專利名稱：用于提高生殖能力的藥物組合物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域，特別是涉及一種用于提高生殖能力的新型藥物組合物及其 制備方法和應用。
背景技術：
通常，懷孕必須具備下列五個條件1.有成熟的卵子；2.有足量活動的、健康的精 子；3.宮頸粘液的粘稠度必須有利于精子的穿透；4.各通道(包括宮頸、輸卵管)必須通 暢；5.子宮內膜與受精卵有同步的發育。只要其中任何一個環節受障，便可發生不孕。根 據不孕的原因可分為相對不孕和絕對不孕相對不孕是指夫婦一方因某種原因阻礙受孕或 使生育力降低，導致暫時性不孕，如該因素得到糾正，仍有可能懷孕。絕對不孕指夫婦一方 有先天或后天的解剖生理方面的缺陷，無法糾正而不能懷孕。根據是否懷孕分為原發不孕 和繼發不孕原發不孕指從未懷孕，繼發不孕指曾經懷孕而后又不孕者。一般，不孕癥的發生率約占生育年齡婦女的8% 17%，平均為10%左右。因此， 不孕癥并非少見，而是一種比較常見的癥候。近年來的研究發現，由于環境污染等原因導致 不孕癥的發生率呈上升趨勢。在美國，每7對夫婦中就有一對在其生殖期的某些時候有受 孕困難。有的資料顯示，不孕癥在國外的發生率約為15% 20%，我國的發病率為5%左 右。隨著醫學科學的進展，不孕夫婦的懷孕率可達30% 50%以上。因此，對不孕癥應有 一個正確的認識，應積極診治，以提高受孕的機會。早在50年代，Tietze (1956)曾利用人口統計學的資料進行估計，認為20 40歲 的婦女不孕的患病率為15%。70年代末到80年代初，各國學者開始重視不孕癥的問題。陸 續開展不孕癥患病率和病因學的研究工作。Mosher利用人口普查的資料進行估計，認為美 國19 49歲的不孕癥患病率是15%，Borrie也利用人口普查資料中45歲以后未生育的 人數來推測澳大利亞不孕癥的患病率是10% 12% ,Rantala利用婦科防癌普查表進行估 計，芬蘭30 40歲的婦女不孕癥患病率為15. 4%。日本井上正人對本地區40歲以后無孩 子的已婚婦女所占比例計算出該地區40 49歲的不孕癥患病率為20%。但由于這些間接 估計值存在偏差，為了準確地了解不孕癥患病率和病因分類，世界衛生組織于80年代末期 在25個國家的33個中心組織了一次采用標準化診斷的不孕癥夫婦調查。結果表明發達國 家約有5% 8%的夫婦受到不孕癥的影響，發展中國家一些地區不孕癥的患病率可高達 30%。全世界的不孕患者人數約為8000萬 1. 1億。造成不孕不育的原因2/3在于女方，1/3在于男方。女性不育癥病因有先天性發育 異常、內分泌功能障礙、生殖器官感染、免疫功能異常和微量元素調控障礙等。男子不育癥 原因有生殖器官發育異常、遺傳性疾病、內分泌功能障礙、免疫功能障礙、生殖器官感染、輸 精管梗阻、性功能障礙、精子異常和缺鋅等。近年研究顯示，過氧化損傷是導致不育的又一 重要原因。目前抗細胞氧化損傷的抗氧化劑，多達數十種，而最常用的有維生素A、維生素C、 維生素E、輔酶Q1(l、β-胡蘿卜素、超氧化物歧化酶、過氧化物酶等。
維生素E (Vitamin Ε, VE)亦稱生育酚(Tocopherol)，是一種脂溶性的維生素，是 由α、β、Υ、δ -生育酚及α、β、Υ、δ -三烯生育酚等8種化合物組成的混合物，這些化 合物的生理活性各異。1922年美國科學家Evans發現如果缺少一種脂溶性物質，雄性白鼠 生育能力將下降，雌性白鼠易早產。1938瑞典科學家卡勒成功的進行了人工合成。并因其 對提高生殖能力的顯著效果，命名為生育酚，即維生素E。臨床上常用于治療不孕癥、習慣性 流產及早產嬰兒的異常情況等。輔酶Q1(1(coneZyme，CoQ10)又名泛醌(ubiquinone)于1948年發現，是一種廣泛存 在于各類細胞中的醌類化合物。在動植物、微生物等細胞內CoQltl與線粒體內膜結合，是一 種在呼吸鏈中與蛋白質結合不緊密的輔酶，在黃素蛋白類和細胞色素之間作為特別靈活的 載體而起作用，是電子傳遞鏈中的遞氫體，能清除多種自由基，并且是線粒體合成能量物質 三磷酸腺苷(ATP)的必需成分。目前，CoQltl在心血管疾病、癌癥、帕金森病等疾病的輔助治 療，以及在運動醫學和抗疲勞作用等方面已得到廣泛研究和應用。在化妝品、口腔衛生制品 以及保健產品中，CoQltl作為重要的保健原料之一也被使用。近年來，隨著人們對生殖健康 的關注與研究，CoQltl在生殖系統中的作用被進一步認識。輔酶Qltl在精漿和精子中的水平 對男性生殖系統的抗氧化損傷能力具有重要的影響。硒(Selenium)是瑞典化學家Berzlius (柏采利烏斯)于1817年發現。硒遍布 于人體各組織器官和體液中，腎中硒濃度最高，肝臟次之，血液中相對低些。硒在人體中構 成含硒蛋白與含硒酶的成分，具有抗氧化、維持正常免疫功能、維持正常生育功能等諸多作 用。硒在男性生殖過程的作用已經越來越引起人們的重視。據早期的研究報告，精液硒濃 度為0. 63 0. 87 μ mol/L時精子活力最高，精液硒濃度0. 5 0. 8 μ mol/L時精子受孕率 最高，精液硒濃度低于0.46 μ mol/L即可引起男性不育。目前，采用微量元素制劑治療男性 不育的臨床研究已經越來越多，而且效果明顯。在人類精子發育成熟過程中，有許多生化物質參與調節，一些離子(如K+、Na+、 Ca、H+等)通過細胞膜內外流動與酶或輔酶共同作用，在調節各級精母細胞成熟、精子運動 和授精功能活動中起著重要作用。精子膜含豐富的多聚不飽和脂肪酸和多種蛋白成分，精 子膜功能的完整性與精子獲能、頂體反應及精卵融合密切相關。近幾年來，人們認識到活 性氧(ROS)與精子和DNA的關系十分密切，人類精子對ROS很敏感。活性氧(ROS)是指具 有比氧更為活潑的化學反應性的氧的代謝產物及其衍生的含O2物質，主要包括超氧陰離子 (O2)、過氧化氫(H2O2)、輕基自由基(OH)、和單線態氧(IO2)以及一氧化氮(NO)等。Sikka 等研究表明，精子和卵子中存在微量的ROS可輔助其代謝及受精過程，但若ROS過量時則會 對生殖細胞產生不同程度的損傷。過量的ROS會損害人體，嚴重削弱精子活動力(SaidT M, Sharm R K, Agarwal A,etal,2004 ；Sharm R K, Agarwal AJ，1998)，使受精力下降導致不孕 不育。因精子中含有非常高的多聚不飽和脂肪酸，且在細胞質中抗氧化劑濃度非常低，所以 精子對氧化應激敏感，但是精子膜功能的完整性與精子獲能、頂體反應及精卵融合密切相 關。在正常條件下，精子和精漿中含有的抗氧化物質可以防止ROS的過量產生，保護精子免 受損傷。然而，在病理條件下，生殖系統中ROS的增加超出了這些抗氧化物質的清除能力， 或因抗氧化物質產生的減少而使其清除能力降低，都會導致過氧化脂質水平升高，損傷精 子結構和功能。因此過氧化損傷是導致精子結構和功能的損傷，是導致男性不育除身體缺 陷外的重要原因。
內分泌失調性疾病會影響女性的正常排卵，促黃體生成激素(LH)和促卵胞成熟 激素(FSH)的水平過低提示丘腦-垂體功能障礙。兩者都高提示卵巢功能障礙。LH高值、 FSH正常時高度懷疑多囊卵巢。男性內分泌失調同樣會影響性欲、影響精子的發育和成熟。內分泌失調性疾病都會影響性功能，生殖器感染性疾病又與免疫功能有關，人的 生育功能與各種疾病有關，各種疾病與自由基氧化應激和過氧化損傷有關，自由基在人體 內調控失調就會造成性功能紊亂，也就患不孕癥，用清除自由基調節生育功能，是治療不孕 癥的一條有效途徑。如果有種藥物同時具有調節內分泌系統、增強免疫能力又可以作為抗 氧劑清除多余的自由基，這樣治療不孕不育癥的功效一定可以大大的提高。本發明的目的 正是如此。現今社會，壓力的增大與環境因素的影響，導致性功能障礙的比率增加，這不僅僅 表現在女性不孕，同時因精子質量的下降，造成越來越多的男性不育。申請號為CN200580023193. 1 該發明涉及靶向線粒體的抗氧化劑例如維生素E衍 生物、輔酶Qltl或谷胱甘肽過氧化物酶模擬物在治療和預防肝病和/或上皮癌中的用途。該 組合物是抗氧化劑通過共價鍵與親脂性陽離子耦合的模擬物，且在其權利要求中只應用于 治療和預防肝病和/或上皮癌中的用途，同時該專利也只對谷胱甘肽過氧化物酶有限定， 沒有對微量元素硒的限定。申請號為CN02818722.9:該專利公開了一種口服或者腸胃外給藥的組合物，其含 有下列成分(a)L-肉堿內鹽或其可藥用鹽；(b)乙酰L-肉堿內鹽或其可藥用鹽；(c) α -硫 辛酸；⑷輔酶Qltl ； (e)維生素E ；與(f)硒代蛋氨酸。并且規定了該組合物各個成分的含量 20 IlOmgL-肉堿內鹽或其可藥用鹽；20 IlOmg乙酰L-肉堿內鹽或其可藥用鹽；70 130mg α -硫辛酸；90 IlOmg輔酶Qltl ;5 15mg維生素E與40 60 μ g硒代蛋氨酸。該 專利的組合物在制備藥物中的用途，主要用于預防、抵消和/或治療由氧化應力、伴隨氧化 應力而來的過早生理性細胞程序死亡現象和/或環境因素誘導的細胞程序死亡引起的病 癥和/或疾病，且該專利權利要求中該組合物必須包括所要求的六種成分，同時還明確規 定了各成分的用量。而本專利是綜合應用抗氧化應激理論，同時還結合了在增強免疫力和 調節內分泌系統以及營養學方面的協同作用，來提高生殖能力。申請號為CN200410022994.3 該專利申請的發明由維生素C、維生素E、褪黑素三 種抗氧化劑組成，此組成構成了一種新型抗生物細胞自由基氧化損傷合劑，將其作為一種 新型高效抗生物細胞自由基氧化損傷物質應用于與生物細胞自由基氧化損傷有關的各領 域。克服了單獨使用某一抗氧化劑引起的過氧化現象等缺陷。申請號為CN200710074140. 3 該發明公開了一種治療心腦血管類疾病的藥物。其 主要由以下原料制成輔酶Qltl (CoQltl)、維生素E (VE)、大豆卵磷脂(PC)。該專利利用維生素 E可促使輔酶Qltl的生物合成和激活CoQltl的活力，使其在電子傳遞中更具能力，大豆卵磷脂 (PC)能幫助CoQltl清除殘余的低密度蛋白質，這樣VE和PC促進CoQltl的生物合成且提高功 效。申請號為CN00102763.8 該專利公開的是一種復合輔酶Qltl藥物，其中記述了在輔 酶Qltl制劑中加入一定量的活性氧自由基清除劑以減少輔酶Qltl藥物的副作用。其中活性氧 自由基清除劑包括維生素E、維生素C、維生素Α、β-胡蘿卜素和細胞色素C。使用活性氧 自由基清除劑的目的是解決輔酶Qltl漏電子生產超氧自由基和活性氧的旁路反應，減少輔酶Qltl具有的副作用。因此該專利只是改善輔酶Qltl在體內吸收時產生的副作用，從而提高 了其藥效作用。申請號為CN200610159628. 1 該專利申請發明的是一種含硒、維生素E的木糖醇 片。其活性成分硒和維生素E作為營養補充劑，用以滿足機體生理生化需要，通過含食本 品，對適宜人群提供身體必需的硒和維生素E以補充從食物攝取的不足，維持機體的正常 代謝過程和機能完整性。而本發明聯合應用傳統治療不孕不育藥物——維生素E和新型治療藥物輔酶Qltl 和微量元素硒在不孕不育癥上的獨特療效，應用不同的治療不孕不育的機理，提高精子的 運動和活力、增加性激素的分泌、保護卵巢功能、提高免疫力以提高受孕的幾率和保證胎兒 的營養，在治療不孕不育癥更有效。
發明內容
本發明的目的是提供一種能有效提高生殖能力的藥物組合物，不僅僅針對女性患 者，對男性患者也是同樣有效的。女性患者通過調節性激素分泌和增強免疫能力來降低著 床前的胚胎毒性和著床后的習慣性流產及死胎等；男性患者通過增加精漿和精子中的抗氧 化應激的能力，來提高抵抗精子的脂質過氧化造成的精子無力、精子畸形甚至無精現象，從 而提高受精能力。雖然目前維生素E、輔酶Qltl和/或硒在臨床上也有不同的應用，但至今 為止其沒有在有效提高生殖能力的藥物臨床上的應用、也沒有把維生素E、輔酶Qltl結合或 把三者組合起來作為一個有效提高生殖能力的藥物組合物的應用。本發明的主要目的在于提供了一種提高生殖能力的藥物組合物。根據本發明的一方面，所述藥物組合物包括維生素E、輔酶Qltl和/或硒。其中，所述維生素E、輔酶Qltl和/或硒的單位劑量范圍為維生素E 5mg 150mg ； 輔Bl Qi05mg 50mg ；石西 0 μ g 100 μ g。優選地，所述維生素E、輔酶Qltl和/或硒的單位劑量范圍為維生素E 5mg IOOmg ；輔Sl Q105mg 50mg ；石西 15 μ g ~ 100 μ g。其中，所述維生素E為D-α-生育酚、DL-α-生育酚、DL-α-生育酚醋酸酯、 D-Ci-生育酚醋酸酯、或D-α -生育酚琥珀酸酯。其中，所述的硒為硒化卡拉膠、富硒啤酒酵母、半胱氨酸硒、亞硒酸鈉、或硒代蛋氨酸。根據本發明的又一方面，本發明提供了一種制備上述藥物組合物的方法，包括以 下步驟(1)將維生素E和輔酶Qltl加入玉米油中50 60°C水浴溶解，同時將硒溶于明膠制 成囊材；或者維生素E、輔酶Qltl、卵磷脂和/或硒加入玉米油中攪拌均勻；或者將維生素E、 輔酶Q1(l、硒與微晶纖維素直接混合均勻；或者將維生素E、輔酶Qltl、硒與微晶纖維素和十二 烷基硫酸鈉直接混合均勻；或者將在60°C水浴鍋中溶解后的維生素E、輔酶Qltl和卵磷脂加 入泊洛沙姆和硒的水溶液中，和(2)按照常規工藝制備成軟膠囊、片劑、硬膠囊或口服液。根據本發明的再一方面，本發明提供了一種提高生殖能力的藥物組合物在制備提 高生殖能力的藥物中的應用，其中，所述藥物組合物用于預防和治療由氧化應激、內分泌失調或環境因素誘導而造成生殖障礙的藥品和保健品。維生素E對不孕癥的應用在營養學、免疫學以及自由基理論等方面的研究發現，VE對機體的免疫和生殖功 能具有顯著的保護作用。在VE發現的初期，已證實其對動物的生殖和發育均有明顯的影 響。VE與哺乳動物的繁殖性能密切相關。近一個世紀以來，人們從不同的學科領域對VE進 行了多個角度深入的研究。VE在治療不孕癥、習慣性流產及早產嬰兒的異常情況的機理， 主要以下四種一、VE直接作用于下丘腦、垂體，改善垂體毛細血管血流，增強下丘腦、垂體 功能活性，可促垂體前葉促性腺分泌細胞亢進，分泌增多，促進精子的生成與活動，完善與 提高性功能，亦能增強卵巢的生理功能，使卵泡增加和黃體細胞增大并使孕酮的作用增強， 降低了不孕癥的發生率。二、自由基理論，VE是一種脂溶性維生素，結合在細胞膜上使細胞 免受自由基進攻和過氧化損傷。其抗氧化功能依賴其自身結構，它可以插入到細胞膜的脂 質雙分子層之間，與多價不飽和脂肪酸形成膜結構的一部分，并與結合在膜上的能生氧自 由基的酶(如混合功能氧化酶)精密相鄰，在氧自由基攻擊多聚不飽和脂肪酸前將其捕獲 和清除，阻斷其氧化過程，防止和抑制了膜上磷脂形成脂質過氧化。將自由基阻擋在細胞質 以外，并有效減少自由基的濃度，保護細胞膜大分子物質免受自由基的攻擊和過氧化損傷。 另外，因其形成了細胞膜結構的一部分，故具有固定細胞膜，增加其穩定性的作用。因此， VE能對抗生殖系統的氧化應激損害，逆轉由活性氧誘導的小鼠胚胎發育毒性，提高胚囊的 發育率。活性氧(ROS)的產生和精子膜的過氧化均可損傷精子的運動能力，導致精子中段 畸形和精卵融合障礙，而VE能保護精子免受損傷，并緩解黃曲霉菌所誘導的小鼠睪丸生物 化學變化，及甲氧氯誘導的附睪和附睪精子氧化應激反應，防止睪丸形態結構異常、精子數 量和活動度的變化。三、VE可促進細胞核RNA更新和蛋白質合成，促進某些酶蛋白的合成。 四、VE可以有效地緩解某些毒物對生殖系統發育的毒性作用，如甲醛、鎘以及放射線等物理 和化學因素造成的生殖系統氧化損傷。輔酶Qltl對不孕癥的應用臨床常用于心血管疾病及病毒性肝炎的輔助治療的脂溶性輔酶Qltl在細胞膜生化 代謝呼吸鏈中起重要作用，它具有促進氧化磷酸化反應，保護和恢復生物膜結構完整性及 增強免疫反應的作用。輔酶Qltl在體內有氧化性輔酶Qltl(CoQici)和還原型輔酶Qltl(CoQiciH2) 兩種存在狀態。ROS所導致的脂質過氧化是細胞結構解體、功能喪失的一個重要原因。由于 精子膜上抗氧化酶的水平相對較低，因此，精子膜上多聚不飽和脂肪酸在有ROS或自由基 條件下極不穩定，易發生脂質過氧化反應，生成過氧化脂質而使精子膜損傷，甚至發生細胞 死亡。此外，脂質過氧化反應過程產生的脂質過氧化物及其代謝產物本身也具有細胞毒性， 會對精子造成直接損傷，成為男性不育的病因之一。還原型輔酶Qltl (CoQltlH2)能有效清除精 液中的R0S，防止精子膜表面磷脂發生過氧化作用，維持磷脂蛋白還原型基團的活性。此外， 輔酶Qltl還可以刺激機體提高其他抗氧化劑(如SOD)的水平，使生殖系統具備一定抗氧化 損傷的緩沖能力。體內輔酶Qltl濃度雖然比維生素E水平低，但作為磷脂與脂蛋白分子氧化 的強抑制劑，其對精子正常形態及活力的維持具有著重要作用。并且輔酶Qltl在體內以絡氨 酸為原料可以自動合成，同時輔酶Qltl的兩種狀態在肝臟內可以自動轉化，是唯一的一種天 然存在的在人體內能再生(轉換為活性形式)的脂溶性抗氧劑。精漿和精子中輔酶Qltl水平 的高低對精子功能的正常發揮顯得非常重要，人們期待通過外源性補充CoQltl以增強精子抗氧化損傷的能力，提高某些因氧化損傷導致精子質量下降的不育患者的生育能力。2004 年來有報告應用CoQltl對特發性弱精子癥患者的潛在治療作用治療。結果發現，補充CoQltl 治療后，精漿和精子中的CoQltl水平均明顯升高，精子活力也顯著增強(BalerciaG，Arnaldi G，Fazioli F，et al，2002 ；譚育紅，張敏建，孫云華.特發性男性不育癥的約物治療進展； 施云飛，湯文葳，宋洪程.輔酶Qltl結合金施爾康治療弱精子癥)。Carlo等報告22例補充 CoQltl 口服劑的患者，3個月后精液和精細胞內CoQltl濃度顯著升高，精子活力改善，無不良反 應，治療后自然妊娠率為13.6%。70年代中期，Mitchell化學滲透假說理論，揭示了生物體內能量的轉換以及輔酶 Qltl在線粒體能量轉換體系中的重要作用。輔酶Qltl至少是3種線粒體酶(多酶復合體I、II 和III)的輔酶，輔酶Qltl的生物活性主要來自于其醌環的氧化還原特性和其側鏈的理化性 質。其醌環在氧化呼吸鏈中起傳遞電子和質子的作用，這種作用不僅是所有生命形式必不 可少的，而且還是形成三磷酸腺苷(ATP)的關鍵。而ATP是機體能量的主要儲存形式，也是 所有細胞功能賴以正常發揮的重要基礎，顯示出極好抗疲勞作用。輔酶Qltl能使細胞保持良 好健康的狀態，因而機體充滿活力，精力旺盛，腦力充沛。這有助于提高精子的運動和活力， 對孕婦也有助于安胎、減少流產。輔酶Qltl作為特異性和非特異性免疫增強劑，能顯著提高人體免疫力，能提高吞噬 細胞的吞噬率，增加抗體的產生，改善T-細胞功能。對因機體免疫力低下的不孕癥患者，有 很好的改善作用，能提高受孕率。硒對不孕癥的應用硒是動物和人類必需的微量元素之一。硒在生物體內以有機化合物的形式存在于 硒蛋白質內，硒的生物學功能通過硒蛋白表達。作為硒蛋白的組份，硒又是谷胱甘肽氧化物 酶的組成成分，具有結構和酶的功能，而該酶主要作為抗氧化劑。硒蛋白質對硒的吸收排 泄，保留及平衡等起著非常重要的作用。缺硒首先影響了硒蛋白質的合成，然后出現抗氧化 體系的改變和組織細胞的損傷。組織細胞的損傷，是自由基所致。現已明確硒是精子成熟的必需元索，在精子中間部位的線粒體是硒蛋白，對精子 的生存環境和生物學功能有著重要影響。研究表明，氧化應激是男性不育的一個主要誘發 因素。睪丸精小管內高比率的有絲分裂和不同階段的減數分裂，暴露生殖細胞染色體于局 部環境自由基的潛在損傷下。精子中含有非常高的多不飽和脂肪酸，且在細胞質中抗氧化 劑濃度非常低，因而精子對氧化應激敏感。硒缺乏時，動物的附睪內精子活力會降低或消 失，精子中段鞭毛會出現缺損。精子生物化學分析也表明，大量的硒結合到精子鞭毛多肽 中。自由基含量過高時，其通過進攻膜脂形成的脂質過氧化物，進而導致睪丸細胞的脂質降 解、斷裂、損傷。缺硒時，性機能低下、性欲減低、陽萎、睪丸縮小變軟、甚至不育等。硒具有直接清除自由基的作用，是與自由基結合的強力抗氧化劑。另外，它又是谷 胱甘肽氧化物酶(GSH-Px)活性中心的必需組成成分，體內SOD、GSH-Px可直接拮抗自由基 的毒性作用，清除脂質過氧自由基和羥自由基，羥自由基是脂質過氧化的起動劑。GSH-Px能 催化脂質過氧化物轉化為細胞毒性較小的醇類，硒通過增加GSH-Px活性，促進脂質過氧化 物分解而起抗氧化作用。所以，硒可以改善由自由基引起的組織細胞的損傷，降低精子的畸 形率，提高受孕率。硒提高生殖功能的另一機理為硒有利于合成褪黑素，褪黑素能調節各種 性激素的分泌，以維持正常的性能力。褪黑素是機體激素的總指揮，它能調節各種性激素的分泌，使各種激素都不發生過量和不足的現象，而維特性功能和性欲的正常。性激素包括雄 激素睪酮和二氫睪酮(DHT)，雌激素黃體酮、促黃體生成激素(LH)、促卵胞成熟激素(FSH)、 催乳激素、縮宮激素。男性的性欲及性器官的勃起是由睪酮及二氫睪酮來支配的；女性的 性欲是由雌激素黃體酮等來支配的，尚有黃體酮生成激素、促卵胞成熟激素、催乳激素和縮 宮激素的參與。促黃體生成激素(LH)與促卵胞成熟激素(FSH)協同作用，促進卵泡生長 成熟和卵泡膜增生，促進排卵和形成黃體，參與內膜細胞合成分泌雌激素；促卵胞成熟激素 (FSH)還可以刺激卵巢生長和使生長至出現空腔的卵泡繼續發育增大并接近成熟。在雄性 動物中，LH亦稱促間質細胞激素，為睪丸分泌和合成睪酮所必需的，促進成年男子曲細精管 發育、生精細胞的分裂、精子的發育和成熟。硒對重金屬拮抗機制可能是硒通過抗脂質過氧化拮抗重金屬毒性；或者硒與金屬 有很強的親和力，在體內可能與金屬結合，形成一種絡合物并使之排出體外。因此，硒可以 降低胚胎毒性，減少著床前的丟失率。Kumar KS等發現多次流產者紅細胞硒水平顯著低于 正常者。對不明原因自然流產者的血硒含量進行測定，發現流產孕婦的血硒含量普遍低于 正常者。于燕等報道缺硒會使孕鼠體重增長緩慢，首先，硒缺乏會影響母體自身體重。硒的 缺乏則會引起脫碘酶、谷胱甘肽過氧化物酶的活性降低，進一步使得與代謝相關酶(如Na、 K、ATP酶、呼吸鏈中的輔酶A、輔酶CoQltl、酮戊二氧化酶系統)的催化反應能力下降，使能量 生成障礙。其次，硒缺乏也會直接影響其仔代胎仔體重。有研究表明，妊娠末期胎仔體重與 母體孕期體重增長呈正相關，且孕鼠是為胚胎提供必要的營養的唯一來源，在其本身能量 儲備不足的同時還要為胎仔供能，不僅加重了孕鼠的能量消耗，也會導致仔鼠營養不良，從 而導致胎仔體重降低，甚至造成死胎。因為硒能保護細胞膜結構完整和功能正常，并且能顯 著促進日糧營養物質的消化吸收與代謝，另一方面硒能促進乳腺細胞數增加，乳腺組織發 達，分娩后產奶量增加，從而改善乳質，為幼仔提供營養和能量，降低因能量供應不足造成 的流產或胎兒營養不良或者死胎的發生率。與維生素E具有很好的協同作用。已證實，有正常生育能力的男性精液中硒含量比無生育能力者高，而且精子數量 多，活力也強。因此，缺硒會影響生殖系統的正常發育及其功能，使生育力降低或消失。艾 滋病患者血硒水平及GSH-Px活性均顯著低于正常人。這就說明，硒是維持正常生育力的必 需元素，與生命體戚相關。本發明的優勢維生素E在阻斷自由基與多聚不飽和脂肪酸的反應、保護生物膜的過程中產生了 相對穩定的生育酚自由基，若生育酚自由基長時間不能被清除，在體內積聚，這種自由基就 會引起脂肪過氧化反應或蛋白質氧化，最終將導致低密度脂蛋白(LDL)微粒被氧化。此時， 若有還原型輔酶Qici(COQICIH2)存在的情況下，輔酶Qltl可以還原維生素E在清除自由基時產 生的生育酚酰基自由基，使維生素E恢復了原本的抗氧化功能，起到抗氧化的作用。輔酶Qltl 是唯一的一種天然存在的，在人體內能再生(轉換為活性形式)的脂溶性抗氧劑。同時，維 生素E可以清除輔酶Qltl與自由基反應產生的超氧自由基。因此，維生素E和輔酶Qltl作為 體內抗氧劑有協同作用。同時，硒作為谷胱甘肽過氧化物(GSH-Px)的重要成分，在保護細胞免受氧化損傷 方面，對VE起補償和協調作用。VE位于細胞膜上，可清除細胞膜上的自由基，而谷胱甘肽過氧化物酶存在于細胞液中，能中和穿過細胞膜進入細胞液的自由基，防止有害自由基對不 飽和脂肪酸的氧化攻擊。故維生素E是防止脂質過氧化的第一道防線，含硒的GSH-Px起著 第二道防線的作用，二者在防止細胞膜脂質的過氧化反應、保護細胞膜、肝線粒體及內質網 膜的穩定性方面具有互補作用。此外，硒還是細胞膜內面存在的一種特殊的磷脂酰谷胱甘 肽過氧化物酶的活性成分，對防止細胞膜磷脂的氧化起重要作用(Manahan，1996)。硒還可 通過谷胱甘肽過氧化物的不同功能，防御缺乏維生素E對肝臟的損害。維生素E和硒在防 止過氧化損害方面具有互補作用，共同保護細胞膜的質膜結構的完整性。所以，維生素E、輔酶Qltl和/或硒在抗氧化應激反應清除自由基反面有相互協同 作用，不僅增強了各自在抗氧化作用的功能，還減輕了各自的不良作用。維生素E和硒通過改善垂體毛細血管血流，增強下丘腦、垂體功能活性，有利于褪 黑素的合成，促進性激素的分泌。完善與提高性功能，促進精子的生成與活動，增強卵巢的 生理功能，使卵泡增加和黃體細胞增大并使孕酮的作用增強，降低了不孕癥的發生率。免疫代謝的協同作用，免疫反應的基礎是淋巴細胞的形成，依據功能可將淋巴細 胞分為B-淋巴細胞和T-淋巴細胞B-淋巴細胞產生于法氏囊，通過與特定抗原反應而產 生抗體，從而發揮體液免疫作用；T-淋巴細胞則產生于胸腺，主要在細胞免疫中發揮作用， 也可以通過控制B-淋巴細胞的活性而在一定程度上調節體液免疫。維生素E增強機體免 疫力的機理研究比較深入和取得認可的是前列腺素(PG)學說。對免疫反應有抑制作用的 PG尤其是PGE2，其作用主要抑制T-淋巴細胞的功能和B-淋巴細胞的功能，而B-淋巴細胞 和T-淋巴細胞是免疫反應的基礎。此外，PG還能直接抑制淋巴細胞的細胞毒性和抗體的 產生，抑制細胞因子的產生，而降低機體的免疫力。花生四烯酸是合成前列腺素的直接前 提，維生素E和硒可抗花生四烯酸過氧化，從而改變動物體內花生四烯酸的代謝(Aziz等， 1996 ；Bry ant等，1980)。這樣維生素E和硒可影響PG前體的合成，最終可降低具有免疫活 力抑制作用的PG合成，增強機體免疫力。輔酶Qltl能增強人體免疫力主要表現為輔酶Qltl 能增加白細胞的數量，增加胸腺活力，激發免疫球蛋白和抗體數量增加，能提高吞噬細胞的 吞噬率，改善T-細胞功能。CoQltl與線粒體內膜結合，是一種在呼吸鏈中與蛋白質結合不緊密的輔酶，在黃素 蛋白類和細胞色素之間作為特別靈活的載體而起作用，是電子傳遞鏈中的遞氫體，為線粒 體合成能量物質三磷酸腺苷(ATP)的必需成分，提供人體95%左右的能量。硒的缺乏則會 引起脫碘酶、谷胱甘肽過氧化物酶的活性降低，進一步使得與代謝相關酶(如Na、K、ATP酶、 呼吸鏈中的輔酶A、輔酶CoQltl、酮戊二氧化酶系統)的催化反應能力下降，使能量生成障礙， 并且硒可以促進日糧營養物質的消化吸收與代謝，可以通過母體的營養物質的攝入，保證 胎兒的營養需求。維生素E對生殖器官的保護作用也在甲醛、鎘以及放射線等物理和化學因素造成 的生殖系統氧化損傷中得到證實；硒對重金屬拮抗機制可能是硒通過抗脂質過氧化拮抗重 金屬毒性；或者硒與金屬有很強的親和力，在體內可能與金屬結合，形成一種絡合物并使之 排出體外。因此，采用維生素E、輔酶Qltl和/或硒三種藥物聯合應用治療男性不育(male infertility, MIF)主要表現在以下方面(1)能明顯提高與ROS有關的MIF患者精子的 體外功能；(2)提高精子形態正常患者的精子受精率；(3)顯著提高精子活動力弱患者的精子運動能力；(4)對于合并少精、弱精和精子畸形的患者，從三方面進行改善提高精子 活動力；提高活精和正常精子的百分率；體外條件下提高精子DNA的整合性。對女性不孕 (female infertility, FIF)的治療主要表現在以下方面(1)促進性激素的分泌，增強卵 巢的生理功能，使卵泡增加和黃體細胞增大并使孕酮的作用增強；(2)增強母體免疫力，促 進日糧營養物質的消化吸收和代謝。本發明聯合應用傳統治療不孕不育藥物——維生素E和新型治療藥物輔酶Qltl和 /或微量元素硒在不孕不育癥上的獨特療效，應用不同的治療不孕不育的機理，提高精子的 運動和活力、增加性激素的分泌、保護卵巢功能、提高免疫力以提高受孕的幾率和保證胎兒 的營養，在治療不孕不育癥更有效。本發明針對維生素E與其他抗氧劑的協同作用，在抗氧化過程中構成一個往復循 環的氧化還原鏈，增強各自抗氧化功能，并且還可以避免各自抗氧化劑清除自由基時產生 的一些不良反應，擴大使用范圍以，形成一種高效無毒的自由基清除劑。本發明新型的提高生殖能力的組合物的各個成分各自在提高生殖能力研究和臨 床上都有應用，所以，這種組合物能安全高效的應用于生殖障礙，而其效果比單獨使用組合 物中的任意成分都高的多，同時又可以克服了單獨使用某一成分的缺陷。
具體實施例方式為了進一步闡述本發明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它 們僅用來對本發明進行具體描述，不應當理解為對本發明的限制。實施例1稱取D- α -生育酚150g、輔酶Q1(15g加入到295g玉米油中，于50 60°C水浴鍋中 加熱溶解，目測完全溶解。硒代蛋氨酸0. 14g(含硒50mg)溶于明膠中，可在明膠中可添加 一定比例的著色劑和遮光劑，制成有色囊材，在滾模式壓制機上，灌封為軟膠囊，制成1000 粒。再經定型、干燥、檢丸等工序。制得每粒含維生素E150mg、輔酶Q1(15mg、硒50 μ g。實施例2稱取D-α-生育酚醋酸酯IOOg (以α -生育酚當量計)、輔酶QltlIOg加入到285g玉 米油中，與50 60°C水浴鍋中加熱溶解，目測完全溶解。硒化卡拉膠0. 27g (含硒15mg)溶 于明膠中，可在明膠中可添加一定比例的著色劑和遮光劑制成有色囊材，在滾模式壓制機 上，灌封為軟膠囊，制成1000粒。再經定型、干燥、檢丸等工序。制得每粒含維生素ElOOmg、 輔Bl Q10IOmg、石西 15μ g。實施例3稱取DL-α -生育酚100g、輔酶Q1(15g、卵磷脂8g加入到287g玉米油中，攪拌均勻。 在膠液中可添加一定比例的著色劑和遮光劑制成有色囊材，在滾模式壓制機上，灌封為軟 膠囊，再經定型、干燥、檢丸等工序。制得每粒含維生素ElOOmg、輔酶Q1(l5mg。實施例4稱取DL-α-生育酚醋酸酯(以α -生育酚當量計)100g、輔酶Q1(15g、亞硒酸鈉 1. Ig(含硒50mg)、卵磷脂8g加入到287g玉米油中，攪拌均勻。在膠液中可添加一定比例 的著色劑和遮光劑制成有色囊材，在滾模式壓制機上，灌封為軟膠囊，再經定型、干燥、檢丸 等工序。制得每粒含維生素ElOOmg、輔酶Q1(15mg、硒50 μ g。
實施例5將D- α _生育酚琥珀酸酯5g (以α _生育酚當量計)、輔酶Q1(150g、富硒啤酒酵母 40g(含硒IOOmg)和適量微晶纖維素放入混合器中混合均勻；將上述混勻后的藥物，用適量 淀粉漿制得軟材，經50°C干燥、整粒；整理后，加入適量潤滑劑如硬脂酸鎂、微粉硅膠或羧 甲基淀粉鈉，混勻，壓片，制成1000片。制得每片含維生素E5mg、輔酶Q1Q50mg、硒IOOygo實施例6將D-α _生育酚琥珀酸酯50g(以α _生育酚當量計)、輔酶Q1(150g、半胱氨酸硒 0. 26g(含硒IOOmg)和適量微晶纖維素、十二烷基硫酸鈉混合均勻后直接灌裝成硬膠囊，制 成1000粒。制得每粒含維生素E50mg、輔酶Q1(150mg、硒100 μ g。實施例7將泊洛沙姆F-682. 5g和亞硒酸鈉2. 2g(含硒IOOmg)溶解于預熱過的適量蒸餾 水，將IOOg D-CI-生育酚醋酸酯IOOg(以α-生育酚當量計)、輔酶QltlIOg和卵磷脂IOOg 于60°C水浴鍋中溶解后，再緩慢加入到泊洛沙姆溶液中，補蒸餾水至5L并置磁力攪拌器上 城初乳溶液。將上述初乳溶液經高壓均質機均質成穩定的乳液，灌裝于容器中，密封，制成 1000支，每支口服液含維生素ElOOmg、輔酶QltlIOmg和硒100 μ g。動物學實驗與結果1、實驗大鼠對各種營養素缺乏極敏感，是研究營養學的適用動物，所以現有的動物模型 以大鼠最為多見。根據Burk于1987年提出得制作硒缺乏大鼠動物模型的方法，我們制作 硒缺乏與維生素E缺乏模型，飼料配方見表1，飲蒸餾水。表1低硒低VE飼料的配方 a.混合無機鹽的配方(g/kg)碳酸鈣543、磷酸二氫鉀225. 2、氯化鈉59. 69、氯 化鉀104. 8、碳酸鎂25、硫酸鎂16、枸櫞酸鐵銨20. 5、硫酸錳3. 44、氟化鈉1、硫酸銅 0. 9、氯化鉻0. 1、碘化鉀0. 08。b.混合維生素配方(/IOOg)乳糖88. 68g、維生素Bl :40mg、維生素B2 :25mg、維 生素B6 :20mg、泛酸鈣200mg、氯化膽堿10g，煙堿酸lg、維生素K 10mg、葉酸20mg、生物素10mg，維生素B12 :lmg、維生素A :lmg、維生素D :0. Olmg。選用體重約50g的健康斷乳后封閉群SD大鼠(由浙江中醫藥大學藥學院實驗動 物中心供)喂養，喂養4周。由于肝對硒水平的改變非常敏感，所以肝臟谷胱甘肽過氧化物 酶(GPX)被作為監測機體硒缺乏狀態的指標。我們選取肝GPX活力約為對照組5% 20%， 即輕中度和硒缺乏為成功動物模型。1. 1 分組選用上述成功動物模型160只，隨機分成8組，每組20只(雌、雄各半)。分別為 ①低硒低VE飼料組，即對照組；②低硒低VE飼料加維生素E組(維生素E400mg/kg)，即維 生素E組；③低硒低VE飼料加輔酶Qltl組(輔酶Q1Q10mg/kg)，即輔酶Qltl組；④低硒低VE飼 料加硒組(硒2mg/kg)，即硒組；⑤低硒低VE飼料加維生素E和輔酶Qltl組(維生素E400mg/ kg,輔酶Q1(110mg/kg)，即維生素E和輔酶Qltl組合組；⑥低硒低VE飼料加維生素E和硒組 (維生素E400mg/kg，硒2mg/kg)，即維生素E和硒組合組；⑦低硒低VE飼料加輔酶Qltl和硒 組(輔酶Q1(110mg/kg，硒2mg/kg)，即輔酶Qltl和硒組合組；⑧低硒低VE飼料加維生素E加輔 酶Qltl加硒組(維生素E400mg/kg，輔酶Q1(110mg/kg硒2mg/kg)，即維生素E和輔酶Qltl加硒 組合組。其中，維生素E以天然維生素E (D-α-生育酚醋酸酯)形式，硒以亞硒酸鈉形式。1. 2飼養條件實驗動物按設計要求分別喂以含不同維生素Ε、輔酶Qltl和硒濃度的飼料，大鼠自 由進食，飲用蒸餾水，室溫18 25°C相對濕度50% 65%。喂養4周后，按雌雄=2 1 進行交配，每天早晚各觀察一次陰栓，發現陰栓為孕期O天，于妊娠19天時分籠標記待產每 天清早檢查母鼠生產情況并記錄分娩仔鼠數、雌雄個數、分娩死亡數和4天存活數。1. 3測定指標(1)大鼠附睪中精子活動和組織病理形態學變化；(2)孕鼠生育指標計數黃體 數、胚胎的著床數、活胎數、吸收胎及晚期死胎數。1. 4實驗方法參考徐叔云.卞如濂.陳修主編《藥理學實驗方法》第三版上——對附睪中精子 活動和形態影響的實驗。精子畸形取1滴濾液滴片，晾干，甲醇固定，伊紅染色，蒸餾水沖洗，晾干后鏡檢。 每只小鼠計數1000個精子，記錄畸形精子數并計算精子畸形率。按下列公式計算精原細 胞染色體的畸變率畸變率(％)=含染色體結構畸變精原細胞數/分析的精原細胞總數 *100%。活精率及精子活動度將濾液置于37°C水浴中孵育20min后，滴片，光鏡下計數 1000個精子中活精子數和各級活動精子數，并計算精子活動度(％) = (1+11)*100/1000。精子數濾液經60°C水浴殺死精子，用血球計數板以紅細胞計數法計數精子，再 折算成精子數(個)/附睪尾(ml)。1.5數據處理使用SPSS13. O統計軟件處理數據，樣本均數之間的顯著性采用單因素方差分析 法(ANOVA)和t檢驗，多重比較采用最小顯著差法(LSD)。2、結果精子密度除組8外格實驗組精子密度檢查與對照組先比差異沒有顯著(P>0.05)。結果可參見表2。總畸形精子百分率除組3、組4外其他實驗組與對照組相比有顯著差異(P < 0. 01或P < 0. 05)，其中組8即維生素E加輔酶QlO加硒組試驗組與其他試驗組相比有 顯著差異(P < 0. 05)。結果可參見表2。附睪電鏡結果附睪管壁的上皮細胞組1對照組呈立方形，細胞質內出現大量空 泡，細胞間連接增寬。組8呈柱狀，細胞質均勻，細胞間連接緊密，基底膜結構清晰。腔面精 子頭、尾組1對照組可見到結構異常的精子，其頭部形狀不規則，膜結構不完整，染色質不 均勻，精子尾部的2+9結構減少，出現0+9、2+8或2+7結構，且排列紊亂。組8可見到大量的 精子尾部，其橫斷面上2+9結構清晰，精子頭部為橢圓形，膜結構完整，染色質均勻、致密。總精子活動百分率各試驗組與對照組相比均有顯著差異(P < 0.05或P <0.01)。結果可參見表2。胚胎毒性比較各試驗組受孕率均顯著高于對照組(P < 0. 05)，活胎數、著床前丟失率、著床后丟 失率均顯著低于對照組(P < 0. 05或P < 0. 01)。結果可參見表3。實驗證明，維生素E、輔酶QlO和硒三種物質的組合能顯著提高生殖能力，并且三 者之間發生了協同作用，使其效果更加優于單一成分和它們三者之間的兩兩組合物。值得 說明的是輔酶QlO和維生素E的組合物在提高生殖能力上優于其他兩兩組合物形式。本發明的一種提高生殖能力的組合物，可開發成藥品和保健品用于口服，口服制 劑包括軟膠囊、硬膠囊、片劑、口服液等多種方法。
表中數據為平均值士標準誤；*為與組1即對照組比P < 0. 05，有顯著差異廣為 與組1即對照組比P < 0. 01，有非常顯著差異 ’#為與試驗組比P < 0. 05，有顯著差異;## 為試驗組比P < 0. 01，有非常顯著差異。需要聲明的是，上述發明內容及具體實施方式
意在證明本發明所提供技術方案的 實際應用，不應解釋為對本發明保護范圍的限定。本領域技術人員在本發明的精神和原理 內，當可作各種修改、等同替換、或改進。本發明的保護范圍以所附權利要求書為準。
組①組②組③組④組⑤組⑥組⑦組⑧
60 11.6±1.9 7.4±2.0 5.9±2.6
60
90
2.5±1.7
11.3±2.2 11.2±2.0 8.6±2.1* 2.3 士 1.3
70 11.5±2.3 11.0±1.
8.3士2.0
70 11.4±1.8 11.1±2.1 8.6±1.9*
2.2±1.5
2.0±1.8
70 11.1 士 2.0 10.9±2.1 9.5 土 2.3*
80 11.6 士 1.9 11.3±2.4 10.1士1.8*
1.9±1.1
28.25
17.44
17.21
14.95
11.8±2.1 11.3±2.3 10.3 士 2.2* 1.5±0.9* 9.71*
12.03
.4 士 0.9* 8.66*
100 11.5 士 2.7 11.1±1.7 11.0±1.9** 0.05 士3.64**
權利要求
一種提高生殖能力的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括維生素E、輔酶Q10、和/或硒。
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述維生素E、輔酶Qltl、和/或硒 的單位劑量范圍為維生素E 5mg 150mg ； 輔酶 Q10 5mg 50mg ； 石西0 μ g ~ 100 μ g。
3.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述維生素E、輔酶Qltl和/或硒的 單位劑量范圍為維生素E 5mg IOOmg ； 輔酶 Q10 5mg 50mg ； 石西15 μ g ~ 100 μ g。
4.根據權利要求1 3任一所述的藥物組合物，其特征在于，所述維生素E為D-α -生 育酚、DL- α -生育酚、DL- α -生育酚醋酸酯、D- α -生育酚醋酸酯、或D- α -生育酚琥珀酸
5.根據權利要求1 3任一所述的藥物組合物，其特征在于，所述的硒為硒化卡拉膠、 富硒啤酒酵母、半胱氨酸硒、亞硒酸鈉、或硒代蛋氨酸。
6.一種制備如權利要求1 5任一所述的藥物組合物的方法，其特征在于，所述方法包 括以下步驟(1)將維生素E和輔酶Qltl加入玉米油中50 60°C水浴溶解，同時將硒溶于明膠制成 囊材；或者維生素E、輔酶Qltl、卵磷脂和/或硒加入玉米油中攪拌均勻；或者將維生素E、輔 酶Q1(l、硒與微晶纖維素直接混合均勻；或者將維生素E、輔酶Qltl、硒與微晶纖維素和十二烷 基硫酸鈉直接混合均勻；或者將在60°C水浴鍋中溶解后的維生素E、輔酶Qltl和卵磷脂加入 泊洛沙姆和硒的水溶液中；和(2)按照常規工藝制備成軟膠囊、片劑、硬膠囊或口服液。
7.—種如權利要求1 5任一所述的藥物組合物在制備提高生殖能力的藥物中的應 用，其特征在于，所述藥物組合物用于預防和治療由氧化應激、內分泌失調或環境因素誘導 而造成生殖障礙的藥品和保健品。
全文摘要
本發明涉及醫藥領域，提供了一種能提高生殖能力的藥物組合物及其制備方法和應用，所述藥物組合物包括維生素E、輔酶Q10和/或硒。所述藥物組合物作為一種新型高效抗氧化劑可用于預防和治療由氧化應激、內分泌失調或環境因素誘導而造成生殖障礙的藥品和保健品。本發明聯合應用傳統治療不孕不育藥物維生素E和新型治療藥物輔酶Q10和/或硒，應用不同的治療不孕不育的機理，提高精子的運動和活力、增加性激素的分泌、保護卵巢功能、提高免疫力以提高受孕的幾率和保證胎兒的營養，治療不孕不育癥更有效。與單獨使用本發明藥物組合物中的任何一種成分相比，本發明的藥物組合物不僅能有效地提高療效，同時又克服了單獨使用引起的缺陷。
文檔編號A61K31/731GK101879184SQ20091014399
公開日2010年11月10日 申請日期2009年6月5日 優先權日2009年5月7日
發明者候國枝, 易德平, 林愛弟, 王奎, 田治科, 繆丹丹 申請人:浙江醫藥股份有限公司新昌制藥廠