專利名稱：一種長效、穩(wěn)定的動物干擾素溶液制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制品領(lǐng)域，涉及一種穩(wěn)定的聚乙二醇-動物干擾素長效水溶液制 劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
干擾素(Interferon，IFN)是一類重要的細胞因子，在病毒性疾病和腫瘤的治療 上已發(fā)揮出了巨大的臨床應(yīng)用價值。動物用干擾素既可以單獨作為生物制劑應(yīng)用于疾病的 防治，也可作為免疫佐劑增強疫苗的免疫效果。但干擾素結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，在很多緩沖體系或有 其他離子存在的情況下容易失活；干擾素相對分子量小，在體內(nèi)易受腎的代謝作用，體內(nèi)半 衰期短。林碧蓉等(2001)、Bailon P等(2001)和童葵塘(2005)等的研究，已經(jīng)很好的利 用無毒且具有雙親性的PEG對干擾素進行修飾，獲得的聚合物穩(wěn)定性明顯增加，體內(nèi)循環(huán) 的半衰期大大延長。但用此方法獲得的聚合干擾素多為粉針劑，制作成本高；且使用時需加 入注射用水，臨床使用不方便。干擾素為高度折疊的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，對很多物理和化學因素敏 感，在制劑開發(fā)中，往往通過添加蛋白類似物、助懸劑等來穩(wěn)定蛋白結(jié)構(gòu)，而這些單一因素 因未系統(tǒng)研究，而影響了其在干擾素制劑開發(fā)中的應(yīng)用。研制高抗病毒活性和高免疫調(diào)節(jié)活性的長效、穩(wěn)定的溶液劑，是動物制劑專家不 斷研發(fā)的重要課題。本發(fā)明通過系統(tǒng)研究，提供了一種穩(wěn)定的緩沖體系，研制出了長效聚合 干擾素的溶液劑，此劑型在臨床使用中既可以注射、也可以飲水，適用的PH值值范圍廣，具 有重要的應(yīng)用價值。
發(fā)明內(nèi)容
本申請人經(jīng)過深入、細致試驗，研發(fā)出了在pH值6. 0-7. 5之間穩(wěn)定的聚乙二 醇_干擾素水溶液，該溶液不需要添加吐溫和血清白蛋白，為臨床提供了 一種穩(wěn)定的適應(yīng) 緩沖范圍廣的干擾素水溶液。本發(fā)明涉及一種動物用干擾素溶液制劑，含有聚乙二醇-干擾素聚合物、保護 劑、張力劑、PH值緩沖體系、抗菌防腐劑和足以制備上述列出組分溶液的一定數(shù)量的注射用 水。本發(fā)明中所用的干擾素，可以是動物用的任何干擾素，包括動物用干擾素α、β 和Y。本發(fā)明中采用的干擾素結(jié)合到聚乙二醇上，聚乙二醇_干擾素聚合體的形成可以 采用林碧蓉等(2001)、Bailon P等(2001)和童葵塘(2005)中公開的任何方法，聚乙二醇 的平均分子量可在300-30000道爾頓之間變化。每ml溶液含有的聚乙二醇-動物干擾素 中含有IO6-IO8IU干擾素。按照本發(fā)明，制劑中使用的保護劑為葡萄糖、果糖、甘氨酸、精氨酸、賴氨酸、甘露 醇、山梨醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、麥芽糖、PVPK-30中的一種或多種，各成分含量(W/V)為，葡 萄糖、果糖0. 2% -0. 8%，甘氨酸、精氨酸、賴氨酸0. 1%-1. 0%，甘露醇、山梨醇-10%，蔗糖、乳糖、海藻糖、麥芽糖0.5% -1.5%, PVPK-300. 5% -3. 0%，優(yōu)選0. 3%的甘氨酸、1 % 的蔗糖和2%的PVPK-30。本發(fā)明所選用的張力劑為0. -1% (W/V)的氯化鈉溶液。本發(fā)明所選用的PH值緩沖體系可以是常用的緩沖液，優(yōu)選的緩沖液是磷酸鹽緩 沖液，該緩沖液的PH值范圍為6. 0-7. 5。本發(fā)明中的抗菌防腐劑為常用抑菌劑，如苯酚、苯甲醇等，優(yōu)選苯酚，含量范圍為 0. 1% -0.6% (W/V)，最優(yōu)選為 0. 4% (W/V)。本溶液通過以下技術(shù)步驟獲得的①先將保護劑、張力劑、PH緩沖鹽用注射用水溶解，充分攪勻；②邊攪拌邊在上述的溶液中緩慢加入用注射用水稀釋60倍后的苯酚，充分攪拌 均勻；④用0. 22 μ m濾膜過濾上述溶液后，在無菌環(huán)境中，按比例加入聚乙二醇_動物干 擾素，攪拌均勻后，用注射用水定容至所需體積，即得。本發(fā)明所述的聚乙二醇-干擾素長效溶液制劑，在2_8°C下貯藏24個月后仍然保 持著干擾素的高化學、生物學和物理學穩(wěn)定性。本文在說明用于本發(fā)明制劑中的聚乙二醇_干擾素時使用的術(shù)語“高化學穩(wěn)定 性”指制劑中的干擾素在2-8°C下貯藏24個月后保持至少85%，優(yōu)選85% -100%化學完整 性。使用的術(shù)語“高生物學穩(wěn)定性”指本發(fā)明制劑中的干擾素在2-8°C下貯藏24個月后保 持至少85%，優(yōu)選90% -100%生物學活性(參見實施例2表1中的結(jié)果)，該生物學活性 根據(jù)病毒的致細胞病變效應(yīng)(CPE)抑制的檢測方法測定(測定方法見附件1)。本文在說明 用于本發(fā)明制劑中的聚乙二醇-干擾素時使用的術(shù)語“高物理學穩(wěn)定性”指本發(fā)明制劑中 的干擾素在2-8°C下貯藏24個月后保持澄清，即沒有混濁也沒有可見顆粒物質(zhì)(可見顆粒 直徑大于60-70 μ m)。本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢本發(fā)明所述的聚乙二醇-干擾素長效溶液制劑，不用小牛血清或白蛋白作為保護 劑，避免了這些蛋白攜帶病毒的潛在危險，節(jié)約了成本，利于更準確的監(jiān)測產(chǎn)品的質(zhì)量。該 溶液制劑既可以注射、也可以飲水，適用的PH值范圍廣。長效聚合干擾素溶液制劑在2_8°C 貯藏24個月后仍然保持著干擾素的高活性。
具體實施例方式結(jié)合以下實施例可以觀察到本發(fā)明的有益性質(zhì)，這些實施例是說明性的，不會對 本發(fā)明構(gòu)成限制。實施例1、一種長效、穩(wěn)定的動物干擾素(聚乙二醇-雞α干擾素)溶液制劑的制 備除非另外說明，所述樣品包含組分每L用量a.聚乙二醇-雞α干擾素1*107IUb.氯化鈉6gc.磷酸氫二鈉4g
d．磷酸二氫鉀o．2g
e．甘氨酸3g
f．蔗糖log
g．山梨醇50g
h．PVPK一3020g
i．苯酚4ml
i．注射用水加至lL
溶液的配制方法是
①先將PVPK-30~百注射用水溶解，充分攪勻，液體澄清、透明、穩(wěn)定后進行下一步；
②邊攪拌邊在PVPK-30的溶液中緩慢加入氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、甘氨酸、蔗糖、山梨醇，得一混合均一的溶液；
⑧用注射用水稀釋苯酚60倍后，加入上述混合溶液中，充分攪拌均勻；
④用o．22 u m濾膜過濾除菌后，在無菌環(huán)境中，按比例加入聚乙二醇一雞。干擾素，攪拌均勻后，用注射用水定容至所需體積，即得。
實施例2、長效、穩(wěn)定的雞。干擾素溶液穩(wěn)定性考察評價方法和穩(wěn)定性考察結(jié)果
除非有另外說明，否則都采用以下的步驟進行穩(wěn)定性評價。將實施例l中的樣品分別置于溫度為4℃±2℃的冰箱、溫度為25℃工F2Z和濕度為60％±5％的恒溫恒濕箱中。穩(wěn)定性考察過程中測量所述組合物的外觀性狀、干擾素活性，并與初始配制組合物進行比較。采用“細胞病變作用抑制生物學實驗一一CPE”方法檢測干擾素活性，具體方法見附件l。
實施例l中的組合物在4℃±2℃的冰箱條件下放置24個月后，與初始配制樣品無外觀性狀上、活性上的明顯差異，之E 25 4℃±2℃和濕度為60％±5％條件下放置6個月內(nèi)，制劑沒有明顯外觀性狀和活性上的變化。因此制劑在4℃條件下放置24月是穩(wěn)定的。具體活性測定結(jié)果見下表l所示。
表l實施例l中雞。干擾素穩(wěn)定性考察數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.一種長效、穩(wěn)定的動物干擾素溶液制劑，其特征在于該溶液包含聚乙二醇-動物干 擾素聚合物、保護劑、張力劑、PH值緩沖體系、抗菌防腐劑和足以制備上述列出組分的溶液 的一定數(shù)量的注射用水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的溶液，其特征在于所述組合物包含的聚乙二醇_動物干擾素 聚合物，可以是動物用的任何干擾素，包括動物用干擾素α、β和Y。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的溶液，其特征在于所述每ml溶液含有的聚乙二醇-動物干擾 素中含有IO6-IO8IU干擾素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的溶液，其特征在于所述溶液中使用的保護劑為葡萄糖、果糖、 甘氨酸、精氨酸、賴氨酸、甘露醇、山梨醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、麥芽糖、PVPK-30中的一種或 多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的溶液，其特征在于所選保護劑的含量(W/V)為，葡萄糖、果糖 0. 2% -0. 8%，甘氨酸、精氨酸、賴氨酸0. 1%-1. 0%，甘露醇、山梨醇-10%，蔗糖、乳糖、 海藻糖、麥芽糖0. 5% -1. 5%,PVPK-300. 5%-3. 0%，優(yōu)選0. 3%的甘氨酸、1 %的蔗糖和2% 的 PVPK-30。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的溶液，其特征在于所選用的張力劑為0.1%-1%(W/V)的氯 化鈉。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的溶液，其特征在于，所選用的PH緩沖體系可以是常用的緩沖 液，優(yōu)選的緩沖液是磷酸鹽緩沖液，該緩沖液的PH值范圍為6. 0-7. 5。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的溶液，其特征在于，所選用的抗菌防腐劑為常用抑菌劑，如苯 酚、苯甲醇等，優(yōu)選苯酚，含量范圍為0. 1% -0. 6%，優(yōu)選為0. 4% (W/V)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種長效、穩(wěn)定的動物干擾素溶液制劑，其制備方法是通過 下述技術(shù)步驟實現(xiàn)的①先將保護劑、張力劑、PH值緩沖鹽用注射用水溶解，充分攪勻；②邊攪拌邊在上述的溶液中緩慢加入用注射用水稀釋60倍后的苯酚，充分攪拌均勻；④用0. 22 μ m濾膜過濾上述溶液后，在無菌環(huán)境中，按比例加入聚乙二醇_動物干擾素，攪拌均勻后，用注射用水定容至所需體積，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種長效、穩(wěn)定的動物干擾素溶液制劑及其制備方法。該水溶液包含具有動物干擾素生理活性的多肽和非多肽組分，pH值范圍在6.0-7.5之間。通過本發(fā)明制作的聚乙二醇-動物干擾素水溶液制劑穩(wěn)定，具有相對較高的生物學抗病毒活性和熱穩(wěn)定性。
文檔編號A61P31/12GK102000324SQ20091007031
公開日2011年4月6日 申請日期2009年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月1日
發(fā)明者劉桂蘭 申請人:天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司