專利名稱：：三七莖葉制備人參皂甙Rh2、Rg3的工藝方法
技術領域：
：本發明涉及植物藥用有效成份提取工藝方法，具體涉及利用三七莖葉為原料制備人參皂甙Rh2、Rg3的方法。
背景技術：
：人參是馳名世界的中藥，早在4000多年前，我們的祖先就利用人參防治疾病了，上世紀90年代初，日本學者北川勛發現人參中的一種活性物質一人參皂甙Rg3具有選擇性地抑制腫瘤細胞浸潤和轉移的作用。人參中共有40多種皂甙，但Rg3在新鮮的或自然干燥的人參藥材中并不存在，在紅參中的含量僅為十萬分之三。人參皂甙Rg3不僅具有防癌和抗癌的作用，還有提高免疫、保肝、抗疲勞、保護腦神經細胞及抗血栓等藥理作用。隨著對人參研究的深入，日本學者首次從紅參中發現了人參皂甙Rh2。這種皂甙是一種次生甙，是鮮人參加工制成紅參時，由于某些二醇組皂甙受熱降解后生成的，其在紅參中的含量約在十萬分之一左右。Rh2在十年前就被發現有抗癌活性，但是由于含量太少、提取不易、價格昂貴，因此一直未被利用。隨著臨床試驗結果陸續被報導出來，Rh2對于抗癌的療效極為驚人的滿意，被視為當今最具潛力的天然抗癌物質。研究證明Rh2對癌細胞有抑制及抗轉移的效果，而且效果非常明顯。Rh2不但具有抑制所有癌細胞的生長、誘導分化癌細胞和抗轉移的功能，同時對人體無毒性。Rh2使癌細胞核枯萎、死亡的作用，不同于任何放化療方法及藥物。Rh2對人體尚有非常優秀的提升各種免疫機能的作用，對人體健康細胞毫無毒副作用，只專攻擊癌細胞。三七[Panaxnotoginseng(BurK.)F.H.Chen]與人參同為五加科人參屬植物，有研究表明，三七莖葉也是人參皂甙_Rh2和人參皂甙Rg3的重要來源。據初步調查，目前每年采收的三七莖葉僅有約5%被利用，主要用于制備其它藥物的原料用途和制備化妝品等等，有一部分用于制備袋泡茶飲品，滋補養身，而大部分三七莖葉資源被丟棄。因此對三七莖葉的有效利用，從中提取寶貴的人參皂甙Rh2和人參皂甙Rg3，造福人類，具有很重要的現實意義。2004年2月出版的《化學研究與應用》第16卷第1期“三七葉甙制備抗癌活性成分20(R)-人參皂甙-Rh2和人參皂甙Rg3”，技術表達為利用三七葉甙為原料，通過乙酸水解和柱層析分離得到。其工藝為12克三七葉總甙，加入300毫升50%乙酸水溶液中，70°C水浴加熱6小時，冷卻，攪拌下加入5%碳酸鈉溶液。過濾，濾液用正丁醇萃取。沉淀以甲醇-氯仿溶解，進行硅膠柱層析，以氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水(2241，下層)洗脫，薄層層析檢查，合并相同組分，得到主含化合物1的組分，再以硅膠柱層析(氯仿-甲醇91)再分離純化等工藝方法。所公開的利用三七莖葉為原料提取人參皂甙Rh2及Rg3的方法存在多方面的問題，該方法各步驟使用了多種化學試劑，如碳酸鈉中和酸、正丁醇萃取、甲醇-氯仿溶解、以氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水(2241，下層)洗脫等，這些無/有機溶劑將會部分帶入產品中，影響產品質量。工藝較復雜，成本較高也是客觀存在的。
發明內容本發明的目的是提供一種以三七莖葉為原料制備人參皂甙Rh2、Rg3的工藝方法，該工藝方法簡單易行，提純率高，產品質量好，符合行業標準。工藝流程(1)提取三七葉總皂甙三七莖葉一水煮提取一吸附一洗脫一濃縮一三七葉總皂甙稀浸膏，將三七莖葉加水煎煮提取三次，每次時間1.5-5小時，溫度75100°C，提取完畢后過濾，合并三次濾液上ADS3大孔吸附樹脂柱吸附，用水洗滌，10-95%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮至無醇味，即得三七葉總皂甙稀浸膏，(2)二醇組皂甙的制備三七葉總皂甙稀浸膏一吸附一洗脫一濃縮一干燥一粉碎一二醇組皂甙，三七葉總皂甙稀浸膏加水1-5倍稀釋，上AB8樹脂柱吸附，水洗至中性，用70-80%乙醇洗脫，洗脫液濃縮干燥即得二醇組皂甙，(3)酸水解二醇組皂甙一酸水解一吸附一水洗一洗脫一濃縮干燥一含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2的混合物，將二醇組皂甙進行酸水解，酸水解條件如下采用醋酸或草酸或鹽酸或硫酸或磷酸中的一種，其中，以醋酸或草酸為常用，濃度為0.1-lOmol/L，溫度2095°C，時間1小時5天，酸水解完畢后，上樹脂柱AB8吸附，水洗至中性，可以是PH6.5-PH7.5，按濃度由低至高順序用10%至95%乙醇洗脫，洗脫液混合，濃縮干燥，所得產品即為含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2混合物。二醇組皂甙中Rf2在適宜條件下酸水解轉變成Rh2，二醇組皂甙中Rbl、Rb2、Rb3、Re、Rb在適宜條件下酸水解后改變結構轉化為Rg3。其反應式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>RblRl=GLC2-GLCR2=GLC6-GLCRb2Rl=GLC2-GLCR2=GLC6-Ara(P)RcRl=GLC2-GLCR2=GLC6-Ara(+)RdRl=GLC2-GLCR2=GLCRF2Rl=GLCR2=GLC人參皂甙Rh2結構式[結構式]由于其C-20位的空間構型不同，人參皂甙Rh2在20位均有兩種構型，即20(R)型和20(S)型。結構式如圖<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>20(S)-人參皂甙Rh220(R)-人參皂甙Rh2[分子式]C36H62O8[物理性狀]無色針狀結晶，熔點mp°c218220，比旋度[a]22D(在甲醇中)+21.8(0.93)，紅外光譜、kBr)cnf1:二易溶于甲醇、乙醇等有機溶劑中。人參皂甙Rg3結構式[結構式]由于其C-20位的空間構型不同，人參皂甙Rg3在20位均有兩種構型，即20(R)型和20(S)型。其結構式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>20(5)_人參皂甙收220(R)-人參皂甙Rg3[分子式]C42H72O13[物理性狀]無色針狀結晶，20(S)-人參皂甙Rg3易溶于甲醇，而20(R)-人參皂甙Rg3難溶于甲醇，易溶于吡啶。從下表可以看出，本發明的技術方案所制備的產品符合相關國家和行業產品質量要求。主要技術指標<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>下面結合實施例對本發明進一步說明，但不限于實施例。具體實施例方式實施例1、(1)提取三七葉總皂甙三七莖葉一水煮提取一吸附一洗脫一濃縮一三七葉總皂甙稀浸膏，將三七莖葉加水煎煮提取三次，每次時間2小時，溫度90°C，提取完畢后過濾，合并三次濾液上ADS3大孔吸附樹脂柱吸附，用水洗滌，70%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮至無醇味，即得三七葉總皂甙稀浸膏，(2)二醇組皂甙的制備三七葉總皂甙稀浸膏一吸附一洗脫一濃縮一干燥一粉碎一二醇組皂甙，三七葉總皂甙稀浸膏加水3倍稀釋，上AB8樹脂柱吸附，水洗至中性，用70%乙醇進行洗脫，洗脫液濃縮干燥即得二醇組皂甙，(3)酸水解二醇組皂甙一酸水解一吸附一水洗一洗脫一濃縮干燥一含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2的混合物，將二醇組皂甙進行酸水解，酸水解條件如下采用醋酸濃度為lmol/L，溫度95°C，時間2小時，酸水解完畢后，上樹脂柱AB8吸附，水洗至PH7.0，順序用30%、50%、60%、75%、85%乙醇進行洗脫，洗脫液混合，濃縮干燥，所得產品即為含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2混合物。所得產品Rg3和Rh2含量分別在30%和40%，此產品即為人參皂甙Rg3和Rh2。實施例2、(1)提取三七葉總皂甙三七莖葉一水煮提取一吸附一洗脫一濃縮一三七葉總皂甙稀浸膏，將三七莖葉加水煎煮提取三次，每次時間5小時，溫度75°C，提取完畢后過濾，合并三次濾液上ADS3大孔吸附樹脂柱吸附，用水洗滌，20%乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮至無醇味，即得三七葉總皂甙稀浸膏，(2)二醇組皂甙的制備三七葉總皂甙稀浸膏一吸附一洗脫一濃縮一干燥一粉碎一二醇組皂甙，三七葉總皂甙稀浸膏加水5倍稀釋，上AB8樹脂柱吸附，水洗至中性，用80%乙醇進行洗脫，洗脫液濃縮干燥即得二醇組皂甙，(3)酸水解二醇組皂甙一酸水解一吸附一水洗一洗脫一濃縮干燥一含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2的混合物，將二醇組皂甙進行酸水解，酸水解條件如下采用草酸濃度為8mol/L，溫度35°C，時間4天，酸水解完畢后，上樹脂柱AB8吸附，水洗至PH6.8，順序用10%、60%、80%、95%乙醇進行洗脫，洗脫液混合，濃縮干燥，所得產品即為含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2混合物。所得產品Rg3和Rh2含量分別在30%和40%，此產品即為人參皂甙Rg3和Rh2。經按國家及行業標準對產品進行檢測，符合國家及行業標準。權利要求三七莖葉制備人參皂甙Rh2、Rg3的工藝方法，其特征在于按以下工藝流程制備(1)提取三七葉總皂甙三七莖葉→水煮提取→吸附→洗脫→濃縮→三七葉總皂甙稀浸膏，將三七莖葉加水煎煮提取三次，每次時間1.5-5小時，溫度75～100℃，提取完畢后過濾，合并三次濾液上ADS3大孔吸附樹脂柱吸附，用水洗滌，10-95％乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮至無醇味，即得三七葉總皂甙稀浸膏，(2)二醇組皂甙的制備三七葉總皂甙稀浸膏→吸附→洗脫→濃縮→干燥→粉碎→二醇組皂甙，三七葉總皂甙稀浸膏加水1-5倍稀釋，上AB8樹脂柱吸附，水洗至中性，用70-80％乙醇洗脫，洗脫液濃縮干燥即得二醇組皂甙，(3)酸水解二醇組皂甙→酸水解→吸附→水洗→洗脫→濃縮干燥→含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2的混合物，將二醇組皂甙進行酸水解，酸水解條件如下采用醋酸或草酸或鹽酸或硫酸或磷酸中的一種，濃度為0.1-10mol/L，溫度20～95℃，時間1小時～5天，酸水解完畢后，上樹脂柱AB8吸附，水洗至中性，按濃度由低至高順序用10％至95％乙醇洗脫，洗脫液混合，濃縮干燥，所得產品即為含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2混合物。2.根據權利要求1所述的三七莖葉制備人參皂甙Rh2、Rg3的工藝方法，其特征在于酸水解選用醋酸或草酸。全文摘要本發明涉及三七莖葉為原料制備人參皂甙Rh2、Rg3的工藝方法，工藝流程(1)提取三七葉總皂甙三七莖葉→水煮提取→吸附→洗脫→濃縮→三七葉總皂甙稀浸膏；(2)二醇組皂甙的制備三七葉總皂甙稀浸膏→吸附→洗脫→濃縮→干燥→粉碎→二醇組皂甙；(3)酸水解二醇組皂甙→酸水解→吸附→水洗→洗脫→濃縮干燥→含人參皂甙Rg3和人參皂甙Rh2的混合物。該工藝方法簡單易行，提純率高，產品質量好，符合行業標準。文檔編號A61P7/02GK101830957SQ20091009419公開日2010年9月15日申請日期2009年3月12日優先權日2009年3月12日發明者張凱,張吉華申請人:云南黑藥植物科技開發有限公司