專利名稱：甘草苷芹糖制劑的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬藥物用途，涉及甘草苷芹糖制劑的用途，具體涉及甘草苷芹糖在制備治療鎮咳、祛痰和平喘藥物中的應用。
背景技術：
隨著全球經濟的發展，工業與民用污染源不斷增加，加之環境治理不力等因素，呼吸系統疾病的發病率呈明顯上升趨勢，其引起的死亡率也逐年上升。不過，這也給生產呼吸系統疾病藥物的企業創造了更廣闊的市場空間。咳嗽、痰多和喘息是呼吸系統疾病的主要癥狀，應用鎮咳、祛痰和平喘藥是對癥治療的重要手段。合理應用鎮咳藥不僅可以減輕病人的痛苦，并可防止并發癥的發生和原發疾病的進一步惡化。在中國藥品市場中，鎮咳、祛痰和平喘藥每年的市場份額約為300億元。因此，從中藥中尋找和提取鎮咳、祛痰和平喘藥具有良好的社會效益和經濟效益。
發明內容
本發明的目的是提供一種甘草苷芹糖在制備治療鎮咳、平喘和祛痰藥物中的應用。所述制備以甘草苷芹糖單獨或與其它活性組份或輔料配合制成，制劑中以1000粒計，含甘草苷芹糖30克。初步的藥理實驗證實本發明的甘草苷芹糖可以改善急、慢性咳嗽、痰多和喘息癥狀。
本發明通過2種動物鎮咳試驗模型，枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽模型和辣椒素引起的小鼠咳嗽模型。證明了甘草苷芹糖抑制枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽反應和辣椒素引起的小鼠咳嗽反應，提示甘草苷芹糖具有很強的鎮咳作用；通過2種動物祛痰試驗模型，小鼠氣道酚紅排泄模型和蛙上腭和食道纖毛運動模型。證明了甘草苷芹糖促進小鼠氣道酚紅排泄，增強蛙上腭和食道纖毛運動，提示甘草苷芹糖具有很強的祛痰作用；通過3種離體豚鼠氣管平滑肌試驗方法，證明了甘草苷芹糖可直接松弛離體豚鼠氣管平滑肌，呈量效關系松弛CCH引起離體豚鼠氣管平滑肌收縮反應，抑制CCH收縮的趨勢，提示甘草苷芹糖具有很強的平喘作用。
本發明所述甘草苷芹糖的英文名liquiritin apioside，分子式C26H30O13，分子量550，結構式
本發明是以甘草苷芹糖為主要活性成分，單獨或加入常規的賦形劑、調味劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤劑、粘合劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔料，制成任何一種適于臨床上使用的劑型，如膠囊劑、片劑、口服液體劑等。
本發明的另一個目的是提供甘草苷芹糖在制備改善咳嗽、痰多和喘息癥狀的保健食品中的應用。甘草苷芹糖來源于天然植物，因此，可以將甘草苷芹糖制成保健食品，用于咳嗽、痰多和喘息癥狀的改善。
甘草苷芹糖(Liquiritin apioside)是從甘草總黃酮中分離純化獲得的一個天然藥物，屬于二氫黃酮類。至今為止尚未見有它制備成藥品和治療任何疾病或癥狀的報道。我們從甘草總黃酮中分離純化，經四大圖譜(紅外、紫外、質譜、核磁共振)檢測，證明它為甘草苷芹糖，分離純化的程度達到了99％以上。通過對甘草苷芹糖主要藥效學的評價，證實了甘草苷芹糖具有平喘、鎮咳和祛痰藥效，且證實其藥效明顯強于甘草黃酮，作用強度是甘草黃酮10倍以上。本發明提供的甘草苷芹糖來源于天然植物，原料來源豐富，制備成本低，藥物毒副作用小，適于實用，為臨床治療急、慢性咳嗽、痰多和喘息癥狀提供優選天然藥物。
圖1是制劑處方組成篩選溶出度曲線。
圖2是甘草苷芹糖吸濕性曲線。
圖3是甘草苷芹糖膠囊制劑制備工藝流程圖。
圖4是甘草苷芹糖片對離體豚鼠氣管平滑肌直接松弛作用。
圖5是甘草苷芹糖片對CCH引起離體豚鼠氣管平滑肌收縮的解痙作用。
圖6是甘草苷芹糖片對CCH引起豚鼠離體氣管平滑肌的抑制作用。
圖7是甘草苷芹糖片對CCH引起豚鼠離體氣管平滑肌的解痙作用。
具體實施例方式 本發明結合附圖和實施例作進一步的說明。
實施例一、甘草苷芹糖膠囊處方及制備工藝 1處方
2 處方依據及處方的篩選過程 2.1 處方依據 根據藥效學試驗制訂甘草苷芹糖膠囊，規格甘草苷芹糖含量30mg/粒。
淀粉本方中為玉米淀粉，色澤好，吸濕性弱，產量大，價格低；為白色細微粉末，不溶于水和乙醇，在空氣中很穩定，與大多數藥物不起作用，吸濕而不潮解，遇水膨脹，為最為廣泛的稀釋劑和崩解劑，本方中主要用作稀釋劑崩解劑。
羥丙基纖維素(L-HPC)本品為白色或白色或結晶性粉末，在水中不溶但可吸水溶脹，由于L-HPC粉末有很大的比表面積和孔隙率，故有較大的吸濕速度和吸水量，增加了膨脹性。本品用量，一般可為1％-5％左右，本方中用量為2％。
微粉硅膠，本品為輕質的白色粉末，無臭無味，不溶于水及酸，化學性質穩定，與絕大多數藥物不發生反應，良好的流動性，對藥物有較大的吸附力，親水性能強，有利于藥物的吸收，本品用量一般僅為0.15％-3％，因為主藥甘草苷芹糖流動性差，本方中用于改善顆粒的流動性，用量為1.5％。
硬脂酸鎂為白色粉末，細膩輕松，有良好的附著性，顆粒混合后分布均勻而不易分離，僅少量即可顯示出良好的潤滑作用，一般用量為0.3％-1％，本方中用量為0.5％。
2.2 處方的篩選過程 設計以下三個處方(1000粒)規格30mg/粒表1-1
按照以上三個處方試制樣品，并進行以上處方篩選試驗。
(1)、進行溶出度試驗 ①、測定方法 按中國藥典2000年版第二部甘草苷芹糖膠囊溶出度測定法(附錄XC第二法)操作，以0.1mol/L醋酸鹽緩沖液(取無水醋酸鈉82g加水7500ml，用冰醋酸pH值至5.0，加水使成10000ml)為溶劑，轉速為每分鐘50轉，依法操作，按時取溶液經0.8μm微孔濾膜濾過，取續濾液在482nm處測定吸收度，計算溶出百分率。
②、溶出度測定結果 分別取供試品，按測定方法測定溶出度，取樣時間5，10，15，20，25，30，45，60min，結果見表1-1 1-2 三個處方溶出度測定結果
根據上表對應的溶出度結果見表1-3及圖1。
表1-3 溶出度測定結果(n＝6 X±S)
結果表明處方3在20分鐘溶出度可達到86.8％，30分鐘溶出度幾乎達到最大。處方1、處方2在20分鐘吸光度僅有60分鐘的60％，30分鐘時溶出度為85％。根據中國藥典在30分鐘時溶出度達到80％，它們都符合藥典要求。
由此可見，處方3中低取代羥丙基纖維素(L-HPC)的用量僅為2％，溶出速率明顯快于處方1、處方2，可見本方3中加入L-HPC之后，有助于膠囊的崩解而加快了主藥甘草苷芹糖溶出。
(2)、休止角試驗 按處方1、2、3制成顆粒，經口徑7cm的長頸漏斗流下，并呈圓錐形狀，測其休止角，結果見表1-4 表1-4
可見處方2、3的休止角小于處方1，說明處方2、3的流動性好于處方1。
結論微粉硅膠能顯著改善顆粒的流動性能。
綜上所述，處方3的溶出度、流動性好于處方1、2，所以選定處方3。
3 生產工藝 3.1 制備方法 制法稱取處方量的甘草苷芹糖、淀粉、和L-HPC混合，過60目的篩三次，混合均勻；加入10％的淀粉漿適量制軟材，用16目制粒，600C干燥，用16目整粒后，加入微粉硅膠、硬脂酸鎂混合均勻，用0號膠囊制成1000粒。
3.2 工藝條件的篩選 按處方進行試制1000粒樣品。
3.2.1 堆密度試驗 將試制的顆粒裝入100ml量筒中，以一定的高度落下兩次，(每次保持條件一致，松緊適宜，稱其重量計算其堆密度，結果見表2-1 表2-1 堆密度試驗數據(n＝3)
因此，根據以上數據可知，顆粒平均堆密度是0.46g/ml，每粒裝量要求為30m，所以選擇5號膠囊。
3.2.2 吸濕性試驗 考察環境濕度對膠囊填充過程中影響程度，為此測定了顆粒的吸濕性。
稱取顆粒12份，每份約2g，精密稱定，將其置于不同相對濕度環境下放置7天，測其重量變化，結果見表2-2及圖2吸濕曲線。
表2-2 吸濕性測定數據表(n＝2)
相對濕度在40-90％條件下顆粒重量基本沒有變化，吸濕性沒有明顯增加。因此，可確定該品種的相對濕度要求不嚴格，在一般的生產環境下可以生產。不會因為水分對藥物性質及穩定性造成影響。
4 工藝流程參見圖3。
二、甘草苷芹糖緩釋放片處方及制備工藝 1 制劑處方組成 1.1 每1000片含下列物質 甘草苷芹糖 30g 硬脂酸 40g HMPC200g 聚乙烯吡咯烷酮(K30) 80g 30％丙烯酸樹脂IV號 適量 1.2 包衣液處方 (Y-1-7000) 60g(類白色) 乙醇1000ml 2.制備工藝 2.1 粘合劑的配制 精密稱取丙烯酸樹脂IV號適量，用95％乙醇配制成濃度為30％的溶液，備用。
2.2 片芯的制備 取處方量主藥甘草苷芹糖與輔料硬脂酸、HMPC、聚乙烯吡咯烷酮充分混勻后過60目篩，加入30％丙烯酸樹脂IV號適量，制成干濕適中的軟材，24目篩制粒，50℃烘干30分鐘，24目篩整粒，測定顆粒含量合格后，壓片即得。
2.3 包衣 2.3.1 包衣的依據 甘草苷芹糖緩釋片為薄膜衣片，同時考慮到美觀等因素，本品制成薄膜衣片。
2.3.2 包衣液的配制 稱取(Y-1-7000)適量，緩緩加入70％的乙醇溶液中，配制成6％的包衣液，在磁力攪拌器上不停地攪拌，直至完全溶解，即得。
2.3.3 取素片置包衣鍋內，鍋轉速每分鐘30～40轉，鍋內溫度為40～50℃，不間斷噴包衣液至素片上，直至均勻包上一層薄膜衣，干燥即得。
2.4 臨界相對濕度的測定 在一定溫度下，取按處方和工藝制得的顆粒適量，分別放置在不同的飽和鹽溶液中，放置5天后，取出稱重，以不同的飽和鹽溶液的相對濕度作橫坐標，顆粒在不同的飽和鹽溶液中增重百分率作縱坐標，作曲線圖，并作曲線的切線，所得兩切線的交點為臨界相對濕度，且從圖得出臨界相對濕度為74％。測定結果見下表3-1。
表3-1 臨界相對濕度的測定 本品顆粒的臨界相對濕度為74％(>50％)，說明本品顆粒在密封條件下不吸濕。
3.處方依據 3.1 劑量的確定 甘草苷芹糖緩釋片其規格為30mg/片，本品臨床上常規用量為每日30～90mg，在確定本品的劑量時，并考慮到方便病人服用，便于劑量調節，故確定為每片含甘草苷芹糖30mg。
3.2 處方篩選 3.2.1 輔料的干擾性試驗 選擇在333nm波長處無吸收干擾的輔料如HMPC、聚乙烯吡咯烷酮、糊精、淀粉、甘露醇、硬脂酸、丙烯酸樹脂等，按處方配比取一片量輔料，加入容器中照含量測定項下方法，測定定量溶液的吸收度，實驗結果表明在333nm波長處輔料無吸收。
3.2.2 處方篩選過程 甘草苷芹糖可溶于水，為了使藥物緩慢釋放，有效血藥濃度能維持較長時間，以達到較好的治療目的，因此，我們制成甘草苷芹糖緩釋片，為骨架型。目前國內常用的緩釋材料有聚乙烯吡咯烷酮、乙基纖維素、硬脂酸、羥丙甲纖維素、丙烯酸樹脂等。以每片含甘草苷芹糖30mg，采用上述控釋材料中的一種或數種以及不同規格、不同用量組方，進行體外釋放度試驗，從十多個緩釋處方中發現1、2號處方緩釋效果較好，但2號處方體外釋放度最好，且顆粒的可壓性、流動性和處方的重現性均佳，故確定處方2為本緩釋片處方。
處方篩選過程如下表表3-2 3.2.3 試制的三批樣品檢測結果 根據確定的處方和制備工藝，試制了三批樣品，檢測結果如下 表3-3 從三批試制樣品檢測結果表明該品確定的處方和制備工藝可行。
3.2.4 以pH6.8的磷酸鹽緩沖液作為本品的釋放介質，方法采用轉籃法(中國藥典2000年版二部附錄XC第一法)，轉速為每分鐘100轉，取樣點為1小時、3小時和10小時，據此我們重新測定了三批樣品及進口片的釋放度，結果如下 表3-4 從三批試制樣品檢測結果表明該品確定的處方和制備工藝可行。
同時對試制的樣品(080906)進行了影響因素試驗(光照試驗、高溫試驗、高濕試驗)，方法與結果如下 (1)光照試驗 在室溫條件下，本品去除外包裝將樣品平攤在平皿里，在4500lux光強度下放置5、10天后取樣檢測。結果見表4-1。
(2)高溫試驗 本品去除上市包裝分別于60℃的烘箱中放置5、10天后取樣檢測。結果見表4-2。
(3)高濕試驗 本品去除上市包裝分別放入恒濕器皿中，于25℃、相對濕度92.5％敞口放置考核5、10天后取樣檢測。結果見表4-3。
表4-1 光照試驗結果
*指片芯色澤，薄膜衣均無變化(下同) 表4-2.高溫試驗結果
表4-3.高濕度試驗結果
4.各輔料在處方中的作用 4.1 A具有疏水性，阻止藥物的釋放。
4.2 羥丙甲纖維素為親水性高分子纖維素材料，遇水形成凝膠，降低水向片內滲透的速率，延緩藥物的釋放，具有緩釋作用。國內外已廣泛用于緩控釋制劑。
4.3 聚乙烯吡咯烷酮為親水性高分子材料，遇水形成凝膠，降低水向片內滲透的速率，延緩藥物的釋放，具有緩釋作用。國內外已廣泛用于緩控釋制劑 4.4 丙烯酸類樹脂商品名為“Eudragit”，因其取代基不同分成各種型號，國外已廣泛用來作為控緩釋制劑的材料，也用作腸溶衣材料，本處方選擇其作為粘合劑，利用其成膜性包裹藥物，阻止藥物在胃內釋放速率。
4.5 B為潤滑劑。
4.6 Opadry薄膜衣材料，主要成份為羥丙甲纖維素。
5.原輔料來源及質量標準 5.1 甘草苷芹糖本實驗室提取純化，含量純度為99％以上。
5.2 A符合中國藥典1995年版，上海延安油脂化工廠生產。
5.3 羥丙甲纖維素符合美國藥典(USP XXIII)，由上海Colorcon公司提供。
5.4 聚乙烯吡咯烷酮符合美國藥典，沈陽東北制藥總廠生產。
5.5 丙烯酸樹脂IV符合中國藥典1995年版，由連云港制碘廠生產。
5.6 B符合中國藥典1995年版，由上海葡萄糖廠生產。
5.7 Opadry符合英國藥典，由上海Colorcon公司提供。
三、藥效學研究 參照國家食品藥品監督管理局《新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編(藥學藥理學毒理學)》，設計了本實驗方案。選用2種鎮咳藥實驗動物模型、2種祛痰藥實驗動物模型和3種平喘試驗方法，對甘草苷芹糖膠囊或片劑進行了平喘、鎮咳和祛痰方面的研究。試驗材料、方法和結果如下 1.材料 藥品與試劑 (1)枸櫞酸上海化學試劑一廠，批號20070201，用蒸餾水配制成15％的濃度備用； (2)磷酸可待因片青海制藥廠，批號20060615；蒸餾水配制成0.5mg/ml混懸液； (3)Capsaicin(辣椒素)Sigma Chemical Company，lot123H78341，新鮮配制稱取Capsaicin 3mg，用10％乙醇1ml溶解，加10％吐溫801ml，研磨后加水至100ml。
(4)地西泮注射液江蘇濟川制藥有限公司，批號20060309； (5)酚紅試劑上海化學試劑三廠；批號20070615；精密稱取酚紅試劑2g，加生理鹽水至80ml。由于酚紅在生理鹽水不能完全溶解，因此置超聲波洗滌器內超聲溶解30min，使酚紅顆粒均勻，配制成0.25％酚紅懸液。
(6)氫氧化鈉浙江蕭山化學試劑廠，批號20060726； (7)carbamylcholineSigma Chemical Company，lot0834 (8)異丙腎上腺素上海信宜制藥業有限公司，批號20070212 (9)甘草苷芹糖膠囊或片劑自制，批號20080206；將甘草苷芹糖10粒膠囊或片劑的原料藥加蒸餾水至100ml。整體試驗劑量以mg/kg表示，離體試驗以mol濃度。
動物 (1)Hartley品系豚鼠，體重350-500g，雌雄不拘。(2)ICR品系小鼠，體重18～22g，雌雄各半。購于浙江大學實驗動物中心，合格證號220010014。所有的操作和實驗流程均遵守《實驗動物管理條例》。動物在實驗前均自由進食和進水。(3)青蛙，體重25～45g，雌雄不拘。購于市場。
2、方法 2.1、枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽試驗 2.1.1 分組共分5組，每組8～9只豚鼠，雌雄不拘。具體分組情況如下 A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水灌胃給藥 B.甘草苷芹糖 3mg/kg C.甘草苷芹糖 10mg/kg D.甘草苷芹糖 30mg/kg E.可待因 10mg/kg 2.1.2 篩選豚鼠用超聲波霧化器氣霧15％枸櫞酸2min后，10min內咳嗽次數在10次以上的豚鼠作為實驗豚鼠，棄去10次以下的豚鼠。24h后給豚鼠灌胃給藥(ig)，進行藥物鎮咳試驗。
2.1.3 給藥劑量和容積所有試驗豚鼠均在枸櫞酸引咳前30min給藥1次。采用等容不等量灌胃給藥(ig)。
2.1.4 實驗步驟將豚鼠放入20×10×10cm體積描記盒中，用高靈敏度壓力換能器將豚鼠呼吸頻率和容積信號輸入微機Pclab生物信號采集系統，記錄豚鼠咳嗽次數。豚鼠放入體積描記盒穩定1min后，用超聲波霧化器氣霧15％枸櫞酸2min，計數自氣霧開始10min內的咳嗽次數，每一次咳嗽均以聽到豚鼠咳嗽聲音和微機Pclab上見到的明顯的咳嗽記錄結合分析。
2.2、辣椒素誘導小鼠咳嗽試驗 2.2.1 分組ICR小鼠，體重25-30g，♀
各半。共分5組，每組動物數見表2，雌雄不拘。具體分組情況如下 A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水灌胃給藥 B.甘草苷芹糖 6mg/kg C.甘草苷芹糖 20mg/kg D.甘草苷芹糖 60mg/kg E.可待因 20mg/kg 2.2.2 篩選小鼠將小鼠放入特制的體積描記器中穩定1min后，用超聲波霧化器氣霧30μmol/L辣椒素溶液15sec，即刻描計3min內的咳嗽次數，3min內咳嗽次數在10次以上的小鼠作為實驗小鼠，棄去10次以下的小鼠。24h后給小鼠灌胃給藥(ig)，進行藥物鎮咳試驗。
2.2.3 給藥劑量和容積所有試驗小鼠均在枸櫞酸引咳前30min給藥1次。采用等容不等量ig。
2.2.4 實驗步驟辣椒素引咳前，每鼠ip地西泮0.5mg/只，以減少小鼠活動所引起的實驗觀察記錄干擾。實驗時將小鼠放入特制的體積描記器中穩定1min后，用超聲波霧化器以1ml/min霧化30μmol/L辣椒素溶液15sec，用壓力換能器將小鼠呼吸頻率和容積信號傳入微機Pclab生物信號采集處理系統，記錄小鼠在3min內的咳嗽次數。每一次咳嗽均以聽到小鼠咳嗽時張嘴表現和微機Pclab上見到的明顯的咳嗽記錄結合分析。
2.3、小鼠氣道酚紅分泌試驗 2.3.1分組共分6組，每組9～12只小鼠，雌雄各半。具體分組情況如下 A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水灌胃給藥 B.甘草苷芹糖 6mg/kg C.甘草苷芹糖 20mg/kg D.甘草苷芹糖 60mg/kg E.甘草苷芹糖 120mg/kg F.氨溴索 200mg/kg 2.3.2 給藥劑量和容積所有試驗小鼠饑餓過夜，均在注射酚紅前30min給藥一次。采用等容不等量ig。
2.3.3 實驗步驟2.5％酚紅置電磁攪拌器上邊混合邊注射，2.5％酚紅0.2ml/10g體重ip，30min后脫臼處死動物，低溫放置1h，待小鼠僵硬時解剖氣管(避免分離氣管時出血)，分離氣管，取喉結下至肺門的主氣管，每一氣管放置一支5ml試管內，加生理鹽水1.0ml，震蕩洗滌30min后，加0.1ml 1mmol/L NaOH，混勻后150g離心10min，取上清液于酶標儀(BIO-TEK，ELX800，USA)520nm測定含量。標準曲線繪制取12.5μg/ml酚紅倍比稀釋成5個濃度0.78、1.56、3.13、6.25、12.5μg/ml濃度酚紅液在酶標儀520nm測得的A值繪制標準曲線。
2.4、蛙上腭和食道粘膜纖毛運動試驗 2.4.1 分組 A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水加入 B.甘草苷芹糖1×10-9～1×10-6mol/L4個濃度 C.陽性對照藥乙酰膽堿組1×10-10～1×10-7mol/L4個濃度 2.4.2 實驗步驟將毀腦和脊髓后的蛙固定于板上，分離口腔上腭至食道末端的粘膜，取2.5×1.5cm粘膜平貼于板上，加以固定，定時以任氏液濕潤粘膜表面。每只試驗的蛙食道粘膜均先用活性炭(半粒芝麻大小)測定一次2cm長度的運動時間，作為粘膜標本的篩選，剔除運動時間<80sec、>150sec的標本。篩選合格的粘膜標本以含受試藥物的任氏液濕潤，用同樣大小的活性炭粒再測定一次運動2cm長度的運動時間作為用藥后所需要的運動時間。
2.5、豚鼠離體氣管平滑肌收縮和松弛試驗 2.5.1 分組Hartley豚鼠，
♀兼用，體重361±20g A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水加入 B.甘草苷芹糖1×10-7～1×10-4mol/L5個濃度 C.陽性對照藥麻黃堿組1×10-7～1×10-4mol/L5個濃度 5.5.2 實驗步驟擊昏豚鼠，動脈放血致死，立即分離并取出氣管，置含氧的Krebs液中，制備成氣管標本。然后將標本置37℃ Krebs液水浴槽內，通氧氣，氣管平滑肌靜息張力為1g。張力變化通過張力換能器輸入PCLab生物信號采集處理系統。標本穩定1h后開始實驗。
5.2.1 對氣管平滑肌直接松弛作用氣管平滑肌標本在浴槽內穩定1h后，分別以10-9～10-3mol/L累積劑量加藥法加入甘草苷芹糖和麻黃堿藥物后，然后再加入10-6mol/L異丙腎上腺素，使其達最大松弛。計算時以10-6mol/L異丙腎上腺素的松弛反應為100％。
5.2.2 對carbamylcholine(CCH)引起氣管平滑肌收縮的解痙作用氣管平滑肌標本在浴槽內穩定1h后，先在浴槽內加入10-6mol/L CCH，待氣管平滑肌收縮反應達最大值并穩定后，再分別以10-6～10-3.5mol/L累積劑量加藥法加入受試藥物，最后加入10-6mol/L異丙腎上腺素。計算時以10-6mol/L異丙腎上腺素的松弛反應幅度為100％。
5.2.3 對CCH引起氣管平滑肌收縮的抑制作用先加入Krebs液(對照)或10-6～10-3mol/L受試藥物，5min后累積劑量加藥法加入10-6～10-4mol/L CCH，觀察收縮反應幅度。以預先用Krebs液處理的CCH收縮幅度為100％，計算出受試藥物對CCH收縮反應的抑制作用。
6、統計方法用微機和Sigma Stat統計軟件(Sigmastat 1.01 for Windows 95，1992，Jandel corporation，USA)具體方法見結果中的表注。ID50(95％可信限)、ED50(95％可信限)和EC25(95％可信限)用上海科學技術出版社POMS2.0版軟件計算。
3、結果 3.1、甘草苷芹糖對枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽反應的抑制作用 結果顯示，甘草苷芹糖能減少豚鼠的咳嗽次數，見表5。抑制咳嗽50％的劑量(ID)50(95％可信限)＝13.68(8.53～21.94)mg/kg。
表5.甘草苷芹糖對枸櫞酸引起豚鼠咳嗽反應的抑制作用(x±SD)
統計方法T-test，與生理鹽水組比較**P<0.01 3.2、甘草苷芹糖對辣椒素引起小鼠咳嗽反應的抑制作用 結果顯示，甘草苷芹糖能減少辣椒素引起小鼠咳嗽次數，見表6。ID50(95％可信限)＝18.33(12.17～27.63)ml/kg。
表6.甘草苷芹糖對辣椒素引起小鼠咳嗽反應的抑制作用(x±SD)
統計方法T-TEST或Mann-Whitney Rank Sum Test，與生理鹽水組比較*P<0.01，**P<0.01，***P<0.001 3.3、甘草苷芹糖對小鼠氣道酚紅排泄的促進作用 結果顯示，甘草苷芹糖能促進小鼠氣道酚紅排泄，見表7。ED50(95％可信限)＝22.41(18.48～27.18)mg/kg。
表7.甘草苷芹糖片對小鼠氣道酚紅排泄的促進作用(x±SD)
T-test或Mann-Whitney Rank Sum Test，與生理鹽水組比較*P<0.01，**P<0.01，***P<0.001 3.4.甘草苷芹糖對蛙上腭和食道粘膜纖毛運動的增強作用 甘草苷芹糖增強蛙上腭和食道纖毛運動，EC25(95％可信限)＝1.01(0.8～1.3)×10-9mol/L，見表8。
表8.甘草苷芹糖片對蛙上腭和食道粘膜纖毛運動的促進作用(x±SD)
T-test或Mann-Whitney Rank Sum Test，與任氏液對照比較*P<0.01，**P<0.01，***P<0.001 3.5、甘草苷芹糖對離體豚鼠氣管平滑肌直接松弛作用 以累積劑量加藥法分別加入甘草苷芹糖10-7～10-4mol/L后，可見甘草苷芹糖呈量效關系松弛離體豚鼠氣管平滑肌，見表9和圖4。
表9 甘草苷芹糖對離體豚鼠氣管平滑肌直接松弛作用(x±SD)
統計方法Student-Newman-Keuls Method；與對照K-H液組比較*P<0.05； 3.6、甘草苷芹糖對CCH引起離體豚鼠氣管平滑肌收縮的解痙作用 以累積劑量加藥法分別加入10-9～10-6mol/L藥物后，可見甘草苷芹糖和麻黃堿均呈量效關系松弛CCH引起離體豚鼠氣管平滑肌收縮反應，甘草苷芹糖與麻黃堿作用強度基本相同，見表9和圖5。
3.7、甘草苷芹糖對CCH引起離體豚鼠氣管平滑肌收縮的抑制作用 先加入甘草苷芹糖和麻黃堿10-6、10-5和10-4mol/L，再以累積加藥法加入CCH10-8～10-5.5mol/L。可見甘草苷芹糖和麻黃堿有抑制CCH收縮的趨勢。見表10和圖6、7。
表10、甘草苷芹糖片對CCH引起離體豚鼠氣管平滑肌收縮的抑制作用(x±SD)
4 討論與小結 在本實驗中，采用了2種動物鎮咳試驗模型，枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽模型和辣椒素引起的小鼠咳嗽模型。甘草苷芹糖抑制枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽反應和辣椒素引起的小鼠咳嗽反應，提示甘草苷芹糖具有很強的鎮咳作用。
在本實驗中，采用了2種動物祛痰試驗模型，小鼠氣道酚紅排泄模型和蛙上腭和食道纖毛運動模型。甘草苷芹糖促進小鼠氣道酚紅排泄，增強蛙上腭和食道纖毛運動，提示甘草苷芹糖具有很強的祛痰作用。
在本實驗中，采用了3種離體豚鼠氣管平滑肌試驗方法，證明了甘草苷芹糖可直接松弛離體豚鼠氣管平滑肌，呈量效關系松弛CCH引起離體豚鼠氣管平滑肌收縮反應，抑制CCH收縮的趨勢，提示甘草苷芹糖具有很強的平喘作用。
權利要求
1.一種甘草苷芹糖在制備鎮咳、平喘和祛痰藥物中的應用，所述甘草苷芹糖的分子式C26H30O13，分子量550，其特征在于所述制備以甘草苷芹糖單獨或與其它活性組份或輔料配合制成，制劑規格為按每粒或片含甘草苷芹糖30mg。
2.一種甘草苷芹糖在制備改善咳嗽、痰多和喘息癥狀的保健食品中的應用。
3.根據權利要求1所述的一種甘草苷芹糖鎮咳、平喘和祛痰藥物中的應用，其特征在于所制備的制劑以甘草苷芹糖為活性成分，加入常規的賦形劑、調味劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤劑、粘合劑、增稠劑或增溶劑中的一種或多種藥物輔料制成藥物制劑。
4.根據權利要求3所述的一種甘草苷芹糖制劑，其特征在于所述制劑劑型為膠囊劑、片劑或口服液體劑。
全文摘要
本發明提供一種甘草苷芹糖在制備鎮咳、平喘和祛痰藥物和保健品中的應用。甘草苷芹糖單獨或與其它活性組份或輔料配合制成。經過對甘草苷芹糖制劑的主要藥效學的評價，證實甘草苷芹糖有較強的平喘、鎮咳和祛痰藥效，可以改善急、慢性咳嗽、痰多和喘息癥狀。本發明的甘草苷芹糖制劑可制成任何一種適于臨床上使用的劑型，如膠囊劑、片劑、口服液體劑等。甘草苷芹糖來源于天然植物，原料來源豐富，制劑成本低，藥物毒副作用小，療效顯著。本發明為臨床治療急、慢性咳嗽、痰多和喘息癥狀提供優選天然藥物。
文檔編號A61K31/7042GK101518541SQ20091009749
公開日2009年9月2日 申請日期2009年4月7日 優先權日2009年4月7日
發明者謝強敏, 董新威, 吳希美, 睿 曹, 蔣俊霞 申請人:浙江大學