專利名稱：：維生素-定向的顯象劑的制作方法維生素-定向的顯象劑本申請是申請號為03814683.5,發明名稱為"維生素-定向的顯象劑"的發明專利申請的分案申請。發明領域本發明涉及用于將顯象劑引導到動物細胞上的化合物和方法。更具體地講，通過利用維生素或維生素受體結合衍生物或其類似物作為顯象劑的定向配體，將放射性核素型顯象劑引導到具有維生素受體的細胞上。
背景技術：
：和概述跨膜轉運是一種重要的細胞功能。由于對于包括藥物治療和基因轉移在內的很多醫學和生物科學領域來說，實踐者業已認識到了跨膜轉運的重要性，為了理解和應用所述方法，業已進行了大量的研究努力。因此，舉例來說，業已通過利用蛋白載體，抗體栽體，脂質體輸送系統，電穿孔，直接注射，細胞融合，病毒栽體，滲透壓沖擊，和磷酸鈣介導的轉化嘗試了核酸的跨膜輸送。不過，很多這樣的技術同時局限于進行跨膜轉運的細胞的類型，以及使外源分子進行成功的跨膜轉運所需要的條件。另外，很多這樣的技術局限于外源分子的類型和大小，所述外源分子能夠通過細胞膜轉運而又不喪失生物活性。具有廣泛用途的外源分子的跨膜轉運的一種機制是受體介導的細胞內吞作用。優選的是，受體介導的細胞內吞作用同時在體內和體外進行。受體介導的細胞內吞作用涉及與膜受體結合的配體通過膜的內陷轉移到由所述膜所包圍的部位的內部。所述過程是通過受體專一性配體與所述受體的結合啟動的或激活的。業已表征了多種受體介導的細胞內呑系統，包括能導致以下分子內在化的系統半乳糖，甘露糖，甘露糖6磷酸，轉鐵蛋白，去唾液酸糖蛋白，葉酸，運鈷胺素蛋白(維生素B,》，oc-2巨球蛋白，胰島素，和其他肽生長因子，如表皮生長因子(EGF)。業已將受體介導的細胞內吞作用用于將諸如蛋白和核酸的外源分子輸送到細胞中。一般，特定的配體是通過共價鍵，離子，或氫鍵結合與感興趣的外源分子化學綴合的，形成在綴合物中仍然能夠被靶受體識別的部分(配體部分)的綴合分子。通過這種技術，業已將光毒性蛋白補骨脂素綴合在胰島素上，并且通過胰島素受體細胞內吞途徑內在化(Gasparro，Biochem.Biophys.Res.Comm.141(2)，pp.502-509，Dec.15，1986);業已將半乳糖末端去唾液酸糖蛋白的肝細胞的專一性受體用于與質粒非共價絡合的缺乏唾液酸基的血清類黏蛋白-聚-L-賴氨酸的肝細胞專一性跨膜輸送(Wu,G,Y.,J.Biol.Chem.，262(10),pp.4429-4432,1987);業已將EGF的細胞受體用于將與EGF共價連接的多核苷酸輸送到細胞內部(Myers,歐洲專利申請86810614.7,公開日為1988年6月6日)；業已將位于腸道中的有機金屬維生素B12-內在因子絡合物的細胞受體用于介導與維生素B12絡合的藥物，激素，生物活性肽和免疫原的輸送，在口服之后輸送到循環系統中(Russell-Jones等，歐洲專利申請86307849.9，公開日為1987年4月29日)；業已將甘露糖-6-磷酸受體用于輸送低密度脂蛋白到細胞中(Murray,G.J.和Neville,D.M.，Jr.，J.Biol.Chem,Vol.255(24)，pp.1194—11948，l"0);業已將霍亂毒素結合亞基受體用于將胰島素輸送到缺乏胰島素受體的細胞中(Roth和Maddox，J.Cell.Phys.Vol.115，p.151,1983);并且業已將人絨膜促性腺激素受體用于將與HCG結合的蓖麻毒蛋白a-鏈輸送到具有合適HCG受體的細胞中(Oeltmann和Heath,J.Biol.Chem,vol.254，p.1028(1979))。在本發明的一種實施方案中，涉及到放射性核素-型顯象劑通過具有維生素受體，或維生素受體結合衍生物或其類似物的跨膜轉運。讓具有維生素受體，或維生素衍生物或類似物的受體的細胞膜與維生素-顯象劑綴合物接觸足夠的時間，以便啟動并且進行所述綴合物的跨膜轉運，并且監測所述維生素-顯象劑綴合物在所述動物體內的生物分布。在另一種實施方案中，所迷維生素/維生素衍生物或類似物定向郜分只是與細胞表面維生素受體結合，以便在所述細胞表面上濃縮螯合的放射性核素。本發明利用了(1)維生素受體的定位和(2)相關的受體-介導的細胞內吞過程。例如，本發明利用了能專一性地結合腫瘤細胞上的或能夠超量表達所迷受體的其他細胞類型上的維生素，或其衍生物或類似物的維生素受體，轉運蛋白，或其他表面呈遞蛋白的獨特的表達，超量表達，或優先表達。因此，本發明可用于檢測諸如腫瘤細胞，或其他細胞7類型的細胞，這些細胞通過利用受體介導的細胞內吞過程能夠超量表達維生素受體，或維生素衍生物或類似物的受體，所述過程是在所述細胞與維生素-顯象劑接觸時發生的。例如，微生物受體，如高親和力葉酸受體(FR)是在癌細胞上高水平表達的。卵巢，乳腺，結腸，肺，鼻，喉，和大腦的上皮癌都報導了能表達較高水平的FR。實際，已知超過9oy。的所有人類卵巢腫瘤能表達大量的這種受體。因此，本發明可用于多種腫瘤類型，和與疾病狀態相關的其他細胞類型的診斷顯象。業已將與配體絡合的放射性核素螯合劑用作診斷診斷顯象目的的非損傷性探針。例如，業已將血管活性腸肽，生長激素釋放抑制激素類似物，和單克隆抗體用作配體，將放射性核素定位于諸如腫瘤細胞的細胞。單克隆抗體，和它的各種片斷最初受到了最多的關注，這是因為人們相信利用單克隆抗體作定向配體可以實現精確的腫瘤專一性定向。不幸的是，這種方法是有問題的，因為i)由于它們的較大的體積，抗體具有很長的循環時間，這對于顯象目的來說是不利的，ii)抗體的生產成本昂貴，iii)抗體可能是免疫原性的，因此，在使用多個劑量時，必須人源化，和iv)抗體結合的放射性核素的腫瘤與非把定組織的比例(T/NT)不是最佳的。因此，最近的焦點集中在利用沒有所迷限制的較小的腫瘤專一性配體。業已將諸如葉酸的維生素用于將顯象劑引導到腫瘤細胞，并且因為它們較小的體積是有利的。所披露的用于體內腫瘤顯象的第一種葉酸型定向絡合物是含有1251的組胺衍生物。因為長效的1251放射性核素成分，這種絡合物不被認為是相關的臨床候選物。隨后，開發了腫瘤顯象的去鐵胺-葉酸綴合物(去鐵胺螯合物"Ga，Y-發射放射性核素，它具有78小時的半衰期)。發現了該綴合物的肝膽管清除，因此，由于在精確的顯象腹部定位方面的預期的問題而終止了臨床前的開發。不過，通過用一種有效的mIn螯合劑(半衰期68小時)-二乙三胺五乙酸(DTPA)取代所述的去鐵胺螯合劑克服了這一障礙。證實了消除"'In-DTPA-葉酸的主要途徑是通過腎臟。最近，業已將"'Tc用作用于診斷顯象的優選放射性核素，因為i)這種放射性核素容易從商業銷售的"Mo-'"Tc發射劑獲得，ii)與生產出In的成本相比，生產大量"'Tc的成本是微不足道的，和iii)""Tc具有更短的(6小時)半衰期，這樣可以服用更大劑量的放射性核素，能夠產生更高分辨率的圖像，而又不會使活體器官接收有害的輻射。業已開發了若干種葉酸型""Tc綴合物。例如，業已證實了""Tc-6-胼基煙酰胺-腓基(HYNIC;Guo等，J.Nucl,Med.,40(9):1563-1569(1999))，""Tc12-氨基-3,3，9，9-四甲基1-5-氧雜-4，8二氮雜-2，10-dodecanedinoe二將(氧雜)(Under等，Soc.Nucl.Med.，Proc.47thAnnualMeeting,2000，41(5):119P),"Tc-乙烯二半胱氨酸(Ilgan等，CancerBiother.&Radiopharm.，13(6):427-435(1998))，和'"c-DTPA葉酸(Mathias等，Bioconjug,Chem.，11(2):253-257(2000))的葉酸綴合物在體內腫瘤攝取質量方面的應用前景。不過，還需要其他維生素-型mTc綴合物，或利用其他放射性核素的維生素-型綴合物，它具有最佳的腫瘤與非目標組織比例(T/NT)，并且是通過腎臟消除的。所述維生素型綴合物應當適合作為腫瘤顯象劑的臨床開發，并且用于其他疾病狀態的診斷。在一種實施方案中，提供了具有以下結構式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中，V是維生素，或維生素受體結合衍生物或其類似物，L是二價連鍵，R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈，M是放射性核素的陽離子，n是l或0，而k是l或0。所述維生素是受體-介導的體內跨膜4爭運的底物。在另一種實施方案中，提供了一種用于診斷顯象的組合物，它包括具有以下結構式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中，V是維生素，或維生素受體結合衍生物或其類似物，L是二價連鍵，R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈，M是放射性核素的陽離子，n是l或O，和它的可以藥用的栽體。所述維生素是受體-介導的體內跨膜轉運的底物。在另一種實施方案中，提供了一種對動物體內的一群細胞進行顯象的方法，其中，所述細胞以這些細胞表面上的維生素受體為特征。所述方法包括給所述動物服用有效量的包括具有以下結構式的化合物的組合物V-《L)n-NHCH2CH'CO,-CH(R)CO，-CH<COOH)CH2;rSHH2N,、、、、、'；，，'''其中，V是維生素，或對細胞表面維生素受體專一的受體結合衍生物或其類似物，L是二價連鍵，R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈，M是放射性核素的陽離子，n是l或O,和它的可以藥用的栽體，并且監測所述化合物在所述動物體內的生物分布。在另一種實施方案中，提供了具有以下結構式的化合物V-(L)n-NHCH-CO,'CH(R)CO.，-CH(COOH)CH2;;SHH2C、、、、!Si/.......、\!'z'''..........也其中，v是維生素，它是受體-介導的體內跨膜轉運的底物，或維生素受體結合衍生物或其類似物，L是二價連鍵，R是具有結構式H2NCHRCOOH的氨基酸的側鏈，M是放射性核素的陽離子，n是1或0,而k是1或0。在另一種實施方案中，提供了用于診斷顯象的組合物，它包括具有以下結構式的化合物10V-(L>n-NHCH.CO'NI^CH(R)CO.，-CH(COOH)CH2;;SHH2C、、、、、'i......M其中，v是維生素，它是受體-介導的體內跨膜轉運的底物，或維生素受體結合衍生物或其類似物，L是二價連鍵，R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈，M是放射性核素的陽離子，n是l或0，和它的可以藥用的載體。在另一種實施方案中，提供了一種對動物體內的一群細胞進行顯象的方法，其中，所述細胞以這些細胞表面上的維生素受體為特征。所述方法包括給所述動物服用有效量的包括具有以下結構式的化合物的組合物V-(L)n.NHCH'CO，.CH(R)CO，-CH(COOH)CH2:;SHH2C、、、、SH.其中，V是維生素，或對細胞表面維生素受體專一的受體結合衍生物或其類似物，L是二價連鍵，R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈，M是放射性核素的陽離子，n是l或O，和它的可以藥用的載體，并且監測所迷化合物在所述動物體內的生物分布。在上述任何實施方案中，所述化合物中的V可以是，例如，選自下列一組的維生素葉酸，核黃素，疏胺素，維生素B,2,和生物素，或其衍生物或類似物。在上述任何實施方案中，在所述化合物中的放射性核素可以選自，例如，下列一組放射性同位素鎵，銦，銅，锝，和錸。附圖簡述圖1.EC20的結構，被用作本發明顯象劑的典型的化合物。圖2.9'mTc-EC20的HPLC放射層析圖。在WatersNova-PakC18(3.9x150mm)柱上等度洗脫""Tc-EC20的樣品，使用含有20%甲醇和0.2%三氟乙酸的水移動相，流速為1毫升/分鐘。通過UV檢測儀(280nm)和BioscanFC-3200檢波器監測HPLC分析。A峰,無，'"Tc;B峰,具有未知結構的含有葉酸的螯合物；C和D峰，在EC20的Dap-Asp-Cys螯合環中具有锝-氧鍵的順或反構像的非對映異構體。圖3.Re-EC20和"，c-EC20異構體的結構(金屬-氧鍵的順或反位置)。圖4.用各種含有葉酸的竟爭劑抑制'H-葉酸與KB細胞的結合。在有或沒有加大竟爭劑濃度的條件下，將KB細胞在水上與100nM4-葉酸一起培養15分鐘。(O葉酸；(B)EC20;(▲)EC20:Re異構體A;(T)EC20:Re異構體B;(□)DTPA-葉酸。誤差線條表示1個標準誤差(n-3)。圖5.99mTc-EC20的時間決定型結合。在37'C下將KB細胞與10nM""Tc-EC2D—起長時間培養。在多次洗涂之后，收獲細胞，并且統計結合的放射性活性。誤差線條表示1個標準誤差(n=3)。圖6.99mTc-EC20的濃度決定型結合。在37。C下，在提高""Tc-EC20濃度的情況下培養KB細胞2小時。在多次洗滌之后，收獲細胞，并且統計結合的放射活性。誤差線條表示1個標準誤差(n=3)。圖7."mTc-EC20"B峰"的濃度決定型結合。在37'C下，在存在較大濃度"B峰"的情況下培養KB細胞2小時。所述B峰是通過層析方法從""Tc-EC20制劑中分離的。在多次洗滌之后，收獲細胞，并且統計結合的放射性活性。誤差線條表示1個標準誤差(n-3)。()，B峰；(。)，B峰+1mM葉酸。圖8.在Balb/c小鼠體內抑制""Tc-EC20的血液清除。在進行短時間的乙醚麻醉期間用大約0.lmL的體積給每只動物靜脈注射50Mg/kgEC20的劑量(67nmol/kg)。在指定的注射后時間，通過二氧化碳窒息對每一只動物實施安樂死，采集血液，并且統計相關的放射活性。誤差線條表示1個標準誤差(n=3只動物)。圖9.整體y圖像(腹部視圖)。圖像是在給長有皮下葉酸受體陽性M109腫瘤的Balb/c小鼠靜脈服用""Tc-EC20之后4小時獲得的。只有腎臟(K)和腫瘤(T)表現出這種放射性示蹤劑的明顯積累。圖10.ECU,ECU,EC14,EC15,EC19,EC20,EC31和EC53的結構。圖11，"Tc-EC20在長有FR-陽性M109肺瘤和FR-陰性4T1肺瘤的Balb/c小鼠體內的9'，c-EC20的組織分布。圖12.ECU的HPLC分析。圖13.ECU的質語分析。圖14.EC11的NMR分析。圖15.EC13的HPLC分析。圖16.EC14的NMR分析。圖17.EC15的質譜分析。圖18.EC19的HPLC分析。圖19.EC19的質語分析。圖20.EC31的HPLC分析。圖21.EC53的HPLC分析。圖22.EC53的質鐠分析。圖23.EC53的質語分析。發明詳述根椐本發明，提供了用于將放射性核素-型顯象劑引導到能獨特地表達，超量表達，或優先表達維生素受體的細胞群體的化合物和方法。因此，將維生素，或其受體結合衍生物或類似物被用作所述顯象劑的定向配體。可以將所述維生素-顯象劑綴合物用于將放射性核素引導到細胞上，并且在諸如腫瘤細胞群體的細胞群體中濃縮所迷放射性核素，以便用于診斷顯象。本發明提供了用于診斷顯象的組合物，它包括用于所迷方法的具有以下結構式的化合物V.(L)n-NHCH2CH'CO，CH(R)CO，-CH(COOH)CH2;7SHH2N.,、、、、、i或V-(L)n-NHCHCO.NI^-CH(R)CO，-CH(COOH)CH2;;SHH2C、、、、、'iSh/.........、、、、!..........->/r在所述化合物中，V是維生素，或維生素受體結合衍生物或其類似物，L是二價連鍵，R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈，M是放射性核素的陽離子，而n是l或0。所述維生素，或維生素受體結合衍生物或其類似物，是受體-介導的體內跨膜轉運的底物。本發明還提供了具有以下結構式的化合物V-(L>n.NHCH2CH'CO-NI^.CH(R)CO-，-CH(COOH)CH2;7SHH2N、、、、、'和V-(L)n-NHCH'CO.NIfCH<R)CO-，-CH(COOH)CH2;;SHH2C、、、、、'；Sh/........、、、J..........-)M)'k其中，V是維生素，或維生素受體結合衍生物或其類似物，L是二價連鍵，R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈，M是放射性核素的陽離子，n是l或O,而k是l或O。所述維生素是受體-介導的體內跨膜轉運的底物。所述化合物的例子是圖1所示的被稱為EC20的化合物。用于本發14明的其他化合物的例子是ECU,EC13,EC14，EC15,EC19,EC31,和EC53(參見圖10)。所迷維生素部分(例如EC20中的葉酸部分)提供了對細胞FRs的高親和力結合。所述化合物還含有雙功能肽型螯合劑，它提供了用于螯合放射性核素，例如，""Tc(參見圖l)的位點，并且所述化合物可選擇性地包括接頭，通過該接頭可以將所迷維生素部分共價結合在所述螯合部分上。根椐本發明，所迷化合物的維生素部分是維生素，它是受體-介導的體內跨膜轉運的底物，或維生素受體結合衍生物或其類似物。所述維生素通過接頭(L)選擇性地與所述化合物的螯合劑部分結令。所迷螯合劑部分包括通過第三個氨基酸殘基與半胱氨酸基團連接的oc,p-二氨基丙酸部分。所述化合物的螯合劑部分適合結合放射性核素陽離子(M)(其中k=1)。根據本發明，所述具有結合的放射性核素的化合物被稱為"維生素-顯象劑綴合物"。所述接頭(如果存在的話)的結構對于本發明來說是不重要的。因此，例如，它可以是任何生物兼容性二價鍵。通常，所述接頭包括大約1-大約30個碳原子，更常見的是大約2-大約20個碳原子。通常采用較低分子量的接頭(即，分子量大約為30-大約300的接頭)。另外，所述維生素部分可以是維生素，或它的衍生物或類似物。例如，含有一個與蝶酸連接的L構型的谷氨酸的葉酸。如圖1所示，EC20包括與所述螯合劑部分結合的葉酸類似物，因為EC20具有D構型的谷氨酸。EC11和EC14包括兩個谷氨酸殘基，因此，所述化合物還可以，例如，被認為是葉酸的衍生物(圖10)。被認為能誘導受體介導的細胞內吞作用并且可應用于本發明披露的方法中的維生素包括煙酸，泛酸，葉酸，核黃素，硫胺素，生物素，維生素B，2,和脂溶性維生素A，D,E和K。這些維生素，以及它們的類似物和衍生物構成了與顯象劑結合以便形成用于本發明的維生素-螯合劑綴合物的維生素。優逸的維生素部分包括葉酸，生物素，核黃素，疏胺素，維生素Bu,和這些維生素分子的類似物和衍生物，以及其他相關的維生素受體-結合分子。葉酸，亞葉酸，蝶酸，蝶酰聚谷氨酸，和葉酸受體-結合蝶咬如四氫蝶呤，二氫葉酸，四氫葉酸，和它們的脫氮和二脫氮類似物可用于本發明。術語"脫氮"和"二脫氮"類似物表示本領域所公認的葉酸類似物，它具有取代天然存在的葉酸結構上的一個或兩個氮原子的碳原子，例如，所述脫氮類似物包括l-脫氮，3-脫氮，5-脫氮，8-脫氮，和10-脫氮類似物。所述二脫氮類似物包括，例如1，5二脫氮，5，10-二脫氮，8,10-二脫氮，和5,8-二脫氮類似物。以上是葉酸類似物或衍生物，并且可以與葉酸受體結合。可用于本發明的其他葉酸類似物或衍生物包括葉酸受體-結合類似物氨喋呤，氨甲喋呤(氨甲葉酸)，『-曱基葉酸，2-脫氨-羥基葉酸，脫氮類似物，如1-脫氮甲噪呤或3-脫氮甲嚷呤，和，5'-二氯-4-氨基-4-脫氧-N"-甲基蝶酰谷氨酸(二氯氨甲葉酸)。所述維生素，或它的衍生物或其類似物能夠選擇性地與要顯現的細胞群體結合，因為在所述靶細胞上優先表達了所述維生素，或衍生物或類似物的受體，其中，所述受體是可以結合的。所述維生素的結合位點可以包括能夠特異地結合受體的任何維生素分子的受體，所述受體或其他蛋白是由要顯現的細胞群體獨特的表達，超量表達的，或優先表達的。由要顯現的細胞獨特表達，超量表達，或優先表達的表面呈遞蛋白是在其他細胞上不存在或以較低含量存在的受體，提供了選擇性地，快速地，和靈敏地觀察靶定的細胞的方法，用于利用本發明的維生素-顯象劑綴合物進行診斷顯象。根據本發明，所迷維生素顯象劑綴合物能夠與要顯現的癌細胞或其他細胞上的受體高親和力結合。所述高親和力結合可能是所述維生素部分所固有的或所述高親和力可以通過使用化學修飾的維生素(即類似物或衍生物)或通過存在于所迷綴合物的維生素和螯合劑部分之間的特殊化學連鍵加強。根椐本發明，所述螯合劑可以與多種不同的維生素，或維生素受體結合衍生物或類似物綴合，以便增加與相應的細胞膜受體結合的機會。另外，維生素-顯象劑綴合物的劑量的獨立部分可以構成不同的維生素-顯象劑綴合物，以便增加與相應的細胞膜受體結合的機會。一般，在螯合劑和維生素，或維生素受體結合衍生物或類似物之間形成絡合物的任何方法都可用于本發明。所述螯合劑可以通過使用二價鍵通過所述螯合劑和維生素的直接綴合，所迷螯合劑可以與維生素，或維生素受體結合衍生物或類似物形成絡合物。另外，所述維生素和螯合劑可以是在不使用接頭的情況下綴合的。如果使用接頭的話，所述接頭可以通過氫鍵，離子鍵，或共價鍵直接綴合所迷維生素，或維生素受體結合衍生物或類似物，以及所迷螯合劑。另外，根椐本發明，所述二價鍵可以包括結合所述螯合劑和維生素，或維生素受體結合衍生物或類似物的間接方式，如通過中間接頭，間隔臂，或橋連分子連接。直接和間接結合的方法，都必須不會妨礙所述維生素，維生素受體結合衍生物或類似物與所述細胞膜上的維生素受體結合，以便實施本發明的方法。無論是否使用接頭，所迷維生素，或維生素受體結合衍生物或類似物，和所述螯合劑的共價結合可以通過酸，醛，羥基，氨基，或肼基之間形成酰胺，酯或亞胺基鍵實現。例如，可以利用羰基二咪唑或標準碳二亞胺結合試劑，如l-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺(EDC)激活維生素部分或螯合劑部分上的羧酸，然后與所迷綴合物的其他成分起反應，或與至少一個親核性基團，即羥基，氨基，肼基或巰基的接頭起反應，以便形成有或沒有通過酯，酰胺，或疏酯鍵結合的接頭的維生素螯合劑綴合物。適合診斷顯象的放射性核素包括放射性核素鎵，銦，銅，锝和錸，包括同位素'"In，""Tc,"Cu,"Cu，"Ga或"Ga。所述放射性核素是陽離子型的，并且通過所述綴合物的螯合基團與所述螯合劑絡合，以便形成維生素顯象刑綴合物。本發明的維生素-顯象劑綴合物被用于利用閃爍成像技術選摔性顯現動物體內的一群細胞，其中，所述細胞群體能夠獨特地表達，超量表達，或優先表達維生素，或維生素受體結合衍生物或其類似物的受體。所述維生素-顯象刑綴合物可用于顯現致病性細胞的群體，只要所迷細胞能獨特地或優先表達或超量表達維生素受體或結合維生素衍生物或類似物的受體就行。本發明可應用于致病性細胞群體，它們能導致多種病狀，包括癌癥，和通過其他類型的致病性細胞介導的疾病，所述細胞能超量表達維生素受體或能夠結合維生素衍生物或類似物的受體。因此，所述致病性細胞群體可以是致瘤的，包括良性腫瘤和惡性腫瘤，或它可以是非治瘤的。如果所述細胞群體是癌細胞群體，所述癌細胞可以自發產生或通過諸如存在于宿主動物種系的突變或體細胞突變自發發生，或者所迷癌癥可以是化學，病毒，或輻射誘導的。本發明可用于癌癥諸如腫瘤，惡性腫瘤，淋巴瘤，HodgeUn's病，黑素瘤，間皮瘤，Burkitt's淋巴瘤，鼻咽癌，和骨髄瘤的診斷顯象。所述癌細胞群體可以包括，但不局限于口腔，鼻咽，曱狀腺，內分泌，皮膚，胃，食道，咽，喉，胰腺，結腸，膀胱，骨，卵巢，宮頸，子宮，乳腺，睪丸，前列腺，直腸，腎，肝，肺和大腦癌。對于所迷細胞群體是癌細胞群體的實施方案來說，腫瘤細胞，包程中的腫瘤細胞，可以利用維生素顯象劑綴合物顯現。本發明的維生素-顯象劑綴合物可用于診斷疾病癥狀或監測疾病的發展。例如，本發明的診斷顯象方法可用于監測癌癥的發展，與預防性治療結合，以便預防在通過任何治療方法切除之后的腫瘤復發，所迷方法包括腫瘤的手術切除,放療，化療，或生物治療。本發明的組合物和方法可用于人類臨床藥和獸醫用途。因此，具有要顯現的細胞群體的動物可以是人，或者對于獸醫用途來說，可以是實驗室，農業，家養，或野生的動物。本發明可應用的動物包括，但不局限于人，實驗室動物，如嚙齒類動物(例如，小鼠，大鼠，倉鼠等)，兔子，猴子，黑猩猩，家養動物，如狗，貓，和兔子，農業動物，如牛，馬，豬，綿羊，山羊，和圈養的野生動物，如熊，熊貓，獅子，虎，豹，大象，斑馬，長頸鹿，大猩猩，海豚，和鯨魚。用于診斷顯象的組合物包括在通過一個或通過多個劑量服用時能夠在進行診斷顯象的動物體內有效顯現靶細胞的量的維生素-顯象劑綴合物。含有維生素-顯象劑綴合物的診斷顯象組合物優選通過腸胃外途徑給動物服用，例如，真皮內，皮下，肌內，腹膜內，靜脈內，或膜內。另外，含有維生素-顯象劑綴合物的組合物可以通過其他醫學上可以使用的方法給動物服用，并且，可以使用任何有效劑量和合適的劑型，包括口服和吸入劑型。腸胃外劑型的實例包括所述維生素-顯象劑綴合物的水溶液，存在于等滲鹽水，5%葡萄糖或其他眾所周知的可以藥用的液體載體中，如液體醇，乙二醇，S旨，和酰胺。本發明的腸胃外劑型可以是可復水的冷凍干燥形式的，包括所迷劑量的維生素-顯象劑綴合物。所述診斷顯象組合物中的維生素-顯象劑綴合物的劑量可以根據動物的大小，要定向進行診斷顯象的細胞群體，所使用的特定維生素顯象劑綴合物，以及服用所迷綴合物的途徑而明顯不同。給所迷動物服用的有效量是基于所述動物的身體表面積，體重，和醫生對動物癥狀的評估。18有效劑量可以是大約lng/kg-大約1mg/kg范圍內，更優選大約100ng/kg-大約500//ag/kg，最優選大約100ng/kg-大約25pg/kg。服用含有維生素-顯象劑綴合物的診斷顯象組合物的任何有效方案都可以使用。例如，所述診斷顯象組合物可以作為單劑量服用，或者可以通過多個劑量服用，如果必要的話，以便實現所述靶細胞群體的顯現。在首次注射之后，可以數日或數月的間隔給所述動物服用其他注射劑量的含有所迷維生素-顯象劑綴合物的診斷顯象組合物，并且，所述其他注射可用于監測疾病狀態的發展。含有維生素-顯象劑綴合物的診斷顯象組合物還可以與未標記過的維生素一起組合使用。"與...組合"表示所述未標記過的維生素可以與所述顯象劑共同服用，或者在服用所述顯象劑之前預先注射未標記過的維生素，以便提高圖像質量。例如，所述顯象劑可以與大約0.5ng/kg-大約100mg/kg，或大約1pg/kg-大約100mg/kg,或大約100jLtg/kg-大約100mg/kg的未標記過的維生素組合服用。所述診斷顯象組合物通常被制備成用于腸胃外服用，并且是以能夠使靶細胞群體有效顯象的量給所述動物服用的。通常給所述動物服用含有所述維生素定向顯象劑的診斷顯象組合物，并且在經過一段時間之后，使所述維生素-顯象劑綴合物在所述靶細胞群體中輸送和濃縮，并且對所迷動物進行顯象過程，并且顯象可以通過所述維生素-顯象劑綴合物完成。在用于監測疾病發展過程或診斷時，顯象方法通常是在服用含有維生素-顯象劑綴合物的診斷顯象組合物之后大約1-大約6小時進行的。本發明還提供了對動物體內的一群細胞進行顯象的方法，其中，所迷細胞以存在于所述細胞表面上的維生素受體為特征。所述方法包括以下步驟給所迷動物服用有效量的包括具有以下結構式的化合物的組合物V-(L)n-NHCH2CH'CO,CH(R)CO，H.CH(COOH)CH2;SHH2N.、、、、、、、W或V-(L)n-NHCH.CO，-CH(R)CO.，-CH(COOH)CHpSHH2C、、、、'MSH-其中，V是所述維生素，或對細胞表面維生素受體專一的受體結合衍生物或其類似物，L是二價連鍵，R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈，M是放射性核素的陽離子，n是l或O,和它的可以藥用的栽體，并且監測所述化合物在所述動物體內的生物分布。所迷方法可用于在體外，例如，在細胞培養物中或在體內，其中，所述細胞構成了動物組織的一部分或以其他方式存在于動物組織中進行細胞群體的顯象。因此，舉例來說，所述把細胞可以包括襯在消化道如口腔和咽喉黏膜里的細胞，所述細胞構成了小腸的絨毛，或襯在大腸里的細胞。根據本發明，所述消化道中的細胞可以通過服用包括維生素顯象劑綴合物的診斷顯象組合物進行定向。類似地，襯在動物的呼吸系統(鼻道/肺)里的細胞可以通過吸入本發明的絡合物定向，并且，內臟器官的細胞，包括卵巢和大腦的細胞特別是可以通過腸胃外服用診斷顯象組合物定向。實施例1材料N'。-三氟乙酰蝶酸是從瑞士的EprovaAG，Schaffhausen購買的。肽合成試劑是從NovaBiochem和Bachem購買的。""Tc高锝酸鈉是由Syncor提供的。[Re02(en)2]Cl是按照Rouschias的方法制備的(Rouschias，G.,Chem.Rev.,74:531(1974))。纖維素平板和DEAE離子交換平板是從J.T.Baker購買的。20實施例2EC20的合成，純化，和分析表征EC20是使用Fmoc方法通過聚合物支持的順序方法制備的(參見下面的方案1;Fmoc=9-芴基甲氧基羰基；Boc-叔丁氧基羰基；Dap=二氨基丙酸；DMF-二甲基甲酰胺；DIPEA=二異丙基乙胺)。EC20是在用Fmoc-L-Cys(Trt)-OH加栽的酸敏感型Wang樹脂上合成的。苯并三唑-l-基-氧基-三-吡咯炕-膦六氟代磷酸(PyBOP)是作為活化制劑使用的，以便確保利用低當量的氨基酸進行有效結合，Fmoc保護基團是在每一個結合步驟之后，在標準條件下去掉的(存在于DMF中的含有20%的哌啶)。在最后的組裝步驟之后，通過用含有2.5%乙二疏醇，2.5°/三異丙基硅烷和2.5%去離子水的92.5%的三氟乙酸處理將所迷肽從聚合物支持物上裂解掉。該反應還導致了t-Bu,Boc和三苯曱基保護基團的同時消除。最后，在氫氧化銨水溶液中除去三氟乙酰部分，以便得到EC20。通過HPLC純化粗制EC20產物，使用XterraRP1830x300咖，7jum柱(Waters);流動相32mMHCl(A),MeOH(B);梯度條件始于99%A和1%B,以20mL/分鐘的流速，用37分鐘時間達到89%A和11%B。在上述條件下，EC20單體通常在14.38分鐘洗脫出，而EC20二硫化物二聚體(少量污染物)在16.83分鐘洗脫出。圖IO所示的所有其他化合物可以用類似的合成方法制備，所不同的是，EC15是按照下面所示的方案2合成的。將2mgHPLC-純化的EC20溶解在0,62mL的D20，并且收集500MHz'H-NMR譜。表1(參見下文)列舉了EC20分子中的所有非交換質子的化學位移，信號形狀，和J值。還通過電霧化質譜學分析了EC20。主要陽性離子峰(m/z,相對強度)746.1，100;747.1，44;556.8，32;570.8，16。方案r'試刑和條件:i)20V底啶,DMF;ii)Fmoc-Asp(OtBu)-0H，PyBop，DIPEA,DMF;iii)Boc-Dap(F畫)-OH，PyBop,DIPEA，DMF;iv)F,-D-Glu-OtBu,PyBop,DIPEA,DMF;v)N'。-TFA-Pte-OH,DIPEA,DMSO;vi)F3CC02H,HSCH2CH2SH,iPnSiH;vii)HWOH，pH-10.3,表1.EC20的'H-NMR數據。將EC20溶解在D20中，并且采集500MHz光譜。化學位移(5)以ppm為單位。將5=4.80ppm時的HOD信號用作參照。pD-4.78;s-單峰；d-雙峰；m-多峰。<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>方案2'<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>'試劑和條件i)20V底啶，DMF;ii)Fmoc-Asp(OtBu)-OH，PyBop，DIPEA,DMF;iii)F陽-Cys(Trt)-OH，PyBop,DIPEA,DMF;iv)F,-D-Glu-OtBu,PyBop，DIPEA,DMF;v)Nl。—TFA-Pte-OH,DIPEA,DMSO;vi)TFAA,HSCH2CH2SH,iPr3SiH;vii)出NOH,pH=10.3實施例3非放射性試劑小瓶和'9mTc-EC2G的制備將EC20試劑盒用于制備""Tc-EC20放射性藥物。每一個試劑盒含有0.1mgEC20，80mgoc-D-葡萄糖酸鈉，80mg二水合氯化錫(II)的無菌的，非致熱的冷凍干燥的混合物，并且含有足夠量的氫氧化鈉或氫氯酸，以便在冷凍干燥之前將pH調整到6.8±0,2。在氬氣環境中將所迷冷凍干燥的粉末密封在5mL小瓶中。然后在-20'C下冷凍保存所迷試劑盒，直到使用或期滿(現有的貯存期限大于2年)。重要的是，需要所述氯化錫(II)成分，以便還原所添加的"，Tc-高锝酸鹽，同時需要cc-D-葡萄糖酸鈉成分，以便在它與EC2Q化合物最終螯合之前穩定所述新還原的"mTc。""Tc-EC20是按以下方法制備的(即"mTc與EC20的螯合)。首先，制備含有部分淹沒的鉛瓶罩的煮沸的水。用70%的乙醇擦拭EC20瓶的頂部，以便對它的表面進行消毒，并且將所迷小瓶放入合適的密封容器中。使用裝有27號針頭的被密封的注射器將存在于0.9%氯化鈉中的1mL消毒的高锝酸鈉"mTc注射液(15-20mCi)注射到所述密封的小瓶中。在將所迷注射器從所述小瓶中取出之前，從所述小瓶中排出與所添加的高锝酸鹽體積相等的體積的氣體，以便使所迷小瓶內的壓力正常化。輕輕攪拌所述小瓶30秒，以便確保所述冷凍干燥粉末的完全溶解。然后將所述小瓶放入放置在煮沸的水浴的所迷鉛軍中。將該溶液加熱大約18分鐘，然后用至少15分鐘時間冷卻到室溫。該溶液可以在室溫(15-25°C)下遮光保存，不過應當在制備之后6小時內使用。在室溫下遮光保存長達24小時之后，通過HPLC測定所述放射性藥物的放射化學穩定性。使用HPLC系統分析"mTc-EC20溶液(20jnL)的樣品，該系統包括Waters600E多溶劑輸送系統和490UV檢測儀，BioscanEC-3200檢波器，Lauravl.5放射層析圖軟件,和WatersNova-PakC18(3.9x150mm)柱。使用含有20%甲醇和0.1%三氟乙酸的含水流動相以1mL/分鐘的流速等度洗脫注射的樣品。利用UV檢測儀(280nm)和y檢波器監測HPLC分析。顯然，在所有例子中，在至少24小時之后，殘留的"，Tc-EC20的放射化學純度超過90%。實施例4通過TLC測定""Tc-EC20的放射化學純度"mTc-EC20的制備中的主要放射化學雜質是l"'"Tc高锝酸鹽，2)"mTc-葡萄糖酸鹽(配體交換前體),3)非專一性結合的""Tc(結合在除了EC20分子的預期的Dap-Asp-Cys螯合部分以外的位點上的""Tc),和4)水解的"，c。由于試驗了""Tc-EC20的可能的臨床用途，開發了三種-TLC-型方法，以便測定每一種雜質的量，并且估算""Tc-EC20的總的放射化學純度。在第一種系統中，用去離子水對纖維素板進行顯象。""Tc-EC20，""Tc-葡萄糖酸鹽，非專一性結合的""Tc和mTc高锝酸鹽移動到溶劑前面(Rf=1.0)，而水解的""Tc保持在起點部分(Rf=0.0)。在Rf-0.3(距離起點1.5cm)處將所述纖維素板切成兩部分，并且用劑量校正儀，對每一部分進行計數。按以下方法計算水解的""Tc的百分比A-水解。/。；""Tc=(下面部分中的jaCi/在兩部分中的MCi)xlOO。在第二種系統中，用丙酮和O.9%NaCl(7:3，v/v)對纖維素平板進行顯影。""Tc-高锝酸鹽以Rr=0.9移動，而"，c-EC20,""Tc-葡萄糖酸鹽，非專一性結合的'^Tc和水解的"，c保持在起點(Rf-0.0)。在Rf-0.6處(距離起點3.0cm)將纖維素/丙酮-鹽水平板切成兩部分，用劑量校正儀對每一部分進行計數。""Tc-高锝酸鹽的百分比按以下方法計算B=%"mTc-高锝酸鹽-(上部的pCi/兩部分中的juCi)xl00。最后，在第三種系統中，用0.3MNa2S0jfDEAE離子交換平板進行顯影。^Tc-葡萄糖酸鹽移動到溶劑前面(RfS1.0)，非專一性結合的""Tc以Rr-O.6移動，而""Tc-EC20，水解的""Tc和""Tc-高锝酸鹽保留在靠近起點的地方("'Tc-EC20。Rf-0.1;水解的"冊Tc:Rf=0.0;""Tc高锝酸鹽Rr-0.3)。在距離起點2.5cm處將纖維素/化2304平板切成兩部分，并且利用劑量校正儀對每一部分進行計數。按以下方法計算""Tc-葡萄糖酸鹽和非專一性結合的""Tc的百分比如下C-%(mTc-葡萄糖酸鹽+非專一性結合""Tc)-(上部的MCi/兩部分的nCi)x100。然后按以下方法計算""Tc-EC2D的總的放射化學純度放射化學純度-100-(A+B+C)。如圖2所示，""Tc-EC20制劑的HPLC分析出現了四種放射化學成分，被命名為A-D峰。證實A峰是無""Tc的，并且，該副產物可再現地以<2%的比例存在。B峰，與""Tc-葡萄糖酸鹽的峰不同(數據未顯示)，是以2.8分鐘的保留時間洗脫的。該成分占所述混合物的大約3%,并且被認為是由于"mTc螯合在EC20分子上的除了預計的Dap-Asp-Cys部分以外的位點所得到的。C峰和D峰(保留時間分別為4.8分鐘和13.2分鐘)，占制備的放射化學活性的主要部分。實施例5Re-EC20的合成將52mg(0.010mmol)的EC20和[Re02(en)2]C1(52mg，0.l"mol)分別溶解在6mL和lmL氬凈化的磷酸緩沖液中(0.05M,pH5.8)。合并這兩種溶液，并且在氬氣中，在煮沸的水浴中加熱2小時。冷凍反應混合物，并且冷凍干燥過夜。通過HPLC純化粗產物(XterraRPI8柱，19x150mm,10mM歸Ac/CH，CN，流速為10mL/mm;梯度為1°/廣8%)。收集級分，冷凍干燥，并且在-20'C下保存待用。由于沒有質譜裝置可用于分析放射活性材料，對非放射性錸類似物Re-EC20進行分析。錸和锝都是VIIA族金屬，它們在物理和化學特性方面具有顯著的相似性。它們還能與有機配體形成類似的絡合物。這種類25似的化學特性通常被應用于闡明基于根據非放射性錸類似物的锝放射性藥物的新類型。有趣的是，Re-EC20的HPLC分析還表現出分別在5分鐘和14.2分鐘洗脫的兩個主峰，類似于"'Tc-EC20的C峰和D峰(色譜圖未示出)。質鐠分4斤證實，這兩種成分是相當于Re-EC20絡合物的異構體(m/z=945)。實際上，這些種類很可能是具有Dap-Asp-Cys螯合環中的锝一氧鍵的順或反構型的非對映異構體。因為i)Re—EC20色i脊圖中的兩個峰表示異構體絡合物，和ii)存在锝絡合物中的類似異構體的報導，""Tc-EC20放射層析圖中的成分C和D可能也是異構體。實施例6細胞培養物在37'C下，在5%二氧化碳/95%空氣-潮濕的環境中，使用無葉酸RPMI培養基(FFRPMI)讓細胞以單層形式連續生長，所述培養基含有10%加熱失活的胎牛血清(HIFCS),不含抗生素。所述HIFCS含有它的正常內源葉酸補體，這使得所述細胞能夠在這種生理學上更相關的培養基中持續生長。所有細胞實驗都是用含有10%HIFCS的FFRPMI(FFRPMI/HIFCS)作為生長培養基進行的，除非另有說明。實施例7相對親和力測定通過稍加改進的Westerhoff等(Mol.Pharm.，48:459-471(1995))所披露的方法測定各種葉酸衍生物的相對親和力。簡單地講，在室溫下，在0.25y。胰蛋白酶/PBS中讓FR-陽性O細胞溫和地胰蛋白酶化3分鐘，然后用FFRPMI/HIFCS稀釋。然后以800xg的速度離心5分鐘，并且用PBS洗涂1次，將最終的細胞沉淀物懸浮在FFRPMI1640中(無血清)。在有和沒有提高含有葉酸的測試物品的濃度的情況下，在冰上將細胞與100nM力-葉酸一起培養15分鐘。以10，000xg的速度使樣品離心5分鐘，將細胞沉淀懸浮在緩沖液中，轉移到裝有5ml閃爍混合物的每一個小瓶中，然后進行放射性計數。負對照試管僅裝有溶解在FFRPMI中的3H-葉酸(無竟爭劑)。陽性對照試管含有最終濃度為1mM的葉酸，并且從所有樣品中扣除在所迷樣品中測定的CPMs(表示標記物的非專一性結合)。很明顯，相對親和力定義為取代與KBFR結合的50%的力-葉酸所需要的化合物的反摩爾比，并且將葉酸對FR的相對親和力設定為1。用這種測定方法測定了EC20直接與葉酸竟爭結合細胞表面FRs的能力。重要的是，1.0的相對親和力值表示測試物品配體對FR的親和力與葉酸相等。同樣，低于統一值的值表示較弱的親和力，高于統一值的值表示較強的親和力。在存在逐漸加大濃度的非放射性葉酸，EC20,錸-EC2G(異構體A;C峰)，錸-EC20(異構體B;0峰)，或相關的葉酸型放射性藥物，DTPA-葉酸的情況下，將培養的KB細胞與100nl^H-葉酸一起培養。在4'C下培養15分鐘之后，將未結合的材料從細胞上漂洗掉，并且對殘余的細胞結合的放射性活性進行計數。將結合的放射性活性的量對未標記的配體的濃度進行作圖，并且估算I"值(抑制50%力-葉酸結合所需要的配體濃度)。如圖4和表2所示(參見下文)，測定EC20相對葉酸對人FRs的親和力而言具有0.92的親和力。錸-EC20的兩種異構體的相對親和力值都非常類似于(如果不高于)母體EC20分子的親和力(Re-EC20異構體A和異構體B的親和力分別為1.42和1.37)。DTPA-葉酸，"'In-螯合葉酸放射性藥物劑對葉酸受體的相對親和力為0.87。因此，用各種金屬螯合基序對葉酸進行化學修飾，不會破壞所迷維生素對FR的固有的親和力。27表2.相對親和力評估。相對親和力(RA)定義為取代與FR-陽性KB細胞結合的50/的力-葉酸所需要的化合物的反摩爾比。將葉酸的相對親和力設定為1。每一種測試物品重復評估3次。測試物品ICso(nM)S.D.RAS.D.葉酸118+191.00EC20128+250.92±0.23EC20:Re異構體183土161.42土0.36EC20:Re異構體286±31.37±0,23DTPA-葉酸136+120.87±0.16實施例8時間決定型細胞吸收將KB細胞接種到12孔Falcon平板上，并且過夜以便形成亞融合的單層。在用lmL新的FFRPMI/HIFCS漂洗1次之后，每一個孔接納1mL含有10nM的99mTc-EC20的FFRPMI/HIFCS。在37'C下，將細胞培養預定時間，然后用1mL水冷的PBS漂洗4次。在室溫下，用15分鐘時間，將所述細胞單層溶解存0.5mL含有1%十二烷基硫酸鈉的PBS，pH7.4中，然后利用Packardy計數器進行放射性計數。用BioRadDC蛋白測定試劑盒對每一個樣品中的樣品進行定量，并且利用每個細胞2,23x10"mg蛋白的換算系數，將細胞蛋白值換算成細胞數量。最終的制表用的值是以每個細胞的EC20分子數形式表示的。利用這種方法定量測定了^皮吸收到FR-陽性KB細胞中的""Tc-EC20的動力學。如圖5所示，在37'C下，在2小時內達到了穩態吸收，其中，大約3.2百萬個EC20分子是細胞結合的，而1/2最大細胞結合出現在將10nM的這種放射性藥物與所迷細胞混合9分鐘之后。有趣的是，當細胞與IO倍較高濃度的"，c-EC20(100nM;數據未顯示)一起培養時，僅用37秒就達到了1/2最大飽和點。實施例9濃度決定型細胞吸收將KB細胞接種到12孔Falcon平板上，并且過夜以便形成亞融合28的單層。在用lmL新的FFRPMI/HIFCS漂洗1次之后，每一個孔接納1mL含有增加濃度的""Tc-EC20的FFRPMI/HIFCS。在37'C下培養細胞2小時，然后用1mL冰冷的PBS，pH7.4漂洗4次。在室溫下，用15分鐘時間，將所述細胞單層溶解在0.5mL含有1%十二烷基疏酸鈉的PBS中，然后利用Packardy計數器進行放射性計數。按上述方法測定蛋白含量，并且最終的制表值是以每個細胞的EC20分子數形式表示的。如圖6所示，發現"mTc-EC20的細胞吸收取決于細胞外濃度。測定所使用的特定KB細胞的每個細胞最多能夠結合400萬個葉酸放射性藥物的分子。對所述數據進行Scatchard分析，估計結合的KD為3.2nM,該值與觀察到的維生素葉酸與相同細胞的結合值相當。盡管沒有確立B峰成分的完全相同，UV吸收分析表明，它含有葉酸部分(即，所述吸收光鐠包括位于363nm處的葉酸的標記性次吸收峰)。收集這種HPLC純化的放射性標記的物質(B峰物質)，然后添加到培養的KB細胞中。如圖7所示，還發現""Tc-標記過的B峰成分的細胞吸收取決于細胞外濃度。對所述數椐進行的Scatchard分析測算出結合的"為l.lnM。有趣的是，在存在過量葉酸的情況下，B峰的細胞結合被完全抑制，這表明這種次要制劑副產品也能夠在放射性診斷用途中定向FR-陽性細胞。實施例10血液清除在劑量服用之前，用無葉酸的飲食(Harlan#TD-90261)將用于本研究的動物維持大約3周時間。對這種特殊飲食的適應是重要的，因為正常的嚙齒類動物飲食包括大量的葉酸(6mg/kg食物)，并且促進小鼠體內的高血清葉酸含量。另外，以前的研究業已證實，用無葉酸的飲食詞養小鼠3周時間，保持了25±7nM的安全的血清葉酸水平，這一水平明顯高于在人類血清中測定的9-14nM的濃度。"mTc-ECM溶液是在使用當天制備的，并且最初每毫升含有100|ugEC20。用無菌鹽水進一步稀釋該溶液，以便制備工作母液。通過TLC估算該產物的放射性化學純度為大約94%。在簡單的乙醚麻醉期間，通過尾靜脈給每只動物靜脈注射大約0.1mL體積的50Mg/kgEC20(67nmol/kg)的劑量。在注射之后指定的時間(參見圖8),通過二氧化碳窒息對每只動物實施安樂死，馬上通過心臟穿刺采集血液。如圖8所示，""Tc-EC20被很快從Balb/c小鼠的循環系統中清除。估計這種放射性藥物的血漿半衰期為大約4分鐘，并且在4小時之后在循環系統中殘留的注射的"mTc-EC20不足0.2°/(假設血液占總體重的5.5%)。這一數據表明，在靜脈服用之后，葉酸綴合物被很快清除，并且，有價值的組織生物分布數據只能在注射數小時之后獲得，不考慮由于血液攜帶的放射活性導致的非專一性組織攝取。實施例ll組織分布研究使用FR-陽性M109模型評估了"Tc-EC20在體內靶定腫瘤的能力。所述腫瘤細胞與Balb/c小鼠是同源的，并且它們能夠在接種之后2周之內形成皮下固體腫瘤。在該生物測定中，還評估了在結構上與"mTc-EC20類似的""Tc-EC14，所不同的是，它包括一個額外的D-Glu殘基(即，Pte-D-Glu-D-Glu-(3Dpr-Asp-Cys)，"Tc-EC28(不含蝶酸的對照，包括苯甲酰基-D-Glu-n-Glu-(3Dpr-Asp-Cys),以及以前才艮導的'"In-DTPA-葉酸放射性藥物。重要的是，""Tc-EC28對照制劑不能結合細胞表面FRs,因為它缺乏關鍵的蝶咬環部分。4-5周大的小鼠(Balb/c林系)是從HarlanSpragueDawley,Inc.(Indianapolis,IN)購買的，并且在進行實驗之前，用無葉酸的飲食一共維持3周時間。在實驗之前2周，將同源的，FR-陽性M109腫瘤細胞(lxl06每只動物)接種到右側腋窩的皮下組織中。所有小鼠都是雌性的，在實驗當天，腫瘤的重量為54.2±29,8mg。在使用當天制備每毫升含有IOOjug制劑的'"c-EC20母液，并且它的放射性化學純度大于96%。另外兩種""Tc~螯合劑,""Tc-EC14和"c-EC28以及'"In-DTPA-葉酸也被制備成>90%的放射性化學純度。所有溶液都用鹽水本身或含有100當量葉酸(用于竟爭)的鹽水溶液稀釋，以便最終的放射性藥物濃度為10|uol/mL。在簡單的乙醚麻醉期間，通過動物尾部側靜脈通過靜脈注射100p1體積的大約40ymol/kg劑量的試驗物品。注射之后4小時，通過二氧化碳窒息殺死動物，并且解剖。取出特定的組織，稱重，并且計數，以便測定"mTc分布。對CPM值進行衰變校正，并且以每克濕重量組織的％注射劑壹形式制表。如表3所示(見下文),含有放射性藥物""Tc-EC14，'"Tc-EC20和"'In-DTPA-葉酸的這三種"葉酸"主要積累在FR-陽性腫瘤和腎臟中，不過所述腎臟與腫瘤相比在每克組織中濃縮了更高百分比的注射劑量(%ID/g)。有趣的是，lllIn-DTPA-葉酸和"mTc-EC20的凈胂瘤積累幾乎相同(分別為19和m"D/g)，而""Tc-EC14的腫瘤吸收略低于大約10%ID/g。不過，所有三種制劑都表現出高的腫瘤與血液比例(>30:1)。表3.葉酸放射性藥物在長有皮下M109腫瘤的Balb/c小鼠體內的生物分布W主W布lf^M^主射后4小fr+葉酸""Tc'EC20+葉酸葉酸葉酸+葉酸血液's臟肺a肉鐘痛腫瘤/血液0.31土0，"2,39土0，642加+(M03.44+2,192,68+2,491,70+0,5598,0+40.70,外±0.28M7+0,S89.83±2，7734，，±7.41(M9土0,070,08+0,01O,IS土(MM1<37+0洲2,99±"3S.94土0,S20，09土(M10,10+0,03(M3土0.S22.00土2.002.22±0，630.9S土0，1S2*56土0,61138土，2.40,67土0,2017,2±1.02Sl,0土8.200，09土0,0Z0,08+0,015,64i2,130，06土0，023*35+5.194,70±1,300.21±0,101.72+0,61S'Z1j;2必330±2*331,87土0,6919i79,21,19j;M8，,62i0，65，9.3土5.86102±43.40，09土0,(M0.09土0.20.81+0,031."±0'730*82±0,"0.05^0,040,25+0.200.46±0,420,03土0,010，05土0,010,60±0380.62±0,"0.21i0,190.，1±0.062*00±(K50*所示出的值表示來自三只動物的數據的平均值±標準誤差。通過兩種不同的方法進一步證實了葉酸專一性定向。首先，當這些制劑與100倍過量的葉酸同時服用時，"，c-EC14，99mTc-EC20和'"In-DTPA-葉酸在FR-陽性腫瘤和腎臟中的積累被有效的抑制(>94%)。其次，99mTc-EC28對照制劑不能在腎臟和腫瘤中明顯積累。這兩種發現都證實了完整的"類葉酸"(或蝶酸)部分是實現所迷放射性藥物制劑向FR-陽性組織中吸收和保留所必須的。實施例12Y閃爍掃描法實驗之前2周將M109腫瘤細胞(1><106每只動物)接種到Balb/c小鼠的右側腋窩的皮下組織中。在進行簡單的乙醚麻醉期間，通過動物尾部側靜脈靜脈注射存在100p1體積中的大約50pmol/kg劑量的試驗31物品。注射之后4小時，通過二氧化碳窒息殺死動物，然后放置在圖像獲取表面的頂部。4吏用TechnicareOmega500Sigma410方文射性同位素Y照相以每分鐘50-75000次計數的計數速度獲取整體圖像1分鐘時間。用裝有MedasysPinnacle軟件的MedasysMS-DOS-型計算機分析所有數據。使用這種y閃爍掃描法證實了fr-陽性m109腫瘤和腎臟對99mTc-EC20的吸收。如圖9所示,用上述""Tc-EC20注射的小鼠的腹部圖像將Y輻射定位于兩個腎臟(K)和M109腫瘤區(T;肩部區)。在其他身體組織中沒有觀察到明顯的放射性示蹤劑。業已報導了'"In-DTPA-葉酸放射性藥物的類似的圖像特征。實施例13泌尿和代謝""Tc-EC2Q的泌尿HPLC物種形成特征，是使用Balb/c小鼠獲得的。通過尾部側靜脈用1mCi(6.7nmol)的"mTc-EC20注射小鼠(每只小鼠大約20克)。在l,4,或6小時時間之后，通過二氧化碳窒息對兩只小鼠組成的組實施安樂死，并且采集尿液。在通過GV13Millex濾膜過濾之后，用裝有Nova-PakC183,9xl50mm柱和放射性化學檢測儀的HPLC系統評估放射性化學物種形成。用含有0.1%TFA的20%的甲醇，用1mL/分鐘的流速對該系統進行等度洗脫。前面確定了'"In-DTPA-葉酸的主要消除途徑是通過尿液。與圖2所示的HPLC曲線類似，""Tc-EC20標準物和尿液樣品都具有四個放射性高峰。如表4所示(參見下文)，在該實驗進行的6小時時間內，標準物的放射性化學純度(C和D峰的總和，推測相當于順和反""Tc-EC20)保持穩定在大約93%。在該標準物(A峰)中""Tc的量為大約2%。重要的是，在該放射性化學曲線中的B峰被認為是在非常低的，不太穩定的狀態下與""Tc螯合的EC20。不過，在該級分中測定的放射活性沒有包含在""Tc-EC20的總體放射性化學純度弧線中。該數據總體上表示在這6小時的研究時間中，該制劑保持穩定。在注射到Ba1b/C小鼠體內1和4小時之后,小鼠尿液中的"mTc-EC20的放射性化學物種形成曲線沒有改變。不過，在注射6小時之后，存在于尿液中的放射性太低，以至于不能通過HPLC精確地測定。在進行定量的4個小時期間，在尿液中回收的放射性物質的母體藥物的比例保持相對穩定在大約90%。這一值與標準物質的93%的純度非常類似，表明了""Tc-EC20被以修飾過的形式主要被分泌到尿液中。表4.來自Balb/c小鼠的"mTc-Ec20的分泌物和代謝。通過尾部側靜脈給小鼠注射lmCi(6.7nmol)的""Tc-EC20。在標明的時間，對每組2只小鼠實施安樂死，并且采集尿液。通過HPLC測定放射性化學物種形成。利用C和D峰的面積百分比總和(順和反異構體)計算完整'。nrcEC20的總體純度。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>實施例14血清蛋白結合將新鮮的大鼠血清，和商業化男人血清(AB型供體，SigmaChemicalCo.)用于評估""Tc~EC20與血清蛋白的體外結合。在""Tc-EC20與1mL的血清在室溫下混合1分鐘之后，將0.3mL的血清溶液轉移到干凈的Centrifree⑧超濾裝置(30,000NMWL)中，重復進行三次。在用所迷血清溶液對離心機加樣1分鐘之內，在2(TC下使該裝置以1000xg的速度離心20分鐘。將50juL所述原始溶液的樣品和來自每一個裝置的濾液轉移到干凈的試管中，并且在自動Y計數器中計數。用相同的方法對與1mL普通鹽水混合的'"Tc-EC2G的對照溶液進行超濾。計算三種樣品中每一個的游離""Tc的百分比。盡管"'Tc-EC20僅表現出與超濾裝置的低水平的非專一性結合(低于5%),發現它的70。/。主要與大鼠或人類血清溶液中的〉30kDa的血清蛋白級分相關(分別為69%和72%)。重要的是，由于""Tc-EC20不能有效地和優先積累在FR陽性組織中(參見表2和圖8)，它對血清蛋白的表觀親和力似乎不影響這種放射性示蹤劑在體內靶定FRs的能力。實施例15組織分布研究在本實施例中使用的方法類似于例11所迷方法。用FR-陽性M109和FR-陰性4T1腫瘤模型進一步評估了'9fflTc-EC20在體內靶定腫瘤的能力。六周大的雌性Balb/c小鼠(n-3/劑量組)是從HarlanSpragueDawley,Inc.購買的(Indianapolis,IN)，并且在接種腫瘤細胞之前用無葉酸飲食(HarlanTEKLAD)—共維持7天時間。用100|u1含有r/4同源小鼠血清的無葉酸RPMI-1640皮下接種同源的FR-陽性Ml09腫瘤細胞(2x106Po每只動物)或FR-陰性4T1細胞(5x105P。每只動物)。按上述方法在使用當天制備每毫升含有100/ag制劑的"mTc-EC20母液。在接種腫瘤細胞16天之后，用500或1800nmol/kg的EC20對長有M109腫瘤的動物進行靜脈內注射，而對于長有4T1腫瘤的動物來說用500nmol/kg的EC20進行注射(每個劑量組3只小鼠)。所有注射體積均為100m1。在注射4小時之后，通過二氧化碳窒息殺死動物，并且通過心臟穿孔采集血液，并且對所述動物進行解剖。取出選擇的組織(心臟，肺，肝臟，脾，腎，小腸，胃，肌肉和胂瘤)，稱重，并且用自動Y計數器計數，并且確定""Tc分布。通過參考用該注射制劑的稀釋液制備的標準物計算所述放射性藥物的吸收，以濕重量組織的百分注射劑量表示(％ID/g)。如圖11所示，證實了葉酸受體-專一性定向，因為""Tc-EC20主要積累在FR-陽性Ml09腫瘤和腎臟中，而不主要積累在FR-陰性4T1腫瘤中。FR-陰性4T1腫瘤中的吸收比FR-陽性M109胂瘤中的吸收低7.6倍。正如所預料的，除了腎臟之外，"mTc-EC20在正常組織中的吸收較低。以上結果表明，"'Tc-EC20定向是FR-專一性的。實施例16組織分布研究在本實施例中使用的方法類似于例11所披露的方法。利用FR-陽性KB腫瘤模型評估了""Tc-ECn(肽-A,)，""Tc-EC13(肽-A》，和"mTc-EC14(肽-A》在體內靶定腫瘤的能力。在接種腫瘤細胞之前，用無葉酸飲食將344周大的雄性裸鼠(n-4/組)維持10天時間。將FR-陽性KB腫瘤細胞(O.25xl(^每只動物)皮下接種到膜內部位。在接種腫瘤細胞14天之后，在下面的表5所示的綴合物的劑量(大約12jLig/kg)下用""Tc，ECl1，"mTc-EC13，或""Tc-EC14對所述動物(n-4/組)進行靜脈內注射。按上述方法在使用當天制備""Tc-ECl1，""Tc-EC13,和""Tc-EC14溶液的母液。給對照動物共同服用大約20倍過量的游離葉酸(大約200Mg/kg)。在注射4小時之后，通過二氧化碳窒息殺死動物，并且通過心臟穿刺采集血液，并且解剖所迷動物。取出選擇的組織，稱重，并且用自動y計數器計數，確定""Tc分布。通過參照用所述注射制劑的稀釋液制備的標準物計算濕重量組織的百分注射劑量形式的放射性藥物的吸收OiID/g)。如表5所示，證實了葉酸受體-專一性定向，因為""Tc-ECU，99BTc-EC13，和'9'Tc-EC14主要積累在FR-陽性KB腫瘤和腎臟中。通過同時服用游離葉酸抑制所述積累。以上結果表明""Tc-ECll，""Tc-EC13，和""Tc-ECl4在體內能夠以FR-專一性方式耙定肺瘤。用類似方法，使用""Tc-EC53(EC20的所有D-對映體)獲得了類似結果(參見下面的表6),所不同的是，""Tc-EC53的劑量大約為50jug/kg,并且可以使用IOO倍過量的游離葉酸或冷的EC53。如表6所示，證實了葉酸受體受體-專一性定向，這是因為"'Tc-EC53主要積累在FR-陽性KB腫瘤和腎臟中。通過共同服用游離葉酸抑制了所述積累。以上結果表明，""Tc-EC53能夠以FR-專一性方式體內靶定腫瘤。35表5<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>所示出的值表示平均值土標準誤差.假設血液占總體重的5.5、腫瘤/背景組織比例基于每克數據的相應的百分注射刑量t與^^Tc-葉酸-綴合物劑量共同注射的葉酸劑量<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>討論本發明提供了作為顯象劑用于臨床顯象的維生素和放射性核素螯合劑的綴合物。所述顯象劑的典型例子是新設計的，合成的，和放射性化學表征的葉酸-型放射性核素螯合劑，""Tc-EC20。""Tc-EC20是葉酸的小分子量肽衍生物，它包括D-y-Glu肽鍵(參見圖1)，它是用有效的固相合成方法合成的。在它的天然形式下，葉酸(或蝶酰-谷氨酸)具有存在于L構型中的單一的谷氨酰殘基。不過，D-Glu對映體殘基被整合到EC20分子中。重要的是，與EC20類似，用D-Glu殘基取代葉酸中的L-Glu殘基，不會改變葉酸與所述高親和力FR結合的能力。在存在ot-D-葡萄糖酸鹽和氯化錫(II)的情況下，發現EC20能有效螯合"，c。在通過放射性化學HPLC分析時，所得到的"，c-EC20制劑超過95%是由順和反立體異構體的混合物組成，各自同樣能夠以高親和力與FR結合(參見圖3)。所述制劑中大約3%的'"c在EC20分子上的某些其他位點上與EC20螯合，而不是在預期的Dap-Asp-Cys部分上螯合。盡管該成分不是以最佳表征足夠的量分離的，但它證實了能夠以高親和力與FR結合(參見圖6)。最后，""Tc-EC20制劑中的殘余的2%的放射性活性是由于游離的""Tc產生的。"mTc-EC20表示出與FR-陽性細胞相關的時間和濃度依賴性。""Tc-EC20被很快從血液中清除(t"廣4分鐘),對于診斷顯象劑來說它是重要的。并且""Tc-EC20優選在FR-陽性腫瘤中大量積累。使用兩種不同的方法將""Tc-EC20的性能直接與類似的FR定向制劑，mIn-DTPA-葉酸進行比較。首先，發現兩種葉酸型放射性藥物能以相同的水平與葉酸竟爭結合KBFRs(參見圖3和表l)。其次，每一種制劑在長有腫瘤的小鼠體內的分布幾乎是相同的(參見表2)。測定了""Tc-EC20的高的腫瘤吸收和肺瘤與血液比例。綜合以上結果表明，與"'In-DTPA-葉酸類似，"，c-EC20在給患者臨床服用時，能有效定位于FR-陽性腫瘤。以前業已表征了若干種葉酸型""Tc綴合物。有關""Tc-12-氨基-3，3,9，9-四甲基-5-氧雜-4，8二氮-2，10-dodecanedinoe二將(氧雜)葉酸綴合物的生物分布數據是有限的，不過報導了示蹤劑在KB腫瘤中的中等水平的(大約7%ID/g)吸收。還報導了有關""Tc-乙烯二半胱氨38酸~葉酸綴合物在長有乳腺瘤的大鼠體內的生物分布的研究。給該研究中的大鼠喂食富含葉酸的食物。因此，獲得了低的腫瘤吸收和低的腫瘤與血液比例。最后，證實了"mTc-6-辨基煙酰胺-肼基(HYNIC)葉酸衍生物(HYNIC-葉酸)在24JK-FBP腫瘤中大量積累。有趣的是，""Tc-EC20在Ml09腫瘤中的積累水平幾乎與HYNIC-葉酸在241K-FBP腫瘤中的積累水平相同(大約17%ID/g)(表2)。在靜脈注射之后4小時，這兩種制劑還表現出大約50:1的腫瘤與血液的比例。總之，制備了一種能夠有效螯合""Tc的新的葉酸的肽衍生物。這種新的化合物"'Tc-EC20能在體外和體內高親和力的與FR-陽性腫瘤細胞結合。發現EC20能夠以非常高的親和力(K。大約為3nM)以時間和濃度決定型方式與培養的葉酸受體(FR)-陽性腫瘤細胞結合。通過體外相對親和力測定，發現在單獨存在或作為合成的金屬螯合劑存在時，EC20能夠與卞-葉酸有效竟爭細胞結合。在靜脈注射到Balb/c小鼠體內之后，99mTc-EC2D被迅速地從循環系統中清除(血漿11/2大約4分鐘)，并且以未代謝過的形式分泌到尿液中。用長有Ml09腫瘤的Ba1b/c小鼠進行的Y閃爍掃描和定量生物分布研究的數椐證實了""Tc-EC20主要積累在FR-陽性腫瘤和腎組織中。以上結果表明，""Tc-EC20是有效的，非破壞性的放射性診斷顯象劑，可用于檢測FR-陽性腫瘤。還證實其他EC20-相關的顯象刑是有效的，包括ECU，EC13,EC14,和EC53。在美國，每年大約有26，OOO個女性被診斷患有卵巢癌，并且在這些女性中存活超過5年時間的人不超過50%。導致^f氐存活率的一個原因是，這種癌癥的診斷的難度。由于擔心未確定的腹部團塊的破裂和潛在的癌癥在腹腔中的擴散，通常不進行細針生物活組織檢查。相反，受懷疑的卵巢團塊的診斷和定期通常是通過剖腹手術進行的，這是一種破壞性的和昂貴的手術。由于""Tc-EC20與大量存在于卵巢癌上的FR緊密結合(包括其他癌)，這種放射性藥物提供了一種廉價的，非破壞性的，但是可靠的用于惡性卵巢癌的早期診斷的方法。重要的是，通過可能的更明確的和更早的診斷疾病的復發或殘余的疾病^Tc-EC20還能幫助指導臨床確診過程。權利要求1.一種具有以下結構式的化合物其中，V是維生素，它是受體-介導的體內跨膜轉運的底物，或維生素受體結合衍生物或其類似物；L是二價連鍵；R是具有結構式H2NCHRCOOH的氨基酸的側鏈；M是放射性核素的陽離子；n是1或0；而k是1或0。2.權利要求l的化合物，其中，V是選自葉酸，核黃素，疏胺素，維生素Bu，和生物素的維生素，或維生素受體結合衍生物或其類似物。3.權利要求l的化合物，其中，所述放射性核素選自鎵，銦，銅，锝，和錸的同位素。4.權利要求3的化合物，其中，所述放射性核素是锝的同位素。5.權利要求l的化合物，其中，V是葉酸，或葉酸受體結合類似物或其衍生物。6.—種用于診斷顯象的組合物，它包括具有以下結構式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中，v是維生素，它是受體-介導的體內跨膜轉運的底物，或維生素受體結合衍生物或其類似物；L是二價連鍵；R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈；M是放射性核素的陽離子；n是l或0;和它的可以藥用的載體。7.權利要求6的組合物，其中，所述化合物中的V是選自葉酸，核黃素，疏胺素，維生素Bu,和生物素的維生素，或維生素受體結合衍生物或其類似物。8.權利要求6的組合物，其中，化合物中的所述放射性核素選自鎵，銦，銅，锝，和錸的同位素。9.權利要求8的組合物，其中，所迷化合物中的所述放射性核素是锝的同位素。10.權利要求6的組合物，適合腸胃外服用。11.權利要求6的化合物，其中，V是葉酸，或葉酸受體結合衍生物或其類似物。12.—種對動物體內的一群細胞進行顯象的方法，其中，所迷細胞以這些細胞表面上的維生素受體為特征，所述方法包括以下步驟給所述動物服用有效量的包括具有以下結構式的化合物的組合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中，V是所述維生素，或維生素受體結合衍生物或其類似物，對所述細胞表面維生素受體專一；L是二價連鍵；R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈；M是放射性核素的陽離子；n是1或0;和它的可以藥用的栽體；并且監測所述化合物在所述動物體內的生物分布。13.權利要求12的方法，其中，所迷化合物中的V是選自葉酸，核黃素，疏胺素，維生素Bu，和生物素的維生素，或維生素受體結合衍生物或其類似物。14.權利要求12的方法，其中，化合物中的所迷放射性核素選自鎵，銦，銅，锝，和錸的同位素。15.權利要求14的方法，其中，所述化合物中的所述放射性核素是锝的同位素。16.權利要求12的方法，其中，所述組合物是通過腸胃外途徑給患者服用的。17.權利要求12的化合物，其中，V是葉酸，或葉酸受體結合衍生物或其類似物。18.—種具有以下結構式的化合物V-(L)n'NHCH'CO'NI^CH(R)CO，.CH(COOH)CH2;:SHH2C、、、、、!/、、、！SH........、、,'.........其中，V是維生素，它是受體-介導的體內跨膜轉運的底物，或維生素受體結合衍生物或其類似物；L是二價連鍵；R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈；M是放射性核素的陽離子；n是1或0;和k是1或0。19.一種用于診斷顯象的組合物，它包括具有以下結構式的化合物V-(L)n-NHCH.CO,-CH(R>CO，H-CH(COOH)CH2;;SHH2C、、、、、iSh/.........、、、、、j/'...........其中，v是維生素，它是受體-介導的體內跨膜轉運的底物，或維生素受體結合衍生物或其類似物；L是二價連鍵；R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈；M是放射性核素的陽離子；n是1或0;和它的可以藥用的栽體。20,—種對動物體內的一群細胞進行顯象的方法，其中，所迷細胞以這些細胞表面上的維生素受體為特征，所述方法包括以下步驟給所述動物服用有效量的包括具有以下結構式的化合物的組合物V-(L)n-NHCH'CO-NI^-CH(R)CO-rjlH-CH(COOH)CH2;:SHH2C、、、、'！其中，V是所述維生素，或維生素受體結合衍生物或其類似物，對所迷細胞表面維生素受體專一；L是二價連鍵；R是具有結構式H2NCHRC00H的氨基酸的側鏈；M是放射性核素的陽離子；n是l或O;和它的可以藥用的栽體；和監測所述化合物在所迷動物體內的生物分布。全文摘要本發明涉及通過利用維生素作為顯象劑的定向配體將放射性核素型顯象劑導引到具有維生素受體，或維生素受體結合衍生物或其類似物的細胞的化合物和方法。本發明提供了用于所述方法的具有結構式(I)或(II)的化合物。其中各變量如說明書中所定義。文檔編號A61K47/48GK101648028SQ20091015127公開日2010年2月17日申請日期2003年5月6日優先權日2002年5月6日發明者C·P·利蒙,M·A·帕克申請人:恩多塞特公司