組分的免疫原性基本上不被所述組合物中的其它各種組分所削弱。所謂基本上不被削弱，意指免疫后，針對每種組分所獲得的抗體效價是當分別給予所述抗原時所獲得的所述效價的60%以上、優選超過70%、更優選超過80%、再更優選超過90%、最優選超過95-100%。本發明的免疫原性組合物最好配制為用于體內給予宿主的疫苗，使得它們提供的抗體效價優于可接受百分比人類受治療者的每種抗原組分的血清保護標準。在評價群體中的疫苗功效時，這是一個重要的試驗。高于所述抗原血清轉化型宿主的相關抗體效價的抗原是眾所周知的，這樣的效價由諸如WHO的組織公布。優選80%以上的統計學顯著性受治療者樣品為血清轉化型，更優選超過90%，再更優選超過93%，最優選96-100%。本發明的免疫原性組合物最好加有佐劑。合適的佐劑包括鋁鹽例如氫氧化鋁凝膠(alum)或磷酸鋁，但也可以是鈣鹽、鐵鹽或鋅鹽，或者可以是酰化酪氨酸、或酰化糖、陽離子或陰離子衍生化多糖或聚磷腈的不溶性懸浮液。也可以選擇TH1型應答優先誘導物的佐劑，以有助于細胞免疫應答。高水平的Thl型細胞因子往往有助于誘導對給定抗原的細胞介導免疫應答，而高水平的Th2型細胞因子往往有助于誘導對所述抗原的體液免疫應答。促進主要為Thl應答的合適佐劑系統包括單磷酰脂質A或其衍生物(特別是3-脫-0-酰化單磷酰脂質A)以及單磷酰脂質A(最好是3-脫-0-酰化單磷酰脂質A(3D-MPL))與鋁鹽的組合。一種增強系統涉及單磷酰脂質A和皂苷衍生物的組合、特別是W094/00153中公開的QS21和3D-MPL的組合，或者在W096/33739中公開的用膽固醇猝滅QS21的反應原性較低的組合物。在W095/17210中介紹了一種特別有效的佐劑制劑，包括QS21、3D-MPL和生育酚的水包油乳劑。另外，所述疫苗還可包含皂苷、更優選是QS21。所述制劑也可包含水包油乳劑和生育酚(W095/17210)。含有寡核苷酸的未甲基化CpG(WO96/02555)也是TH1應答的優先誘導物且適合用于本發明中。在上述免疫原性組合物中鋁鹽是優選的佐劑。具體地說，H印B應最好吸附至磷酸鋁上，然后與其它組分混合。為了將本發明組合物中的佐劑(特別是鋁鹽)水平減至最低，所述多糖綴合物可以不進行佐劑化。本發明也提供生產疫苗制劑的方法，所述方法包括將所述疫苗組分與藥s學上可接受的賦形劑混合在一起的步驟。本發明的一種特別優選的DTPw組合物包含TT、DT、Pw、H印B(最好吸附至磷酸鋁上)、Hib(最好與TT綴合和/或未吸附)、MenA(最好與D蛋白綴合)和MenC(最好與D蛋白綴合)。所述疫苗最好在2個容器中提供，第1個容器裝有液體形式的DTPw-H印B，而第2個容器裝有凍干形式的Hib-MenA-MenC。所述容器的內容物在以一次注射給予宿主前臨時混合。本發明的另一方面提供一種用于藥物的本文所述免疫原性組合物或疫苗。在本發明的再一方面，提供本發明的免疫原性組合物在生產用于治療或預防由以下病原體感染引起的疾病的藥物方面的應用百日咳博德特氏菌、破傷風梭菌、白喉棒桿菌、乙型肝炎病毒、流感嗜血菌和腦膜炎奈瑟氏球菌。另外，也提供免疫人類宿主抵抗由以下病原體引起的疾病的方法百日咳博德特氏菌、破傷風梭菌、白喉棒桿菌、乙型肝炎病毒、流感嗜血菌和腦膜炎奈瑟氏球菌，所述方法包括給予所述宿主免疫保護劑量的本發明免疫原性組合物。通過系統或粘膜途徑給予本發明的疫苗制劑，可以用本發明的疫苗制劑保護或治療感染易感哺乳動物。這些給藥可以包括通過肌內、腹膜內、皮內或皮下途徑注射；或者通過口腔和/或消化道、呼吸道、泌尿生殖道粘膜給予。每劑疫苗中的抗原量根據在典型接種者體內誘導免疫保護性應答而沒有明顯毒副作用的劑量進行選擇。這種劑量將根據使用何種特定免疫原以及如何給予所述免疫原而變化，一般而言，預期每劑將包含0.1-100yg多糖，最好是0.1-50iig，優選是0.1-10iig，其中l-5yg是最優選的范圍。所述疫苗中所述蛋白抗原的含量通常的范圍是1-100yg，優選為5-50yg，最通常的范圍是5-25iig。在初次接種疫苗后，受治療者可以接受適當間隔的一次或數次加強免疫。在VaccineDesign("亞單位禾口佐劑途徑(Thesub皿itandadjuvantapproach)，，(PowellM.F.禾口NewmanM.J.編著)(1995)PlenumPressNewYork)中全面描述了疫苗制備。Fullerton的美國專利4，235，877描述了脂質體包囊化。有趣的是，本發明人也發現對于包含TT、DT、Pw和Hib的疫苗，在所述組合疫苗中可以使用令人驚奇的低劑量Hib的疫苗(與每0.5mL劑量為10g的標準劑量相比)，獲得針對流感嗜血菌b型莢膜多糖抗原至少等同的抗體效價。這與先前預期的相反。因此，在本發明的再一實施方案中，提供包含以下組分的多價免疫原性組合物滅活全細胞百日咳博德特氏菌(Pw)、破傷風類毒素(TT)、白喉類毒素(DT)以及載體蛋白和流感嗜血菌B型莢膜多糖的綴合物(Hib-最好與TT、DT或CRM197綴合)，其中每0.5mL劑量的大劑量(bulk)疫苗中綴合物的量是l-8yg，而所述綴合物的免疫原性相當于包含更大劑量綴合物的這類組合物或優于所述組合物。任選的是，也可以包括乙型肝炎表面抗原。每0.5mL劑量的大劑量疫苗中綴合物的量優選低于10yg(綴合物中的多糖)，更優選為1-7yg或2-6iig，最優選約為2.5iig、3iig、4iig或5iig。最優選Hib綴合物在與DTPw疫苗混合之前不吸附至鋁鹽佐劑上。本發明人進一步觀測到的事實是，包含Hib綴合物的組合疫苗在宿主體內明顯誘發較高抗Hib的抗體效價(與單價、未吸附的Hib綴合物疫苗相比)，如果在另外還包含1種、但特別是2種或更多種額外細菌多糖的疫苗中給予Hib綴合物，疫苗Hib多糖(最好是所有所述多糖)不吸附至佐劑(特別是鋁鹽)上。因此，本發明的再一個獨立的方面是提供包含載體蛋白和流感嗜血菌B型(Hib)莢膜多糖的綴合物的多價免疫原性組合物，其中所述組合物另外還包含能夠給宿主提供保護作用以抵抗所述細菌引起的感染的l種、但特別是2種或更多種其它細菌多糖(最好是超過2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll、12或13種細菌多糖)，其中在所述組合物中的Hib多糖(而最好是沒有所述多糖)被吸附至鋁鹽佐劑上。最優選在所述組合物中不存在鋁鹽佐劑。所謂不被"吸附至鋁鹽佐劑上"的抗原是指配制所述組合物的工藝不包括抗原吸附在新鮮鋁鹽佐劑上的專用步驟。可以將Hib與任何可以提供至少一種T輔助細胞表位的載體(上述例子)、最好是破傷風類毒素綴合。最好是所述其它細菌多糖也與載體蛋白(上述例子)綴合。在具體的實施方案中，流感嗜血菌B型莢膜多糖和其它多糖不與相同載體(Hib不與其它多糖共享相同載體)綴合，特別是在所述載體為CRM197的情況下。在所述實例的優選實施方案中，所述組合物的至少一種多糖與D蛋白綴合，然而，這不是實施本發明所必需的一事實上是既不需要Hib也不需要任何其它多糖與D蛋白綴合。在本發明的一個具體實施方案中，只有Hib和其它細菌多糖(和它們的綴合物)是所述組合物中存在的唯一抗原。能夠給宿主提供保護作用的多糖量(有效量)可容易地由技術人員確定。一般而言，預期每劑包含0.1-100iig多糖，最好是O.l-50iig，優選0.l-10iig，其中l-5iig是最優選的范圍。Hib綴合物存在的量優選為3-15i！g(所述綴合物的多糖)，更優選為4-12i！g，最優選為5-10i！g。在一個優選的實施方案中，在每0.5mL劑量的組合物中存在的其它多糖總共不低于2iig(特別是當綴合的時候)，最好是包括不低于3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、17、20、25、30、35、40、45或50iig。最好是每0.5mL劑量包括不超過100iig其它多糖。所述其它細菌多糖最好選自腦膜炎奈瑟氏球菌血清組A莢膜多糖(MenA)、腦膜炎奈瑟氏球菌血清組C莢膜多糖(MenC)、腦膜炎奈瑟氏球菌血清組Y莢膜多糖(MenY)、腦膜炎奈瑟氏球菌血清組W莢膜多糖(MenW)、B組鏈球菌I組莢膜多糖、B組鏈球菌II組莢膜多糖、B組鏈球菌III組莢膜多糖、B組鏈球菌IV組莢膜多糖、B組鏈球菌V組莢膜多糖、金黃色葡萄球菌5型(St即hylococcusaureustype5)莢膜多糖、金黃色葡萄球菌8型莢膜多糖、得自傷寒沙門氏菌的Vi多糖、腦膜炎奈瑟氏球菌LPS、M.catarrhalisLPS和流感嗜血菌LPS。所謂LPS是指天然脂多糖(或脂寡糖)或脂質A部分已通過多種已知方法中任一種方法解毒的脂多糖(參見例如WO97/18837或W098/33923)或任何包含從所述LPS衍生的0-多糖的分子。所謂腦膜炎奈瑟氏球菌LPS是指所述12種已知免疫學類型(LI、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、L9、L10、L11或L12)中的1種或多種。特別優選的組合是含有或者包含以下組分的組合物1)綴合Hib、綴合MenA和綴合MenC;2)綴合Hib、綴合MenY和綴合MenC;和3)綴合Hib和綴合MenC。在每種上述綴合物中的PS量可以各自為每0.5mL人劑量5iig或10iig。任選的是，上述組合物也可包括腦膜炎奈瑟氏球菌血清型B外膜小泡、或者一種或多種腦膜炎奈瑟氏球菌血清型B外膜(表面暴露)蛋白、或者一種或多種腦膜炎奈瑟氏球菌LPS(如上限定)，以制備全腦膜炎疫苗。優選MenA、MenC和MenY或者是TT綴合物或者是PD綴合物。所述其它細菌多糖也可以選自所述肺炎球菌莢膜多糖(優選超過7種，更優選11種或更多種，最優選13種或更多種)中的任一種，例如選自以下血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、IOA、IIA、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F或33F。所述肺炎球菌多糖最好是綴合型(最優選為PD綴合物)。例如可以從上述一覽表中選出得自至少4種血清型(包括例如6B、14、19F和23F)或者得自至少7種血清型(包括例如4、6B、9V、14、18C、19F和23F)的肺炎球菌多糖。更優選所述組合物包括得自超過7種血清型的多糖，例如至少11種血清型。在一個實施方案中，例如所述組合物包括11種得自血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F的莢膜多糖(最好是綴合型)。在本發明的一個優選實施方案中，包括至少13種多糖抗原(最好是綴合型)，不過本發明也考慮了其它多糖抗原，例如23價(例如血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、IOA、IIA、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F)。對于老年人接種疫苗(例如為了預防肺炎)，在上述優選的11價抗原組合物中最好包括血清型8和12F(最優選15以及22)，以形成13/15價疫苗，而對于嬰兒或學步幼兒(在特別關注中耳炎的情況下)，最好是包括血清型6A和19A，以形成13價疫苗，所述肺炎球菌多糖可以吸附或不吸附至鋁鹽佐劑上。可以將Hib(最好凍干)和肺炎球菌多糖(最好為液體形式)在以一次給藥/注射給予宿主之前臨時混合。這種配制可使免疫后獲得的針對Hib莢膜多糖的抗體效價超過獨立給予Hib綴合物時所獲得的抗體效價的100%。在優選實施方案中，與獨立給予相比，以組合形式給予肺炎球菌多糖綴合物沒有(明顯的)有害作用(就保護性功效而論)。這可以通過在最后初次劑量(初次劑量是初次給予的量一在1歲內通常為3次)后1個月測量抗多糖抗體的初次后幾何平均濃度(geometricmeanconcentrations)(GMC)對其進行評價。優選本發明疫苗的GMC(以Pg/ml計)應該高于給予所述肺炎球菌多糖而不給予Hib綴合物時GMC的55X(更優選高于60%、70%、80%或90%)。沒有有害作用的另一指征是，當比較初次給予本發明疫苗與無Hib綴合物的疫苗后1個月時，是否抗體濃度不低于0.5iig/ml的受治療者百分比相差不超過10%(最好低于9%、7%、5%、3%或1%)。雖然以上涉及Hib和其它細菌"多糖"(優選實施方案)，但也設想了本發明可以延伸至Hib和其它細菌"寡糖"(其天然具有低數目的重復單位，或它可以是處理性大小減小的多糖，但仍能夠在宿主體內誘導保護性免疫應答)，這些都是疫苗領域眾所周知的。本發明該方面的多價免疫原性組合物最好配制為用于體內給予所述宿主的疫苗，其中所述組合物的單個組分的配制使得單個組分的免疫原性不被所述組合物的其它單個組分所削弱(參見上述定義)。因此，在優選實施方案中，與將其分別給予相比，以組合形式給予其它細菌多糖沒有(明顯的)有害作用(就保護性功效而論)。本發明該方面的多價免疫原性組合物最好配制為用于體內給予所述宿主的疫苗，其中所述疫苗提供的抗體效價優于每種抗原組分人類受治療者可接受百分比的血清保護標準(參見上述定義)。本發明該方面的組合物最好配制成疫苗。也設想了本發明該方面的多價免疫原性組合物在生產用來治療或預防由流感嗜血菌(最好還有獲得其它細菌多糖的生物)感染引起的疾病的藥物方面的應用，同樣設想了免疫人類宿主使其抵抗針對由流感嗜血菌(最好還有獲得其它細菌多糖的生物)引起的疾病的方法，所述方法包括給予所述宿主免疫保護劑量的本發明該方面的多價免疫原性組合物。也提供本發明該方面的多價免疫原性組合物的制備方法，所述方法包括將所述單個組分混合在一起的步驟。如果讓所述其它細菌多糖吸附至鋁鹽佐劑上，則這應該在向所述制劑中加入Hib之前進行。優選不使用過量的鋁鹽佐劑。最優選將Hib加入到給予宿主的臨時配制組合物的鋁佐劑化其它多糖中。所有引用的參考文獻和出版物通過引用結合到本文中。實施例實施例僅用以說明本發明，而不限制本發明的范圍。實施例1:DT-TT-Pw-H印B(DTPw-H印B)疫苗的制備如W093/24148中所述進行。該疫苗是市售的，商品名為Tritanrix_HepB(SmithKlineBeechamBiologicals)。實施例2:MenA-MenC-Hib(MenAC-Hib)疫苗的制備i)未加佐劑的MenC-Hib或MenA-MenC-HibMenAC-Hib:在每種綴合物每0.5mL人劑量中以每種多糖5yg的量將與D蛋白綴合的腦膜炎奈瑟氏球菌A型莢膜多糖(采用CDAP技術)、與D蛋白綴合的腦膜炎奈瑟氏球菌C型莢膜多糖和與TT綴合的流感嗜血菌b型莢膜多糖混合在一起。將pH調至6.l，然后在蔗糖存在下凍干。MenC-Hib:在每種綴合物每O.5mL人劑量中以每種多糖5yg的量將與D蛋白綴合的腦膜炎奈瑟氏球菌C型莢膜多糖(采用CDAP技術)和與TT綴合的流感嗜血菌b型莢膜多糖混合在一起。將pH調至6.l，然后在蔗糖存在下凍干。ii)加有佐劑的MenA-MenC_Hib將與D蛋白綴合的腦膜炎奈瑟氏球菌A型莢膜多糖(采用CDAP技術)、與D蛋白綴合的腦膜炎奈瑟氏球菌C型莢膜多糖和與TT綴合的流感嗜血菌b型莢膜多糖分別在鹽水中吸附至磷酸鋁(每劑每種綴合物各5iig分別吸附至100iig、100iig和60iigAl3+)上。將所述吸附疫苗于pH6.1混合在一起，然后在蔗糖存在下凍干。實施例3:臨床試驗研究MenAC-Hib001評價通過上述實施例制備的MenC-Hib和MenAC-Hib(吸附型和非吸附型)誘導的免疫原性、反應性和安全性，對嬰兒給予三劑初次接種。該研究為1I期隨機研究，包括5個研究組。用以評價的制劑是凍干純制劑和吸附型MenAC-Hib制劑和MenC-Hib純制劑。將這3種制劑給予3個嬰兒年齡分別為3個月、4個月和5個月的第一研究組；將Tritanrix-IfepB同時給予(分別注射)這3個組。MenAC-Hib純制劑也在液體白喉、破傷風、全細胞百日咳、乙型肝炎組合疫苗(Tritanrix-H印BTM)中重建，且一次注射給予嬰兒年齡分別為3個月、4個月和5個月的第四研究組。第五組(對照)為年齡為3個月、4個月和5個月給予TritanriX-IfepBTM-Hib疫苗。該研究為開放式，但是首先接受兩種不同MenAC-Hib制劑的兩個組是雙盲法，最后接受Tritanrix-IfepBTM-MenAC-Hib和Tritanrix_IfepBTM-Hib疫苗的兩個組也是雙盲法。概括地講，研究組是<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>結果表明，所評價的每種制劑都誘導對每種抗原的良好免疫應答(測量針對腦膜炎球菌A組和C組、多核糖基磷酸(流感嗜血菌b型莢膜多糖)、白喉類毒素、破傷風類毒素、百日咳博特氏菌和乙型肝炎的抗體)。每種疫苗制劑的耐受性良好。PostIII抗多核糖某磷酸(PRP)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>0.15mcg/ml和1.Omcg/ml通常是觀測到估計血清保護的效價閾值。在DTPw-H印B/MenAC-Hib疫苗中沒有Hib干擾。這也可在圖1中觀察到，圖1顯示所述數據的反向累積曲線(reversecumulativecurve)(RCC)。另外，令人驚奇的是，與吸附型制劑相比，非吸附型MenAC-Hib疫苗顯示出顯著更高的抗PRP效價。PostIII抗D蛋白IgG<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>有關相應的RCC抗PDIgG曲線另見圖2。由此可見，所有制劑都誘導針對所述載體蛋白(D蛋白)的免疫應答。PostIII抗PSA(腦膜炎球菌A的莢膜多糖)IgG<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>該試驗為測量針對腦膜炎球菌多糖A的IgG含量的ELISA試驗。圖3顯示所述數據的RCC圖形。當以DTPw-H印B/MenAC-Hib疫苗存在時，沒有干擾MenA多糖抗原誘導至少相同量的抗體。PostIII針對腦膜炎球菌血清組A的抗SBA<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>該試驗是測量抗腦膜炎球菌血清組A的殺細菌抗體的殺細菌試驗。以DTPw-H印B/MenAC-Hib疫苗存在時，沒有干擾MenA多糖抗原誘導至少相同量的抗體。PostIII抗PSC(腦膜炎球菌C莢膜多糖)IgG和SBA-MenC<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>該試驗為測量針對腦膜炎球菌多糖C的IgG含量的ELISA試驗。圖4顯示所述數據的RCC圖形。SBA-MenC是測量抗腦膜炎球菌C血清的殺細菌活性的殺細菌試驗。這是測量功能性抗體。圖5顯示所述數據的RCC圖形。以DTPw-H印B/MenAC-Hib疫苗存在時，沒有干擾MenC多糖抗原誘導相同量的功能性抗體。PostIII抗腦膜炎球菌血清組C的SBA-MenC<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>該試驗為測量抗腦膜炎球菌血清組A的殺細菌抗體的殺細菌試驗。這是測量功能性抗體。當以DTPw-H印B/MenAC-Hib疫苗存在時，沒有干擾MenC多糖抗原誘導相同量的功能性抗體。抗白喉、破傷風、百日咳博德特氏菌細胞和HepB抗體的血清轉化率<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>BP是指百日咳博德特氏菌。進行ELISA以測量抗全細胞細菌的IgG。^師、石皮傾、5曰斷繊寺fe翻朐'禾口Het)B碰白勺JI解J:編介(GMT)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>根據以上兩個表可以觀察到，對DT、TT、Pw和H印B的免疫應答類似于用注冊的Tritanrix-H印B疫苗獲得的血清轉化和GMT性免疫應答。實施例4:Hib-ll價肺炎球菌綴合物(Hib/Str印llV)疫苗的制備將于pH6.l在乳糖存在下凍干的與TT綴合的流感嗜血菌b型莢膜多糖(每劑所述綴合物中lOiig多糖)[HiberixTM(SmithKlineBeechamBiologicals)]臨時(使用當天)溶于與PD綴合的ll價肺炎球菌莢膜多糖(血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F)(每劑每種綴合物中1Pg多糖)的液體溶液中。肺炎球菌疫苗預先已吸附至0.5mgAl3+(例如A1P0》。實施例5:對實施例4疫苗的臨床試驗將實施例4的疫苗和對照疫苗以三劑(年齡為3個月、4個月、5個月)方案給予德國嬰兒。如下是免疫應答結果(最后一次初次給藥后1個月測量的結果)。抗肺炎球菌IgG抗體GMC(iig/ml)(Elisa)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>A組=llPn-PD+Infanrix-HeXaTM(Infanrix-Penta加上所加的Hib綴合物)D組二llPn-PD/Hib+Infanrix-PeNTa+表示同時給予(在不同肢體)，而不是混合給予。抗體濃度不低于0.5iig/ml的受治療者百分比<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>抗PRP抗體GMC(iig/ml)(Elisa)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>100X受治療者的抗PRP(Hib多糖)抗體濃度不低于1.0iig/ml。Hiberix(非吸附型Hib-TT綴合物)的GMC在相似的給藥方案后約為6yg/ml。所有血清型而言，接受11Pn-PD/Hib的疫苗嬰兒的ELISA抗體免疫應答類似于接受11Pn-PD疫苗的嬰兒所觀察到的免疫應答，例外的是觀察到11Pn-PD/Hib疫苗的血清型1、3和9V幾何平均濃度降低趨勢。然而，這些差異沒有顯著性，證據是95%置信區間相互重疊。11Pn-PD/Hib疫苗誘導針對所有11種血清型的功能性(調理吞噬)抗體。將Hib疫苗與肺炎球菌綴合物疫苗混合沒有顯著干擾肺炎球菌免疫應答，且與注冊的疫苗Infanrix-HeXa和Hiberix相比，令人驚奇地增強抗PRP應答。實施例6:對DTPwH印B疫苗中低劑量Hib效應的臨床試驗進行隨機試驗以評價SBBiologicalsDTPwIfepB(TritanrixTM-HB)疫苗中不同劑量Hib-TT綴合物疫苗在年齡6周、10周和14周的健康嬰兒中初次接種的免疫原性。544名受治療者(分成4組，每組136名)給予下述疫苗組1:與全劑量的Hib-TT(PRP10iig;TT10-20yg;乳糖12.6yg;鋁[鹽]0.15mg)臨時混合的DTPw-H印B;組2:與半劑量的Hib-TT(PRP5iig;TT10-20yg;乳糖10yg;鋁[鹽]0.0755mg)臨時混合的DTPw-H印B;組3:與四分之一劑量的Hib-TT(PRP2.5yg;TT5-10yg;乳糖10yg;鋁[鹽]0.036mg)臨時混合的DTPw-H印B;組4:與全劑量的Hib-TT同時給予(在不同的肢體)的DTPw-H印B。第三次給藥后1個月抗PRP抗體的幾何平均效價(GMT)如下<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>低劑量制劑令人驚奇地具有最高GMT值。如果Hib-TT疫苗為非吸附型，這種效應甚至更高。權利要求一種多價免疫原性組合物，所述組合物包含載體蛋白和流感嗜血菌B型(H.influenzaetypeB)莢膜多糖的綴合物，其中所述組合物還包含能夠給宿主提供抵抗疫苗性細菌感染的保護作用的2種或2種以上其它細菌多糖，其中所述流感嗜血菌B型莢膜多糖綴合物未吸附至鋁鹽佐劑上。2.權利要求l的多價免疫原性組合物，所述組合物包含7種以上其它細菌多糖。3.權利要求2的多價免疫原性組合物，其中所述其它細菌多糖是肺炎球菌莢膜多糖。4.權利要求1-3的多價免疫原性組合物，其中所述組合物中的所有多糖均未吸附至鋁鹽佐劑上。5.權利要求l-4的多價免疫原性組合物，其中所述其它細菌多糖選自腦膜炎奈瑟氏球菌(N.meningitidis)血清組A莢膜多糖、腦膜炎奈瑟氏球菌血清組C莢膜多糖、腦膜炎奈瑟氏球菌血清組Y莢膜多糖、腦膜炎奈瑟氏球菌血清組W莢膜多糖、肺炎鏈球菌(Str印tococcuspneumoniae)血清型1莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型2莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型3莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型4莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型5莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型6A莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型6B莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型7F莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型8莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型9N莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型9V莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型10A莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型11A莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型12F莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型14莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型15B莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型17F莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型18C莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型19A莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型19F莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型20莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型22F莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型23F莢膜多糖、肺炎鏈球菌血清型33F莢膜多糖、B組鏈球菌I組莢膜多糖、B組鏈球菌II組莢膜多糖、B組鏈球菌III組莢膜多糖、B組鏈球菌IV組莢膜多糖、B組鏈球菌V組莢膜多糖、金黃色葡萄球菌5型(Staphylococcusaureustype5)莢膜多糖、金黃色葡萄球菌8型莢膜多糖、傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphi)Vi多糖、腦膜炎奈瑟氏球菌LPS、M.catarrhalisLPS和流感嗜血菌LPS。6.權利要求1-5的多價免疫原性組合物，其中所述其它細菌多糖與載體蛋白綴合。7.權利要求l-6的多價免疫原性組合物，其中所使用的載體蛋白選自破傷風類毒素、白喉類毒素、CRM197、重組白喉毒素、腦膜炎奈瑟氏球菌0MPC、肺炎鏈球菌的肺炎球菌溶血素和流感嗜血菌D蛋白。8.權利要求6或7的多價免疫原性組合物，其中所述流感嗜血菌B型的莢膜多糖和所述其它多糖不是與相同載體綴合。9.權利要求8的多價免疫原性組合物，其中所述流感嗜血菌B型的莢膜多糖和所述其它多糖不是全部均與CRM197綴合。10.權利要求1-9的多價免疫原性組合物在生產用于治療或預防流感嗜血菌(Haemophilusinfluenzae)感染性疾病的藥物中的應用。11.一種免疫人類宿主抵抗由流感嗜血菌引起的疾病的方法，所述方法包括給予所述宿主免疫保護劑量的權利要求1-9的多價免疫原性組合物。12.—種多價免疫原性組合物，所述組合物保護宿主抵抗由百日咳博德特氏菌(Bordetellapertussis)、破傷風梭菌(Clostridiumtetani)、白喉棒桿菌(Corynebacteriumdiphtheriae)、乙型肝炎病毒、流感嗜血菌和腦膜炎奈瑟氏球菌引起的疾病，所述組合物包含a)滅活全細胞百日咳博德特氏菌或者2種或2種以上非細胞百日咳組分，b)破傷風類毒素，c)白喉類毒素，d)乙型肝炎表面抗原，e)載體蛋白和流感嗜血菌B型莢膜多糖的綴合物，f)載體蛋白和選自腦膜炎奈瑟氏球菌A型和腦膜炎奈瑟氏球菌C型的細菌的莢膜多糖的一種或多種綴合物。13.權利要求12的免疫原性組合物，所述組合物還包含載體蛋白和選自腦膜炎奈瑟氏球菌Y型和腦膜炎奈瑟氏球菌W型的細菌的莢膜多糖的一種或多種綴合物。14.權利要求12或13的免疫原性組合物，所述組合物還包含滅活減毒甲型肝炎病毒。15.權利要求12-14的免疫原性組合物，所述組合物還包含滅活脊髓灰質炎病毒。16.權利要求12-15的免疫原性組合物，其中所使用的載體蛋白選自破傷風類毒素、白喉類毒素、CRM197、重組白喉毒素、腦膜炎奈瑟氏球菌0MPC和流感嗜血菌D蛋白。17.權利要求12-16的免疫原性組合物，所述組合物配制成體內給予所述宿主的疫苗，其中所述組合物的各個組分的配制使得各個組分的免疫原性不因所述組合物的其它各組分而被削弱。18.權利要求12-16的免疫原性組合物，所述組合物配制成體內給予所述宿主的疫苗，就人類受治療者可接受百分比而言，所述疫苗提供的抗體效價優于每種抗原組分的血清保護標準。19.權利要求12-18的免疫原性組合物，所述組合物還包含佐劑。20.權利要求19的免疫原性組合物，其中所述佐劑是鋁鹽。21.權利要求1-9和12-20的多價免疫原性組合物，所述組合物用于藥物。22.權利要求12-20的免疫原性組合物在生產用于治療或預防百日咳博德特氏菌、破傷風梭菌、白喉棒桿菌、乙型肝炎病毒、流感嗜血菌和腦膜炎奈瑟氏球菌感染性疾病的藥物中的應用。23.—種免疫人類宿主抵抗由百日咳博德特氏菌、破傷風梭菌、白喉棒桿菌、乙型肝炎病毒、流感嗜血菌和腦膜炎奈瑟氏球菌引起的疾病的方法，所述方法包括給予所述宿主免疫保護劑量的權利要求12-20的免疫原性組合物。24.—種制備權利要求1-9和12-20的多價免疫原性組合物的方法，所述方法包括將所述各個組分混合在一起的步驟。25.—種多價免疫原性組合物，所述組合物包含滅活全細胞百日咳博德特氏菌、破傷風類毒素、白喉類毒素以及載體蛋白和流感嗜血菌B型莢膜多糖的綴合物，其中每0.5mL劑量的大劑量疫苗中的綴合物量是l-8yg，而所述綴合物的免疫原性等于或優于包含更大劑量綴合物的這類組合物。26.權利要求25的免疫原性組合物，其中所使用的載體蛋白選自破傷風類毒素、白喉類毒素、CRM197、腦膜炎奈瑟氏球菌OMPC和流感嗜血菌D蛋白。27.權利要求25或26的免疫原性組合物，其中每O.5mL劑量的大劑量疫苗中的綴合物量是3-6iig。28.權利要求25或26的免疫原性組合物，其中每O.5mL劑量的大劑量疫苗中的綴合物量是5iig。29.權利要求25-28的免疫原性組合物，其中所述載體蛋白和流感嗜血菌B型莢膜多糖的綴合物未吸附至鋁鹽佐劑上。全文摘要描述了一種包含未吸附至鋁鹽佐劑上的流感嗜血菌b莢膜多糖和兩種或更多種其它細菌多糖的綴合物的多價疫苗組合物。也描述了一種包含全細胞百日咳組分、破傷風類毒素、白喉類毒素、乙型肝炎表面抗原、流感嗜血菌b莢膜多糖綴合物和腦膜炎奈瑟氏球菌A型或C型(或兩者)的莢膜多糖綴合物的多價疫苗組合物。此外，描述了包含全細胞百日咳組分、破傷風類毒素、白喉類毒素和低劑量的流感嗜血菌b莢膜多糖綴合物的多價疫苗組合物。文檔編號A61K39/106GK101708333SQ20091017426公開日2010年5月19日申請日期2001年6月27日優先權日2000年6月29日發明者C·卡皮奧,D·勒穆瓦納,D·布特里奧,J·普爾曼,P·M·德斯蒙斯申請人:史密絲克萊恩比徹姆生物有限公司