專利名稱：一種有抑菌、抗炎和止血作用的黎藥提取物及組合物和其制備方法
技術領域：
本發明屬于民族藥領域，具體涉及一種黎藥裸花紫珠提取物及組合物和制備方法 及其應用。
背景技術：
裸花紫珠為馬鞭草科紫珠屬植物裸花紫珠(Callicarpa nudiflora Hook. Et Arn.)，葉入藥，其味微苦、濯，性平；有抗菌、止血、消炎解毒和散瘀消腫的功能，是我國黎族 同胞的一種常用藥。國內外對紫珠屬植物包括裸花紫珠化學成分研究的報道較少，其化學成分主要有 黃酮類、萜類和揮發油類等。目前技術是將裸花紫珠葉采用水煎煮提取的方法得到浸膏后 加入輔料制成片劑或者膠囊等口服制劑，用于治療細菌感染引起的炎癥，急性傳染性肝炎， 呼吸道及消化道等腔道出血等癥，療效確切。但存在服用劑量大，有效成分不明確、質量標 準可控性差等缺點，難于滿足藥物“安全、有效、可控、穩定”的要求。目前，盡管有多種劑型 方便了患者的使用，但僅是簡單的劑型轉換，在技術上未有實質上的創新之處，尚不能用科 學的方法揭示其藥效物質基礎與作用機理，難于被國際市場所接受。
發明內容
為解決該成藥存在的上述缺陷，本發明對裸花紫珠葉中的有效部位進行了提取。 并對該黎藥提取物的化學成分進行了分析。實驗表明，使用本發明方法所提取的裸花紫珠 葉活性提取物，具有止血、抑菌、抗炎的功效，且無毒副作用，該提取物對細菌感染引起的炎 癥，急性傳染性肝炎，子宮、陰道、呼吸道及消化道等腔道出血具有確切的療效。因此，本發明目的之一在于，提供裸花紫珠葉的提取物，該提取物對細菌感 染引起的炎癥，急性傳染性肝炎，呼吸道及消化道出血具有治療作用。該提取物主 要化學成分為5，4' - 二羥基-3，7，3'-三甲氧基黃酮(5，4' -dihydroxy-3, 7, 3 ‘ -trimethoxyflavone) ( I )、5_ 羥基 _3，7，3 ‘ ,4'-四甲氧基黃酮(5_hydroxy-3， 7,3 ‘，4 ‘ -tetramethoxyflavone) ( II )、木犀草素(Iuteolin) ( III )、木犀草 素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖苷(luteolin-7-Ο-β -D-glucopyranoside) ( IV )；香草酸 (vanillic acid) ( V )、ρ-香豆酸(p-coumaric acid) ( VI )、咖啡酸(caffeic acid) (ΥΠ )、阿魏酸(ferulic acid) ( VDI)、原兒茶酸(protocatechuic acid) ( IX )、原兒茶醛 (protocatechuicaldehyde) ( X )等，允許有少量雜質存在。其結構式分別為 5，4' - 二羥基_3，7，3'-三甲氧基黃酮 4f _四甲氧基黃酮(5,4 ‘ -dihydroxy-3,7,3 ‘ -trimethoxyflavone) 4' -tetramethoxyflavone) 木犀草素(Iuteolin) 素-7-0-β-D-吡喃葡萄糖苷 香草酸(vanillicacid) (caffeic acid) 阿魏酸(ferulic acid) (protocatechuic aldehyde)
原兒茶酸(protocatechuic acid) 原兒茶酸該發明的另一目的是提供一種黎藥提取物的制備方法。本發明是通過以下技術方案予以實施
本發明中所述的裸花紫珠為馬鞭草科紫珠屬植物裸花紫珠(Callicarpa nudifloraHook. Et Arn.)的葉。本發明的黎藥提取物是通過以下步驟制成將裸花紫珠葉或經粉碎粉碎的葉，用溶劑提取法提取，提取液合并濾過后濃縮，得 粗提物。該粗提物使用吸附樹脂進行柱色譜，首先以水為洗脫劑進行洗脫，濃縮、干燥，得水 洗脫部分，然后以醇為洗脫劑進行梯度洗脫，對所得醇洗脫液減壓濃縮、干燥，得醇洗脫物， 即為本發明黎藥裸花紫珠提取物。優選地，裸花紫珠葉用溶劑提取的次數為3次。每次提取時間為0. 5-3小時，提取 溶劑可以為水或一定濃度的乙醇。優選的水洗脫劑的用量為藥材重量的10-20倍，優選醇洗脫劑的用量為藥材重量 的10-30倍。更為優選地，本發明所述黎藥提取物的制備方法包括以下步驟將裸花紫珠葉粉碎后，用溶劑提取3次，每次加入的溶劑用量為藥材重量的10-20 倍，每次提取時間是3小時。提取液合并濾過，濾液減壓濃縮，得到粗提物；將該粗提物用吸 附樹脂進行柱色譜，先以10-20倍重量的水進行洗脫得水洗脫部分；之后再以10-30倍重 量的10%-90% (體積比)的醇為洗脫劑進行梯度洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮、干燥即 得本發明黎藥提取物。洗脫溶劑為C1 C4的低級醇，最優選的為乙醇，濃度優選為30% 80% (體積比)。所用的吸附樹脂為大孔吸附樹脂，包括極性、中等極性至弱極性吸附樹脂，如 D101、D101B、D312、DM130、DM131、LK002、XDA-l、XDA-lB、AB-8、ZTC-I 等型號大孔吸附樹脂， 也可用類似性能的其他型號樹脂。本發明采用的制備方法優點是，除掉了大量的水溶性雜質，從而提高活性，降低毒 性，使活性成分更加集中，方法科學穩定，工藝簡單，適合工業化生產。本發明黎藥提取物的止血、抗菌等活性通過下述動物藥效學試驗得到證明。1.通過對小鼠凝血時間影響，對上述提取物的止血活性進行評價1. 1試驗材料裸花紫珠片(陽性對照藥物，每片相當于生藥材3. 68g)；水洗物(每克相當于生 藥材7. 76g)；裸花紫珠提取物(每克相當于生藥材10. 25g)。1. 2試驗儀器分析電子天平(北京瑞利，精密度0. Img)、注射器、毛細玻璃管(內 徑1mm、長IOcm)；載玻片、大頭針；濾紙；秒表。1. 3試驗動物昆明種小鼠1. 4試驗方法對小鼠凝血時間的影響(毛細玻管法).在室溫15°C下，取昆明種小白鼠，體重18_22g，雌雄各半，隨機分為4組，每組10 只。隨機分為空白、片劑、水洗物、裸花紫珠提取物，分別按0.5ml/20g灌胃給藥，空白對照 組給與同體積鹽水，1次/天，連續給藥7天，末次給藥后lh，小鼠夾固定，用內徑Imm的毛細 玻璃管(或一次性定量取血管)插入小鼠內眥球后靜脈叢取血，深約4-5mm，輕輕轉動，再回 縮。自血液流入管內開始計時，血注滿后取出毛細玻管平放于桌上，每隔30s從兩端折斷毛 細管一小段約0. 5cm，并緩慢向左右拉開，觀察折斷處是否有血凝絲，直至出現血凝絲為止，一旦出現血凝絲，從另一端折斷進行驗證，平均兩端出現血凝絲的時間，即為凝血時間。所 歷時間即為血凝時間。每組毛細管兩端數據平均值即為該鼠的血凝時間，計算縮短率。結 果見表1。1. 5試驗結果結果表明和空白對照組小鼠凝血時間相比，裸花紫珠片和水洗物、醇物組小鼠凝 血時間均有明顯縮短(P <0.01)。凝血時間縮短依次為裸花紫珠提取物、水洗物。結果提 示水洗物、裸花紫珠提取物均能促進小鼠血液的凝固，又以裸花紫珠提取物的效果較好。觀察結果見表1。表1 對小鼠凝血時間的影響 注:***P< 0. 012.通過采用紙片法測定抑菌圈，對上述提取物的抗菌活性進行評價2. 1試驗材料2. 1. 1藥物本發明所述粗提物(每克相當于生藥材4. 27g)；水洗物(每克相當于 生藥材7. 76g)；裸花紫珠提取物(每克相當于生藥材10. 25g)。2. 1. 2菌種金黃色葡萄球菌；枯草芽孢桿菌，購自沈陽軍區總醫院藥劑科藥檢室。2. 2試驗儀器滅菌的濾紙、滅菌環、培養皿、游標卡尺、無菌鑷子。2. 3 方法2. 3. 1菌液的制備分別刮取金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的培養基斜面用 0. 9%的無菌氯化鈉溶液稀釋成105-106cfu/ml的菌液備用。2. 3. 2供試品溶液的制備每份樣品分別按低濃度10mg/ml、中濃度50mg/ml、高濃 度100mg/ml加入無菌水或甲醇溶液備用。2. 3. 2試驗方法采用紙片法測定抑菌圈。分別吸取上述2種菌液各1ml，加到平皿 中，然后加入培養基制成含菌平板，將滅菌的濾紙片分別浸入到以上三種濃度的供試品中 及滅菌水和甲醇中制成供試液組和空白對照組，然后用無菌鑷子夾出平貼于含菌平板上， 每皿放濾紙片4片，分別為空白組、低、中、高濃度組，然后置37°C恒溫培養箱中培養24小時 后觀察結果，用游標卡尺測量抑菌圈大小。2. 4抑菌圈大小以從濾紙片邊緣開始計算，以毫米微單位，抑菌圈邊緣距離濾紙片 邊緣大于Imm即為有抑菌作用。試驗結果見表2.
表2.各樣品的抑菌結果 試驗結果表2可以看出(1)裸花紫珠提取物對金黃色葡萄球菌敏感，其他樣品均不敏感，裸花紫珠提取物 在中濃度時(50mg/ml)就顯示抑菌作用。(2)裸花紫珠提取物對枯草芽孢桿菌敏感，其他樣品均不敏感，裸花紫珠提取物在 高濃度(100mg/ml)時有抑菌作用。3.藥物一次口服最大耐受量試驗3. 1試驗材料裸花紫珠粗提物、水洗物、裸花紫珠提取物3. 2試驗儀器電子天平(北京瑞利，精密度0. Img)；3. 3試驗動物健康昆明種小鼠，體重18_22g，購自廣州實驗動物中心，分4組，13 只/組，以清潔固體飼料飼養，自由飲水，實驗前飼養2天，以適應實驗環境。3. 4試驗方法最大耐受量試驗根據動物預試驗結果提示該藥毒性較低，無法測出半數致死量 (LD 50)，故對受試藥物進行其最大耐受量(MTD)測定。取健康小鼠共52只，隨機均勻分為 4組。實驗前禁食不禁水12h。給藥組以0.5ml/20g體重一次性灌胃給藥，空白組用等量蒸 餾水灌胃，給藥后24h內密切觀察小鼠是否出現中毒反應，隨后每天觀察2次，直至10天結 束，觀察期保證喂養條件不變，發現死亡小鼠及時剖檢。3. 5試驗結果3. 5. 1 一般反應給藥后除空白對照組外，其它組小鼠出現輕度活動減少、閉眼倦 縮，個別表現來回走動，但無其他表現。3. 5. 2小鼠最大耐受量倍數2. 4g/20g X 50000g/30g = 200 (倍)3. 5. 3死亡情況表3實驗中各組小數死亡情況(只) 3. 5. 4解剖對實驗中途死亡的小鼠進行剖檢，肉眼觀察各主要臟器(心、肝、脾、 肺、腎、胃、腸、胸腺、睪丸、卵巢等)未見異常。3. 6 討論實驗結果表明當給藥量為120g/kg(以生藥材計)時，粗提物死亡2只，其余均未 見死亡。小鼠對粗提物的最大耐受量倍數小于200倍，而對水洗物和裸花紫珠提取物的最 大耐受量倍數均大于200倍，以上可看出水洗物和裸花紫珠提取物安全范圍比粗提物大， 安全性較好。上述藥理實驗結果表明按本發明技術方案制得的黎藥提取物(裸花紫珠提取 物)具有止血、抗菌的功能，且無毒副作用，對細菌感染引起的炎癥，急性傳染性肝炎，呼吸 道及消化道出血有明顯的治療作用。此外，本發明的目的還在于提供一種黎藥裸花紫珠提取物用于制備治療細菌感染 引起的炎癥，急性傳染性肝炎，呼吸道及消化道出血的藥物的應用。本發明的另一個中藥組合物含有本發明所述的裸花紫珠提取物，以及可藥用載 體。本發明藥物組合物的制備方法包括，將本發明所述的黎藥提取物與可藥用載體混合。本 發明所述的藥物組合物可以被制成片劑、膠囊劑、散劑和分散片等口服制劑。根據本發明所公開的技術內容，本領域技術人員將很清楚本發明的其它實施方 案，下述實施例僅作為示例。在不違反本發明主旨及范圍的情況下，可對本發明進行各種改 變和改進。這些改變和改進均應在本發明的保護范圍之內。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步的詳細描述。實施例1裸花紫珠提取物的制備例將裸花紫珠葉粉碎后，用溶劑提取3次，每次加入的溶劑用量為藥材量的10-20 倍，每次提取時間是3小時。提取液合并濾過，濾液減壓濃縮，得到粗提物；將該粗提物進行 DlOl吸附樹脂柱色譜，先以10倍量的水為洗脫劑進行洗脫得水洗脫部分；之后再以15倍 量的10% -90%的醇為洗脫劑進行梯度洗脫，收集醇洗部分洗脫液，減壓濃縮、干燥即得醇 洗脫物，即為裸花紫珠的提取物。實施例2本發明藥物組合物片劑制備的具體實施例。將實施例1所得的黎藥提取物1份，加入0. 5-1份淀粉，混勻，制粒，干燥，整粒，加 入硬脂酸鎂，壓片，即得片劑。實施例3本發明藥物組合物分散片的制備將實施例1所制得的黎藥提取物1份，加入0. 5-1份的淀粉作稀釋劑，加入0. 5-1 份的微晶纖維素作崩解劑，將上述混合物制粒(過20-12目)，烘干，加入適量硬脂酸鎂作助 流劑，混合均勻后將粉末直接壓制成片劑，即制得分散片。實施例4本發明藥物組合物膠囊劑的制備將實施例1所制得的黎藥提取物，噴霧干燥成干浸膏粉。干浸膏粉經粉碎，過 60-100目篩，取已過篩的該黎藥提取物細粉1份，加入淀粉0. 01-6. 5份作為充填劑，加入 1-3%硬脂酸鎂作助流劑，混合均勻后用空心膠囊充填，制得硬膠囊劑。實施例5本發明藥物組合物散劑的制備
將實施例1所制得的黎藥提取物，噴霧干燥成干浸膏粉。干浸膏粉經粉碎，過 60-100目篩，取已過篩的該黎藥提取物細粉1份，加入可溶性淀粉1-10份，加入1-10%甜 蜜素，按等量遞加混合法混合均勻，按容量法分劑量制得散劑。
權利要求
一種黎藥裸花紫珠提取物，其特征是通過以下步驟制得(1)將裸花紫珠葉粉碎后，用溶劑提取法提取，提取液合并濾過濃縮，得粗提取物；(2)使用吸附樹脂將所述粗提取物進行柱色譜，首先以水為洗脫劑進行洗脫，然后以醇為洗脫劑進行洗脫；(3)對所得醇洗脫液減壓濃縮，干燥，即得裸花紫珠提取物。
2.按照權利要求1所述黎藥裸花紫珠提取物，其特征在于所述步驟(1)中裸花紫珠 溶劑提取的次數為3次，每次提取時間為0. 5-3小時。
3.按照權利要求1所述黎藥裸花紫珠提取物，其特征在于所述步驟(2)中使用水洗 脫劑的用量為藥材重量的10-20倍，醇洗脫劑的用量為藥材重量的10-30倍。
4.按照權利要求1-3任一項所得該黎藥提取物含有以下化學成分5，4'-二羥 基_3，7，3'-三甲氧基黃酮、5-羥基_3，7，3'，4' _四甲氧基黃酮、木犀草素、木犀草 素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖苷、香草酸、ρ-香豆酸、咖啡酸、阿魏酸、原兒茶酸和原兒茶醛等， 允許有少量雜質存在，其化學結構式分別為
5.一種黎藥裸花紫珠提取物的制備方法，該方法包括以下步驟(1)將裸花紫珠葉粉碎后，用溶劑提取法提取，提取液合并濾過濃縮，得粗提取物；(2)使用吸附樹脂將所述粗提取物進行柱色譜，首先以水為洗脫劑進行洗脫，然后以醇 為洗脫劑進行洗脫；(3)對所得醇洗脫液減壓濃縮，干燥，即得中藥裸花紫珠提取物。
6.按照權利要求5的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中裸花紫珠溶劑提取的次 數為3次，每次提取時間為0. 5-3小時。
7.按照權利要求5的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中使用水洗脫劑的用量為 藥材重量的10-20倍，醇洗脫劑的用量為藥材重量的10-30倍。
8.含有權利要求1-7任一項所述的裸花紫珠提取物在制備治療細菌感染引起的炎癥， 急性傳染性肝炎，子宮、陰道、呼吸道及消化道等腔道出血藥物中的應用。
9.一種裸花紫珠組合物，含有權利要求1-4任一項所述黎藥裸花紫珠提取物以及可藥 用載體。
10.根據權利要求9的組合物，其特征在于將所述組合物制成片劑、膠囊劑、散劑和分 散片等口服制劑。
全文摘要
本發明提供了一種有抗菌、抗炎及止血作用的黎藥裸花紫珠提取物及其制備方法以及含有該活性提取物的藥物組合物。該提取物以及含有該提取物的藥物組合物用于治療細菌感染引起的炎癥，急性傳染性肝炎，呼吸道及消化道等腔道出血，并且無毒副作用。用它可以制備成任何一種用來治療細菌感染引起的炎癥，急性傳染性肝炎，子宮、陰道、呼吸道及消化道等腔道出血的口服制劑。
文檔編號A61K127/00GK101890114SQ20091014277
公開日2010年11月24日 申請日期2009年5月23日 優先權日2009年5月23日
發明者劉明生, 張俊清, 張鵬威, 董琳 申請人:海南省南藥黎藥研究院