甘草黃酮鎮咳劑及應用的制作方法

專利名稱：：甘草黃酮鎮咳劑及應用的制作方法
技術領域：
：本發明屬藥物制劑和用途，涉及甘草黃酮的藥物制劑和用途，具體涉及甘草黃酮在制備治療各種原因引起的急、慢性咳嗽藥物中的應用。
背景技術：
：在我國，甘草藥用歷史悠久，得到廣泛的應用。傳統醫學認為其有益氣補中、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調和諸藥等功效，有"十方九草"之說。甘草為豆科(Leguminosae)甘草屬(GlycyrrhizaLinn.)多種植物的根和根莖。據《中華人民共和國藥典》2005年版一部記載其原植物有3種，即烏拉爾甘草G.uralensisFisch.、脹果甘草G.inflateBat和光果甘草G.glabraL.。隨著藥學及其相關學科以及科研設備的發展，人們對甘草的認識也越來越豐富。甘草中主要含有甘草酸、甘草次酸、黃酮、生物堿和氨基酸等化學成分，具有廣泛的生理活性。甘草酸和甘草次酸以前研究較深入，但近年來人們發現其中黃酮類成分有較強的生物活性，已成為新的研究熱點。迄今為止，已從甘草中分離出150多個黃酮類化合物，可分為黃酮類、黃酮醇類、異黃酮類、查爾酮類、雙氫黃酮類、雙氫査爾酮類等(中國中藥雜志.2003;28(7):593-597)。甘草黃酮已經研究證明有抗腫瘤作用、抗氧化作用、抗HIV作用、抗潰瘍作用、抗心律失常作用和保肝作用等，但甘草黃酮是否能有鎮咳作用報道甚少，尤其是鎮咳作用的物質基礎是什么？鎮咳作用的作用機制是什么？以及單獨以甘草黃酮制備制劑作為鎮咳藥品的研究尚未見有報道。隨著全球經濟的發展，工業與民用污染源不斷增加，加之環境治理不力等因素，呼吸系統疾病的發病率呈明顯上升趨勢，其引起的死亡率也逐年上升。不過，這也給生產呼吸系統疾病藥物的企業創造了更廣闊的市場空間。咳嗽是呼吸系統疾病的主要癥狀之一，應用鎮咳藥是對癥治療的重要手段。合理應用鎮咳藥不僅可以減輕病人的痛苦，并可防止并發癥的發生和原發疾病的進一步惡化。在中國藥品市場中，2004年鎮咳藥是除感冒藥以外的第二大非處方(OTC)藥品，銷售額約占藥品零售總額的5%，每年的市場份額約為30億元。但目前臨床應用鎮咳藥主要為處方藥，占70%，以西藥為主，強效的鎮咳藥主要是麻醉性的中樞鎮咳藥(麻醉管理藥品)。因此，從中藥中尋找和提取非麻醉性的強效鎮咳藥具有良好的社會效益和經濟效益。
發明內容本發明的目的是提供甘草黃酮在制備治療各種原因引起的急、慢性咳嗽藥物中的應用。本發明所涉及的急、慢性咳嗽包括急性和慢性氣管炎、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病、特發性肺纖維化、肺結核、細菌性肺炎、支氣管擴張等各種疾病引起的咳嗽癥狀，用于咳嗽癥狀的改善。本發明的甘草黃酮是藥物活性成分，按照常規的制劑工藝，單獨或加入常規的賦形劑、調味劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤劑、粘合劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔料，制成任何一種適于臨床上使用的劑型，如膠囊劑、片劑、口服液體劑等。規格為按每粒(片)含甘草黃酮300mg。本發明的另一個目的是提供甘草黃酮在制備改善急、慢性咳嗽癥狀的保健食品中的應用。甘草黃酮來源于天然植物，因此，可以將甘草黃酮制成保健食品，用于改善各種原因引起的急、慢性咳嗽癥狀。本發明的有益之處是從甘草分離的甘草黃酮，經藥理試驗證明了甘草黃酮具有很強的鎮咳作用，其作用強度與麻醉性鎮咳藥可待因相近；這些作用機制分析表明甘草黃酮是通過非麻醉性中樞作用起鎮咳作用的。解決了目前缺乏非麻醉性的強效鎮咳藥的問題，提供了非麻醉性的強效鎮咳藥，具有良好的社會效益和經濟效益。圖1是甘草黃酮抑制枸櫞酸誘導豚鼠咳嗽反射的量效關系。圖2是甘草黃酮抑制辣椒素誘導豚鼠咳嗽反射的量效關系。圖3是甘草黃酮抑制辣椒素誘導豚鼠咳嗽反射的時效關系。圖4是納洛酮、麥角新堿和格列苯脲對甘草黃酮和可待因抑制枸櫞酸誘導豚鼠咳嗽反射作用的影響。圖5是甘草黃酮對電刺激貓喉上神經誘導咳嗽的抑制作用。圖6是制備工藝流程圖。具體實施例方式本發明結合附圖和實施例作進一步的說明。實施例l一、藥效學試驗我們首先模擬臨床咳嗽癥狀建立了2種豚鼠咳嗽動物模型，應用該模型研究后發現本發明的甘草黃酮制備的藥物，以30mg/kg、100mg/kg、300mg/kg的劑量能抑制枸櫞酸或辣椒素誘導的豚鼠咳嗽反射，預先給麥角酰胺(Methysergide，5-羥色胺受體阻斷藥)3mg/kg(ip)能阻斷甘草黃酮對枸櫞酸誘導豚鼠咳嗽反射的抑制作用；預先給格列苯脲(Glibenclamide,ATP敏感的鉀離子通道阻滯劑)20mg/kg(ip)輕微減弱甘草黃酮對枸櫞酸誘導豚鼠咳嗽反射的抑制作用。納洛酮(Naloxone,阿片受體阻斷藥)0.3mg/kg(ip)不能阻斷甘草黃酮對枸櫞酸誘導豚鼠咳嗽反射的抑制作用，而納洛酮能阻斷甘草黃酮對枸櫞酸誘導豚鼠咳嗽反射的抑制作用。甘草黃酮10、30和100mg/kg給藥后呈劑量依賴抑制電剌激貓喉上神經引起咳嗽反射，平均閾值電壓與對照組比較分別提高了15%、57%(PO.01)和154%(PO.OOl)。這些作用機制分析表明甘草黃酮、甘草黃酮活性成分甘草苷、甘草素和甘草苷芹糖是通過非麻醉性中樞作用起鎮咳作用的。甘草黃酮、甘草黃酮活性成分甘草苷、甘草素和甘草苷芹糖作為非麻醉性中樞鎮咳要可以用于臨床治療或改善各種原因引起的急、慢性咳嗽癥狀。具體實施方式如下-一)甘草黃酮制劑對豚鼠枸櫞酸或辣椒素誘導的豚鼠咳嗽反射的作用及機制1實驗材料與方法1.1實驗動物ZMU:DHP-1豚鼠，300-400g，雌雄不拘，購于浙江大學實驗動物中心，合格證號220010014。所有的操作和實驗流程均遵守《實驗動物管理條例》。動物在實驗前均自由進食和進水。1.2主要試劑和設備甘草黃酮(簡稱LF)由本實驗室提取，經HPLC測定主要成分為甘草黃酮，含總黃酮50%以上，以甘草苷和甘草苷芹糖為主要成分，不含甘草酸；枸櫞酸，上海化學試劑廠，批號20000121。辣椒素(Capsaicin),批號123H78341、納洛酮(NaloxonehydrochlorideDihydrate)，批號446754/1、麥角酰胺(Methysergidemaleatesalt),批號073kl279和格列苯脲(Glibenclamide),批號123kl062，均購于SigmaChemicalCo.(St.LouisMissouri,USA)。磷酸可待因，青海制藥廠，批號220103。儀器體積描記器、差壓換能器、計算機(PentiumIII，128M/30G)、MedLab生物信號采集處理系統(MedLabV5.0.0,南京美易公司)，PARIMASTER壓縮吸入機(PARI,MASTER;Germany)。1.3方法1.3.1枸櫞酸誘導豚鼠咳嗽試驗(量效關系實驗)豚鼠63只，隨機分為6組，每組動物數1013只。除模型對照組和空白組用蒸餾水(ig)夕卜，其余各組分別甘草黃酮30、100、300mg/kg(ig)，可待因(陽性對照藥)10mg/kg(ig)，給藥后lh,分別將豚鼠置于20xl0xl0cm體積描記盒中，用壓力換能器將容器內的壓力變化信號傳入微機Medlab生物信號采集系統，描記呼吸波和咳嗽波。豚鼠放入體積描記盒穩定lmin后，用霧化器氣霧15%枸櫞酸鈉溶液(空白組用生理鹽水代替)30sec。計數自氣霧結束后10min內咳嗽次數。每次咳嗽均以聽到豚鼠咳嗽聲音，看到咳嗽動作，和微機Medlab上見到明顯呼吸波變化綜合分析。1.3.2對辣椒素所致豚鼠咳嗽的影響1.3.2.1量效關系實驗豚鼠81只，隨機分為6組，每組動物數12~18只。除模型對照組和空白組用蒸餾水(ig)夕卜，其余各組分別甘草黃酮30、100、300mg/kg(ig)，可待因(陽性對照藥)10mg/kg，給藥后lh，分別將豚鼠置于20xl0xl0cm體積描記盒中。穩定lmin后，用霧化器氣霧0.015%辣椒素溶液(空白組用生理鹽水代替)連續氣霧10min。計數自氣霧開始到結束的咳嗽次數。每次咳嗽均以聽到豚鼠咳嗽聲音，看到咳嗽動作，和微機Medlab上見到明顯呼吸波變化綜合分析。1.3.2.2時效關系實驗豚鼠69只，隨機分為7組，每組動物數914只。除模型對照組用蒸餾水(ig)外，各用藥組甘草黃酮100mg^g(ig)，分別給藥后lh，4h，6h，8h，12h，將豚鼠置于20xl0xl0cm體積描記盒中。穩定lmin后，用霧化器氣霧0.015%辣椒素溶液(空白組用生理鹽水代替)連續氣霧10min。計數自氣霧開始到結束的咳嗽次數。每次咳嗽均以聽到豚鼠咳嗽聲音，看到咳嗽動作，和微機Medlab上見到明顯呼吸波變化綜合分析。1.3.3甘草黃酮鎮咳機制分析豚鼠130只，隨機分為8組，每組動物數10~20只。分為模型對照組、甘草黃酮組、納洛酮+甘草黃酮組^+LF組)、麥角新堿+甘草黃酮組(1^+LF組)、格列苯脲+甘草黃酮組(6+LF組)、可待因(Cod)組、納洛酮+Cod組(N+Cod組)和麥角新堿+Cod組(M+Cod組)。甘草黃酮組，N+LF組，M+LF組，G+LF組，LF100mg/kg(ig)前30min(G+LF組除外，為5min)分別以生理鹽水、納洛酮0.3mg/kg、麥角新堿3mg/kg或格列苯脲20mg/kg(*)。Cod組、N+Cod組和M+Cod組，Cod10mg/kgGg)前30min分別以生理鹽水、納洛酮0.3mg/kg和麥角新堿3mg/kg(*)，模型組用生理鹽水代替。灌胃給藥后lh氣霧枸櫞酸引咳。分別將豚鼠置于20xl0xl0cm體積描記盒中。穩定lmin后，用霧化器氣霧15%枸櫞酸溶液30sec。計數自氣霧結束后10min內咳嗽次數。每次咳嗽均以聽到豚鼠咳嗽聲音，看到咳嗽動作，和微機Medlab上見到明顯呼吸波變化綜合分析。1.4結果1.4.1對枸櫞酸所致豚鼠咳嗽的影響(量效關系)空白組豚鼠給蒸餾水(ig)lh后用生理鹽水氣霧30sec，氣霧結束后觀察10min內未見有咳嗽反射；模型組氣霧15X枸櫞酸溶液30sec，計數自氣霧結束后10min內平均咳嗽次數達28次。甘草黃酮30、100和300mg/kgGg)呈劑量依賴抑制枸櫞酸引起的咳嗽反射，甘草黃酮100和300mg/kg與可待因10mg/kgGg)比較鎮咳作用強度相當，參見表l和圖l。表l.甘草黃酮抑制枸櫞酸誘導豚鼠咳嗽反射的量效關系.<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>甘草黃酮和可待因于引咳前60min(ig).統計學Student'st-test或Mann-WhitneyRankSumTest;與模型組比較**戶<0.01，***戶<0.001;與空白組比較,戶O.OOl。1.3.4對辣椒素所致豚鼠咳嗽的影響(量效關系)空白組豚鼠氣霧生理鹽水lOmin，未見豚鼠有咳嗽反射；模型組氣霧辣椒素lOmin,平均咳嗽次數達22次。甘草黃酮30、100和300mg/kg(&)呈劑量依賴抑制辣椒素引起的咳嗽反射，甘草黃酮300mg/kg與可待因10mg/kg(&)比較鎮咳作用強度相當，參見表2和圖2。甘草黃酮和可待因于引咳前60min(ig).統計學mean士SD，Student'st-test或Mann-WhitneyRankSumTest;與模型組比較**尸<0.01,***尸<0.001;與空白組比較娜尸O.OOl。表2.甘草黃酮抑制辣椒素誘導豚鼠咳嗽反射的量效關系H咳嗽次數抑制率_(mg/kg)_(lOmin)_(%)空白組—11O.O土O.O模型對照組-1822.1±5.5###甘草黃酮301314.9±8.2**32.61001411.3±6.0***48.9300129.0±6.2,59.3可待因10125.3±5.2***76.01.3.5甘草黃酮鎮咳作用的持續時間(時效關系)甘草黃酮100mg/kg(/g)后lh、4h和6h三個時間點與模型組相比，咳嗽次數明顯減少，其中(&)后lh鎮咳作用最強，與模型組相比尸<0.01，參見表3和圖3。統計學:meantSD，Student'sWest或Mann-WhitneyRankSumTest法檢驗.與模型組比較<0.05，**P<0.01。表3.甘草黃酮抑制辣椒素誘導豚鼠咳嗽反射的時效關系<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1.3.6麥角新堿、納洛酮和格列苯脲對甘草黃酮和可待因抑制枸櫞酸誘導豚鼠咳嗽反射作用的影響麥角新堿3mg/kg于甘草黃酮100mg/kg(&)前30min與單獨甘草黃酮比較，明顯減少甘草黃酮的抑制率，統計學差異非常顯著(PO.OOl)，提示麥角新堿可阻斷甘草黃酮的鎮咳作用；格列苯脲20mg^g于甘草黃酮100mg/kgGg)前5min輕微減弱甘草黃酮的鎮咳作用(見圖4);而納洛酮0.3mg/kg于甘草黃酮100mg/kg前30min則不能阻斷甘草黃酮的鎮咳作用。與之相反，納洛酮0.3mg/kg于可待因10mg/kg(&)前30min明顯阻斷可待因的鎮咳作用，統計學差異非常顯著(戶O.OOl)，麥角新堿3mg/kg于可待因10mg/kg(/g)前30min也能減少可待因的抑制率(尸<0.05)，參見表4和圖4。納洛酮(0.3mg/kg)或麥角新堿(3mg/kg)于甘草黃酮和可待因給藥前30min腹腔注射，格列苯脲于甘草黃酮給藥前5min腹腔注射。甘草黃酮和可待因于引咳前60min(ig)。統計方法:mean士SD,Student國Newman國Keuls;*尸<0.05vs模型組，***尸<0.001vs模型組；####P<0.001wLF組；A尸〈0.05/"i5〈0.001wCod組.表中藥名縮寫LF(甘草黃酮)、N(納洛酮)、M(麥角新堿)、G(格列苯脲)、Cod(可待因)。表4納洛酮、麥角新堿和格列苯脲對甘草黃酮和可待因抑制枸櫞酸誘導豚鼠咳嗽反射作用的影響.<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>1.5討論與小結在本階段的研究中，我們證明了甘草黃酮呈劑量依賴抑制枸櫞酸和辣椒素誘導豚鼠的咳嗽反射。甘草黃酮100mg/kg(ig)鎮咳作用持續時間為6h以上。初步的作用機制分析研究證明，麥角新堿可阻斷甘草黃酮的鎮咳作用和部分阻斷可待因的鎮咳作用，提示甘草黃酮和可待因的鎮咳作用可能與5-羥色胺(5-HT)途徑有關。Kameietal(1987)證明腦內的5-HT水平下降可減弱中樞性鎮咳藥的作用強度，但對外周性鎮咳無影響[1]。Kameietal(1988)用5,7-脫羥色胺(5,7-dihydroxytryptamine)處理新生大鼠使腦內5-HT水平下降19X,結果導致可待因對咳嗽的抑制作用超敏[2]。此外，在5,7-脫羥色胺處理過的大鼠，可觀察到可待因的鎮咳作用明顯增強，但可被麥角新堿部分阻斷。因此，可待因鎮咳作用的明顯增強可能是由于5-HT受體敏感性的改變。這些研究提示5-HT受體在中樞性鎮咳藥活性方面起著重要作用，而與周圍性鎮咳藥關系不大。格列本脲是一個ATP-敏感K+通道阻斷劑，有實驗證明它能阻斷莫吉司坦(moguisteine,—個周圍性的非麻醉性鎮咳藥)的鎮咳作用[3'4]，不能阻斷可待因和右美沙酚(dextromethorphan)，提示莫吉司坦不是一個中樞性的鎮咳藥，它的作用途徑與ATP-敏感K+通道有關。據此，Kamei等人認為周圍性的非麻醉性鎮咳藥作用機制與ATP-敏感K+通道有關。在本實驗中，我們試用格列本脲阻斷甘草黃酮的鎮咳作用，結果顯示ATP-敏感K+通道阻斷后，甘草黃酮的鎮咳作用稍有減弱，但統計學無明顯差異(見圖4)。格列苯脲未能阻斷甘草黃酮的鎮咳作用不是意味著甘草黃酮的鎮咳作用與ATP-敏感K+通道無關。與通過5-HT受體相比，甘草黃酮的鎮咳作用通過ATP-敏感K+通道發生鎮咳作用更強，本實驗格列苯脲未能阻斷甘草黃酮的鎮咳作用可能與所用的劑量有關。因為Kamei等人的實驗表明格列苯脲能阻斷甘草黃酮對辣椒素誘導豚鼠咳嗽反射的抑制作用(結果未公開)，而本試驗采用的為枸橡酸誘導的豚鼠咳嗽反射模型。為了進一步了解甘草黃酮的鎮咳作用的機制，我們試用納洛酮(一個阿片受體阻斷劑)阻斷甘草黃酮的鎮咳作用，結果顯示，阿片受體阻斷后不影響甘草黃酮的鎮咳作用強度，但可阻斷可待因的鎮咳作用，這些結果提示，甘草黃酮不是通過阿片受體發生鎮咳作用，是一個非麻醉性的鎮咳藥。綜上結果表明，甘草黃酮可能是一個作用較強的中樞性鎮咳藥，其作用機制涉及5-HT途徑，但也不能排除其周圍性鎮咳作用機制。二)甘草黃酮對電剌激貓喉上神經誘導咳嗽的影響1材料與方法1.1材料l丄l動物貓，體重3.0士1.0kg，雌雄不拘。購于浙江大學醫學院實驗動物中心，合格證號20040516。l丄2主要試劑(1)甘草黃酮(簡稱LF)由本實驗室提取，經HPLC測定主要成分為甘草黃酮，含總黃酮50%以上，以甘草苷和甘草苷芹糖為主要成分，不含甘草酸。用生理鹽水配制成為濃度分別為100mg/ml，30mg/ml，10mg/ml的溶液備用；(2)磷酸可待因片磷酸可待因，青海制藥廠，批號220103。用生理鹽水溶解配制成濃度為5mg/ml混懸液備用；(3)戊巴比妥鈉批號F20030816，中國醫藥(集團)上海化學試劑公司(進口分裝)，用生理鹽水配制成濃度為3.5%的溶液備用。l丄3主要儀器(1)MedLab-U/4C生物信號采集處理系統，南京美易科技有限公司；(2)電子天平上海天平儀器廠，FA1104型；(3)電剌激器Model:SEN-3301,分離器Model:SS-202J，NihonKohdenCorporation,Japan。2.方法2.1分組(1)空白組生理鹽水lml/kg灌胃給藥，n=10;(2)陽性對照組磷酸可待因5mg/kg灌胃給藥，n=10;(3)高劑量組甘草黃酮100mg/kg灌胃給藥，n=10;(4)中劑量組甘草黃酮30mg/kg灌胃給藥，n=10;(5)低劑量組甘草黃酮10mg/kg灌胃給藥，n=10。2.2方法將貓用戊巴比妥鈉35mg/kg腹腔注射麻醉，背位固定于手術臺上，剪去頸部毛發，沿頸中線切開皮膚，分離皮下組織，暴露甲狀軟骨，找出一側迷走神經，沿迷走神經向頭端找出結神經節，可見喉上神經內神經節分出。仔細分離喉上神經，安上保護電極，在放電極處滴數滴液體石蠟，以防干燥。分離氣管，用Y型管行氣管插管，一端連壓力換能器連于MedLab-U/4C生物信號采集處理系統記錄咳嗽情況。調節電刺激器，參數為Duration0.5ms，maininterval20ms,interval10ms,delay1ms,每次剌激輸出電壓由低到高遞增，測出給藥前剌激喉上神經引起咳嗽的電壓閾值，觀!l的連續3次剌激能引起貓咳嗽的電壓值即為該貓的引咳電壓閾值，然后按分組情況對貓灌胃給藥，給藥30min后開始刺激。每隔5min重新刺激一次，測定給藥1小時后閾值的變化情況。3、結果從表1可見，各組動物在給藥前電刺激貓喉上神經引起咳嗽的平均閾值電壓為0.640.70之間，經統計各組間無明顯差異(P>0.05)。甘草黃酮10、30和100mg/kg給藥后呈劑量依賴抑制電刺激貓喉上神經引起咳嗽反射，平均閾值電壓與對照組比較分別提高了15%、57%(P<0.01)和154%(PO.OOl)。陽性對照藥可待因5mg/kg給藥后顯示很強的鎮咳作用，平均閾值電壓與對照組比較提高了296%(PO.OOl)，分別與甘草黃酮三個劑量組比較均有非常顯著的差異(PO.OOl)，作用明顯強于甘草黃酮，見圖5和表5。統計方法mean土SD,t-test;**尸<0.01w對照組，"><0.001w對照組；LF:甘草黃酮。_表5甘草黃酮對電刺激貓喉上神經誘導咳嗽的影響(三士SD，n-10)_<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>甘草黃酮1000.66±0.13300.65±0.13100.67±0.13注與controlgroup比較，**><0.01，"》<0.001.4.討論與小結之前我們已經證明了甘草黃酮呈劑量依賴抑制枸櫞酸和辣椒素誘導豚鼠的咳嗽反射。甘草黃酮100mg/kg(ig)鎮咳作用持續時間為6h以上。初步的作用機制分析研究證明，5-羥色胺(5-HT)受體阻斷藥麥角新堿可阻斷甘草黃酮的鎮咳作用，提示甘草黃酮的鎮咳作用可能與5-羥色胺(5-HT)途徑有關。Kameietal(1987)證明腦內的5-HT水平下降可減弱中樞性鎮咳藥的作用強度，但對外周性鎮晐無影響[4。Kameietal(1988)用5,7-脫羥色胺(5,7-dihydroxytryptamine)處理新生大鼠使腦內5-HT水平下降19%，結果導致可待因對咳嗽的抑制作用超敏[5]。在5，7-脫羥色胺處理過的大鼠，可觀察到可待因的鎮咳作用明顯增強，但可被麥角新堿部分阻斷。在電刺激引起的貓喉上神經引起的咳嗽反射實驗中，5-HT前物5-hydroxytryptophan5mg/kg(iv)不但抑制呼吸頻率而且抑制電刺激引起的貓喉上神經引起的咳嗽反射[2]，相反，麥角新堿3mg脊椎動脈內注射可增加電刺激引起的貓喉上神經引起的咳嗽反射和呼吸頻率[3]。這些研究提示腦內5-HT水平的升高對咳嗽反射的中樞發生機制有抑制作用，5-HT受體在中樞性鎮咳藥活性方面起著重要作用。在本階段的試驗中，我們進一步證明了甘草黃酮能抑制電刺激引起的貓喉上神經引起的咳嗽反射，提示甘草黃酮的主要作用可能是提高腦內5-HT水平，從而發揮其中樞鎮咳作用。實施例2甘草黃酮制劑1處方(甘草黃酮膠囊)甘草黃酮300g淀粉32g羥丙基纖維素(L-HPC)6g微粉硅膠4.5g硬脂酸鎂l-5g淀粉漿(10%)適量1.70±0.311.05±0.27*0.77±0.19制成1000粒2處方依據及處方的篩選過程2.1處方依據根據藥效學試驗制訂甘草黃酮膠囊，規格甘草黃酮含量300mg/粒。淀粉本方中為玉米淀粉，色澤好，吸濕性弱，產量大，價格低；為白色細微粉末，不溶于水和乙醇，在空氣中很穩定，與大多數藥物不起作用，吸濕而不潮解，遇水膨脹，為最為廣泛的稀釋劑和崩解劑，本方中主要用作稀釋劑崩解劑。羥丙基纖維素(L-HPC)本品為白色或白色或結晶性粉末，在水中不溶但可吸水溶脹，由于L-HPC粉末有很大的比表面積和孔隙率，故有較大的吸濕速度和吸水量，增加了膨脹性。本品用量，一般可為1%-5%左右，本方中用量為2%。微粉硅膠，本品為輕質的白色粉末，無臭無味，不溶于水及酸，化學性質穩定，與絕大多數藥物不發生反應，良好的流動性，對藥物有較大的吸附力，親水性能強，有利于藥物的吸收，本品用量一般僅為0.15%-3%，因為主藥甘草黃酮流動性差，本方中用于改善顆粒的流動性，用量為1.5%。硬脂酸鎂為白色粉末，細膩輕松，有良好的附著性，顆粒混合后分布均勻而不易分離，僅少量即可顯示出良好的潤滑作用，一般用量為0.3%-1%，本方中用量為0.5%。2.2處方的篩選過程設計以下三個處方(IOOO粒)規格300mg/粒表6-l必方7必方2必方3/佛甘草黃酮，g，g300g主藥淀粉39g35g32g稀釋劑羥丙基纖維素(L-HPC)6g崩解齊U微粉硅膠《5g《5g助流齊!J淀粉漿(10%)適量適量適量粘合齊U硬脂酸鎂1.5g1.5g潤滑齊J滑石粉2.5g潤滑齊U合計78g78g78g按照以上三個處方試制樣品，并進行以上處方篩選試驗。13(1)、進行溶出度試驗①、測定方法按中國藥典2000年版第二部甘草黃酮膠囊溶出度測定法(附錄XC第二法)操作，以0.1mol/L醋酸鹽緩沖液(取無水醋酸鈉82g加水7500ml，用冰醋酸pH值至5.0，加水使成10000ml)為溶劑，轉速為每分鐘50轉，依法操作，按時取溶液經0.8nm微孔濾膜濾過，取續濾液在482nm處測定吸收度，計算溶出百分率。②、溶出度測定結果分別取供試品，按測定方法測定溶出度，取樣時間5，10，15，20，25，30，45，60min,結果見表6-2。6-2三個處方溶出度測定結果~~~~-510152025304560i11.716.154.26U71.885.591.895.4211.419.357.264.573.789.293.497.8處311.112.551.162.371.185.188.293.1方411.215.653.955.772.681.692.396.5一511.513.852.458.669.183.191.693.6611.718.656.161.768.988.4狄596.1平均溶出(%)11.816.154.261.371.985.591.895.4標準偏差(S)±1.47±1.26±2.3±3.1±1.9±2.9±1.9±1.814.427.159.865.477.687.194.496.3216.129.962.467.779.489.996.898.5處312.924.957.162.875.984.392.194.1方416.127.361.966.776.888.496.397.4一513.425.458.963.978.786.194.294.6614.828.858.565.877.886.993.597.1平均溶出(%)14.627.259.865.477.787.194.596.3標準偏差(s)±1.3±1.9±2.1±1.8±1.3±1.9±1.8±1.7116.551.265.786.895.299.198.197.8219.353.168.189.498.199.398.199,3處313.949.463.684.292.496.796.196.1方418.149.966.289.295.498.397.898.3二516.352.364.485.196.798.999.397.1615.451.667.186.393.4111.297.198.5平均溶出16.651.365.886.895.299.198.197.814<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>根據上表對應的溶出度結果見表6-3。表6-3溶出度測定結果(n=6X±S)溶出度(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>結果表明處方3在20分鐘溶出度可達到86.8%,30分鐘溶出度幾乎達到最大。處方l、處方2在20分鐘吸光度僅有60分鐘的60%，30分鐘時溶出度為85%。根據中國藥典在30分鐘時溶出度達到80%，它們都符合藥典要求。由此可見，處方3中低取代羥丙基纖維素(L-HPC)的用量僅為2%，溶出速率明顯快于處方l、處方2，可見本方3中加入L-HPC之后，有助于膠囊的崩解而加快了主藥甘草黃酮溶出。(2)、休止角試驗按處方l、2、3制成顆粒，經口徑7cm的長頸漏斗流下，并呈圓錐形狀，測其休止角，結果見表6-4。表6-4<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>可見處方2、3的休止角小于處方1，說明處方2、3的流動性好于處方1。結論微粉硅膠能顯著改善顆粒的流動性能。綜上所述，處方3的溶出度、流動性好于處方l、2,所以選定處方3。3生產工藝3.1制備方法制法稱取處方量的甘草黃酮、淀粉、和L-HPC混合，過60目的篩三次，混合均勻；加入10%的淀粉漿適量制軟材，用16目制粒，60GC干燥，用16目整粒后，加入微粉硅膠、硬脂酸鎂混合均勻，用0號膠囊制成1000粒。3.2工藝條件的篩選按處方進行試制1000粒樣品。3.2.1堆密度試驗將試制的顆粒裝入100ml量筒中，以一定的高度落下兩次，(每次保持條件一致，松緊適宜，稱其重量計算其堆密度，結果見表7-l。表7-1堆密度試驗數據(n-3)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>因此，根據以上數據可知，顆粒平均堆密度是0.46g/ml，每粒裝量要求為30mg，所以選擇0號膠囊。3.2.2吸濕性試驗考察環境濕度對膠囊填充過程中影響程度，為此測定了顆粒的吸濕性。稱取顆粒12份，每份約2g，精密稱定，將其置于不同相對濕度環境下放置7天，測其重量變化，結果見表7-2。表7-2吸濕性測定數據表(11=2)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>可見，相對濕度在40-90%條件下顆粒重量基本沒有變化，吸濕性沒有明顯增加。因此，可確定該品種的相對濕度要求不嚴格，在一般的生產環境下可以生產。不會因為水分對藥物性質及穩定性造成影響。4工藝流程參見圖6。二、甘草黃酮緩釋放片處方及制備工藝1制劑處方組成1.1每1000片含下列物質(300mg/片)甘草苷芹糖300g硬脂酸40gHMPC200g聚乙烯吡咯垸酮(K30)80g30y。丙烯酸樹脂IV號適量1.2包衣液處方(Y-l-7000)60g(類白色)乙醇1000ml2.制備工藝2.1粘合劑的配制精密稱取丙烯酸樹脂IV號適量，用95%乙醇配制成濃度為30%的溶液，備用。2.2片芯的制備取處方量主藥甘草黃酮與輔料硬脂酸、HMPC、聚乙烯吡咯垸酮充分混勻后過60目篩，加入30y。丙烯酸樹脂IV號適量，制成干濕適中的軟材，24目篩制粒，5(TC烘干30分鐘，24目篩整粒，測定顆粒含量合格后，壓片即得。2.3包衣2.3.1包衣的依據甘草黃酮緩釋片為薄膜衣片，同時考慮到美觀等因素，本品制成薄膜衣片。2.3.2包衣液的配制稱取(Y-1-7000)適量，緩緩加入70%的乙醇溶液中，配制成6%的包衣液，在磁力攪拌器上不停地攪拌，直至完全溶解，即得。2.3.3取素片置包衣鍋內，鍋轉速每分鐘3040轉，鍋內溫度為405(TC，不間斷噴包衣液至素片上，直至均勻包上一層薄膜衣，干燥即得。2.4臨界相對濕度的測定在一定溫度下，取按處方和工藝制得的顆粒適量，分別放置在不同的飽和鹽17溶液中，放置5天后，取出稱重，以不同的飽和鹽溶液的相對濕度作橫坐標，顆粒在不同的飽和鹽溶液中增重百分率作縱坐標，作曲線圖，并作曲線的切線，所得兩切線的交點為臨界相對濕度，且從圖得出臨界相對濕度為74%。測定結果見下表8-1。表8-1臨界相對濕度的測定<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>本品顆粒的臨界相對濕度為74%(>50%)，說明本品顆粒在密封條件下不吸濕03.處方依據3.1劑量的確定甘草黃酮緩釋片其規格為300mg/片，本品臨床上常規用量為每日300~900mg，在確定本品的劑量時，并考慮到方便病人服用，便于劑量調節，故確定為每片含甘草黃酮300mg。3.2處方篩選3.2.1輔料的千擾性試驗選擇在333nm波長處無吸收干擾的輔料如HMPC、聚乙烯吡咯烷酮、糊精、淀粉、甘露醇、硬脂酸、丙烯酸樹脂等，按處方配比取一片量輔料，加入容器中照含量測定項下方法，測定定量溶液的吸收度，實驗結果表明在333nm波長處輔料無吸收。3.2.2處方篩選過程甘草黃酮可溶于水，為了使藥物緩慢釋放，有效血藥濃度能維持較長時間，以達到較好的治療目的，因此，我們制成甘草黃酮緩釋片，為骨架型。目前國內常用的緩釋材料有聚乙烯吡咯烷酮、乙基纖維素、硬脂酸、羥丙甲纖維素、丙烯酸樹脂等。以每片含甘草黃酮30mg，采用上述控釋材料中的一種或數種以及不同規格、不同用量組方，進行體外釋放度試驗，從十多個緩釋處方中發現l、2號處方緩釋效果較好，但2號處方體外釋放度最好，且顆粒的可壓性、流動性和處方的重現性均佳，故確定處方2為本緩釋片處方。處方篩選過程見下表3-2:<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>2小時38.908022399.636小時62.612小時:82.6從三批試制樣品檢測結果表明該品確定的處方和制備工藝可行。3.2.4以pH6.8的磷酸鹽緩沖液作為本品的釋放介質，方法采用轉籃法(中國藥典2000年版二部附錄XC第一法)，轉速為每分鐘100轉，取樣點為l小時、3小時和10小時，據此我們重新測定了三批樣品及進口片的釋放度，結果如下-表8-4批號釋放度％0802191小時31.43小時54.4IO小時85.80802211小時32.13小時54.410小時85.9080223l小時32.13小時54.1IO小時84.1同時對試制的樣品(080219)進行了影響因素試驗(光照試驗、高溫試驗、高濕試驗)，方法與結果如下(1)光照試驗在室溫條件下，本品去除外包裝將樣品平攤在平皿里，在45001ux光強度下放置5、IO天后取樣檢測。結果見表8-5。(2)高溫試驗本品去除上市包裝分別于60。C的烘箱中放置5、10天后取樣檢測。結果見表8-6。(3)高濕試驗本品去除上市包裝分別放入恒濕器皿中，于25。C、相對濕度92.5%敞口放置考核5、IO天后取樣檢測。結果見表8-7。表8-5光照試驗結果條件時外觀*有關物質標不量釋放度(％)間(%)沃)XXX總雜質lh3h10h0類內色<0.05%<0.5%99.5142.1±0.455.5±0.885.9±1.35500類白色<0.05%<0.5%99.8842.1±0.855.0±1.585.2±1.0Lux10類白色<0.05%<0.50/098.8941.4±1.154.7±1.485.8±1.1*指片芯色澤，薄膜衣均無變化(下同)20表8-6.高溫試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>4.各輔料在處方中的作用4.1A:具有疏水性，阻止藥物的釋放。4.2羥丙甲纖維素為親水性高分子纖維素材料，遇水形成凝膠，降低水向片內滲透的速率，延緩藥物的釋放，具有緩釋作用。國內外已廣泛用于緩控釋制劑。4.3聚乙烯吡咯烷酮為親水性高分子材料，遇水形成凝膠，降低水向片內滲透的速率，延緩藥物的釋放，具有緩釋作用。國內外已廣泛用于緩控釋制劑4.4丙烯酸類樹脂商品名為"Eudragit"，因其取代基不同分成各種型號，國外已廣泛用來作為控緩釋制劑的材料，也用作腸溶衣材料，本處方選擇其作為粘合劑，利用其成膜性包裹藥物，阻止藥物在胃內釋放速率。4.5B:為潤滑劑。4.6Opadry:薄膜衣材料，主要成份為羥丙甲纖維素。5.原輔料來源及質量標準5.1甘草黃酮本實驗室提取純化，含量純度為99%以上。5.2A:符合中國藥典2005年版，上海延安油脂化工廠生產。53羥丙甲纖維素符合美國藥典(USPXXIII)，由上海Colorcon公司提供。5.4聚乙烯吡咯垸酮符合美國藥典，沈陽東北制藥總廠生產。5.5丙烯酸樹脂IV:符合中國藥典2005年版，由連云港制碘廠生產。5.6B:符合中國藥典2005年版，由上海葡萄糖廠生產。5.70padiy:符合英國藥典，由上海Colorcon公司提供。權利要求1.一種甘草黃酮在制備治療各種原因引起的急、慢性咳嗽藥物中的應用，其特征在于在制備治療因急性和慢性氣管炎、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病、特發性肺纖維化、肺結核、細菌性肺炎或支氣管擴張疾病引起的急、慢性咳嗽藥物中的應用。2.—種甘草黃酮在制備改善急、慢性咳嗽癥狀的保健食品中的應用。3.根據權利要求1所述的一種甘草黃酮在制備治療各種原因引起的急、慢性咳嗽藥物中的應用，其特征在于所制備的制劑以甘草黃酮為活性成分，單獨或加入常規的賦形劑、調味劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤劑、粘合劑、增稠劑或增溶劑中的一種或多種藥物輔料制成，制劑規格為按每粒或片含甘草黃酮300mg。4.根據權利要求3所述的一種甘草黃酮制劑，其特征在于所述制劑劑型為膠囊劑、片劑或口服液體劑。全文摘要本發明提供甘草黃酮在制備治療各種原因引起的急、慢性咳嗽藥物中的應用，所涉及的急、慢性咳嗽包括急性和慢性氣管炎、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病、特發性肺纖維化、肺結核、細菌性肺炎、支氣管擴張等各種疾病引起的咳嗽癥狀。從甘草分離的甘草黃酮經藥理試驗，證實了甘草黃酮具有很強的鎮咳作用，其作用強度與麻醉性鎮咳藥可待因相近；這些作用機制分析表明甘草黃酮是通過非麻醉性中樞作用起鎮咳作用的。甘草黃酮來源于天然植物，也可制成保健食品。本發明解決了目前缺乏非麻醉性的強效鎮咳藥的問題，提供了非麻醉性的強效鎮咳藥，具有良好的社會效益和經濟效益。文檔編號A61P11/14GK101524397SQ200910097489公開日2009年9月9日申請日期2009年4月7日優先權日2009年4月7日發明者吳希美,朱一亮,杜曉剛,董新威,謝強敏申請人:浙江大學