專利名稱：具有抗腫瘤轉移作用的藥物制劑的制作方法
技術領域：
本發明屬于制藥領域，特別是涉及一種具有抗腫瘤轉移作用的藥物制劑。
背景技術：
中國藥典收載云南重樓(P. polyphylla Smith var. yunnanensis)禾P七葉一枝 花P.polyphyllaSmith var. chinensis)為重樓的基源植物。文獻報道重樓皂苷對多種動 物移植性腫瘤S180、 S37、 EAC、 ARS、 L759等均有具有良好抑制作用。但目前并未對重樓皂 苷有效部位進行分離純化及其抗腫瘤作用研究報道。目前現有專利多是對其重樓總皂苷 進行研究，包括其制備工藝、婦科疾病治療的應用及其劑型研究。本課題組也曾申請專利 200810052092. 2對其重樓總皂苷制備工藝及其抗腫瘤作用進行報道。 但是，現有研究僅僅停留在總皂苷水平，所報道的總皂苷多為混合物，不能準確的 把握其組成成分及各成分含量。
發明內容
本發明的目的在于提供一種具有抗腫瘤轉移作用的藥物制劑，成分明確、毒副作 用小的具有抗腫瘤作用的藥物制劑。 本發明提供一種具有抗腫瘤轉移作用的藥物制劑是含有重樓皂苷提取物，其 特征在于有效活性成分為八種重樓皂苷總提物重樓皂苷1、重樓皂苷n、薯蕷皂苷、 纖細薯蕷皂苷、重樓皂苷^重樓皂苷￥11、皂苷八(偏諾皂苷元-3-0-0《-鼠李糖基 (1 — 4) -[ a -L-鼠李糖基(1 — 2) ] -13 -D-葡萄糖苷)、皂苷B (偏諾皂苷元-3-0- a _L_鼠 李糖基(1 —2)-a-L-葡萄糖基(1 —3)]-P-D-葡萄糖苷)八種甾體皂苷；以及醫用敷 料；所述的藥物制劑為膠囊劑、片劑、顆粒劑及溶液劑或懸浮劑；
八種重樓皂苷總提物的重量含量為5-30%，以及
敷料的重量含量為70-95%。 本發明提供的具有抗腫瘤作用的八種重樓皂苷總提物制劑對動物移植性腫瘤細 胞具有良好的抑制作用，表現在(1)經本工藝純化了重樓皂苷提取物并利用HPLC-MS手段 分析了其組成成分，為其成藥質量控制提供定性依據(2)對接種的小鼠肺腺癌、人肺癌、人 胃癌、人腸癌、人肝癌及其他瘤株的近交系小鼠和裸鼠轉移模型有顯著的抗腫瘤及轉移作 用；(3)由于該藥物制劑為重樓總皂苷的純化物，具有成分明確，活性已知；又屬中藥提取 物，因而相對化學治療藥物而言具有毒副作用小的優點。
圖1HE染色分析各給藥組肺組織病理學變化；A :模型組；B :高劑量RPS ;C :低劑量 RPS ;D :PM，箭頭所示為轉移灶。 圖2肉眼可視各組腫瘤體積比較；第一排為模型組，第二排為低劑量PM，第三排為 高劑量PM組。
圖3重樓總皂苷的LC-MS分析。 圖4八種重樓皂苷總提物的LC-MS分析。
具體實施例方式
下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明。
八種重樓皂苷總提物經以下兩種方法制得 方法一、將重樓總皂苷提取物(RPS)經甲醇復溶后(濃度為60-100mg/kg)，于制備 液相C18柱中分離；共3個液相峰，收集第2、3餾分。 方法二、將重樓總皂苷提取物(RPS)由60%乙醇復溶后，70%乙醇洗脫3 5倍柱 體積，收集液棄去后，經80%乙醇于大孔樹脂(D101型大孔吸附樹脂，南開大學化工廠)中 洗脫6 8倍柱體積，收集得到八種重樓皂苷總提物(PM)。
實施例l 八種重樓皂苷總提物的制備 將重樓總皂苷(80mg/ml)經甲醇復溶后，于制備液相C18柱(預C-Pack 0DS_A，日 本)中分離，流動相為色譜甲醇，流速為3ml/min，經液相分析，收集第2、3峰，得到8種重樓 皂苷總提物(PM)。 上述的重樓總皂苷提取物(150mg/kg)灌胃給藥后，2h取血，將血清離心3500r/ min， 15min，取上清，乙酸乙酯萃取，上層蒸干甲醇復溶并進行血清學分析
經LC_MSn分析發現，入血后2h后可檢測到重樓皂苷I (薯蕷皂苷元-3-0- a _L_阿 拉伯糖基(1 — 4) - [ a -L-鼠李糖基(1 — 2) ] -13 -D-葡萄糖苷)、重樓皂苷11 (薯 蕷皂苷元-3-0-a -L-鼠李糖基(1 — 4)_a -L-鼠李糖基(1 — 4)_[ a _L_鼠李糖 基(1 — 2)]-e-D-葡萄糖苷)、纖細薯蕷皂苷(薯蕷皂苷元-3-0-a -L-鼠李糖 基(1 — 2)-[a-L-葡萄糖基(1 — 3)]-P-D-葡萄糖苷)、薯蕷皂苷(薯蕷皂苷 元-3-O-a-L-鼠李糖基(1 — 4)-[a-L-鼠李糖基(1 — 2) ]-P _D_葡萄糖苷)、重樓皂 苷￥11(偏諾皂苷元-3-0-0《_鼠李糖基(1 — 4)-a-L-鼠李糖基(1 — 4)_[a-L-鼠 李糖基(1 — 2) ]-P -D-葡萄糖苷)、重樓皂苷H(偏諾皂苷元-3-0- a _L_阿拉伯糖基 (1 — 4) -[ a -L-鼠李糖基(1 — 2) ] -13 -D-葡萄糖苷)、皂苷A (偏諾皂苷元_3_0- a _L_鼠 李糖基(1 — 4)_[a-L-鼠李糖基(1 — 2)]-P-D-葡萄糖苷)、皂苷B(偏諾皂苷 元-3-0-a-L-鼠李糖基(1 —2)-[a-L-葡萄糖基(1 — 3) ]- P _D_葡萄糖苷)等8種成 分，此方法可以間接證明重樓皂苷提取物抗腫瘤作用的藥效部位是此八種化合物。此八種 重樓皂苷總提物在重樓總皂苷中重量含量占35%。
重樓總皂苷及八種重樓皂苷總提物的成分分析 重樓總皂苷經HPLC-MS分析，采用安捷倫1200系列DAD檢測器及離子阱ESI-MS 檢測。色譜柱為Kromasil RP-C18柱(4mmX250mm);進樣量25ug/20ul，流速lml/min， 質譜裂解時采用分流裝置，流動相如下
表1LC-MS流動相比例
4time/min乙腈(％)水(％)
03367
104753
354753
426040
559010
651000
751000 八種重樓皂苷經HPLC-MS分析，采用安捷倫1200系列DAD檢測器及離子阱ESI-MS 檢測。 色譜柱為Kromasil RP-C18柱(4mmX250mm);進樣量25ug/20ul，流速lml/min， 質譜裂解時采用分流裝置，流動相為乙腈水(47 : 53)。 重樓總皂苷及8種重樓皂苷總提物對移植性肺腺癌Lewis小鼠的藥效作用；
實施例將移植Lewis肺腺癌7天后的小鼠隨機分成7組，每組7只，并開始給藥， 每日一次(1)模型組，生理鹽水灌胃；(2)環磷酰胺(CTX)組，按20mg/kg. bw ; (3)重樓皂苷 (RPS)高劑量組，按50mg/kg. bw灌胃；(4)重樓皂苷(RPS)中劑量組，按20mg/kg. bw灌胃； (5)重樓皂苷(RPS)低劑量組，按5mg/kg.bw灌胃;(6)八種皂苷總提物(PM)高劑量組，按 lOmg/kg. bw灌胃；(7)八種皂苷總提物(PM)低劑量組，按3mg/kg. bw灌胃。
給藥前及處死前分別稱量小鼠體積及腫瘤體積，于接種后22天，末次給藥后24h 處死，解剖取其實體瘤、肺、肝、脾，保存于10%中性福爾馬林中。其中瘤組織及脾臟稱重， 分別按下列公式計算抑瘤率和脾指數抑瘤率(％ ) = [ (1-TW/CW) X 100% ] ， TW =給藥組 瘤子質量/給藥前瘤子體積，CW二對照組瘤子質量/給藥前瘤子體積；脾指數=脾重(mg)/ 體重(g)。將在福爾馬林中保存的肺、肝臟、脾臟與實體瘤組織做石蠟切片，常規HE染色，光 鏡顯微鏡下觀察各組織病理學形態及肺、肝內瘤栓與轉移灶情況。 結果表明，重樓皂苷給藥組荷瘤小鼠的瘤重明顯小于模型組，并具有劑量效應關 系。重樓皂苷抑瘤率分別可達40. 94% 、24. 64%及19. 55%，實體瘤重與模型組相比具顯著 性差異(P<0. 05)(見表2)。體重均無明顯變化，脾指數與模型組相比，除陽性對照藥環磷 酰胺組脾指數下降切成，其他各組均無顯著性差異。肺組織HE染色結果顯示，各組除少許 炎性浸潤外，無明顯異常。各組瘤栓與轉移灶情況為，重樓皂苷高劑量組轉移灶最少。
表2重樓總皂苷及八種重樓皂苷總提物對Lewis肺腺癌小鼠腫瘤抑制情況分析
組別劑量 (mg/kg氺d3y)肉眼可見轉移灶相對腫瘤體積(g/cm3)脾指數(mg/g)抑瘤率(％)
RPS-高501.3±0.5*2.90±0.14**12.40±0.3640.94**
RPS-中203.4±0.53.70±0.37*12.66±0.7224.64*
RPS-低53.0±1.03,95±0.22*12.50±1.0719.55*
CTX組206.1±1.72.36±0.19**9.23±0.53*51.79"
模型組4.7±1.14.91±0.5711.52±0.96
PM-高103.2±1.23.81 ±0.30*12.43±0.9022.40*
PM-低34,0±0,73.97±0.3211.99±0.3219.14
5
與模型組相比*P < 0. 05， **P < 0. 01。 經血清學及藥效學比較分析，八種重樓皂苷總提物對腫瘤生長及轉移有一定抑制
作用，是重樓總皂苷的有效部位，八種重樓皂苷總提物組合方作為抗腫瘤轉移作用的藥物。
實施例2 膠囊劑(以重量百分比計)％
八種重樓皂苷總提物10 玉米淀粉 61 糊精 10 微晶纖維素 10 磷酸一氫鈣 3 微粉硅膠 6 將上述輔料加入適量的85%乙醇潤濕而制成軟材，過20目篩制粒，4(TC干燥lh， 再過20目篩整粒，所得顆粒灌入膠囊，制成成品。每個膠囊含重樓皂苷30mg。 實施例3 片劑(以重量百分比計)％ 八種重樓皂苷總提物 10 玉米淀粉 70 糊精 10 羧甲基淀粉鈉 8 硬脂酸鎂 2 將上述輔料除硬脂酸鎂外混合均勻，加入適量乙醇潤濕制成軟材，過20目篩制 粒，4(TC干燥lh，再過20目篩整粒，等量遞加法加入硬脂酸鎂，混合均勻，壓片得到最終產
PR o
權利要求
一種具有抗腫瘤轉移作用的藥物制劑，含有重樓皂苷提取物，其特征在于有效活性成分為八種重樓皂苷總提物重樓皂苷I、重樓皂苷II、薯蕷皂苷、纖細薯蕷皂苷、重樓皂苷H、重樓皂苷VII、皂苷A(偏諾皂苷元-3-O-α-L-鼠李糖基(1→4)-[α-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷)、皂苷B(偏諾皂苷元-3-O-α-L-鼠李糖基(1→2)-α-L-葡萄糖基(1→3)]-β-D-葡萄糖苷)八種甾體皂苷；以及醫用敷料；所述的藥物制劑為膠囊劑、片劑、顆粒劑及溶液劑或懸浮劑；八種重樓皂苷總提物的重量含量為5-30％，以及敷料的重量含量為70-95％。
2. 根據權利要求1所述的藥物制劑，其特征在于它的重量百分比組成八種重樓皂苷總提物10%玉米淀粉 61%糊精 10%微晶纖維素 10%磷酸一氫鈣 3%微粉硅膠 6%。
3. 根據權利要求1所述的藥物制劑，其特征在于它的重量百分比組成八種重樓皂苷總提物10%玉米淀粉 70%糊精 10%羧甲基淀粉鈉 8%硬脂酸鎂 2%。
全文摘要
本發明涉及一種具有抗腫瘤轉移作用的藥物制劑。它是含有重樓皂苷提取物，有效活性成分為八種重樓皂苷總提物重樓皂苷I、重樓皂苷II、薯蕷皂苷、纖細薯蕷皂苷、重樓皂苷H、重樓皂苷VII、皂苷A(偏諾皂苷元-3-O-α-L-鼠李糖基(1→4)-[α-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷)、皂苷B(偏諾皂苷元-3-O-α-L-鼠李糖基(1→2)-α-L-葡萄糖基(1→3)]-β-D-葡萄糖苷)八種甾體皂苷；以及醫用敷料。八種重樓皂苷總提物的重量含量為5-30％，以及敷料的重量含量為70-95％。本發明是毒副作用小的具有抗腫瘤作用的藥物制劑。
文檔編號A61P35/00GK101693035SQ200910070810
公開日2010年4月14日 申請日期2009年10月15日 優先權日2009年10月15日
發明者滿淑麗, 馬超一, 高文遠 申請人:天津大學;