專利名稱：：胸腺5肽的新用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種胸腺肽，尤其是涉及一種胸腺5肽的新用途。
背景技術：
：胸腺肽的臨床應用始于20世紀70年代中期，其最主要的貢獻是對胸腺依賴性疾病的治療，它對于維持原發性免疫缺陷病，自身免疫疾病和癌癥患者的免疫反應性，剌激其特異性淋巴細胞的活性起著主要作用，因此廣泛應用于治療系統性紅斑狼瘡、白塞氏綜合征、類風濕性關節炎、重癥感染、支氣管哮喘、急慢性肝炎和腫瘤等疾病。另外，由于人類的老化明顯地反映胸腺組織的萎縮和功能的衰竭，胸腺肽可以推遲一些老年性疾病的出現，因此應用胸腺肽抗衰老也有著極其廣闊的前景([l]GoldsteinAL，GaraciE.CombinationTher即iess[M].NewYork:springer,1993:39-48;[2]劉治軍，呂俊玲，田國濤，等.胸腺肽研究進展及臨床應用[J].首都醫藥，2003，10(10):40;[3]BelaB，BelaBJ，StuartE，etal.Reviewofthymichormonesincancerdiagnosisandtreament[J].IntJI匪nopharma，2000，22(4):261)。隨著研究的深入，人們已經將研究重點轉向胸腺素中的單一肽，以期發現更有效的臨床治療藥物。"胸腺5肽"(TP-5)是由精氨酸、賴氨酸、天門冬氨酸、纈氨酸及酪氨酸5種氨基酸組成，其結構如下H2N-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH，化學名稱N-[N-[Na-[Na-L_精氨酰-L-賴氨酰]-L-a-天門冬氨酰]-L-纈氨酰]-L-酪氨酰。結構式Arg-Lys-Asp-Val-Tyr，分子式C30H49N909。TP-5具有免疫雙向調節功能，具有誘導和促進T淋巴細胞及其亞群分化、成熟和活化的功能，調節T淋巴細胞的比例，使CD4+/CD8+趨于正常；調節和增強人體細胞免疫功能的作用，能促使有絲分裂原激活后的外周血中的T淋巴細胞成熟，增加T細胞在各種抗原或致有絲分裂原激活后各種淋巴因子(如a、Y干擾素、白介素2和白介素3)的分泌，增加T細胞上淋巴因子受體的水平。它同時通過對T輔助細胞的激活作用來增強淋巴細胞反應。此外可能影響NK前體細胞的趨化，該前體細胞在暴露于干擾素后變得更有細胞毒性，有利于發揮其治療作用。目前已經有人應用胸腺5肽治療伴免疫功能低下的II型糖尿病患者。I型糖尿病的重要原因與自身免疫疾病密切相關，其中主要是因為胰島13細胞受到自身免疫細胞的攻擊，造成抗原暴露，引起免疫系統進一步的反應，使得胰島P細胞大量損失，正常胰島素的分泌受到影響，血糖升高，形成糖尿病癥狀。STZ(鏈脲佐菌素)在I型糖尿病模型制備中已經得到廣泛應用，大鼠在50mg/kg—次性注射情況下并可以造模成功，而小鼠則在相同劑量經過5次連續注射后基本達到造模目的，目前認為STZ的作用機理是通過使機體產生過量的NO，攻擊破壞胰島13細胞，引起胰島細胞抗原暴露，激活機體免疫機制，大量巨噬細胞進入胰島細胞從而加劇胰島細胞的損傷，最后造成胰島素分泌減少，引起血糖增高，誘發糖尿病。誘導的小鼠胸腺萎縮，腎臟明顯腫大，并且血清抗氧化能力顯著下降([4]劉長青，宋立江，蔣東升，等-鏈脲佐菌素穩定性對小鼠糖尿病模型的影響.實用預防醫學，2008，15(3):896-897;[5]吳清洪，顧為望，袁進.鏈脲佐菌素誘導建立I型糖尿病大鼠模型.動物醫學進展，2006，27(8):114-116)。近年來，糖尿病的病因和發病機理研究表明氧化應激與糖尿病的發生和發展密切相關([6]曹文彬等.抗氧化微量營養素防治糖尿病的研究進展.長春中醫藥大學學報，2006，22(2):73-74)，為了防止糖尿病的發生發展，人們對一些具有防治糖尿病作用的天然抗氧化物進行了系統的研究，發現它們通過表達不同的機制與作用環節打斷氧化侵襲引致胰島P細胞損害的惡性循環，從而為天然抗氧化治療糖尿病提供了一個新的策略。至今未見有關胸腺5肽在調節血糖和保護胰島的功能的相關報道。
發明內容本發明的目的在于提供一種胸腺5肽的新用途。通過動物實驗證實，胸腺5肽能夠明顯增強小鼠的糖耐量作用，并且能夠明顯抵抗STZ誘導小鼠糖尿病的發生。組織切片發現，TP-5對于保護胰島細胞結構有重要作用，因此胸腺5肽可用于維持正常糖代謝，保護胰島細胞結構和功能，可用于制備預防糖尿病藥物。通過動物體內實驗證明，TP-5具有很好的抵抗STZ誘導的糖尿病的發生，表現出很好的抵抗糖尿病誘發因素的影響，并且具備增強糖耐量作用的功能，電鏡超微結構結果證明，TP-5在保護胸腺結構和胰島結構方面效果明顯，并且在胰島分泌方面也有促進作用，具體表現為胸腺細胞結構緊密，線粒體結構清晰，嵴狀結構明顯，而對照組胸腺結構出現排列不整齊，細胞凋亡現象明顯，線粒體結構模糊，嵴狀結構出現脫落，胰島結構發現對照組圓形分泌顆粒致密顆粒出現空泡，而用藥組致密顆粒多，空泡現象不明顯。結果證明，TP-5在抵抗糖尿病的發生中具有重要保護作用，為今后開發糖尿病基因工程潛在藥物奠定基礎。圖1為皮下注射TP-5對小鼠抵抗STZ誘導糖尿病的作用(TP-5與STZ同時注射)。圖2為皮下注射TP-5對AUC的效果。圖3為皮下注射TP-5對糖耐量的影響。圖4為TP-5處理組胸腺電鏡圖。圖5為TP-5處理組胸腺電鏡圖。圖6為對照組胸腺電鏡圖。圖7為對照組胸腺電鏡圖。圖8為對照組胰島電鏡圖。圖9為TP-5處理組胰島電鏡圖。具體實施例方式以下實施例將結合附圖對本發明作進一步的說明。實施例所采用的材料與方法說明如下。實驗取材和主要生物試劑如下試驗動物為C57BL/6小鼠，(20±2)g，6-7周齡，雄性，SPF級，小鼠60只，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，合格證號SCXK(滬)200320003。昆明鼠，雄性SPF級，由廈門大學動物研究中心提供。單籠喂養，室溫1825t:，相對溫度50%80%，每日光照12h，自由攝食、飲水。鏈脲佐菌素(str印tozotocinSTZ，SIGMA.USA)，批號053K1569;擰檬酸(成都鴻鶴化工試劑廠)，批號20040821。血糖檢測儀為強生公司Llifscan產品及配套檢測試紙。以下給出2個實施例。實施例1將20只C57BL/6小鼠平均分為2組，每組10只，1組皮下途徑給TP_5，一組以相同體積檸檬酸緩沖液作為對照組。給藥的同時腹腔注射STZ，每天一次，按50mg/kg劑量，連續4天，自注射STZ后，第5，20和30天尾靜脈測血糖。結果見表1以及圖1、49。表1皮下注射TP-5對小鼠抵抗STZ誘導糖尿病的作用(TP_5與STZ同時注射)(C57BL/6小鼠)項目注射STZ后各個時間段血糖值mmol/L5d20d30dcontrol9.36±2.2520.52±5.2816息3.56TP-5(10ng/只)8.42±0.879.38±0.87**11.06±2.57**:與對照組相比，P<0.05，差異顯著；**:與對照組相比，P<0.01差異極顯著。實施例2將20只昆明小鼠平均分為2組，每組10只，1組皮下途徑給TP-5，一組以相同體積檸檬酸緩沖液作為對照組。連續14天，第14天進行糖耐量實驗。結果見表2以及圖2和3。表2皮下注射TP-5對增強小鼠糖耐量作用的效果(昆明小鼠)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>*:與對照組相比，P<0.05，差異顯著；**與對照組相比，差異極顯著。糖耐量實驗按以下公式計算AUC=0.25X(BSvalueat0hour+4XBSvalueat0.5hours+3XBSvalueat2hours)。本實驗所有數據通過SPSS(version13.0，SPSSInc.)軟件進行分析處理。胸腺5肽由海南中和藥業股份有限公司提供，lmg/瓶，選擇昆明小鼠和C57BL/6小鼠為實驗動物，皮下注射途徑給藥，驗證該藥的生理功能。TP-5的一種新功能的實驗方法包括以下步驟1)通過皮下注射途徑將胸腺5肽按10iig/只劑量給藥；2)每隔5天稱小鼠體重；3)14天后測小鼠空腹血糖及進行糖耐量實驗；4)TP-5皮下注射的同時，小鼠經腹腔注射STZ，每天一次，按50mg/kg劑量，連續4天，自注射STZ后，在第5天，20天和30天測血糖。權利要求胸腺5肽用于制備預防糖尿病藥物。全文摘要胸腺5肽的新用途，涉及一種胸腺肽。提供一種胸腺5肽的新用途。通過動物實驗證實，胸腺5肽能夠明顯增強小鼠的糖耐量作用，并且能夠明顯抵抗STZ誘導小鼠糖尿病的發生。組織切片發現，TP-5對于保護胰島細胞結構有重要作用，因此胸腺5肽可用于維持正常糖代謝，保護胰島細胞結構和功能，可用于制備預防糖尿病藥物。文檔編號A61K38/08GK101693104SQ20091011261公開日2010年4月14日申請日期2009年10月1日優先權日2009年10月1日發明者周克夫,王世媛,韓偉申請人:廈門大學;廈門伯賽基因轉錄技術有限公司;