專利名稱：：一種單克隆抗體的水針制劑的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種抗-EGFR單克隆抗體的水針制劑。
背景技術：
：表皮生長因子受體(印idermalgrowthfactorrec印tor，EGi7R)在調節腫瘤細胞的生長、修復和生存、新生血管生成、侵襲和轉移中具有重要的作用，同時在相當一部分的人類腫瘤中都有表達。此外，在很多惡性腫瘤中，EGFR的表達往往與較差的愈后和較低的生存率相關。因此可以推測，如果有藥物能阻斷EGFR的活性，那將會抑制其磷酸化和信號傳導，從而起到多重途徑的抗腫瘤作用，同時也能增加化療和放療的抗腫瘤療效。與天然的配體相比，抗表皮生長因子受體(EGFR)的單克隆抗體與EGFR結合時，具有更高的親和力，因此阻斷EGFR介導的細胞通路是一種具有極高特異性的作用方式。抗EGFR的單克隆抗體是針對于胞外域ETOR的靶向性抗體，臨床應用顯示了良好的抗腫瘤活性，而且并不產生嚴重副反應。抗-EGFR單克隆抗體抗癌原理正基于此。現有的抗-EGFR抗體制劑專利德國S·馬瑟斯和H-C·馬勒通過沉淀試劑和晶體得到抗-EGFR抗體的固體形式制劑(申請號/專利號200480034587)。其缺點是沉淀試劑得到的蛋白有時無法復溶。默克專利有限公司的H-C·馬勒；R·米勒；U·馬丁尼-馬爾；U·哈斯；C·巴赫曼發明包含西妥昔單抗(Cetuximab)的穩定的液體藥物制劑(申請號=02814105.9)，所述Cetuximab是一種抗表皮生長因子受體(EGF受體)的嵌合單克隆抗體。所檢測方法純度檢測高效液相色譜法，柱子用TSK3000SWXl。流動相20mmol磷酸鹽緩沖液0.4mol/LNa2S04。等電點根據《中國藥典》2005年版等點聚焦電泳法。內毒素檢測根據《中國藥典》2005年版細菌內毒素檢測方法。外觀根據《中國藥典》2005年版可見異物檢查法。活性根據A418檢測方法以市售愛必妥(默克公司)做為對照品。設定其活性為100%，水針對比溶液、溶液A、溶液B采用與其活性的比較值。加速穩定性實驗結果(25°C)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>根據穩定性試驗結果表明氨基酸緩沖體系組成的制劑貯存穩定性明顯優于磷酸鹽體系組成的制劑。具體實施例方式以下通過實施例、實驗例詳細說明本發明的內容，但這些實施例并不構成對本發明的限制。實施例1水針對比溶液<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實施例3穩定性考察，采用藥品加速穩定性實驗考察以上3種配方的貯存穩定性，溫度25°C。述制劑的貯藏穩定性增強并且可經胃腸外途徑用于治療腫瘤。S·馬瑟斯和H-C馬勒又通過超濾制備抗-EGFR抗體的高濃縮液體，發明了抗-EGFR抗體液體制劑的方法(申請號/專利號200580004883)。這兩項發明很大程度緩解了以往因蛋白藥物濃度低而帶來的不便，但是也有不足之處，首先其專利以磷酸鹽或醋酸鹽等鹽為緩沖體系，液體制劑的形式存在的蛋白在鹽濃度稍高時就會產生乳光或沉淀，容易發生理化反應，從而失去活性，其次當蛋白在水溶液中濃度過高又沒有保護劑保護時容易聚集，注入人體后易產生免疫反應。
發明內容抗EGFR-單克隆抗體包括鼠源的、人鼠嵌合的、完全人源化的抗EGFR-單克隆抗體。本發明制劑配方簡單，蛋白體系穩定。便于大規模生產，貯存和運輸。以酸性氨基酸和堿性氨基酸組成的體系具有很強的緩沖能力和對蛋白的保護能力。本制劑配方不存在藥理不可接受的試劑，從而具有良好的安全性和耐受性。本發明是一種含有抗EGFR-單克隆抗體的水針制劑，制劑的組成包括抗EGFR-單克隆抗體、緩沖鹽、表面活性劑。抗EGFR-單克隆抗體水針制劑蛋白含量為2-lOOmg/mL，更優選為5_75mg/mL。這種高濃度的蛋白制劑可以大大減輕患者用藥注射量大的痛苦。本發明緩沖體系包括人體可接受的緩沖體系，更優選為精氨酸、組氨酸體系和精氨酸、甘氨酸體系。其濃度為0-200mM，更優選為10mM-100mM。緩沖pH范圍在6.0-9.O之間。更優選pH6.5-7.5。本發明的表面活性劑為PEG類，更優選PEG400，PEG4000,PEG6000，表面活性劑濃度為0.001%-5%，更優選0.005%-4%。權利要求一種含有抗EGFR-抗體的水針制劑，其特征是在制劑配方中利用酸性氨基酸與堿性氨基酸即作為緩沖體系又作為保護劑，利用PEG代替吐溫作為表面活性劑。2.根據權利要求1，其特征在于抗EGFR-抗體含量為1-lOOmg/mL，更優選為2_60mg/mLo3.根據權利要求1，其特征在于緩沖鹽體系包括人體可接受的緩沖體系，更優選為精氨酸、組氨酸體系和精氨酸、甘氨酸體系。4.根據權利要求3，其特征在于緩沖體系的濃度為0-200mM，更優選為10mM-100mM。5.根據權利要求3，其特征在于緩沖體系的緩沖pH范圍在6.0-9.0之間。更優選pH6.5-7.5。6.根據權利要求1，其特征在于表面活性劑為PEG類，更優選PEG400，PEG4000,PEG6000。7.根據權利要求6，其特征在于表面活性劑濃度為0.001%-10%，更優選0.005%-4%。全文摘要本發明提供了抗EGFR-抗體的水針制劑的制備方法。所述抗EGFR-抗體的水針制劑是由抗EGFR-抗體蛋白，緩沖鹽，表面活性劑組成，其優點在于所選的緩沖鹽既起到緩沖pH的效果，又作為蛋白的保護劑存在于溶液中。同時利用PEG代替有溶血性的吐溫作為表面活性劑，使配方更加安全。本發明提供的抗EGFR-抗體蛋白水針制劑穩定性好，有效期延長，節省成本。文檔編號A61K47/16GK101797383SQ20091007138公開日2010年8月11日申請日期2009年2月5日優先權日2009年2月5日發明者冷國慶,劉高波,李會成,李鄭武,王晴,王瑩,程廣偉,趙華南,陳玉軍申請人:哈藥集團生物工程有限公司