專利名稱：：含在植物纖維或微生物不溶組分中的草酸降解酶的制備方法及用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及降解人或動物飲食制品中的，或食入胃腸中的，以及滲入胃腸中的生理代謝產生的草酸鹽，以減少人或動物從飲食制品中吸收草酸鹽以及降解生理代謝產生的草酸鹽，因而起到預防或治療尿草酸鹽過多和與尿草酸鹽過多相關的人或動物的病癥。該發明產品有兩種基本應用途徑一、使用本發明的草酸降解酶在飲食品加工過程中降低或完全除去飼料、飲料及食品中的草酸鹽；二、直接口服以該草酸降解酶為組分的制品以降解食入胃腸中的以及滲入胃腸中的由生理代謝產生的草酸鹽。
背景技術：
：人體內的草酸鹽主要來源于從飲食中吸收和生理代謝產生這兩種途徑。正常人生理代謝產生的草酸鹽量的多少變化范圍不大。因生理代謝產生過量草酸鹽的人數量極少，是由缺少有關代謝的酶造成。從飲食中吸收的草酸鹽的量因人而異，可占總量的10—70%。草酸鈣結石病人從飲食中吸收的草酸鹽比正常人平均多50%。(R.Holmes等，Urol.Res.，32:311—316，2004)。體內的草酸鹽主要由腎臟過濾、濃縮、經過尿液排出體外。尿液中草酸鹽排除量是衡量由于尿草酸鹽過量產生的各種病癥的一個重要指標。體內草酸鹽過多與多種病癥有關。如腎草酸鈣結石，尿道及膀胱結石，腎功能衰退，婦女的陰道觸發性痛(vulvodyna)，兒童的孤僻癥(Autism)，以及因草酸鹽過多導致的關節炎等。僅結石一項，每年給全球數以千萬的人帶來痛苦以及導致上百億美元的經濟損失。據美國的國家衛生研究院的統計資料(M丄itwin等，UrologicDiseaseinAmerica,NIHpublication07-5512:3-7,2007),僅2000年，結石給美國帶來的經濟損失為21億美元。目前還沒有一種簡單有效的辦法來降低這些尿草酸鹽過多的病人從食品中吸收草酸鹽。僅為收集信息的目的，這里介紹這些正在進行早期研究中的各種可能方法1.將草酸氧化酶(PCT/US2006/023115)或草酸脫羧酶(美國專利申請US11/833082)制成蛋白晶體再用戊二醛交聯提高其穩定性，然后將這些晶體制成口服藥劑用于降解胃腸中的草酸鹽；2.口服稀土金屬鹽從胃腸中吸收草酸鹽(CN100438866C);3.口服微生物如多種芽孢桿菌和雙歧桿菌的混合物制品。為了預防從飲食中吸收草酸鹽，病人需要每餐服用藥品或食品添加劑，終生堅持。方法1，2長期服用可能有毒副作用。方法3中的微生物制劑臨床效果不明顯，因為這些微生物可以不用草酸鹽而生存(D.Goldfarb等，CLIN.J.Am.Soc.N印hrol.,2:745-749,2007)。對于這些尿草酸鹽吸收過多的人群，醫生往往建議食用低草酸鹽食物。但是可供選擇的低草酸鹽飲食材料有限，而且草酸鹽在這些食物中的含量受植物生長環境、氣候、季節、產地等諸多因素的影響而增加這些人群選擇食品難度與可靠性。而且，既使能夠堅持食用這些低草酸鹽食品，每餐也會大約攝入20—50毫克草酸鹽。另外，這些人群可能會因為可選擇的食品有限而導致營養不良。因而，這不是解決問題的安牽有效的辦法。市場上極為需要一種安全，價廉，可靠的方法來降低食品中或體內的草酸鹽以達到預防和治療作用，本發明因此而產生。通過使用本發明而生產的制品，不僅可以降低胃腸從食入品中吸收草酸鹽，還可能因降低了胃腸中草酸鹽濃度而促使人體代謝產生的草酸鹽通過主動運輸，被動運輸等生理過程滲入胃腸。滲入胃腸的草酸鹽得到草酸降解酶降解而進一步降低血液中的尿草酸鹽含量，進而降低尿草酸鹽含量。發明概述一、草酸降解酶目前已發現的草酸降解酶有草酸氧化酶(EC1.2.3.4)，草酸脫羧酶(EC4.1.1.2)及草酰輔酶A脫羧酶(EC4.1.1.8)。草酰輔酶A脫羧酶需甲酰輔酶A轉移酶(EC2.8.3.16)先將草酸鹽與輔酶A合成草酰輔酶A后而進行降解。有關這些酶的結構，反應機理及其在自然中的分布已有詳細敘述(D.Svedruzic等，Arch.Biochem.Biophys.,433，176-192,2005)。草酸氧化酶催化的反應是HOOC-COOH+02—2C02+H202草酸脫羧酶催化的反應為HOOC-COOHC02+HC00H草酰輔酶A脫羧酶及甲酰輔酶A轉移酶催化的反應是甲酰輔酶A轉移酶HCO-C。A+HOOC-COOH—HCOOH+HOOCCOCoA草酰輔酶A脫羧酶H00C0CoA—HC0CoA+C02草酸氧化酶存在于許多種植物與微生物中，如各種谷物的幼根及受損傷的葉子，香蕉皮，九重葛，苔蘚，甜菜，食用菌等。在破碎植物或微生物并離心后，植物或微生物中的草酸氧化酶有的溶解在上清液中，有的卻分布在不溶的破碎組分中。植物不溶的破碎組分主要為纖維。微生物不溶的破碎組分主要為細胞壁成分。同種植物或微生物中已發現有二種或二種以上同工酶。一些不表達草酸氧化酶的植物，通過轉基因處理而獲得該酶基因并成功地進行表達(X.Hu等，PlantPhysiol.133:170-181,2003)。一些不表達草酸氧化酶的微生物，通過基因克隆處理而獲得該酶基因并進行表達(D.Svedruzic等，Arch.Biochem.Biophys.,433,176-192'2005)。草酸脫羧酶存在于多種真核與原核微生物中。真菌的草酸脫羧酶基因被轉移到植物，如煙草中，并已成功地在煙草中表達了草酸脫羧酶(M.Kesarwanietal.，J.Biol.Chem.275:7230-7238,2000)。與草酸氧化酶相同，植物或微生物中的草酸脫羧酶有的溶解在上清液中，有的卻分布在植物纖維或不溶的微生物破碎組分中。草酰輔酶A脫羧酶及甲酰輔酶A轉移酶的組合發現主要存于微生物中，如Pseudomonasoxalaticus與Oxabacterformigenes等(D.Svedruzic等，Arch.Biochem.Biophys.，433,176-192,2005)。二、植物與微生物原材料原則上講，任何植物與微生物的全部或特定部位，如果其不溶組分(植物纖維或不溶的微生物破碎組分)中含有大量的草酸降解酶，均是可選原材料。但是，無毒、可食及容易生產與加工都是選擇因素。培養方法因原材料而異，選擇培養方式取決于生產成本與生產條件。植物的培養種植方法可以是有土種植或無土培養；微生物的培養可選發酵或栽培。草酸降解酶的產量取決于植物的生長條件與時間和微生物的發酵或栽培條件及時間。在不溶組分中草酸降解酶含量最高的期間收獲。以無土，自來水，溫度在2(TC左右培養春小麥苗為原料制備的草酸氧化酶為例從麥粒發芽之日起草酸氧化酶即開始表達，但是隨著麥芽長大成麥苗，麥苗長大成小麥株，草酸氧化酶總含量也在提高。大約在發芽起第10—14天，酶含量與產量均達到最大值。這時，麥粒種子中的儲備養分也基本耗盡，可以收獲麥苗來制備草酸氧化酶。草酸氧化酶分布于整個植株，但根中含量最高。根和整個麥苗皆可作為原料，但以根為原料制成的中草酸氧化酶含量每克干重最高。草酸氧化酶含量可以進一步被誘導提高。如果在麥苗發芽第8—10天時，對麥苗進行機械損傷或微生物感染處理，3—4后天收獲，草酸氧化酶產量可提高20—300%。如果在麥苗發芽第8—10天時對其進行化學處理，如將根浸泡在一定濃度的草酸鹽、鋁鹽或其他化合物溶液中1一3天，或向麥苗噴灑這些化合物溶液，也可以提高草酸氧化酶產量10—240%。微生物的草酸降解酶的產量受發酵或栽培條件影響。可以改變發酵或栽培條件或進行物理或化學誘導提高草酸降解酶產量。三、植物纖維或微生物不溶組分中草酸降解酶的制備這里以無土培養的春小麥苗為例。以其他植物為原材料的制備方法相似。取在2CTC左右、自來水培養到第10—14天的麥苗去掉老的種子空殼，洗凈，搾干以取纖維部分，沖洗纖維，切割成O.l—0.5厘米長，用巴氏消毒(對于熱不穩定的酶，可用其它方法消毒)，干燥，分裝即成。如制成粉末，在切成O.l—0.5厘米長以后進行粉碎處理并在干燥后過篩獲取一定大小的粉末。從微生物不溶組分制備草酸降解酶的方法與以植物為原料的制備方法除培養方法不同夕卜，其他部分相似。微生物的栽培或發酵方法根據原材料的不同而定，可選用現有的或經改進的方法。將微生物原料如食用菌收獲后，洗凈，切片，用巴氏法消毒(對于熱不穩定的酶，可用其它方法消毒)，然后干燥，粉碎，過篩獲取一定大小的粉末，分裝即成。四、用途幾乎所有的以植物為原材料的食品，飲料，中藥制劑以及飼料均含有草酸鹽，其中綠葉蔬菜，巧克力，可可，花生及花生制品，黃豆及豆制品，茶葉及含茶飲料，咖啡，各種麥類谷物等中含量很高。在加工或制備這些制品時，可用草酸降解酶降低或完全除去草酸鹽，以提供低草酸鹽(甚至無草酸鹽)的飲食品給需要的人群或動物群。草酸降解酶也可制成食品添加劑或藥品與食品一起食入，在胃腸中降解食入的飲食品中的草酸鹽以降低草酸鹽被胃腸吸收。另外，還可能因降低了胃腸中草酸鹽濃度而促使人體代謝產生的草酸鹽通過主動運輸，被動運輸等生理過程滲入胃腸。滲入胃腸的草酸鹽可得到草酸降解酶降解而進一步降低血液中的尿草酸鹽含量，進而降低尿草酸鹽含量。本發明制備的草酸降解酶受植物纖維或微生物不溶組分保護而不受胃腸蛋白酶破壞，且在酸性，中性及堿性環境下均能找到穩定并具有高活性的草酸降解酶，因而十分適合于制成口服制品在胃腸中降解草酸鹽與用在各種低草酸鹽(甚至無草酸鹽)的飲食品的加工或制備。實例實施例l分析方法草酸HPLC測定方法采用文獻報道的方法(C.Clausen+等，InternationalBiodeterioration&Biodegradation62:372-375,2008)。草酸比色法測定采用美國TrinityBiotech的試劑盒(St.Louis,Mo.)。草酸氧化酶活力測定將0.9ml2mM草酸鹽溶液(其中含50mM檸檬酸鹽緩沖液，pH3.5，或50mM磷酸鹽緩沖液，pH5.5)，在37。C預熱10分種，然后加入0.lml含草酸氧化酶的懸浮液以開始反應。反應30分鐘后，迅速離心2分鐘并取上清液，用HPLC測定殘留草酸鹽濃度。一個酶活力單位(U)為在此條件下，每分鐘降解1個微摩爾草酸鹽所需的酶量。草酸脫羧酶活力測定，將0.8ml10mM草酸鹽溶液(其中含50mM檸檬酸鹽緩沖液，pH3.5)，在37'C預熱10分鐘后，加入0.1ml含草酸脫羧酶的懸浮液開始反應。反應30分鐘后，加入0.1ml1N鹽酸使酶失活。迅速離心并取上清液，用HPLC測定殘留草酸鹽濃度。一個酶活力單位(U)為在此條件下，每分鐘降解1個微摩爾草酸鹽所需的酶量。實施例2在各種植物中的草酸氧化酶草酸氧化酶存在于多種植物中。這里給出一些實例。將蕎麥(buckwheat)、長粒麥(kamut)、裸麥(rye)、黑小麥(triticale)、大麥(barley)、冬小麥(winterwheat)、春小麥(springwheat)、燕麥(oat)、莧菜(amaranth)、小米(millet)、玉米(corn)、高粱(sorgh咖)等種子用水浸泡3—15小時后，包在溫布中發芽24小時。然后將發芽的種子放在不銹鋼網上，網下則為清潔自來水，水位保持在剛剛觸網。在室溫下培養6—10天。收獲這些全苗時，去掉老種子殼，洗凈。另采用有土種植的甜菜莖(Betavulgaris)與九重葛(Bougainvillea)的葉子，洗凈作為原料。將收獲表1<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>的植物的全苗，莖，葉用勻漿機打碎后，離心，分開上清液與沉淀物。分別測定上清液與用水懸浮的沉淀物懸浮液的草酸氧化酶活力。高梁與九重葛的草酸氧化酶活力最適PH在5-6之間，所以在pH5.5下測定，其余酶活力最適pH在3—4之間，所以在pH3.5下測定。測定結果見表1。表1列出每克鮮材料所得的上清液與沉淀物中各含的酶活力。實施例3草酸氧化酶在同一植物不同部位的分布選擇實施例2中的完整春小麥苗，將之分成根、莖、葉三部分，然后分別洗凈，打碎，測酶活。其中根的酶含量最高，為每克鮮重2.36單位。葉，莖酶含量分別為每克鮮重0.72與0.44單位。實施例4培養時間對酶產量的影響以春小麥為例，用實施例2中的方法，將培養6—18天的麥苗取出測草酸氧化酶在整個麥苗纖維中的含量，結果列于表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>81.04101.51121.67142.02161.98181.90實施例5提高酶產量的誘導方法以春小麥為例，用實施例2中的方法，將培養8天的麥苗分別進行以下處理l.用針給葉子扎很多孔，每個孔相距約2毫米。將葉子浸泡在6mM草酸鹽中1分鐘，然后繼續培養；2.給莖的底部接種真菌Sclerotiniasclerotiorum后繼續培養。繼續培養3天后，收獲全苗，洗凈，打碎，測酶含量。與未經任何處理的但繼續同樣培養3天的對照組麥苗進行對比，沒有經任何處理的麥苗的酶含量為每克鮮重1.52單位，處理1和2分別增加酶含量31%與82%。實施例6植物全粉的制備以春小麥為例，用實施例2中的方法，將培養14天的麥苗收獲，去掉老種殼，洗凈，切成0.2—0.5厘米長，進行巴氏消毒，然后干燥，粉碎，過篩，分裝。這種植物全粉除含草酸氧化酶外，還含有許多其他對身體有益的營養成分，有額外的保健作用。實施例7含在植物纖維段中的草酸氧化酶的制備以春小麥為例，用實施例2中的方法，將培養14天的麥苗收獲，去掉老種殼，洗凈，榨干，收集的纖維部分用水洗凈，切成0.1—1.0厘米長，長短視用途而定，采用巴氏消毒，干燥即成。此法所得的制品一般每克干重含有10—50單位酶活力。在用于降低飲用品，食品及飼料中的草酸鹽時，植物纖維段比纖維粉末易于從加工品中分開。實施例8含在植物纖維粉末中的草酸氧化酶的制備基本上同實施例7，但是纖維切斷成O.l—0.5厘米，然后需粉碎，干燥之后需要過篩去掉過大纖維。此法所得的制品一般每克干重含有10—50單位酶活力。活力達到口服降低胃腸中草酸鹽吸收的要求。在用于口服時，纖維粉比植物纖維段更合適。實施例6，7，8雖以春小麥為例，但基本上適合于大麥，冬小麥，裸麥，黑小麥，水稻等熱穩定性草酸氧化酶植物，對于熱不穩定性草酸氧化酶的植物，用過氧化氫，氯水或放射線等物理或化學方法消毒代替巴氏消毒。實施例9含在植物纖維中的草酸脫羧酶的制備基本上同實施例6，7，8，但植物原材料經過轉基因處理并且該植物能夠成功地表達草酸脫羧酶。實施例10在各種微生物中的草酸脫羧酶草酸脫羧酶天然存在于多種微生物中。這里給出一些實例。將新鮮杏鮑菇(Pleurotesseryngii),平恭(Pleurotusostreatus),蘑恭(Agaricusbisporuscampestris),褐茲(Agaricuscrocopeplus),香恭(Lentinulaedoales),金針燕(Fla咖ulinaVelutipes),云芝(TrametesVersicolor)洗凈，用勻槳機打碎后，離心分開上清液與沉淀物。分別測定上清液與用水懸浮的沉淀物懸浮液草酸脫羧酶活力(在pH3.5下測定)。測定結果見表3。應該指出微生物的草酸脫羧酶的產量受發酵或栽培條件影響。改變發酵或栽培條件及采用物理或化學誘導會進一步提高草酸脫羧酶產量。表3上清液(U/g鮮重)沉淀物懸浮液(U/g鮮重)杏鮑菇0.572.15平菇0.130.47蘑茹0.190.28褐菇0.200.31香菇0.240.37金針燕0.350.76云芝0.481.39實施例11含在食用菌或藥用菌不溶組分中的草酸脫羧酶的制備食用菌或藥用菌不溶組分中草酸脫羧酶的制備方法與以植物為原料的制備方法相比，除培養方法不同外，其他類似。各種菌類栽培方法與發酵方法可選用現有的或改進的培養方法。將原材料如蘑菇，金針菇或其他可食用菌類收獲后，洗凈，切碎，采用巴氏消毒(對于熱不穩定的酶，可用其它方法消毒)，然后干燥，粉碎，過篩獲取一定大小的粉末，分裝即成。此法所得的制品一般每克干重含有5—150單位酶活力。'實施例12植物纖維或微生物不溶組分對草酸氧化酶與草酸脫羧酶的保護作用實施例1中的TrinityBiotech的試劑盒中含有大麥苗中純化的可溶性的草酸氧化酶。將此草酸氧化酶，實施例8中制備的春小麥草酸氧化酶粉和實施例11中制備的杏鮑菇草酸脫羧酶粉各自配制成1U/mL的溶液與懸浮液，然后與等體積的含6.4mg/mL胃蛋白酶的200mM甘氨酸緩沖液(pH2.5)混合，37'C下攪拌，在一系列的時間點取樣分析殘留的酶活力。從大麥中純化的可溶性的草酸氧化酶在5分鐘內失去全部活力，而實施例8中與實施例11中制備的草酸氧化酶與草酸脫羧酶在1小時后，還分別保留了90%和73%的活力。此結果表明了植物纖維與微生物不溶組分對草酸降解酶的保護作用。實施例13草酸脫羧酶與草酸氧化酶活力pH范圍與穩定pH范圍草酸脫羧酶與草酸氧化酶活力pH范圍與植物或微生物的原材料種類有關。麥類草酸氧化酶與食用菌類草酸脫羧酶的活力pH范圍一般是2—6，理想的pH是3—4.5,與胃中pH相符，這些酶適合在胃中除去食入物品中的草酸鹽。從高梁或九重葛中制得的草酸氧化酶活力pH范圍是2.5—8.5，理想pH范圍是4.5—7，與腸中pH相符，這些酶適合在腸中除去食入物品中的草酸鹽。對于食品加工過程，在pH2—9范圍內均有相適應的酶可選。這些酶在其活力pH范圍一般都很穩定，不宜失活，因而給應用帶來方便。實施例14除去茶水中的草酸鹽茶水中每升含有1一40毫克的草酸鹽，含量取決于茶的種類，產地，濃度與制備方法。取綠葉茶20克，放入90—95i:熱水中泡5分鐘后濾去茶葉，待水溫降低5(TC以下，調pH至3.0—4.0(如果使用從高粱或九重葛中制得的草酸氧化酶，則不用調pH)，然后加入20單位實施例7或實施例8中制得的草酸氧化酶并通空氣攪拌2小時(如果使用從實施例11中制得的草酸脫羧酶，則不用通空氣)，茶水中的草酸鹽被全部除去。此例適合于制造無草酸茶水與茶沖劑等。也適合于除去許多中藥制劑中的草酸鹽。實施例15除去豆制品中的草酸鹽干黃豆的草酸鹽含量相當高。這也使各種豆制品含有大量的草酸鹽。黃豆制品是亞洲人的日常食品，也是蛋白質重要來源。因此，除去豆制品中的草酸鹽對尿草酸鹽過多的人群十分有意義。將豆漿的pH調到3.0—4.0(如果使用從高梁或九重葛中制得的草酸氧化酶，則不用調pH)，然后加入由實施例7或8中制得的草酸氧化酶，通氣(如果使用從實施例11中制得的草酸脫羧酶，則不用通空氣)，攪拌至草酸鹽降低到一定含量。降解草酸鹽所需的時間與豆漿中的草酸鹽含量和加入的酶量有關。例如100升豆漿中含10克草酸鹽，加1500單位草酸脫羧酶或草酸氧化酶，需要處理約2小時。實施例16除去巧克力中的草酸鹽將巧克力乳濁液的pH調到草酸降解酶的理想pH，加入足夠量的草酸降解酶(草酸氧化酶或草酸脫羧酶)，通空氣(如果用草酸脫羧酶則不用通氣)，攪拌，直到草酸鹽濃度降到許可范圍。實施例17口服例將尿草酸鹽過多的10人分成2組進行為期5天的實驗。在5天中，每人每天規定吃同樣的飲食，但早、中、晚三餐飲食不同，各含草酸鹽30,200,200毫克。收集各人在第二天還沒有口服草酸氧化酶或草酸脫羧酶的24小時尿樣作為對照。從第三天起到第五天止，第一組(編號1一5)在每餐中口服150單位含在纖維粉末中的草酸氧化酶；第二組(編號6—10)在每餐中口服150單位含在纖維粉末中的草酸脫羧酶。收集各人在第五天的24小時尿樣。用試劑盒比色法測定樣品中的草酸鹽含量，結果見表4。表4中的數據為一天24小時尿樣中的草酸鹽總量，單位為毫克。可見草酸氧化酶與草酸脫羧酶都能顯著降低這些人的尿草酸鹽含表4<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>權利要求1.含在植物纖維或微生物不溶組分中的草酸降解酶的用途原料或制品中含有該特征的酶被用于降低飲用品、食品及飼料中的草酸鹽或用于口服從而降解胃腸中食入物品中的草酸鹽以及滲入胃腸中的由生理代謝產生的草酸鹽，因而起到預防或治療尿草酸鹽過多和與尿草酸鹽過多相關的人或動物的病癥。2.如權利要求1中所述的用途，所述的植物纖維或微生物不溶組分中含有的草酸降解酶是草酸氧化酶，或草酸脫羧酶，或草酰輔酶A脫羧酶與甲酰輔酶A轉移酶的組合，或為以上三種中的任意兩種或兩種以上的組合；這些酶為所采用植物或微生物具備的天然基因的表達產物或為通過轉基因處理而獲得的基因的表達產物。3.如權利要求1中所述的用途，所述的植物纖維或微生物不溶組分中含有的草酸降解酶，是指在破碎植物組織或微生物細胞后，分布于不溶的植物破碎組織中或不溶的破碎微生物細胞組分中的草酸降解酶。該不溶的植物破碎組織含大量纖維成分。該不溶的破碎微生物細胞組分主要來自細胞壁。草酸降解酶可能被包裹在植物或微生物不溶的破碎組分中或附在其上，受不溶組分保護而降低蛋白酶對其破壞作用。草酸降解酶因分布于植物或微生物不溶組分中，易于制備；在用于降低飲用品、食品及詞料中的草酸鹽時，易于從加工品中分開。4.如權利要求1中所述的用途，所述的植物纖維或微生物不溶組分中含有的草酸降解酶活力應高于每克干重0.5單位。5.如權利要求1中所述的用途，所述的植物纖維或微生物不溶組分中的草酸降解酶的制品的形狀為粉末或具有一定長度的纖維，具體視原料的來源禾卩用途而定。6.如權利要求1中所述的用途，所述的植物纖維中的草酸降解酶制備方法具有以下的部分或全部特征a.植物的種植培養為有土種植或無土培養。b.植物的各部位，如根，莖，葉，花，果，均可為原料，選材視草酸降解酶的含量與用途而定。C.草酸降解酶的含量可通過適當的方法誘導而提高。提高酶含量的方法有物理損傷，化學處理，植物激素誘導及微生物感染等。d.制備過程對植物原料需進行破碎處理，并采用不溶的破碎組織加工成產品。e.原材料為各種含有草酸降解酶基因的植物，該基因為天然具備的或轉基因而獲得的。7.如權利要求1中所述的用途，所述的微生物不溶組分中的草酸降解酶制備方法具有以下的部分或全部特征a.微生物的培養為發酵或菌類栽培。b.草酸降解酶的含量可通過適當的方法誘導提高。提高酶含量的方法光、熱、化學誘導等。c.制備過程對微生物原料需進行破碎處理，并采用不溶的破碎組分加工成產品。d.原材料為各種含有草酸降解酶基因的微生物，該基因為天然具備的或由基因克隆而獲得的。全文摘要本發明公開了一類含在植物纖維或微生物不溶組分中的草酸降解酶的制備方法及具有該特征的草酸降解酶在制備低/無草酸鹽飲料，食品和飼料；或制成食品添加劑或藥物達到預防或治療尿草酸過多及與尿草酸鹽過多相關的病癥中的用途。本發明制備的草酸降解酶因含在植物纖維或微生物不溶組分中，受到植物纖維或微生物不溶組分的保護而不被胃腸中蛋白酶降解；并且因其含在植物纖維或微生物不溶組分之中，制備工藝簡單，成本低。由于來自植物或微生物，尤其是食用植物或微生物，無毒副作用，利于長期服用。文檔編號A61K38/43GK101554237SQ20091007154公開日2009年10月14日申請日期2009年3月16日優先權日2009年3月16日發明者王肇和申請人:王肇和