專利名稱：：歐纈草的種子繁殖和種植方法
技術領域：
：本發明涉及植物的繁殖和種植方法，具體地，涉及敗醬科纈草屬藥用植物歐纈草(L.)的種子繁殖方法。
背景技術：
：歐纈草(^7/er/a""Linn.)為敗醬科纈草屬多年生草本植物，原產歐洲，國內并無野生分布。歐纈草作為國際上認定的藥用纈草在歐美使用歷史悠久并廣泛應用，其根入藥主要具有鎮靜、促進睡眠、抗抑郁和焦慮等功效，且無宿醉作用，用作鎮靜安眠(鎮靜劑)，治療輕、中度失眠與精神緊張等，先后被英、美、法、德、俄、意等22國國家標準以及歐洲植物藥治療科學合作協會(ESCOP)植物藥專冊目錄收載。歐纈草及其制劑目前在歐美市場上十分暢銷，年銷售額(達到上億美元)一直列暢銷植物藥前10名。纈草屬全世界約250余種，我國約有28種1變種(包括栽培1種)，其中一些種雖有藥用記載，如纈草(K;^^do^c/m7/^C.Y.ChengetH.B.Chen)、寬葉纈草(K/awn'e/)、黑水纈草(KOTwwmwzW毛節纈草(p:atemz/o//a)、蜘蛛香(Kj'"towa朋/)等，但非歐纈草(Kc#"""fcLinn.)。本發明所用資源為歐纈草，其學名經纈草屬專家陳虎彪教授鑒定。國內纈草資源中纈草烯酸(2000年美國藥典USP24規定歐纈草厚料中纈草烯酸不低于0.1%)含量遠未達到歐纈草歐美藥典的標準，從而無法進入歐美市場。隨著社會壓力和生活節奏的加快，我國有20%至30%的國民患有不同程度的失眠，老年群體失眠率更是高達40%。目前治療失眠主要以合成藥物為主，常具有一定的副作用，如頭暈目眩、乏力等，因而尋找能促進睡眠的天然植物藥非常必要。而解決這些天然植物藥的種植和繁殖方法也迫在眉睫。迄今，現有技術中未有歐纈草(ra/ena"ao#"'"a/"Linn.)的種子繁殖和栽培方法的報道。
發明內容本發明的目的在于提供醬科纈草屬藥用植物歐纈草(q訴c/na/"Li皿.)的種子繁殖和種植方法。該方法從歐洲(德國)引進歐纈草種子，成功地選擇實驗地進行播種試驗、育苗試驗、苗期管理、移苗試驗等，最后進行大田規模化栽培。本發明人工繁殖的歐纈草可用于制備改善睡眠保健食品和藥物。為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下的技術方寒歐纈草的種子繁殖方法，包括取歐纈草種子，選擇實驗地進行播種、育苗、移苗、苗期管理、栽培步驟。播種實驗地選擇土壤為石灰巖發育而成的山地紅壤，PH值6-6.8，呈弱酸性。播種時間選在io月初。播種基質選擇容積比為腐葉土(腐熟)豬糞(腐熟)生紅壤=8:i:i，充分拌勻，篩制后用塑料膜覆蓋以保持水分。播種優選33x25x8cm塑料筐進行播種首先在筐底墊l一2cm透水層，放入播種基質后用邊緣直的木板沿筐緣扒平，越平越好，但不能壓；在表面用激光打孔的細噴頭噴一點水后，放入水盆或缸中，讓水將筐中基質浸透后慢慢提取出筐，滲水后基質表面下沉l-2cm，每筐播種500粒左右，蓋土厚度l-2mm，最后用塑料膜覆蓋以保持水分和溫度；4天后，當種子萌發出土時，要及時揭開塑料膜；若生產數量極大時，可用苗床進行播種，苗床寬1.2111，播種基質面用邊緣直的狹木板扒平，均勻撒播完種子后，可用木板輕輕鎮壓種子，蓋土lmm后用松針等物覆蓋，最后用細噴頭澆透水；幼苗出土達60%，分2—3次揭去覆蓋物。幼苗移植是當幼苗出土1月，長出真葉后，移植到6.5x6.5cm塑料苗杯中，每平方米可培育300杯苗，基質與播種用的相同；移苗當晴天時選在早上進行；苗栽好澆透水后上面要遮去70%左右直射光，一周后逐漸揭去遮陽網。苗期管理是當苗剛出，澆水時出水要細要柔，千萬不能沖著幼苗，澆水要澆透，忌天天澆水；有時會發生地下害蟲危害，可用低毒易分解的殺地下害蟲藥防治。栽培試驗地選擇在石灰巖發育成的以往種植玉米的熟土山地，深挖30cm打細后，整理成高床；苗杯定植株行距為30x40cm，采用穴植，底施用基肥為腐熟的農家肥，同時摻入普通過磷酸鈣；用量為農家肥2噸/畝，普鈣20公斤/畝，肥與土充分混合后即可脫去苗杯，將苗種植于穴中央；苗定植后，2-3天澆一次水，進入雨季后注意排水防澇，并根據天氣情況補水；種植2個月時追一次尿素，用量為每畝4公斤；再過l個月施一次復合肥(N:P:K=15:15:15)，用量每畝8公斤；再過l個月追施一次硫酸鉀，用量每畝8公斤；進入雨季后，雜草萌發與生長較快，應及時鏟除，同時翻松土壤，2一3周進行一次除草工作；當植株進入休眠后，進行采收。本發明還提供了一種改善睡眠的藥物，以上述種子繁殖和種植的歐纈草的提取物為原料，加入可接受的藥用載體制備而得。改善睡眠的保健品，以上述種子繁殖和種植的歐纈草的提取物為原料，加入可接受的藥用載體制備而得。具體實施例方式下面的實施例可以使本專業人員更全面地理解本發明，但不以任何方式限制本發明。實施例1:歐纈草的種子繁殖和種植方法一、育苗試驗試驗地選在土壤為石灰巖發育而成的山地紅壤，PH值6-6.8，呈弱酸性。試驗材料歐纈草(ValerianaofficnalisL.)種子(共計254粒，2005年7月由德國引入)分成兩批，分別在2005年8月3日和9月22日在溫室進行播種與幼苗培育試驗。2006年1月開始，對歐纈草繁殖生物學特性進行觀察與研究，并用采集到的種子進行播種時間(6-10月)、播種基質、幼苗移植等試驗。2007年3月20日開始用3380杯容器苗進行田間試驗株行距、追肥、采收時間、產量等。種植在露地的植株11月下旬開始休眠，到12月中旬完全進入休眠期，翌年3月中旬開始萌發進入生長期，1年生以上的采種母株4月底開始顯花，7月初仍然有少數開花；采種期為5—8月。在溫室中培養的植株，冬季不休眠，生長良好，3月底就開花。歐纈草開花期與種子成熟期參差不齊，花期4一7月，果期5—8月，同一植株種子成熟亦如此。當扁平、長卵形的瘦果由綠變為黃褐色而且頂端縮萼形成的羽毛狀冠毛張開如傘時種子成熟，瘦果變為深褐色時，由于種子長僅2-3毫米，冠毛12條左右，長6毫米，只要微風一吹，種子就隨風飄落；因而，在種子成熟期每天都要進行采種工作，這樣，才能采集到大量種子，以進行規模化生產。栽培歐纈草植株標本經研究專家陳虎彪教授鑒定無誤。具體操作如下德國引進的種子2005年8月3日播96粒種子，5天后開始出苗，成苗20株，育苗成苗率20.8%;8月25日播148粒種子，成苗52株，成苗率35.1%。2006年5月開始采集種子，并進行苗期試驗，試驗步驟和結果為1、最佳播種時間用上述采集的種子的最佳播種時間是在10月初，幼苗在溫室中培育以度過冬季，翌年3月底，即可用容器苗在田地種植，年底植株休眠后即可采收其根，形成商品。這樣，可及時提供合格壯苗進行定植，縮短從苗到商品的培育時間，降低管理成本，提高農戶的經濟效益。2、發芽試驗用上述德國引進的培育母株采集的種子進行發芽試驗，均采用三次重復，結果為種子千粒重為0.467g;發芽率為83%;發芽勢為82%。發芽率和發芽勢極為接近說明該批種子質量較好，出畝整齊。3、播種的技術與方法歐纈草的種粒較小，因而播種基質要細，管理要精細。通過種子播種試驗得到結論是好的播種基質是容積比為——腐葉土(腐熟)豬糞(腐熟)生紅壤=8:1:1，方法是播種基質充分拌均勻，篩制后用塑料膜覆蓋以保持水分。成苗率最高的是用33x25x8cm塑料筐進行播種首先在筐底墊l一2cm透水層，放入播種基質后用邊緣直的木板沿筐緣扒平，越平越好，但不能壓；在表面用激光打孔的細噴頭噴一點水后，放入水盆(缸)中，讓水將筐中基質浸透后慢慢提取出筐，滲水后基質表面下沉l-2cm，每筐播種500粒左右，蓋土厚度l-2mm，最后用塑料膜覆蓋以保持水分和溫度；4天后，當種子萌發出土時，要及時揭開塑料膜。若生產數量極大時，可用苗床進行播種，苗床寬1.2m，播種基質面用邊緣直的狹木板扒平，均勻撒播完種子后，可用木板輕輕鎮壓種子，蓋土lmm后用松針等物覆蓋，最后用細噴頭澆透水。幼苗出土達60%分2—3次揭去覆蓋物。4、幼苗移植步驟3長出的幼苗出土1月左右，長出真葉后，移植到6.5x6.5cm塑料苗杯中，每平方米可培育300杯苗，基質與播種用的相同；移苗工作晴天只能在早上進行；苗栽好澆透水后上面要遮去70%左右直射光，一周后逐漸揭去遮陽網。5、苗期管理歐纈草幼苗期要精細管理，苗剛出，澆水時出水要細要柔，千萬不能沖著幼苗，否則會引起幼苗死亡，澆水要澆透，忌天天澆水；有時會發生地下害蟲危害，可用低毒易分解的殺地下害蟲藥防治，苗期很少發生病害。二、規模化栽培試驗1、試驗地選擇試驗地選在石灰巖發育成的山地，以往種植玉米的熟土。深挖30cm打細后，整理成高床。歐纈草分布廣，雖對土壤要求不嚴，但在排水良好、肥沃的壤土上生長勢好。2、定植2007年3月20日一4月1日在試驗地種植3380株步驟一中第4步驟所培育的塑料苗杯中的杯苗(連苗杯一起)定植；定植株行距為30x40cm，采用穴植，底施用基肥為腐熟的農家肥，同時摻入普通過磷酸鈣。用量為農家肥2噸/畝，普鈣20公斤/畝。肥與土充分混合后即可脫去苗杯，將苗種植于穴中央。3、水肥管理3—5月為云南的旱季，苗定植后，2-3天要澆一次水，進入雨季后注意排水防澇，并根據天氣情況補水。5月份，種植的苗已進入快速生長期，追一次尿素，用量為每畝4公斤；6月份施一次復合肥(N:P:K=15:15:15)，用量每畝8公斤；7月追施一次硫酸鉀，用量每畝8公斤。4、中耕除草進入雨季后，雜草萌發與生長較快，應及時鏟除，同時翻松土壤，利于植物根系生長。除草工作要做到除早除了，一般情況下2—3周進行一次除草工作。5、產品采收ll月底一翌年2月，當植株進入休眠后，進行采收。2008年01月5—15日對07年3月份種植的2900株進行采挖，結果為共采收到須根201.6公斤，折算畝產干根80-100公斤。制劑實施例按實施例1的方法種子繁殖獲得歐纈草根原料，進行提取(95%乙醇室溫浸提，采用40升95%乙醇浸提5公斤歐纈草3次，得到l公斤乙醇提取物)或粉碎得到提取物或歐纈草根粉，按常規制成改善睡眠藥效的片劑或膠囊。[制劑實施例l]提取物為活性成分制作片劑按照本領域已知的方法制備片劑，每片含有下述成分:歐纈草提取物90mg乳糖100mg硬脂酸鎂3mg聚乙烯吡咯烷酮7mg合計200mg如果需要，片劑可用羥丙基甲基纖維素、滑石和著色劑進行膜包覆。提取物為活性成分制作膠囊按照本領域已知的方法制備膠囊劑，每個膠囊中含有下述成分歐纈草提取物90mg乳糖80mg玉米淀粉25mg硬脂酸鎂lmg聚乙烯吡咯垸酮4mg合計200mg原料膠囊的制作按照本領域已知的方法制備膠囊劑，每個膠囊中含有歐纈草根粉400mg。試驗例試驗例可進一步說明本發明所述歐纈草的有益效果，這些試驗例為本發明的藥效學試驗，即歐纈草改善睡眠的藥理實驗。實驗方法按實施例1的方法獲得歐纈草根原料，經粉碎后過80目篩的生藥粉于乳缽中加入0.5%CMC-Na研磨后配制成相應濃度的混懸液供動物灌胃用。實驗動物為SPF級ICR小鼠，34周齡，雌雄各半，體重1822g，由昆明醫學院實驗動物中心提供，生產許可證SCXK(滇)2005-0008。IVC動物實驗室。采用中藥藥理實驗方法學中的閾下劑量戊巴比妥鈉協同催眠試驗、閾劑量戊巴比妥鈉睡眠時間測定試驗的方法(這些方法見[l]李儀奎等.中藥藥理實驗方法學.上海科學技術出版社，1991:330;[2]李儀奎等.中藥藥理實驗方法學.上海科學技術出版社，1991:334和[3]陳奇等.中藥藥理研究方法學.1993:113114中的描述)進行試驗，均采用多次灌胃和單次腹腔注射兩種給藥方式。實驗設置溶媒對照，以安定片為陽性對照。實驗結果1、對戊巴比妥鈉閾下催眠劑量小鼠入睡率的影響取1822g小鼠80只，按體重和性別隨機分成8組溶媒對照；陽性對照安定片；歐纈草根粉樣品500、250、125mg/kg(多次給藥為l.O、0.5、0.25g/kg);每組10只，雌雄各半。各組動物分別按劑量灌胃給藥一次(多次給藥試驗除陽性對照組僅于試驗當天給藥一次外，其余各組動物每日按劑量灌胃給藥一次，連續3天)，空白對照組給予20ml/kg的0.5%CMC-Na，45min后(多次給藥試驗為末次給藥后45min)各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg，記錄15分鐘內翻正反射消失達一分鐘以上的動物數為入睡指標，用乂2檢驗比較各給藥組與對照組的差異。結果見表1和2。表l單次給藥對戊巴比妥鈉閾下催眠劑量小鼠入睡率的影響(試驗一)組別劑量(mg/kg)動物數(只)入睡動物數(只)入睡率(%)溶媒對照安定片歐纈草2.050025012510101010101102210202030與對照組相比**P<0.01實驗結果表明2.0mg/kg的安定灌胃給藥一次，能明顯提高閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的入睡率；歐纈草單次給藥對閾下劑量戊巴比妥鈉有協同催眠趨勢，與溶媒對照組相比無顯著差異。表2多次給藥對戊巴比妥鈉閨下催眠劑量小鼠入睡率的影響(試驗二)組別劑量C/kg)動物數(只)入睡動物數(只)入睡率(%)溶媒對照—10110安定片2.0mg109歐纈草l.Og104400.5g103300.25g10880*與對照組相比*P<0.05，**P<0.0115實驗結果表明2.0mg/kg的安定灌胃給藥一次、低劑量連續給藥3天，能明顯提高閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的入睡率；歐纈草多次給藥能明顯提高閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的入睡率，0.25g/kg劑量達到顯著水平。2、對閾劑量巴比妥鈉小鼠睡眠時間的影響取1822g小鼠80只，按體重和性別隨機分成8組溶媒對照；陽性對照安定片；歐纈草樣品500、250、125mg/kg(多次給藥為1.0、0.5、0.25g/kg);每組10只，雌雄各半。各組動物分別按劑量灌胃給藥一次(多次給藥試驗除陽性對照組僅于試驗當天給藥一次外，其余各組動物每日按劑量灌胃給藥一次，連續3天)，空白對照組給予20ml/kg的0.5%CMC-Na，45min后(多次給藥試驗為末次給藥后45min)各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg，以翻正反射消失為入睡時間，從翻正反射消失至恢復時間為睡眠持續時間。記錄各只小鼠的入睡時間和睡眠恢復時間，t檢驗比較組間差異的顯著性。結果見表3和4。表3單次給藥對閾劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時間的影響(試驗一)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實驗結果表明2.0mg/kg的安定灌胃給藥一次，能明顯縮短閾劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠的潛伏期、延長睡眠維持時間；歐纈草單次給藥對小鼠睡眠潛伏期有縮短趨勢，對睡眠維持時間無明顯影響。表4多次給藥對閾劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時間的影響(試驗二)組別劑量C/kg)動物數(n)睡眠潛伏期(3f士SD，min)睡眠時間(x±SD,min)溶媒對照-103.5±0.738.9±20.0安定片2.0mg101.9±0.6**75.8±21.4**中國產歐纈l.Og102.9±0.733.1±17.80.5g104.4±1.431.1±8.10.25g103.5±2.056.1±34.0與對照組相比*P<0.05，**P<0.01實驗結果表明2.0mg/kg的安定灌胃給藥一次，能明顯縮短閾劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠潛伏期、延長睡眠維持時間；樣品l.Og/kg劑量連續灌胃給藥3天，對睡眠潛伏期有縮短趨勢(已接近統計學差異)，樣品0.25g/kg劑量連續灌胃給藥3天，對睡眠時間有延長趨勢。3藥理小結歐纈草根粉以0.25g/kg、劑量連續灌胃給藥3天，能明顯提高閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的入睡率；l.Og/kg連續灌胃給藥3天，對睡眠潛伏期有縮短趨勢；0.25g/kg劑量連續灌胃給藥3天，對睡眠時間有延長趨勢。即歐纈草有溫和的催眠作用。1權利要求1、歐纈草的種子繁殖和種植方法，包括取歐纈草種子，選擇實驗地進行播種、育苗、移苗、苗期管理、栽培步驟。2、如權利要求1所述的方法，其特征在于實驗地選擇土壤為石灰巖發育而成的山地紅壤，ra值6-6.8，呈弱酸性。3、如權利要求1所述的方法，其特征在于播種時間選在10月初。4、如權利要求l所述的方法，其特征在于播種基質選擇容積比為腐葉土豬糞生紅壤=8:i:i，充分拌勻，篩制后用塑料膜覆蓋以保持水分。5、如權利要求1或4所述的方法，其特征在于播種用33x25x8cm塑料筐，在筐底墊l一2cm透水層，放入播種基質后用邊緣直的木板沿筐緣扒平，越平越好，但不能壓；在表面用激光打孔的細噴頭噴一點水后，放入水盆或缸中，讓水將筐中基質浸透后慢慢提取出筐，滲水后基質表面下沉l-2cm，每筐播種500粒左右，蓋土厚度l-2mm，最后用塑料膜覆蓋以保持水分和溫度；4天后，當種子萌發出土時，揭開塑料膜；生產數量極大時，用苗床進行播種，苗床寬1.2111，播種基質面用邊緣直的狹木板扒平，均勻撒播完種子后，可用木板輕輕鎮壓種子，蓋土lmm后用松針等物覆蓋，最后用細噴頭澆透水；幼苗出土達60%,分2—3次揭去覆蓋物。6、如權利要求1所述的方法，其特征在于幼苗移植是當幼苗出土l月，長出真葉后，移植到6.5x6.5cm塑料苗杯中，每平方米可培育300杯苗，基質與播種用的相同；移苗當晴天時選在早上進行;苗栽好澆透水后上面要遮去70%左右直射光，一周后逐漸揭去遮陽網。7、如權利要求1所述的方法，其特征在于苗期管理是當苗剛出，澆水時出水要細要柔，千萬不能沖著幼苗，澆水要澆透，忌天天澆水；當發生地下害蟲危害，用低毒易分解的殺地下害蟲藥防治。8、如權利要求1所述的方法，其特征在于栽培試驗地選擇在石灰巖發育成的以往種植玉米的熟土山地，深挖30cm打細后，整理成高床；苗杯定植株行距為30x40cm，采用穴植，底施用基肥為腐熟的農家肥，同時摻入普通過磷酸鈣；用量為農家肥2噸/畝，普鈣20公斤/畝，肥與土充分混合后即可脫去苗杯，將苗種植于穴中央；苗定植后，2-3天澆一次水，進入雨季后注意排水防澇，并根據天氣情況補水；種植2個月時追一次尿素，用量為每畝4公斤；再過l個月施一次復合肥N:PK5:15:15，用量每畝8公斤；再過1個月追施一次硫酸鉀，用量每畝8公斤；進入雨季后，雜草萌發生長較快時及時鏟除，翻松土壤，2—3周進行一次除草工作；當植株進入休眠后，進行采收。9、改善睡眠的藥物，以權利要求1種子繁殖和種植的歐纈草為原料，用95%乙醇提取原料獲得的歐纈草提取物為活性成分，加入可接受的藥用載體制備而得。10、改善睡眠的保健品，以權利要求1種子繁殖和種植的歐纈草為原料，用95%乙醇提取原料獲得的歐纈草提取物為活性成分，加入可接受的保健品載體制備而得。全文摘要本發明提供敗醬科纈草屬藥用植物歐纈草(ValerianaofficinalisL.)的種子繁殖方法，包括取歐纈草種子，選擇實驗地進行播種、育苗、移苗、苗期管理、栽培步驟。該方法克服了歐纈草種粒較小，播種和種植因難，發芽率低，病蟲害危害等難點，成功地為大規模種植植物歐纈草(ValerianaofficinalisL.)提供了簡單易行的種植和繁殖方法。文檔編號A61K36/185GK101518188SQ20091009429公開日2009年9月2日申請日期2009年4月3日優先權日2009年4月3日發明者劉玉清,俊周,徐云峰,曹家駒,趙友興,趙建國申請人:中國科學院昆明植物研究所;昆明滇虹藥業有限公司