專利名稱：：一種防治豬藍耳病的中獸藥注射液及其生產工藝的制作方法
技術領域：
：本發明屬于中獸藥制劑領域，涉及一種防治豬藍耳病的中獸藥注射液及其生產工藝。
背景技術：
：豬藍耳病又名豬繁殖與呼吸障礙綜合征(PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome,PRRS)，1987年，首先在美國報道，開始被稱為神秘豬病。1990年，德國報導了相似的臨床暴發情況，至1991年PRRS迅速蔓延整個歐洲。1991年6月，荷蘭學者首先從病料中分離出了病毒，并稱其為Lelystad病毒。此后，德國和美國學者也相繼報道分離出了該病毒。目前PRRS己在全世界范圍內廣泛流行，世界動物衛生組織(OIE)將其列為法定報告動物疫病。PRRS于上世紀90年代中期傳入我國，我國將其列為二類動物疫病。PRRS給全球養豬業造成了巨大損失。其特征是妊娠母豬懷孕后期(60天之后)流產、產死胎、木乃伊胎、弱胎明顯增加，仔豬出生率降低，斷奶仔豬死亡率高，母豬再發情推遲，哺乳豬和斷奶仔豬嚴重的呼吸道疾病也是一種重耍的特征。該病在國內豬場中的發病率和隱性感染率較高，直接影響著我國養豬業的健康發展，已引起官方的高度重視。該病不僅僅造成種豬的繁殖障礙和仔豬的呼吸道疾病，而且對機體免疫系統也造成損傷(具體的發病機制見附圖1)。主要表現在首先PRRS病毒對機體的單核-巨噬細胞的專嗜性，使該細胞對外來病原體的吞噬功能降低；其次抑制機體白細胞干擾素的表達，間接的影響機體細胞中核轉錄因子(N-kB)對白介素-1、白介素-2和干擾素等淋巴因子的釋放。由于PRRS病毒對機體免疫系統的損傷是多方面的，因此當豬群感染PRRS之后其抗病能力明顯下降，容易繼發各種疾病。豬場若發生藍耳病，不僅會影響生豬的出欄，導致豬肉供應緊張，而且由其誘發的多種疾病還可能對公共衛生安全造成威脅。目前獸藥市場防治豬藍耳病的藥物很多，但效果均不甚理想。一般是采用采用抗菌藥物和抗炎藥物來對癥治療，或應用中藥治療。中藥制劑的組方和工藝大致可大致分為兩個方面一種是以黃芪、板藍根、金銀花、連翹等提取物加上一些安乃近、氨基比林、地塞米松等為主的復合制劑。由于植物提取行業正處于起步與發展階段其質量管理體系有待改進和提高，其提取物的有效成分含量往往偏低，而解熱鎮痛的藥物雖然能短時間內解除高熱癥狀，但大劑量或長期使用對機體的免疫系統也是有損傷的，因此對藍耳病的防治療效不確切。另一種組方和工藝一般是以中藥黃芪、大青葉、連翹、板藍根、黃連等組合，采用水提醇沉法，該方法往往可以引起一些具有免疫增強作用的天然多糖流失過多，其制劑對藍耳病所起的防治效果甚微。鑒于此，市場上迫切需要有顯著療效的藥物制劑及相關的防治方法。
發明內容本發明的目的是提供一種工藝簡單、質量穩定、成本低廉、療效顯著的防治豬藍耳病的中藥注射液及其生產工藝。為實現本發明的目的，現依據了如下的技術方案，該注射液是由以下重量份配比的原料制成黃疾25-45份、當歸5-20份、瓜蔞9-20份、黃零9-12份、人參5-30份、麥冬5-30份、五味子5-25份、熟地12-22份、茯苓10-25份、白術5-15份。本發明的配方最佳各原料的重量配比為黃芪40份、當歸10份、瓜蔞15份、黃芩10份、人參20份、麥冬20份、五味子10份、熟地15份、茯苓18份、白術10份。本發明治療藍耳病注射液的生產工藝方法如下1)、按所述的重量比稱取各種原料，備用；2)、將上述各味中藥加水煎煮二次，第一次加水量為各藥物重量的10倍，第二次加水為6倍，煎煮后將兩次上清液合并，用3層紗布過濾，繼續加熱濃4縮，直至所煎熬的藥液濃縮至與原藥材比例約為1:1時，冷卻至40'C-60°C，加入蛋白酶和果膠酶量為藥液體積的3%-5%，放置12小時；3)、將上述煎煮液繼續加熱煮沸20分鐘，加入2倍體積的純凈水，加熱溫度至6(TC-8(TC，加入1%殼聚糖醋酸溶液為藥液體積的10%-15%，攪拌，放置12小時，倒出上清液，調節酸堿度，濃縮，過濾，灌裝，滅菌，即得成品。藍耳病屬于免疫抑制病，要想治愈必須運用多糖提高免疫力。本處方中藥材含有大量多糖成分，以往傳統的中藥提取普遍采用水提醇沉法作為去除雜質的分離手段。水提醇沉是中藥制劑的傳統工藝，但醇沉工藝存在一些不足①有效成分損失嚴重、成本高、成品穩定性差、生產周期長、勞動強度高等；②醇沉過程對某些藥效成分的嚴重損失，難以保證制劑的有效性。絮凝分離技術與之相比則具成本低、操作安全簡單、分離效果好、有效成分保留多的特點。本發明應用現代科學技術，運用新工藝研究開發中藥注射液，從整體上提高中藥注射液的制劑水平，從而確保中藥制劑質量與療效的穩定。中藥制劑中的雜質大多為果膠、蛋白質等，可選擇相應的酶予以分解除去。針對中藥中含有脂溶性、難溶于水或不溶于水成分多，通過加入酶，使脂溶性、難溶于水或不溶于水的有效成分轉移到水溶性苷糖中。酶反應較溫和地將植物組織分解，可較大幅度提高效率。本發明中使用殼聚糖作為絮凝劑，殼聚糖能提高機體的免疫力、無毒、無味、無副作用，有良好的絮凝、澄清作用，可用于大部分中草藥的提取精制或制劑的生產。將殼聚糖其加到中藥的水提液中通過吸附、架橋、絮凝作用以及無機鹽電解質微粒和表面電荷產生凝聚作用，使許多不穩定的微粒如蛋白質、錳液質、樹膠、鞣質等連接成絮團沉降，經濾過達到分離純化的目的。對于含有機酸、生物堿、黃酮、多糖等中藥澄清試驗，結果表明，殼聚糖用于人多數中草藥浸提液均起到良好的澄清作用，能有效保留其中大部分有效成分，不殘留于提取液中，安全無毒，操作簡便。本發明工藝使用的澄清劑組成1.酶的組成蛋白酶，果膠酶。2.殼聚糖溶液用1%的醋酸溶液將殼聚糖配成1%的殼聚糖溶液。工藝流程將上述各味中藥煎煮液濃縮至與原藥材比例約為h1時，冷卻至40°C-60°C，加入酶量為藥液體積的3%-5%，放置12小時，然后加熱煮沸20分鐘，加入2倍體積的純凈水，加熱溫度至6(TC-8(TC，加入1%殼聚糖醋酸溶液為藥液體積的10%-15%，攪拌，放置12小時，倒出上清液，調節酸堿度，濃縮，過濾，灌裝，滅菌，即得成品。本發明中所述的注射液的使用方法如下根據豬只的體重，肌肉注射0.5毫升/千克休重，每天注射兩次，連用5天-7天即可取得良好效果。本發明大量試驗表明，殼聚糖對本處方的中藥提取液能起到非常好的絮凝澄清作用，保留其中木部分有效成分，并能明顯提高多糖、皂苷等有效成分，安全無毒，操作簡便，無需增加設備投資。大量的實驗結果表明，本發明所選擇的中藥絮凝技術比傳統的醇沉工藝有明顯優點，使注射液的質量和生產效率得到了顯著的提高。本發明經多次實驗室和臨床實踐檢驗結果表明，該注射液配方合理、工藝簡單、質量穩定、成本低廉、毒副作用小等特點，是對藍耳病的防治有較好的效果，具有巨大的市場潛力。具體實施例方式實例一1、稱取黃芪40克、當歸10克、瓜蔞15克、黃芩10克、人參20克、麥冬20克、五味子10克、熟地15克、茯苓18克、白術10克，加水煎煮二次，第一次加水量為各藥物重量的IO倍，第二次加水為6倍，煎煮后將兩次上清液合并，用3層紗布過濾，繼續加熱濃縮，直至所煎熬的藥液的溶劑為1702.將上述各味中藥的濃縮煎煮液冷卻至40°C，加入蛋白酶和果膠酶，加入量為藥液體積的3%，放置12小時，然后加熱煮沸20分鐘，加入2倍體積的純凈水，加熱溫度至6(TC，加入1%殼聚糖醋酸溶液為藥液體積的10%，攪拌，放置12小時，倒出上清液。3.調節上清液的pH值至6.5，濃縮3倍，0.45微米孔徑的濾膜過濾，灌裝，滅菌，即得成品。4.將本發明中所述的注射液根據豬只的體重，肌肉注射0.5毫升/千克體重，每天注射兩次，連用5天即可取得良好效果。實例二1、稱取配方中的各味中藥，重量為實施例1中的IO倍，加水煎煮二次，第一次加水量為各藥物重量的10倍，第二次加水為6倍，煎煮后將兩次上清液合并，用3層紗布過濾，繼續加熱濃縮，直至所煎熬的藥液的溶劑為1700毫升。2.將上述各味中藥的濃縮煎煮液冷卻至50°C，加入蛋白酶和果膠酶，加入量為藥液體積的4%，放置12小時，然后加熱煮沸20分鐘，加入2倍體積的純凈水，加熱溫度至40。C,加入1%殼聚糖醋酸溶液為藥液體積的13%，攪拌，放置12小時，倒出上清液。3.調節上清液的pH值至7，濃縮3倍，0.45微米孔徑的濾膜過濾，灌裝，滅菌，即得成品。.4.將本發明中所述的注射液根據豬只的體重，肌肉注射0.5毫升/千克體重，每天注射兩次，連用5天即可取得良好效果。實例三1.稱取配方中的各味中藥，重量為實施例1中的5倍，加水煎煮二次，第一次加水量為各藥物重量的10倍，第二次加水為6倍，煎煮后將兩次上清液合并，用3層紗布過濾，繼續加熱濃縮，直至所煎熬的藥液的溶劑為8502.將上述各味中藥的濃縮煎煮液冷卻至60°C，加入蛋白酶和果膠酶，加入量為藥液體積的5%，放置12小時，然后加熱煮沸20分鐘，加入2倍體積的純凈水，加熱溫度至5(TC，加入1%殼聚糖醋酸溶液為藥液體積的15%，攪拌，放置12小時，倒出上清液。3.調節上清液的pH值至7.5，濃縮3倍，0.45微米孔徑的濾膜過濾，灌裝，滅菌，即得成品。4.將本發明中所述的注射液根據豬只的體重，肌肉注射0.5毫升/千克體重，每天注射兩次，連用5天即可取得良好效果。本發明在提高機體免疫力方面的試驗結果試驗一白細胞計數法一試驗材料(1)本發明的中藥注射液；(2)某公司2%的黃芪多糖注射液；(3)滅菌生理鹽水。(4)豬(為已斷奶35日齡的仔豬，體重約10kg)。二試驗方案將空白對照組豬群，注射滅菌生理鹽水；實驗組一，注射2%的黃芪多糖注射液；實驗組二，注射本發明的注射液，各15頭，連續注射2天，檢測各組的白細胞數量。三試驗結果空白對照組(單位m3)l號2號3號4號5號6號7號8號1.12萬1.31萬1.15萬1.24萬1.22萬1.43萬1.38萬1.29萬9號10號11號12號13號14號15號1.23萬1.35萬1.21萬1.33萬1.37萬1.19萬1.26萬8實驗組一(注射2%黃芪多糖注射液)單位m:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實驗組二(注射本發明的中藥注射液)單位m3<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>藍耳病屬于一種免疫抑制病，當機體感染藍耳病病毒(PRRSV)后，血液中白細胞的數量可由正常的12000-15000/m3降低至10000/m3以下，當機體白細胞數量在10000/m3以下時，抵抗外來病原體的能力和特異性免疫應答的功能均會降低。豬正常情況下白細胞的數量在12000-15000/m3之間，主要由單核-巨噬細胞、淋巴細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞等組成。嗜中性粒細胞和單核-巨噬細胞是一類吞噬病原微生物極強的吞噬細胞，其胞漿內含有多種酶類.對侵入機體內的病毒、細菌、原蟲等病原體具有強大的吞噬和消化功能，是機體非特異性免疫的重要組成部分。淋巴細胞占白細胞總數的50%以上，淋巴細胞是機體特異性免疫的重要組成部分，因此測定白細胞的數量，可在一定程度上反映機體的免疫狀態，亦可作為判定療效的一種指標。通過以上各組數據表明本發明的中藥注射液注入機體后，產生的白細胞數目明顯多于對照組和實驗組一，機體的免疫能力迅速提高，從而達到消滅病原體的目的。試驗二玫瑰花環試驗一試驗材料(1)本發明的中藥注射液；(2)某公司2°/。的黃芪多糖注射液；(3)滅菌生理鹽水。(4)豬(已斷奶35日齡的仔豬，體重約10kg)。(5)綿羊紅細胞二試驗方法將空白對照組豬群，注射滅菌生理鹽水；實驗組一，注射2%的黃芪多糖注射液；實驗組二，注射本發明的注射液，各15頭，每天兩次，連續注射2天后，第三天在無菌操作的條件下，進行耳靜脈采集試驗豬的血液，與綿羊紅細胞結合形成的花環率。鏡檢觀察計數。花環數E-花環形成率--X100%空白對照組:l號2號3號4號5號6號7號8號19%17%16.5%18%20%14%17%18%9號10號11號12號13號14號15號22%18%17%16%15%21%20%實驗組一(注射2%黃芪多糖注射液)l號2號3號4號5號6號7號8號200/o21%26%24%19%26%22%23%9號10號11號12號13號14號15號18%24%24%21%20%22%25%實驗組二(注射本發明的中藥注射液)l號2號3號4號5號6號7號8號29%36%35%28%39%32%31%37%9號10號11號12號13號14號15號27%36%34%32%33%38%36%藍耳病病毒(PRRSV)侵入機體后，通常寄生在機體的細胞內，利用活體細胞的營養來生長，復制新的個體，機體自身對PRRSV的抗病毒免疫主要靠細胞免疫，只有細胞免疫的功能達到正常水平以上，機體才能有能力的將體內的PRRSV清除。因此我們通過檢測T淋巴細胞的功能來判定機體細胞免疫功能的強弱。T淋巴細胞(簡稱T細胞)是一個具有多功能的細胞群，其表面有綿羊紅細胞(SRBC)受體，可與綿羊紅細胞(SRBC)結合形成玫瑰花環。此試驗能反映T細胞的活性，從而可以判定機體的細胞免疫水平。Ea-花環代表機體的細胞免疫水平，可以作為反映機體的免疫狀態的一種指標。通過以上的數據證明本發明的中藥注射液能提高花環的形成率，顯著提高機體的免疫力，提高機體的抗病能力。權利要求1、一種防治豬藍耳病的中獸藥注射液，其特征在于是它由以下重量份配比的原料制成黃芪25-45份、當歸5-20份、瓜蔞9-20份、黃芩9-12份、人參5-30份、麥冬5-30份、五味子5-25份、熟地12-22份、茯苓10-25份、白術5-15份。2、一種防治豬藍耳病的中獸藥注射液，其特征在于各原料的重量比是黃芪40份、當歸10份、瓜蔞15份、黃芩10份、人參20份、麥冬20份、五味子10份、熟地15份、茯苓18份、白術10份。3、一種用于權利要求l所述防治豬藍耳病的中獸藥注射液的生產工藝，其特征在于1)、按所述的重量比稱取各種原料，備用；2)、將上述各味中藥加水煎煮二次，第一次加水量為各藥物重量的IO倍，第二次加水為6倍，煎煮后將兩次上清液合并，用3層紗布過濾，繼續加熱濃縮，直至所煎熬的藥液濃縮至與原藥材比例約為1:l時，冷卻至4(TC-60°C，加入蛋白酶和果膠酶量為藥液體積的3%-5%，放置12小時；3)、將上述煎煮液繼續加熱煮沸20分鐘，加入2倍體積的純凈水，加熱溫度至60。C-80°C，加入1%殼聚糖醋酸溶液為藥液體積的10%-15%，攪拌，放置l2小時，倒出上清液，調節酸堿度，濃縮，過濾，灌裝，滅菌，即得成品。全文摘要本發明涉及一種防治豬藍耳病的中獸藥注射液及其生產工藝，它是由黃芪、當歸、瓜蔞、黃芩、人參、麥冬、五味子、熟地、茯苓、白術組成，將上述各味中藥依次經煎煮、酶解、絮凝劑沉淀、過濾、灌裝和滅菌后即可使用。本發明經多次實驗室和臨床實踐檢驗結果表明，該注射液配方合理、工藝簡單、質量穩定、成本低廉、毒副作用小等特點，是對藍耳病的防治有較好的效果，具有巨大的市場潛力。文檔編號A61K36/88GK101618140SQ200910065129公開日2010年1月6日申請日期2009年6月5日優先權日2009年6月5日發明者宗向歌,江紅格,羅振軍,蔣二強申請人:河南黑馬動物藥業有限公司