專利名稱：：柿葉總黃酮的制備方法及其在保肝藥物和保健食品中的應用的制作方法
技術領域：
：本發明屬于含有原料或其與不明結構之反應產物的醫用配制品
技術領域：
，具體涉及到來源于植物的材料。
背景技術：
：柿葉為柿科柿屬植物柿(Dio印yroskakiLf)的新鮮或干燥葉，味苦、性泉其入藥始見于明《滇南本草》記載"經霜葉敷臃搭"，《本草再新》記載用于"治咳嗽吐血，止渴生津"。柿葉已被制成中成藥，用于治療冠心病、心絞痛等，還具有抗菌消炎、生津止渴、清熱解毒、潤肺強心、鎮咳止血、抗癌防癌等多種醫療保健功能。我國柿葉資源豐富，近年來，隨著現代提取分離技術以及現代藥理學的飛速發展，對柿屬植物的研究越來越深入。柿葉中的主要活性成分是黃酮類物質，已發現的柿葉總黃酮類物質有異槲皮素、山奈酚、槲皮素、蘆丁、黃芪苷、山奈酚苷、槲皮素苷、金絲桃武和紫云英甙等，采用不同的方法提取所得黃酮類物質的成分和含量均存在較大差異。眾所周知，肝臟具有生物轉化糖、月旨類、蛋白質、維生素、激素的功能和生成、分泌膽汁及攝取、轉化、排泄膽紅素的作用。肝臟是動物體內的解毒器官及重要的代謝場所。當前，由于環境污染和藥物等各方面的影響，肝臟疾病已成為嚴重I^辦人類健康的首要根源之一，各種有害因素所致的肝損傷可表現為肝壞死、月旨肪肝、膽汁郁積、肝纖維化、肝硬化及肝癌等。肝損傷的防治目前仍是一個全球性的嚴峻課題。因此，通過建立實驗性肝損傷動物模型，研究肝病的發生機制，篩選保肝藥物，探索保肝作用原理，具有十分重要的現實意義。
發明內容本發明所要解決的一個技術問題在于提供一種柿葉總黃酮的提取制備方法。本發明所要解決的另一個技術問題在于為柿葉總黃酮提供一種新用途。解決上述技術問題所采用的技術方案是由下述步驟組成1、稱耳又柿葉干燥粉末，加20倍量的質量濃度為70%的乙醇于75匯7]^浴加熱回流提取1小時，過濾，濾渣再分別用10倍量的質量濃度為70%的乙醇提取兩次，每次1小時。2、將各次提取液合并，用質量濃度為2%的HC1水溶液調節pH值至5.5，過LX-28型大孔吸附樹脂柱或LX-38型大孔吸附樹脂柱，用水洗至流出液無色，用質量濃度為70%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液。3、將洗脫液減壓濃縮至60。C相對密度為1.301.40g/cm3，置于冷凍干燥箱內，-5(TC干燥，得到柿葉總黃酮。在上述步驟1中也可以于頻率為20003000MHz、功率為400450W的微波輻射加熱下回流10分鐘，過濾，濾渣再分別用20倍量的質量濃度為70%的乙醇微波提取兩次，每次10分鐘。在上述步驟1中還可以在頻率為4050KHz、功率為220W的超聲波加熱下回流30分鐘，濾渣再分別用20倍量的質量濃度為70%的乙醇超聲提取兩次，每次加分鐘。上述的提取物柿葉總黃酮的外觀為淡黃色粉末狀，含有異槲皮素、山奈酚、槲皮素、蘆丁、黃芪苷、山奈酚苷、槲皮素苷、金絲桃苷、紫云英苷等。柿葉總黃酮在制備保肝藥物和f，食品中的應用。有效成分柿葉總黃酮制備保肝的藥物用常規藥用制劑的形式來使用。所述的常規藥用制劑含作為活性成分的柿葉總黃酮，該活性成分在制劑中與藥學上可接受的載體如適宜于胃腸內給藥的有機或無機的固體或液體賦形劑混合。該藥用制劑可以是固體形式如片劑、顆粒劑、膠囊劑；也可以是液體形式如懸浮劑、糖漿劑、乳劑等。上述制劑中可含有輔助物質、穩定劑、潤濕劑、增溶劑和其它常用的添加劑，如乳糖、滑石粉、纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、果膠、吐溫-80、聚乙烯醇等。上述制齊阿按照各種制劑常規的制備工藝制成。含有柿葉總黃酮保肝藥物中柿葉總黃酮含有質量比為1%50%的活性成分，優選含有質量比為5%20%的活性成分。有效成份柿葉總黃酮也可以加入乳制品、飲料、茶葉、面包等食品中，制成保肝保健食品。本發明的活性成分柿葉總黃酮制成各種劑型的口服藥物，成人口服，常用劑量一次200mg，1日2次，飯后服用，兒童用藥酌情減量。在保健食品中每天用量400mg，可長期使用。本發明的適應癥治療肝病及保肝。將上述提取物柿葉總黃酮按常規方法制成的口s艮藥劑是制劑學上所說的片劑或顆粒劑鄉囊劑或口服液。本發明藥物經藥效試驗表明，柿葉總黃酮能有效地抑制四氯化碳所致小鼠血清中谷草轉氨酶(ALT)和谷丙轉氨酶(AST)的活性上升，即降低血清ALT和AST的水平；能明顯降低CC1激小鼠肝損傷肝組織中丙二醛(MDA)的含量，提高總超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)活性。電鏡觀察結果表明柿葉總黃酮能夠減少肝細胞的損傷。動物體內試驗研究表明，柿葉總黃酮能有效地清除被損害細胞的自由基，拮抗CCl4誘發的肝細胞自由基和脂質過氧化損傷，具有顯著的保護和治療肝損傷的作用，在試驗中沒有觀察到明顯的副作用。可以作為保肝藥物和保健食品。柿葉總黃酮小鼠急性毒性試驗表明，柿葉總黃酮小鼠給藥，求不出LD50。柿葉總黃酮能顯著的降低血清ALT和AST的作用，并能明顯降低肝臟MDA的含量，提高肝臟SOD和CAT活性，明顯的斷氐肝細胞的損傷程度，對預防及治療肝臟疾病具有重要作用。用柿葉總黃酮制備的藥物可進入臨床試驗。圖1是實施例1提取的柿葉總黃酮的高效液相色譜圖。圖2是CC1J干損傷小鼠肝細胞HE染色的電鏡觀察結果。具體實施例方式下面結合實施例對本發明進一步詳細說明，但本發明不限于這些實施例。實施例1以干燥柿葉10g為例所用的其他原料及其提取方法如下1、稱取柿葉干燥粉末10g，加20倍量的質量濃度為70%的乙醇于75°(:水浴加熱回流提取1小時，過濾，濾渣再分別用10倍量的質量濃度為70%的乙醇提取兩次，每次1小時。2、將各次提取液合并，用質量濃度為2%的HC1水溶液調pH值至5.5，過中極性的LX-28型大孔吸附樹脂柱，用7jC洗至流出液無色，用質量濃度為70%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液。3、將洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.301.40g/cm:i(60°C)，置于冷凍干燥箱內，-5(TC干燥，得到柿葉總黃酮391mg，提取物中總黃酮含量(以蘆丁計)為72.1%。采用本發明方法提取的柿葉總黃酮用高效液相色譜進行分析，色譜柱為Phe憩e濃LunaC18(250X4.6nm，5Mm);流動相為甲醇(A)，0.5%磷酸(B);梯度洗脫為0-5分鐘13%A，5-8^H中13-18%A，8-25分鐘18-19%A，25-40分鐘19-20%A，40-50分鐘20-60%A，50-60分鐘60-13%;流速為1.0ml/min;檢測波長為360nm。高效液相色譜圖見圖1。由圖1可見，柿葉總黃酮含有i0種以上的成分。實施例2以干夂喿柿葉10g為例所用的其他原料及其提取方法如下1、稱？5l柿葉干燥粉末10g，加20倍量的質量濃度為70%的乙醇于于頻率為2450MHz、功率為400-450W的微波輻射加熱下回流10分鐘，過濾；濾渣再用20倍量的質量濃度為70%的乙醇微波提取10力H巾一次。2、將兩次提取液合并，用質量濃度為2。/。的HCl水溶液調pH值至5.5，過中極性的LX-28型大孔吸附樹脂柱，用水洗至流出液無色，用質量濃度為70%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液。.3、將洗脫液MH，濃縮至至相對密度為1.301.40g/cm3(6(TC)的浸膏，置于冷凍干燥箱內，-5(TC干燥，得到柿葉總黃酮586mg，提取物中總黃酮含量(以蘆丁計)為72.5%。實施例3以干纟喿柿葉10g為例所用的其他原料及其提取方法如下1、稱取柿葉干'燥私、末10g，加20倍量的質量濃度為70%的乙醇在頻率為4050KHz、功率為220W的超聲波加熱下回流30分鐘，濾渣再分別用20倍量的質量濃度為70%的乙醇超聲提取30女H中一次。2、將兩次提取液合并，用質量濃度為296的HCl水溶液調pH值至5.5，過弱極性的LX-38型大孔吸附樹脂柱，用水洗至流出液無色，用質量濃度為70%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液。3、將洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.301.40g/cm3(6(TC)的浸膏，置于冷凍干燥箱內，-50。C干燥，得柿葉總黃酮567mg，提取物中總黃酮含量(以蘆丁計)為71.5%。實施例4以生產柿葉總黃酮保肝藥物顆粒劑產品1000克為例所用的柿葉總黃酮和輔料及其配比為斷總翻20g蔗糖400g糊精加至1000g。將柿葉總黃酮加入乙醇使含醇量達60%，靜置24小時，取上清液，減壓回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度為1.301.40g/cm3(6(TC)的清膏，加糊精，蔗糖，混勻，制成顆粒，干燥，裝袋，每袋重10g，每克含柿葉總黃酮20mg。以生產柿葉總黃酮保肝藥物片齊IJ產品1000片為例所用的柿葉總黃酮和輔料及其配比為禾斷總鋼100g淀粉加至400g。其制備方法按制劑學片劑的制備方法進行。每片重0.4g，每片含柿葉總黃酮100mg。以生產柿葉總黃酮保肝藥物膠囊齊ij產品1000粒為例所用的柿葉總黃酮和輔料及其配比為禾制十總鋼100ge-環糊精加至300g。其帝恪方法按制劑學膠囊劑的制備方法進行。每粒重0.3g，每粒含柿葉總黃酮100mg。以生產柿葉總黃酮保肝藥物口服液1000mL為例所用的柿葉總黃酮和輔料及其配比為*斷總鋼20g蔗糖400g蒸餾水加至1000mL。其制備方法按帝躋l」學口服液的制備方fei4行。^MlOmL，每WtW葉總黃酮20mg。實施例5取豐制十總黃酮20g，用10倍量的乙醇溶解，均勻噴灑到980g茶葉上，使每克茶葉中糊十總鋼的含量為20呢，烘干，分裝成每袋10g的袋泡茶，每天飲用2袋，可長期飲用。實施例6取柿葉總黃酮1.6g，用30mL的0.3%食品用羧甲基纖維素鈉懸浮，力口入970mL牛奶中制成具有保肝作用的乳制品，每100mL含柿葉總黃酮160mg,滅菌后包裝，每袋250mL，每人每天t欠用不超過250mL，可長期飲用。實施例7取糊十總鋼4g，植物油50g，20g活性酵母，標準粉加至1000g，按照常規面包制作工藝進行。每人每天食用100g，含榊十總難同400mg。每人每天食用不超過100g。在其〗也食品中，如餅干、蛋糕等食品中，也可以加入糊十總黃酮，按每人每天糊十總#用量400mg為宜。為了驗證柿葉總黃酮在預防、治療肝損傷方面的效果，申請A^用本發明實施例l制備的柿葉總黃酮34行了藥效學i，，各種i力驗清況如下受試藥物柿葉總黃酮，自制，試驗時按常規方法配制成質量濃度為3%的柿葉總黃酮水溶液。受試動物昆明種小鼠，體重2530g，雌雄兼用，由西安交通大學醫學實驗動物中心提{共。動物合格證為SCXK(陜)2007-001。1、柿葉總黃酮小鼠急性毒性試驗取小鼠20只，雌雄各半，禁食12小時，一天內給小鼠灌胃(300mg/kg)3次，每次間隔4小時，使其日累計量達到900mg/kg，給藥后讓小鼠自由攝食及飲水，連續觀察7天，記錄動物外觀，食欲，行為活動，死亡等毒副反應瞎況。7天后將小鼠處死，解咅lj，肉眼觀察主要臟器組織病變,兄。；試驗結果小鼠灌胃后未出現死亡。第一次、第二次灌胃后，活動未見明顯異常；第三次灌胃后，部分小鼠出現自主活動減少、閉目靜臥、反應遲鈍等癥狀，但無豎毛懶動、抽搐、翻倒等異常情況，1-3小時后活動如常，大便深褐色質軟，未出現稀樣便。連續觀察7天，均存活，飲食、活動、精神狀態、皮毛膚色、大小便等均無異常變化。7天后將小鼠處死，解剖，肉眼觀察心、肝、脾、月市、腎等主要臟器，均未見形態學異常改變。試驗結論柿葉總黃酮小鼠給藥，求不出LD50，最大給藥量為800mg/kg。按60kg成人用量400mg計算，相當于人日用量的72倍(800mg/kgX60V400mgX60kg)。柿葉總黃酮的毒性較小。'2、柿葉總黃酮藥效學試驗試齊lj:谷草轉氨酶(ALT)，谷丙轉氨酶'(AST)，丙二醛(MDA)，總超氧化物歧化酶(SQD)和過氧化氫化酶(CAT)試劑盒及蛋白試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供；聯苯雙酯滴丸，由浙江萬邦藥業有限公司生產，批號為081010，規格為1.5mg/丸；四氯化碳(AR)，由天津市化學試劑一廠生產，實驗時用植物油配成0.2%的溶液；其它試劑均為國產分析純。配制聯苯雙酯溶液:按常規方法配制成質量濃度為1%聯苯雙酯水溶液。試驗方法:取昆明種小鼠48只，雌雄各半，隨才幾分為6組每組8只，正常對照組(NCG)、CCl4模型組(MCG)、陽性對照組(LCG)、治療低、中、高組(DKLF1-3，3組)置于通風條件下，所有動物可以自由飲水和飲食。正常對照組(NCG)和ca模型組(MCG)每天灌胃蒸餾水一次(10mL/kg)，陽性對照組(LCG)每天灌胃聯苯雙酯(100mg/kg)—次，治療低、中、高組(DKLF1-3，劑量分別為50mg/kg、100mg/kg、300mg/kg柿葉總黃酮)每天灌胃給藥一次，連續處理21天。實驗第22天，除正常對照組(NCG)給予等劑量植物油外，其余各組給予0.2%四氯化碳植物油溶液(預先經超聲波混勻)，制備急性肝組織損傷模型，灌胃量均按體重10ml/kg，隨后禁食24小時后從眼眶取血，脫臼，稱毛重。(1)柿葉總黃酮對CC14誘使急性肝損傷小鼠肝指數的影響小鼠給藥最后一天，稱毛重，脫臼致死，解剖取出肝臟，用冰冷的生理鹽水涮洗血漬，并用濾紙蘸干，對肝分別稱量。按下面公式計算肝指數L(肝指數)二m！(肝的重量)/m2(小鼠體重)X100%試驗結果見表l。表1柿葉總黃酮對CCl4誘使的肝損傷小鼠肝指數、血清ALT和AST的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注表1中DKLF1為柿葉總黃酮低劑量組，DKLF2為柿葉總黃酮中齊ij量組，DKLF3為柿葉總黃酮高劑量組。與正常組(NCG)比較,林P〈0.01,*P<0.05，與模型組(MCG)比較，"P〈0.01'"〈0.05,與聯苯雙酯對照組(LCG)比較，畫麗P〈0.01，畫P〈0.05。由表1可見，模型組(MCG)小鼠的肝指數比正常組(NCG)和對照組(LCG)均有顯著的增加，且存在顯著性差異(p〈o.oi)，表明模型組小鼠肝細胞發炎嚴重，ca誘導了小鼠肝細胞的損傷；對照組(LCG)小鼠的肝指數比正常組差異不顯著，柿葉總黃酮低劑量組(DKLFl，50mg/kg)小鼠的肝指數明顯高于對照組，中劑量組與其差異不大，當給藥濃度達到300mg/kg時，肝細胞損傷小鼠的肝指數基本上恢復到正常7jC平，與正常組和對照組均無顯著性差異。取肝左葉0.5X0.5X0.5nf小塊，置質量濃度為4%的中性緩沖甲醛溶液中，常規脫水，石蠟包埋，切片，作HE染色，在顯微鏡下觀察肝組織病理改變。病理組織學檢查結果見圖2。(A)正常組(NCG)，(B)模型組(MCG)，(C)聯苯雙酯)(寸照組(LCG)，(D)柿葉總黃酮低劑量組(DKLE1)，(E)柿葉總黃酮中劑量組(DKLE2)，(F)柿葉總黃酮高劑量組(DKLE3)。圖2顯示，柿葉總黃酮治療組與模型組比較，低劑量組無明顯差別，中劑量組、高劑量組明顯減輕了肝細胞碎屑樣壞死、點狀壞死及肝細胞濁腫水樣變性，且正常肝細胞數目增多，與對照組相當，無明顯差異。結果表明柿葉總黃酮對CCL誘使急性肝損傷有明顯的藥效。(2)柿葉總黃酮對CCL誘使的肝損傷小鼠血清ALT和AST的影響CCl4造模后禁食24小時，摘取眼球取血，分離血清，按照試劑盒要求，湖,清ALT和AST指標。試驗結果見表l。由表l可知，Ca造模后模型組血清中ALT和AST與正常組和對照組相比均有顯著性差異(P〈0.01)。與模型組相比，柿葉總黃酮低劑量組(DKLF1，50mg/kg)小鼠血清ALT和AST的水平都有降低，但差異不顯著；中劑量組(100mg/kg)小鼠血清ALT和AST明顯下降(P<0.05);高劑量組(300mg/kg)其ALT和AST水平與模型組差異顯著(P<0.01)。中、高劑量組均與對照組(LCG)已無顯著性差異。高劑量組的ALT和AST水平己經基本達到正常。實驗結果表明，柿葉總黃酮能夠明顯降低肝損傷小鼠血清ALT和AST水平，具有保護細胞免受損傷的作用，與聯苯雙酯具有相同的防護急性四氯化碳肝損傷的作用。(3)柿葉總黃酮X寸CC14誘使的肝損傷小鼠MDA含量的影響動物脫臼處死后，解剖取出肝臟，用冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，用濾紙拭干，制備肝勻漿。按照試劑盒的要求測小鼠肝臟中脂質過氧化物(MDA)的含量。試驗結果見表2。表2柿葉總黃酮對CCL誘使的肝損傷小鼠肝中SOD、MDA和CAT的影響組另lj脂質過氧化物(MDA,nmol/mgprot)總超氧化物歧化酶(SOD,U/順rot)過氧化氫酶(CAT,U/卿rot)NCG7.18"182.99"35.13"MCG14.08林讓麗135.25林麗國15.15**"LCG8.6"176.11"30.72"亂F113.26**目140.34林園國16.73**聽疆亂F29.86*A167.81一26.16*"DKLF37.42"184.84"34.06"讓注表2中DKLF1為柿葉總黃酮低劑量組，DKLF2為柿葉總黃酮中劑量組，DKLF3為柿葉總黃酮高劑量組。與正常組(NCG)比較，**P<0.01,*P<0.05;與模型組(MCG)比較，"P<0.01，卞O.05;與聯苯雙酯X寸照組(LCG)比較，"P<0.01,畫P〈0.05。從表2可以看出，模型組(MCG)肝組織MDA含量與正常組(NCG)相比，有顯著的升高(P<0.01)，即在CCL的誘導下，造成了小鼠肝臟的脂質過氧化損傷，造成了冊A的產生。對照組(LCG)比正常組(NCG)MDA含量稍高，但無顯著性差異。與模型組(MCG)相比，柿葉總黃酮(DKLF)隨著藥物劑量的增加其肝組織MDA含量也明顯的降低，高劑量組(300呢/kg)其MDA含量已經下降至正常水平，高劑量和中劑量組與對照組(LCG)相比差異亦不顯著。結果表明柿葉總黃酮能降低CCL誘導引發的小鼠肝組織中脂質過氧化物MDA的含量，柿葉總黃酮在小鼠體內發揮了作用，即能減輕肝細胞受損傷的程度。(4)柿葉總黃酮對CCL誘使的肝損傷小鼠肝中SOD活性的影響動物，兌臼處死后，解剖取出肝臟，用冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，用濾紙拭干，制備肝勻漿。按照試劑盒的要求測肝中SOD活力。試驗結果見表2。從表2中可以看出模型組(MCG)肝組織中總超氧化物歧化酶(SOD)活力明顯低于正常組(NCG)和對照組(LCG)，均有顯著性差異(P<0.01),說明肝細胞損傷嚴重。與模型組(MCG)相比，柿葉總黃酮三個劑量組(DKLF)肝組織中SOD活性也顯著的增加，經統計學處理分析，除低劑量組(50mg/kg)夕卜，其它兩組(100、300mg/kg)均有顯著性差異(P〈0.05或P<0.01)，且存在明顯的劑量效應關系。中劑量組(DKLF2)和高劑量組(DKLF3)SOD活力與對照組(LCG)相比，差異不顯著。結果表明柿葉總黃酮可以抑制CCl4所致肝臟SOD活力下降，即柿葉總黃酮能通過一系列間接的生理生化機制，促進機體SOD等抗氧化酶的生物合成或活化，提高機體的抗氧化能力，清除超氧自由基保護細胞免受損傷，減輕細胞的脅迫損傷，起到保護細胞的作用。(5)柿葉總黃酮對CC14誘使的肝損傷小鼠CAT活力的影響觀!l試CC14誘導弓f發損傷小鼠肝CAT的變化，結果見表2，與正常組(NCG)肝組織過氧化氫酶(CAT)活力相比，模型組(MCG)CAT顯著下降(P<0.01);與t莫型組(MCG)相比，治療組除過低劑量(50mg/kg)夕卜，其余兩組小鼠肝臟的CAT活力都有不同程度的增加，且存在明顯的劑量效應關系，當給藥濃度達到300mg/kg時，小鼠肝CAT活力基本恢復到正常水平，且與對照組差異不顯著。結果表明柿葉總黃酮能改善環CCl4所致小鼠肝損傷效應，清除自由基的影響，提高小鼠體內CAT的活力。(6)試驗結論柿葉總黃酮能有效地抑制四氯化碳所致小鼠血清中谷草轉氨酶(ALT)和谷丙轉氨酶(AST)的活性上升，即降低血清ALT禾nAST的水平；能明顯降低CC1激小鼠肝損傷肝組織中丙二醛(MDA)的含量，提高總超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)活性。電鏡觀察結果也表明柿葉總黃酮能夠降低肝細胞的損傷。試驗結果表明柿葉總黃酮能有效地清除一些損害細胞的自由基，拮抗CCL誘發的肝細胞自由基和脂質過氧化損傷，具有顯著的保護和治療肝損傷作用，可以作為治療肝病和保肝藥物以及保健食品。柿葉總黃酮藥物的功能與主治治療肝病或保肝。柿葉總黃酮藥物的規格柿葉總黃酮藥物顆粒劑每袋重10g，每克含柿葉總黃酮20mg;柿葉總黃酮藥物片劑每片重O.4g，每片含柿葉總黃酮100mg;柿葉總黃酮藥物膠囊劑每粒重O.3g，每粒含柿葉總黃酮IOOmg;柿葉總黃酮藥物口服液每瓶10mL，^t^t制十總黃酮20mg。柿葉總黃酮藥物的用法與用量口服藥物顆粒劑，開水沖服，一次1袋，早晚各l次；口服藥物片劑，一次2片，一日2次；口服藥物膠囊劑，一次2粒，一日2次；口服藥物口服液，一次1瓶，一日2次。權利要求1、一種柿葉總黃酮的制備方法，其特征在于由下述步驟組成(1)稱取柿葉干燥粉末，加20倍量的質量濃度為70％的乙醇于75℃水浴加熱回流提取1小時，過濾，濾渣再分別用10倍量的質量濃度為70％的乙醇提取兩次，每次1小時；或稱取柿葉干燥粉末，加20倍量的質量濃度為70％的乙醇于用頻率為2000～3000MHz、功率為400～450W的微波輻射加熱下回流10分鐘，過濾，濾渣再分別用20倍量的質量濃度為70％的乙醇微波提取兩次，每次10分鐘；或稱取柿葉干燥粉末，加20倍量的質量濃度為70％的乙醇在頻率為40～50KHz、功率為220W的超聲波加熱下回流30分鐘，濾渣再分別用20倍量的質量濃度為70％的乙醇超聲提取兩次，每次30分鐘；(2)將各次提取液合并，用質量濃度為2％的HCl水溶液調pH值至5.5，過LX-28型大孔吸附樹脂柱或LX-38型大孔吸附樹脂柱，用水洗至流出液無色，用質量濃度為70％的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液；(3)將洗脫液60℃減壓濃縮至相對密度為1.30～1.40g/cm3，置于冷凍干燥箱內，-50℃干燥，得到柿葉總黃酮。2、有交j(成分柿葉總黃酮在制備保肝藥物和保健食品中的應用。全文摘要一種柿葉總黃酮的制備方法，用濃度為70％的乙醇75℃水浴回流提取或用濃度為70％的乙醇于微波輻射加熱回流提取或用濃度為70％的乙醇于超聲波加熱回流提取；合并提取液，用濃度為2％HCl水溶液調pH值至5.5，過LX-28型大孔吸附樹脂柱或LX-38型大孔吸附樹脂柱，水洗至流出液無色，用質量濃度為70％的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液；洗脫液60℃減壓濃縮至相對密度為1.30～1.40g/cm<sup>3</sup>，置于冷凍干燥箱內，-50℃干燥，得到柿葉總黃酮。有效成分柿葉總黃酮在制備保肝藥物和保健食品中的應用。柿葉總黃酮經藥效試驗，能降低血清ALT和AST、肝臟MDA含量，提高肝臟SOD和CAT活性，降低肝細胞的損傷程度，對預防及治療肝臟疾病有重要作用。文檔編號A61K36/44GK101637492SQ20091002374公開日2010年2月3日申請日期2009年8月31日優先權日2009年8月31日發明者原江鋒,唐繼斌,張志琪,張清安,涂得助,燕王,賈曉燕申請人:陜西師范大學