飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯及其合成方法和應用的制作方法

文檔序號：1150168閱讀：328來源：國知局

專利名稱：飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯及其合成方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及飽和脂肪鏈醇三肽酯，尤其涉及一系列具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈醇HiS-Gly-AA三肽酯，還涉及這些飽和脂肪鏈醇三肽酯的制備方法以及它們作為免疫抑制劑的應用，屬于生物醫藥領域。
背景技術：
據統計，截至2002年底，全球共進行各種器官移植935792例次，其中腎移植 585877例次、肝臟移植112153例次、心臟移植66559例次。此外，胰、肺、小腸等器官移植及心_肺、胰-腎、肝-腎、肝-腸等多臟器聯合移植也都獲得成功并應用于臨床。目前，腎移植1年人/腎存活率達90 % 95 %，5年存活率超過70 %。臟器移植要形成移植耐受，這就要求患者終身服用免疫抑制劑。器官移植的進展在很大程度上取決于免疫抑制劑的進展。近幾十年，雖然新免疫抑制藥物使得器官移植在臨床取突飛猛進發展，但它們的毒副作用，例如腎毒性和骨髓抑制作用仍然是器官移植造必須面對的嚴重問題。環孢菌素A是目前臨床常用的免疫抑制劑。由于環孢菌素A的水溶性極差以及腎毒性很強，所以無論是劑型還是療效都不盡人意。提高環孢菌素A制劑的水溶性，降低環孢菌素A的腎毒性，一直是環孢菌素A研究的熱點。尿毒素肽具有免疫抑制活性。發明人認識到，把尿毒素肽與脂肪鏈醇綴合生成的酯具有自組裝性能，因而可以用作具有免疫抑制活性的載藥材料。例如可以用來包裹環孢菌素A，達到提高環孢菌素A的水溶性和降低環孢菌素A腎毒性的雙重目的。

發明內容
本發明的目的之一是，將尿毒素三肽與脂肪鏈醇綴合，得到具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈醇三肽酯綴合物。本發明的目的之一是通過以下技術方案實現的通式I的12種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯His-Gly-AA-O-CH2- (CH2) nCH3 I其中，通式I 中的 AA 為 Glu 或 Lys，n 為 6、8、10、12、14 或 16。本發明的目的之二是，提供一種制備上述具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈醇 His-Gly-AA三肽酯的方法。本發明的目的之二是通過以下技術方案來實現的一種制備通式I的12種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯的方法，該方法包括(1)按照現有液相合成技術，將飽和脂肪醇依次與谷氨酸或賴氨酸的保護中間體、甘氨酸的保護中間體、組氨酸的保護中間體逐步接肽合成保護基保護的飽和脂肪醇三肽綴合物，所述飽和脂肪醇為CH3 (CH2)nCH2OH, η = 6、8、10、12、14或16 ；(2)依次脫去保護基保護的飽和脂肪醇三肽綴合物的N端保護基和C端保護基得到目標化合物。其中所述N端保護基是對多肽的N端進行保護時常用的保護基團，例如可以是叔丁氧羰基(Boc)，芐氧羰基(Z)；所述C端保護基是對多肽的C端進行保護時常用的保護基團，例如可以是芐氧基(OBzl)；所述液相合成技術及所述保護、脫保護的過程是本領域的常規并公知的技術。當AA為Glu時，所述飽和脂肪醇三肽綴合物的制備方法可以用圖1的路線概括，具體的，所述方法包括(1)在(Boc)2O和NaOH存在下將甘氨酸轉化為N-叔丁氧羰基甘氨酸；(2)在(Boc)2O和三乙胺存在下將組氨酸轉化為N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基_組氨酸；(3)在DCC、HOBt、無水THF存在下將N-叔丁氧羰基-谷氨酸-Y -芐酯與飽和脂肪醇縮合，生成飽和脂肪醇N-叔丁氧羰基_ Y _芐酯-谷氨酸酯；(4)在氯化氫_乙酸乙酯中將飽和脂肪醇N-叔丁氧羰基_ Y _節酯-谷氨酸酯脫除叔丁氧羰保護基，生成飽和脂肪醇Y _芐酯-谷氨酸酯；(5)在無水THF中，在DCC和HOBt存在下將飽和脂肪醇Y _芐酯-谷氨酸酯與 N-叔丁氧羰基甘氨酸縮合，生成飽和脂肪醇N-叔丁氧羰基甘氨酰Y -芐酯谷氨酸酯；(6)在氯化氫-乙酸乙酯存在下將飽和脂肪醇N-叔丁氧羰基甘氨酰Y-芐酯谷氨酸酯脫除叔丁氧羰基生成飽和脂肪醇甘氨酰Y _芐酯-谷氨酸酯；(7)在無水THF中，在DCC和HOBt存在下將飽和脂肪醇甘氨酰Y -芐酯谷氨酸酯與N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基-組氨酸縮合，生成飽和脂肪醇N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基組氨酰甘氨酰Y-芐酯谷氨酸酯；(8)在氯化氫-乙酸乙酯中將飽和脂肪醇N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基組氨酰甘氨酰Y-芐酯-谷氨酸酯脫除叔丁氧羰基，生成飽和脂肪醇組氨酰甘氨酰Y-芐酯-谷氨酸酯；(9)在無水乙醇中，在Pd/C存在下將飽和脂肪醇組氨酰甘氨酰Y-芐酯-谷氨酸酯氫解，生成飽和脂肪醇組氨酰甘氨酰谷氨酸酯。當AA為Lys時，所述飽和脂肪醇三肽綴合物的制備方法可以用圖2的路線概括，具體的，所述方法包括(1)在(Boc) 20和NaOH存在下將甘氨酸轉化為N-叔丁氧羰基甘氨酸；(2)在(Boc)2O和三乙胺存在下將組氨酸轉化為N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基_組氨酸；(3)在DCC、HOBt、無水THF存在下將Na-叔丁氧羰基-Ne-芐氧羰基賴氨酸與飽和脂肪醇縮合，生成飽和脂肪醇Na -叔丁氧羰基-N、芐氧羰基賴氨酸酯；(4)在氯化氫-乙酸乙酯中將飽和脂肪醇^-叔丁氧羰基-Ne-芐氧羰基賴氨酸酯脫除叔丁氧羰保護基，生成飽和脂肪醇Ne-芐氧羰基賴氨酸酯；(5)在無水THF中，在DCC和HOBt存在下將飽和脂肪醇Nε -芐氧羰基賴氨酸酯與 N-叔丁氧羰基甘氨酸縮合，生成飽和脂肪醇N-叔丁氧羰基甘氨酰Ne -芐氧羰基賴氨酸酯；(6)在氯化氫-乙酸乙酯存在下將飽和脂肪醇N-叔丁氧羰基甘氨酰N、芐氧羰基賴氨酸酯脫除叔丁氧羰基生成飽和脂肪醇甘氨酰N、芐氧羰基賴氨酸酯；
4
(7)在無水THF中，在DCC和HOBt存在下將飽和脂肪醇甘氨酰Nε -芐氧羰基賴氨酸酯與N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基_組氨酸縮合，生成飽和脂肪醇N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基組氨酰甘氨酰Ne -芐氧羰基賴氨酸酯；(8)在氯化氫-乙酸乙酯中將飽和脂肪醇N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基組氨酰甘氨酰N、芐氧羰基賴氨酸酯脫除叔丁氧羰基，生成飽和脂肪醇組氨酰甘氨酰N、芐氧羰基賴氨酸酯；(9)在無水乙醇中，在Pd/C存在下將飽和脂肪醇組氨酰甘氨酰Νε -芐氧羰基賴氨酸酯氫解，生成飽和脂肪醇組氨酰甘氨酰賴氨酸酯。實驗結果表明本發明的12種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯具有優秀的免疫抑制作用，臨床上可作為免疫抑制劑應用。并且本發明的飽和脂肪鏈醇 His-Gly-AA三肽酯水溶液中均能自組裝成粒經穩定在102-454nm的納米球，可作為制備微乳或脂質體藥物載體的制劑材料，另外可作為制備微乳、脂質體藥物載體的靶向制劑材料。

圖1為當通式I中AA為Glu時6種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈醇 His-Gly-Glu三肽酯的合成路線。i)無水THF、DCC、H0Bt和NMM ;ii)4N氯化氫-乙酸乙酯溶液；iii)無水乙醇、Pd/C 和 H2 ；7a η = 6,7b η = 8,7c η = 10，7d η = 12，7e η = 14， 7f η = 16。圖2為當通式I中AA為Lys時6種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈醇 His-Gly-Lys三肽酯的合成路線。i)無水THF、DCC、H0Bt和NMM ;ii)4N氯化氫-乙酸乙酯溶液；iii)無水乙醇、Pd/C 和 H2 ； 14a η = 6，14b η = 8，14c η = 10，14d η = 12，14e η = 14，14f η = 16。為了進一步闡述本發明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發明進行具體描述，不應當理解為對本發明的限制。
具體實施例方式實施例1 制備 Boc-Glu (OBzl) - (CH2) 6CH3將1. OOg (2. 96mmol) Boc-Glu (OBzl)溶于 20ml 無水 THF，冰浴下往得到的溶液中加入0. 39g(2.96mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)，并使完全溶解。10分鐘后加入 0. 74g(3. 55mmol) 二環己基羰二亞胺(DCC)。得到反應液(I)。冰浴下把0. 39g(2. 96mmol) 脂肪醇CH3(CH2)6CH2OH懸浮于20ml無水THF中，然后加入Iml N-甲基嗎啉(NMM)，調pH 8-9。攪拌35分鐘，得到反應液(II)。冰浴下把反應液(I)加入反應液(II)中，先冰浴下攪拌lh，再室溫攪拌12h，TLC (氯仿/甲醇，10 1)顯示Boc-Glu (Z)消失。濾除二環己基脲 (D⑶)，減壓除去THF。殘留物用50ml乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液洗、飽和NaCl水溶液洗、5% KHSO4水溶液洗和飽和NaCl水溶液洗。有機相用無水Na2SO4 干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到1. 26g(95% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS(m/ ζ) :450[Μ+Η]+, [α ]20d = -8. 4(c = 1. 0，CH3OH)。實施例 2 制備 Boc-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 8CH3按照實施例 1 的方法由 1. OOg(2. 96mmol)Boc-Glu(OBzl)和 0. 47g(2. 96mmol)CH3(CH2)8CH2OH制得1. 37g(97% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m [α ]20d = -11. 6 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例3 制備 Boc-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 10CH3按照實施例1 的方法由 1. OOg (2. 96mmol) Boc-Glu (OBzl)和 O, CH3(CH2)ltlCH2OH制得1.46g(98% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m [α ]20d = -11. 5 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例4 制備 Boc-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 12CH3按照實施例1 的方法由 1. OOg(2. 96mmol)Boc-Glu(OBzl)和 O, CH3(CH2)12CH2OH制得1. 55g(98% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS (m [a J20d = -16. 6 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例5 制備 Boc-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 14CH3按照實施例1 的方法由 1. OOg (2. 96mmol) Boc-Glu (OBzl)和 O, CH3(CH2)14CH2OH制得1. 54g(94% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS (m [a J20d = -13. 8 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例6 制備 Boc-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 16CH3按照實施例1 的方法由 1. OOg(2. 92mmol)Boc-Glu(OBzl)和 O, CH3(CH2)16CH2OH制得1.68g(98% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m [α ]20d = -30. 2 (c = 1. 0，CH30H)。
實施例 7 制備 HCl · Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 6CH3將1. 26g(2. 81mmol) Boc-Glu (OBzl)-OCH2 (CH2)6CH3 溶解在 25ml 4N 氯化氫-乙酸乙酯溶液中，室溫攪拌2小時，TLC (氯仿甲醇，5 1)顯示Boc-Glu (OBzl)-OCH2 (CH2)6CH3 消失，減壓濃縮除去乙酸乙酯，殘留物反復加少量乙醚進行減壓濃縮以除去氯化氫。最后加少量乙醚將殘留物研磨成1.03g(95% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 350[Μ+Η]+, [α ]20d = 11. 5(c = 1. O, CH3OH)。實施例8 制備 HCl · Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 8CH3按照實施例7 的方法從 1. 37g (2. 87mmol) Boc-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 8CH3 制得 1. 16g(98% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 378[Μ+Η]+, [ α J20d = 21.3(c = 1. O, CH3OH)。實施例9 制備 HCl · Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 10CH3按照實施例7 的方法，從 1. 46g (2. 89mmol) Boc-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 10CH3 制得 1. 15g(90% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 406[Μ+Η]+, [ α J20d = 13. 2 (c = 1. O, CH3OH)。實施例10 制備 HCl · Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 12CH3按照實施例7 的方法從 1. 55g (2. 91mmol) Boc-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 12CH3 制得 1. 22g(89% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) :434[Μ+Η]+，[α ]2°D = 9. 5 (c = 1. O, CH3OH)。實施例11 制備 HCl · Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 14CH3按照實施例7 的方法，從 1. 54g (2. 75mmol) Boc-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 14CH3 制得 1. 26g(92% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) :462[M+H]+，[ α ]2°D = 8. 1 (c = 1.0，
/ζ) 478 [M+H]
.55g(2. 96mmol) /ζ) 506 [M+H]
.64g(2. 96mmol) /z) 534 [M+H]
.72g(2. 96mmol) /z) 562 [M+H]
.79g(2. 92mmol) /z) 590 [M+H]
6CH3OH)。實施例12 制備 HCl · Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 16CH3按照實施例7 的方法，從 1. 68g (2. 85mmol) Boc-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 16CH3 制得 1. 31g(92% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS (m/z) 490 [Μ+Η]+, [ α J20d = 13. 2 (c = 1. 0， CH3OH)。實施例13 制備 Boc-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 6CH3按照實施例1 的方法由 0. 57g (3. 26mmol) Boc-Gly 和 1. 26g(3. 26mmol) HCl .Glu(OBzl)-OCH2(CH2)6CH3制得 1. 45g(88% )標題化合物，為淡黃色油狀物。ESI-MS(m/ ζ) :507[Μ+Η]+, [α ]20d = -6. 4(c = 1. 0，CH3OH)。實施例14 制備 Boc-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 8CH3按照實施例1 的方法由 0. 58g (3. 31mmol) Boc-Gly 和 1. 37g (3. 31mmol) HCl .Glu(OBzl)-OCH2(CH2)8CH3制得 1. 45g(82% )標題化合物，為淡黃色油狀物。ESI-MS(m/ ζ) :535[Μ+Η]+, [α ]20d = -4. 6 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例15 制備 Boc-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 10CH3按照實施例1 的方法由 0. 45g (2. 59mmol) Boc-Gly 和 1. 15g(2. 59mmol) HCl .Glu (OBzl)-OCH2 (CH2)ltlCH3 制得 1. 36g(94% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS (m/ ζ) :563[Μ+Η]+, [α ]20d = -16. 4(c = 1. 0，CH3OH)。實施例16 制備 Boc-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 12CH3按照實施例1 的方法由 0. 45g (2. 59mmol) Boc-Gly 和 1. 22g(2. 59mmol) HCl .Glu(OBzl)-OCH2(CH2)12CH3制得 1. 24g(81 標題化合物，為淡黃色油狀物。ESI-MS(m/ ζ) :591[Μ+Η]+, [α ]20d = -7. 1 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例17 制備 Boc-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 14CH3按照實施例1 的方法由 0. 45g (2. 53mmol) Boc-Gly 和 1. 26g(2. 53mmol) HCl .Glu (OBzl)-OCH2 (CH2)14CH3 制得 1. 41g(90% )標題化合物，為淡黃色固體。ESI-MS (m/ ζ) :619[Μ+Η]+, [α ]20d = -5. 6 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例18 制備 Boc-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 16CH3按照實施例1 的方法由 0. 47g (2. 68mmol) Boc-Gly 和 1. 41g (2. 68mmol) HCl .Glu (OBzl)-OCH2 (CH2)16CH3 制得 1. 51g(87% )標題化合物，為淡黃色固體。ESI-MS (m/ ζ) :647[Μ+Η]+, [α ]20d = -5. 1 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例19 制備 HCl · Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 6CH3按照實施例7 的方法，從 1. 45g (2. 87mmol) Boc-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 6CH3 制得 1. 18g(93% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 407[Μ+Η]+, [ α J20d = -2. 8 (c = 1. O, CH3OH)。實施例20 制備 HCl · Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 8CH3按照實施例7 的方法，從 1. 45g(2. 71 匪ol) Boc-Gly-Glu (OBzl)-OCH2 (CH2) 8CH3 制得 1. 13g(89% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 435[Μ+Η]+, [ α J20d = -8. 7 (c = 1. O, CH3OH)。實施例21 制備 HCl · Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 10CH3按照實施例7 的方法，從 1. 36g(2. 42匪ol) Boc-Gly-Glu (OBzl)-OCH2 (CH2) 1(1CH3 制得 1. 16g(96% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 463[Μ+Η]+, [ α J20d = -6. 5 (c =1. 0，CH3OH)。實施例22 制備 HCl · Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 12CH3按照實施例7 的方法，由 1. 24g(2. I(Mimol)Boc-Gly-Glu(OBzl)-OCH2(CH2)12CH3 制得 1. 07g(97% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 491 [Μ+Η]+, [ α J20d = -2. 8 (c =1. 0，CH3OH)。實施例23 制備 HCl · Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 14CH3按照實施例7 的方法，從 1. 41g(2. 28_ο1)Boc-Gly-Glu (OBzl)-OCH2 (CH2) 14CH3 制得 1. 20g(95% )標題化合物，為米黃色固體。ESI-MS (m/z) 519 [Μ+Η]+, [ α J20d = -5. 8 (c = 1· 0，CH3OH)。實施例24 制備 HCl · Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 16CH3按照實施例7 的方法，從 1. 51g(2. 33mmol)Boc-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 16CH3 制得 1. 28g(94% )標題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z) 547[Μ+Η]+, [ α J20d = -2. 1 (c = 1· 0，CH3OH)。實施例25 制備 Boc-His(Boc)-Gly-Glu(OBzl)-OCH2(CH2)6CH3按照實施例1 的方法由 0. 80g(2. 25mmol) Boc-His (Boc)和 1. OOg (2. 25mmol) HCl · Gly-Glu(OBzl)-OCH2(CH2)6CH3制得，所得化合物經硅膠柱層析純化得無色透明油狀物 1.09g，純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 65%。ESI-MS(m/z) :744[Μ+Η]+, [α ]20D =-14. 3 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例26 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 8CH3按照實施例1 的方法 0. 76g(2. 12mmol) Boc-His (Boc)和 1. OOg (2. 12mmol) HCl · Gly-Glu(OBzl)-OCH2(CH2)8CH3制得，所得化合物經硅膠柱層析純化得無色透明油狀物 1. 16g，純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 71%。ESI-MS (m/z) :772[Μ+Η]+，[α ]20D =-20. O (c = 1. 0，CH3OH)。實施例27 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 10CH3按照實施例1 的方法由 0. 71g(2. OOmmoDBoc-His (Boc)禾Π 1. OOg(2. OOmmo 1) HCl · Gly-Glu(OBzl)-OCH2(CH2)10CH3制得，所得化合物經硅膠柱層析純化得無色透明油狀物 1.09g，純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 68%。ESI-MS(m/z) :800 [M+H]+，[ α ]2°D =-25. 8 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例28 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 12CH3按照實施例1 的方法由 0. 67g(l. 89mmol)Boc-His (Boc)和 1. OOg(1. 89mmol) HCl · Gly-Glu(OBzl)-OCH2(CH2)12CH3制得，所得化合物經硅膠柱層析純化得無色透明油狀物 1. 16g，純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 74%。ESI-MS (m/z) :828[Μ+Η]+，[α ]20D =-19. 8 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例29 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 14CH3按照實施例1 的方法由 0. 71g(l. 98mmol) Boc-His (Boc)和 1. 10g(l. 98mmol) HCl · Gly-Glu(OBzl)-OCH2(CH2)14CH3制得，所得化合物經硅膠柱層析純化得無色透明油狀物 1.05g，純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 62%。ESI-MS(m/z) :856 [M+H]+，[ α ]2°D =-19. 7 (c = 1. 0，CH3OH)。
8
實施例30 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 16CH3按照實施例1 的方法由 0. 61g(l. 72mmol) Boc-His (Boc)和 1. 10g(l. 72mmol) HCl · Gly-Glu(OBzl)-OCH2(CH2)l6CH3制得，所得化合物經硅膠柱層析純化得無色透明油狀物 1.08g，純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 71%。ESI-MS (m/z) :884[Μ+Η]+，[ α ]20D =-19. l(c = 1. 0，CH3OH)。實施例31 制備 HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 6CH3按照實施例7 的方法，從 900mg(l. 21mmol) Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (C H2)6CH3 制得 0. 65g(92% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) :544[M+H] +。實施例32 制備 HCl · HiS-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 8CH3按照實施例7 的方法，從 900mg(l. 16mmol) Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (C H2)8CH3 制得 0. 64g(90% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) :572[M+H] +。實施例33 制備 HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 10CH3按照實施例7 的方法，從 850mg(l. 06mmol) Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (C H2)1QCH3 制得 0. 61g(91% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) :600[M+H]+。實施例34 制備 HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 12CH3按照實施例7 的方法，，從 900mg(1.09mmol) Boc-His (Boc)-Gly-Glu (OBzl)-OCH2 ( CH2)12CH3 制得 0. 67g(93% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) :628[M+H]+。實施例35 制備 HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 14CH3按照實施例7 的方法，從 850mg(l. OOmmol) Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (C H2)14CH3 制得 0.64g(92% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) :699[M+H]+。實施例36 制備 HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 16CH3按照實施例7 的方法，從 800mg(0. 91mmol) Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBOBzll) -OCH 2(CH2)16CH3 制得 0. 59g(90% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) :684[M+H] +。實施例37 制備 His-Gly-Glu-OCH2 (CH2) 6CH3(7a)將650mg(l. llmmol)HCl · His-Gly-Glu (OBzl)-OCH2 (CH2)6CH3 用乙醇溶解、加入約 5% Pd/C、室溫攪拌并通 H2 (0. 02Mba)，至 HCl ‘His-Gly-Glu (OBzL) -OCH2 (CH2)6CH3 消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干制得447mg(82% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/Z) 451[Μ-ΗΓ，[a ]20D =-9. 8(c = 1. 0，CH3OH)。Μ· ρ· 112. 2—113. 1°C。實施例38 制備 His-Gly-Glu-OCH2 (CH2)8CH3 (7b)將640mg(l. 04mmol)HCl · His-Gly-Glu (OBzl)-OCH2 (CH2)8CH3 用乙醇溶解、加入約 5% (1/(、室溫攪拌并通!12(0.021&幻至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干制得 445mg(80% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/z) 479 [M-H]", [a J20d = -18. 7 (c = 1. 0，CH3OH)，Μ· ρ· 112. 9-113. 6°C。實施例39 制備 HiS-Gly-Glu-OCH2 (CH2)ltlCH3 (7c)將610mg (0. 96mmol)HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 10CH3 用乙醇溶解、加入約5% (1/(、室溫攪拌并通!12(0.021&幻至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干制得 448mg(83% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/z) :507[Μ_ΗΓ，[ α ]2°d =-6· 6 (c = 1· 0，CH3OH)，Μ· ρ· 129. 7-130. 6°C。實施例40 制備 His-Gly-Glu-OCH2 (CH2) 12CH3 (7d)
將670mg(l. 01mmol)HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 12CH3 用乙醇溶解、加入約5%Pd/C、室溫攪拌并通H2(0.02Mba)至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干制得 437mg(75% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/z) 535 [M-H]", [a J20d = -5. 7 (c = 1. 0，CH3OH)，Μ. ρ· 88. 1-88. 9°C。實施例41 制備 His-Gly-Glu-OCH2 (CH2) 14CH3(7e)將640mg (0. 92mmol)HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 14CH3 用乙醇溶解、加入約5% (1/(、室溫攪拌并通!12(0.021&幻至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干制得 473mg(84% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/z) :563[Μ-Η]_，[ α ]2°D =-1· 9 (c = 1· 0，CH3OH)，Μ· ρ· 124. 0-125. 9°C。實施例42 制備 His-Gly-Glu-OCH2 (CH2) 16CH3 (7f)將590mg (0. 82mmol)HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 16CH3 用乙醇溶解、加入約5% (1/(、室溫攪拌并通!12(0.021&幻至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干制得 385mg(72% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/z) 591 [M-H]", [a J20d = -5. 1 (c = 1. 0，CH3OH)，Μ. ρ· 84. 1-85. 2°C。實施例43 制備 Boc-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 6CH3將1. OOg (2. 6mmol) Boc-Lys (Z)溶于20ml無水THF，冰浴下往得到的溶液中加入 0. 35g(2. 6mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)，并使完全溶解。10分鐘后加入0. 65g(3. Immo 1) 二環己基羰二亞胺(DCC)。得到反應液(III)。冰浴下把0.35g(2.6mmol)脂肪醇 CH3(CH2)6CH2OH懸浮于20ml無水THF中，然后加入Iml N-甲基嗎啉(NMM)，調pH 8_9。攪拌35分鐘，得到反應液(IV)。冰浴下把反應液(III)加入反應液(IV)中，先冰浴下攪拌 lh，再室溫攪拌12h，TLC(氯仿/甲醇，10 1)顯示Boc-Lys(Z)消失。濾除二環己基脲 (D⑶)，減壓除去THF。殘留物用50ml乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶液洗、飽和NaCl水溶液洗、5% KHSO4水溶液洗和飽和NaCl水溶液洗。有機相用無水Na2SO4 干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到1. 25g(98% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS(m/ ζ) :493[Μ+Η]+, [α ]20d = -21. 0(c = 1. 0，CH3OH)。實施例44 制備 Boc-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 8CH3按照實施例43 的方法由 1. OOg (2. 6mmol) Boc-Lys (Z)和 0. 42g(2. 6mmol) CH3(CH2)8CH2OH 制得 1. 20g(89% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS(m/z) :521[M+H]+， [α ]20d = -20. 9 (c = 1· 0，CH3OH)。實施例45 制備 Boc-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 10CH3按照實施例43 的方法由 1. OOg (2. 6mmol) Boc-Lys (Z)和 0. 48g(2. 6mmol) CH3(CH2)ltlCH2OH 制得 1· 3Ig(92% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS(m/z) :549[M+H]+， [α ]20d = -14. 4(c = 1. 0，CH3OH)。實施例46 制備 Boc-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 12CH3按照實施例43 的方法由 1. OOg (2. 6mmol) Boc-Lys (Z)和 0. 55g(2. 6mmol) CH3(CH2)12CH2OH 制得 1. 35g(93% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/z) :577[M+H]+， [α ]20d = -8. 9 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例 47 制備 Boc-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 14CH3按照實施例 43 的方法由 1. OOg (2. 6mmol) Boc-Lys (Z)和 0. 63g(2. 6mmol)
10CH3(CH2)14CH2OH 制得 1. 55g(99% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS(m/z) :604[M+H]+， [α ]20d = -11. 9 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例48 制備 Boc-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 16CH3按照實施例43 的方法由 1. OOg (2. 6mmol) Boc-Lys (Z)和 0. 69g(2. 6mmol) CH3(CH2)16CH2OH 制得 1. 56g(95% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/z) :632[M+H]+， [α ]20d = -30. 2 (c = 1· 0，CH3OH)。實施例49 制備 HCl · Lys (Z) -OCH2 (CH2) 6CH3將1. 25g (2. 54mmol) Boc-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 6CH3 溶解在 25ml 4N 氯化氫-乙酸乙酯溶液中，室溫攪拌2小時，TLC (氯仿甲醇，5 1)顯示Boc-Lys (Z)-OCH2 (CH2)6CH3消失，減壓濃縮除去乙酸乙酯，殘留物反復加少量乙醚進行減壓濃縮以除去氯化氫。最后加少量乙醚將殘留物研磨成1.03g(95% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) :393[M+H]+， [α ]20d = 100. 3 (c = 1. 0，CH3OH)。實施例50 制備 HCl · Lys (Z) -OCH2 (CH2) 8CH3按照實施例49 的方法，從 1. 20g (2. 31mmol) Boc-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 8CH3 制得
0.95g(90% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 421 [Μ+Η]+, [ α J20d = 91. 3 (c =
1.O, CH3OH)。實施例51 制備 HCl · Lys (Z) -OCH2 (CH2) 10CH3按照實施例49 的方法，從 1. 31g (2. 39mmol) Boc-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 10CH3 制得 1. 07g(92% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 449[Μ+Η]+, [ α J20d = 78. 7 (c = 1. O, CH3OH)。實施例 52 制備 HCl · Lys (Z) -OCH2 (CH2) 12CH3按照實施例49 的方法，從 1. 35g (2. 34mmol) Boc-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 12CH3 制得
0.99g(89% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS (m/z) 477 [Μ+Η]+, [ α J20d = 79. O (c =
1.O, CH3OH)。實施例53 制備 HCl · Lys (Z) -OCH2 (CH2) 14CH3按照實施例49 的方法，從 1. 55g (2. 57mmol) Boc-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 14CH3 制得 1. 36g(98% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) 505[Μ+Η]+, [ α J20d = 71. 3(c = 1. 0， CH3OH)。實施例54 制備 HCl · Lys (Z) -OCH2 (CH2) 16CH3按照實施例49 的方法，從 1. 56g (2. 47mmol) Boc-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 16CH3 制得 1. 23g(88% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS (m/z) 533 [Μ+Η]+, [ α J20d = 65. O (c = 1. 0， CH3OH)。實施例55 制備 Boc-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 6CH3按照實施例43 的方法由 0. 41g (2. 33mmol) Boc-Gly 和 1. OOg (2. 33mmol) HCl · Lys (Z)-OCH2 (CH2)6CH3 制得 1. 25g(98% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS (m/z) 550[Μ+Η]+, [α ]20d = -9. 7 (c = 1. O, CH3OH)。實施例56 制備 Boc-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 8CH3按照實施例43 的方法由 0. 35g(l. 97mmol) Boc-Gly 和 0. 90g(l. 97mmol) HCl · Lys (Z)-OCH2 (CH2)8CH3 制得 1. 08g(95% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS (m/z)578[M+H]+，[a ]20d = -1. 8(c = 1. 0，CH3OH)。實施例 57 制備 Boc-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 10CH3按照實施例43 的方法由 0. 33g(l. 85mmol) Boc-Gly 和 0. 90g(l. 85mmol) HCl ·Lys (Z)-OCH2 (CH2)ltlCH3 制得 1. llg(99% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS (m/z) 606[Μ+Η]+, [α ]20d = -2. 2 (c = 1. O, CH3OH)。實施例58 制備 Boc-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 12CH3按照實施例43 的方法由 0. 38g(2. 15mmol) Boc-Gly 和 1. IOg (2. 15mmol) HCl ·Lys (Z)-OCH2 (CH2)12CH3 制得 1. 28g(94% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS (m/z) 634 [M+H]+，[a J20d = -0. 9 (c = 1. O, CH3OH)。實施例59 制備 Boc-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 14CH3按照實施例43 的方法由 0. 36g (2. 04mmol) Boc-Gly 和 1. IOg (2. 04mmol) HCl ·Lys (Z)-OCH2 (CH2)14CH3 制得 1. 31g(97% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS (m/z) 662[M+H]+，[a J20d = -8. 4(c = 1. O, CH3OH)。實施例60 制備 Boc-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 16CH3按照實施例43 的方法由 0. 28g(l. 59mmol)Boc-Gly 和 1. IOg(1. 59mmol) HCl ·Lys (Z)-OCH2 (CH2)16CH3 制得 1.08g(99% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS (m/z) 690[Μ+Η]+, [α ]20d = -6. 5 (c = 1. O, CH3OH)。實施例61 制備 HCl · Gly-Lys(Z) -OCH2(CH2)6CH3按照實施例49 的方法，從 1. 20g(2. 18mmol) Boc-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 6CH3 制得 0.85g(80% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 450[M+H][a]20D = -19. O (c =1. 0，CH3OH)。實施例 62 制備 HCl · Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 8CH3按照實施例49 的方法，從 1. 00g(l. 73mmol)Boc-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2)8CH3 制得 0. 76g(85% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 478 [M+H][a ]2°D = -47. 7 (c =1. 0，CH3OH)。實施例63 制備 HCl · Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 10CH3按照實施例49 的方法，從 1. OOg (1. 65mmol) Boc-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 10CH3 制得 0. 80g(89% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 506 [M+H][a ]2°D = -94. 3 (c =1. 0，CH3OH)。實施例64 制備 HCl · Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 12CH3按照實施例49 的方法，從 1. IOg (1. 74mmol) Boc-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 12CH3 制得 0.80g(81% )標題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 534[M+H][ a ]2°D =-53. O (c =1. 0，CH3OH)。實施例65 制備 HCl · Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 14CH3按照實施例49 的方法，從 1. 20g(l. 82mmol)Boc-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 14CH3 制得
0.98g(91%)標題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z) :562[M+H]+，[a ]20D = -17. 7 (c =
1.O, CH3OH)。實施例66 制備 HCl · Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 16CH3按照實施例49 的方法，從 1. OOg (1. 45mmol) Boc-Gly-Lys (Z)-OCH2 (CH2)16CH3 制得
120. 85g(94% )標題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z) :590[Μ+Η]+，[α ]20D = -35. 0 (c = 1· 0，CH3OH)。實施例67 制備 Boc-His (Boc)-Gly-Lys (Z)-OCH2 (CH2)6CH3按照實施例43 的方法由 0. 62g(l. 75mmol) Boc-His (Boc)和 0. 85g(l. 75mmol) HCl .Gly-Lys (Z)-OCH2 (CH2)6CH3并經硅膠柱層析(氯仿甲醇=100 1)純化制得 949mg(69% )標題化合物，為無色透明油狀物。ESI-MS (m/z) :787[Μ+Η]+，[α J20d = -17. 4 (c =1. 0，CH3OH)。實施例68 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 8CH3按照實施例43 的方法由 0. 53g(l. 48mmol) Boc-His (Boc)和 0. 76g (1. 48mmol) HCl .Gly-Lys (Z)-OCH2 (CH2)8CH3并經硅膠柱層析(氯仿甲醇=100 1)純化制得 807mg(67% )標題化合物，為無色透明油狀物。ESI-MS (m/z) :815[Μ+Η]+，[ α ]20D = -16. O (c =1. 0，CH3OH)。實施例69 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 10CH3按照實施例43 的方法由 0. 53g(l. 48mmol) Boc-His (Boc)和 0. 80g(l. 48mmol) HCl · Gly-Lys (Z)-OCH2 (CH2)ltlCH3并經硅膠柱層析(氯仿甲醇=100 1)純化制得 796mg(64%)標題化合物，為無色透明油狀物。ESI-MS (m/z) 843 [Μ+Η]+, [ α J20d =-17. 6 (c =1. 0，CH3OH)。實施例70 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 12CH3按照實施例43 的方法由 0. 50g(l. 40mmol) Boc-His (Boc)和 0. 80g(l. 40mmol) HCl · Gly-Lys (Z)-OCH2 (CH2)12CH3并經硅膠柱層析(氯仿甲醇=100 1)純化制得 72 Img (59% )標題化合物，為無色透明油狀物。ESI-MS (m/z) 871 [M+H]+，[a J20d = -24. 9 (c =1. 0，CH3OH)。實施例71 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 14CH3按照實施例43 的方法由 0. 58g(l. 64mmol) Boc-His (Boc)和 0. 98g (1. 64mmol) HCl · Gly-Lys (Z)-OCH2 (CH2)14CH3并經硅膠柱層析(氯仿甲醇=100 1)純化制得 751mg(51%)標題化合物，為無色透明油狀物。ESI-MS (m/z) 899 [Μ+Η][α J20d = -18. 6 (c =1. 0，CH3OH)。實施例72 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 16CH3按照實施例43 的方法由 0. 45g(l. 28mmol) Boc-His (Boc)和 0. 80g(l. 28mmol) HCl · Gly-Lys (Z)-OCH2 (CH2)14CH3并經硅膠柱層析(氯仿甲醇=100 1)純化制得 840mg(71%)標題化合物，為無色透明油狀物。ESI-MS (m/z) 927 [Μ+Η][ α ]20D = -21. 3 (c =1. 0，CH3OH)。實施例73 制備 HCl · His-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 6CH3按照實施例49的方法，從786mg(l. OOmmol)Boc-His (Boc)-Gly-Lys (Z)-NHCH2 (CH2)6CH3 制得 0. 57g (9I % )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) 587[Μ+Η]+ ο實施例74 制備 HCl · His-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 8CH3按照實施例49的方法，從700mg(0. 86mmol)Boc-His (Boc)-Gly-Lys (Z)-NHCH2 (CH2)8CH3 制得 0. 5Og (9O 標題化合物，為無色
13固體。ESI-MS(m/z) :615[M+H] + 0實施例75 制備 HCl · His-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 10CH3按照實施例49的方法，從700mg(0. 83mmol)Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) loCH3 制得 0. 52g(92% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) :643[M+H] +。實施例76 制備 HCl · His-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 12CH3按照實施例49的方法，從700mg(0. 81mmol)Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 12CH3 制得 0. 53g(93% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) :671[M+H] + 0實施例77 制備 HCl · His-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 14CH3按照實施例49的方法，從700mg(0. 78mmol)Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 14CH3 制得 0. 54g(95% )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) :699[M+H] +。實施例78 制備 HCl · His-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 16CH3按照實施例49的方法，從800mg(0. 86mmol)Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 16CH3 制得 0. 59g (90 % )標題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z) :727[M+H] +。實施例79 制備 His-Gly-Lys-OCH2(CH2)6CH3(Ha)將570mg(0. 92mmol)HCl · His-Gly-Lys (Z)-OCH2 (CH2) 6CH3 用乙醇溶解、加入約 5% Pd/C、室溫攪拌并通 H2 (0. 02Mba)，至 HCl 'His-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 6CH3 消失。濾除 Pd/C、濾液減壓濃縮至干得341mg(77% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/Z) :452[Μ_Η]_， [α ]20d = -12. 9 (c = 1· 0，CH3OH)，Μ· ρ· 115. 0—116. 2°C。實施例80 制備 His-Gly-Lys-OCH2 (CH2) 8CH3 (14b)將500mg (0. 77mmol) HCl · His-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 8CH3 用乙醇溶解、加 Λ 約 5% (1/(、室溫攪拌并通!12(0.021&幻至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至于得 376mg(94% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/z) 480 [M-H]", [a J20d = -14. 9 (c = 1. 0，CH3OH)，Μ· ρ· 139. 2-140. 5°C。實施例81 制備 His-Gly-Lys-OCH2 (CH2) 10CH3(14c)將520mg (0. 77mmol) HCl · His-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 10CH3 用乙醇溶解、加 Λ 約 5% (1/(、室溫攪拌并通!12(0.021&幻至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干得 360mg(87% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/z) 508 [M-H]", [a J20d = -9. 3 (c = 1. 0，CH3OH)，Μ· ρ· 136. 5-137. 7°C。實施例82 制備 His-Gly-Lys-OCH2 (CH2) 12CH3(14d)將530mg (0. 75mmol) HCl · His-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 12CH3 用乙醇溶解、加 Λ 約 5% (1/(、室溫攪拌并通!12(0.021&幻至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干得 365mg(85% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/z) :536[Μ_ΗΓ，[α ]20d = -5. 2 (c = 1· 0，CH3OH)，Μ· ρ· 131. 7-132. 8°C。實施例83 制備 His-Gly-Lys-OCH2 (CH2) 14CH3 (14e)將540mg (0. 74mmol) HCl · His-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 14CH3 用乙醇溶解、加 Λ 約5%Pd/C、室溫攪拌并通H2(0.02Mba)至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干得 360mg(81% )標題化合物，為無色油狀物。ESI-MS(m/z) :564[Μ_ΗΓ) [ α ]2°D = -6. 3 (c = 1· 0，CH3OH)，Μ· ρ· 136. 1-136. 7°C。實施例84 制備 His-Gly-Lys-OCH2(CH2)16CH3(Hf)將592mg(0. 77mmol)HCl · His-Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 16CH3 ffl 乙醇溶解、加入約 5% (1/(、室溫攪拌并通!12(0.021&幻至原料點消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干得 379mg(78% )標題化合物，為無色油狀物。ESI_MS(m/z) :592[Μ_ΗΓ，[α ]20d = -5. 1 (c = 1· 0，CH3OH)，Μ· ρ· 137. 2-138. 5°C。試驗例1飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯對小鼠脾淋巴細胞絲裂原增殖的抑制作用脫頸處死小鼠，無菌取脾，用200目鋼網和注射器芯研磨，用HANK’ S液洗兩次， 1500轉/分條件下離心10分鐘，計數后用完全RPMI-1640培養液配成5X106/ml個脾淋巴細胞，加100 μ 1細胞懸液于96孔培養板中(每孔含5Χ106個細胞)。每孔加20 μ 1 ConA(ConA終濃度為5 μ g/ml)，該96孔培養板置于體積分數為0. 05的CO2飽和濕度的培養箱內37°C培養4h。4h后分別加入不同濃度飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯(1 X 10_4M、 8X 1(Γ5Μ、5Χ 1(Γ5Μ、3Χ 1(Γ5Μ、1Χ 1(Γ5Μ、8Χ 1(Γ6Μ、5Χ ICT6M 和 IX I(T6M)，每個濃度 3 個復孔。同時設不含化合物對照孔和只含同量培養液無ConA的細胞空白孔。各個孔均重復3次(η =3)。培養48h后用MTT法檢測化合物對脾淋巴細胞的抑制作用。按照公式“抑制率=(D對照-D含藥)/D對照X 100%”計算不同濃度飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯對脾淋巴細胞增殖的抑制作用，根據細胞相對生存率和化合物的濃度繪制細胞生長曲線，利用該生長曲線求得半數抑制率(dxIC5ci)。結果列入表1。結果表明本發明的飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯對小鼠脾淋巴細胞增殖有明確的抑制作用。表1飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯對小鼠脾淋巴細胞絲裂原增殖的抑制作用
化合物名稱IC50 ( I(T5M)化合物名稱IC50 ( I(T5M)CsA1.50±1.18CsA1.50± 1.18HGE29.36 + 7.42HGK14.65± 1.207a49.45±0.4914a100.36±3.477b45.67 土 3.0214b24.70 + 2.507c14.13± 1.7914c43.15+11.677d10.40±2.4014d29.26 + 8.457e8.85 + 0.2114e12.66 + 2.117f14.93 + 5.3414f2.90 + 0.41試驗例2飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯對巨噬細胞吞噬的抑制作用將生長狀態良好、處于對數生長期的Ana-I小鼠巨噬細胞以IXlO5個/mL的密度接種于96孔板，每孔100μ 1，37°C、5% CO2培養箱中培養4小時，按預設的濃度梯度加
15入經滅菌處理的飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯(1 X 10_4M、8 X 10_5M、5 X 10_5M、3 X 10_5M、 1 X 10_5M、8X 10_6M、5X ΙΟ—Μ和1 X I(T6M)，每個濃度3個復孔，對照組加入等體積的溶解樣品的溶媒。繼續培養24小時后，吸棄上清液，每孔加入100 μ 10. 的中性紅溶液，置于 37°C孵育30分鐘。吸棄中性紅溶液，并用PBS緩沖溶液洗滌2-3次(除去未被巨噬細胞吞噬的中性紅)，加入細胞溶解液(乙醇乙酸=1 1)100 μ 1，4°C過夜，酶標儀檢測吸光度值，波長540nm。各個孔均重復3次(η = 3)。按照公式“抑制率=(D對照-D含藥)/D對照Χ100%”計算不同濃度的化合物對巨噬細胞的吞噬能力的抑制作用，根據細胞相對生存率和化合物的濃度繪制細胞生長曲線，利用該生長曲線求得半數抑制率(dxIC5ci)。結果列入表2。結果表明本發明的飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯對Ana-I小鼠巨噬細胞吞噬有明確的抑制作用。表2飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯對Ana-I小鼠巨噬細胞吞噬的抑制作用試驗例3飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯在納米水平的自組裝將飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯配置成1 μ mol/ml的水溶液，在激光納米粒度儀上25°C測定粒徑。連續測定8天，記錄其粒徑。結果列入表3。數據表明，本發明的飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯水溶液中均能自組裝成粒經穩定在102-454nm的納米球。表3飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯在水中自組裝的納米球粒徑
1權利要求
通式I的12種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈醇His Gly AA三肽酯His Gly AA O CH2 (CH2)nCH3 I通式I中的AA為Glu或Lys，n＝6、8、10、12、14或16。
2.一種制備權利要求1的飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯的方法，包括(1)按照現有液相合成技術，將飽和脂肪醇依次與谷氨酸或賴氨酸的保護中間體、甘氨酸的保護中間體、組氨酸的保護中間體逐步接肽合成保護基保護的飽和脂肪醇三肽綴合物，所述飽和脂肪醇為 CH3 (CH2)nCH2OH, η = 6、8、10、12、14 或 16 ；(2)依次脫去保護基保護的飽和脂肪醇三肽綴合物的N端保護基和C端保護基得到目標化合物。
3.權利要求1的12種飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯在制備免疫抑制劑類藥物中的應用。
4.權利要求1的12種飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯作為制備微乳或脂質體藥物載體的制劑材料的用途。
5.權利要求1的12種飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯作為制備微乳、脂質體藥物載體的靶向制劑材料中的用途。
全文摘要
本發明涉及通式I的12種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯綴合物，其中AA為Glu或Lys，飽和脂肪鏈醇中n＝6、8、10、12、14或16，涉及它們的制備方法以及作為免疫抑制劑的應用。這些飽和脂肪鏈醇His-Gly-AA三肽酯對脾淋巴細胞絲裂原增殖反應的抑制作用，以及對巨噬細胞吞噬活性的抑制作用的實驗結果表明，本發明的化合物具有優秀的免疫抑制作用，臨床上可作為免疫抑制劑應用。His-Gly-AA-O-CH2-(CH2)nCH3 I
文檔編號A61K47/42GK101899090SQ20091008532
公開日2010年12月1日申請日期2009年5月26日優先權日2009年5月26日
發明者彭師奇, 趙明, 趙淑銳申請人:首都醫科大學

完整全部詳細技術資料下載