包含腦膜炎奈瑟球菌血清群b和c抗原的組合物的制作方法

專利名稱：：包含腦膜炎奈瑟球菌血清群b和c抗原的組合物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及免疫原性組合物，尤其是那些包含腦膜炎奈瑟球菌o"^。,,,,礎,)血清群B和C(NmB和NmC)的免疫原性分子的組合的組合物。
背景技術：
：腦膜炎奈瑟球菌(Nm)的血清群B和C菌株一起導致歐洲和美國的大部分侵襲性疾病。現在已有了針對各Nm血清群的疫苗。挪威國家公共衛生研究所的NmB疫苗是安全的，在兒童和成年人中可引起菌株-特異性免疫，并能有效預防青少年的NmB疾病。典型地，將這種疫苗與腦膜炎球菌C多糖疫苗聯合并與明礬一起給藥。然而這種普通的多糖疫苗成分對嬰兒和兒童無效。啟龍股份公司的NmC偶聯物(conj.)疫苗是安全的，在2到3個月齡接受疫苗接種的嬰兒體內引發高滴定度的血清殺菌抗體，而且對未偶聯的NmC多糖引發免疫性B細胞記憶。為了提供能引發針對NmB和NmC血清群的聯合疫苗，國際專利申請WO99/61053公開了免疫原性組合物，這種組合物包含(a)偶聯于載體的NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白。這種聯合疫苗對這兩種血清群都引發免疫應答，而這種免疫應答與各單獨血清群引發的免疫應答的差異不大。本發明的目的是將這種聯合疫苗開發成能針對更廣生物類型的免疫應答的組合物。發明公開本發明提供了包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，特征在于這種組合物還可含有選自以下一種或多種成分*WO99/57280公開的蛋白質或其免疫原性片段；*W099/36544公開的蛋白質或其免疫原性片段；*W099/24578公開的蛋白質或其免疫原性片段；9參W097/28273公開的蛋白質或其免疫原性片段；*W096/29412公開的蛋白質或其免疫原性片段；*WO95/03413公開的蛋白質或其免疫原性片段；*W099/31132公開的蛋白質或其免疫原性片段；參抗腦膜炎奈瑟球菌血清群A的保護性抗原；*抗腦膜炎奈瑟球菌血清群Y的保護性抗原；*抗腦膜炎奈瑟球菌血清群W的保護性抗原；*抗流感嗜血菌的保護性抗原；*抗肺炎球菌的保護性抗原；*抗白喉的保護性抗原；*抗破傷風的保護性抗原；*抗百日咳的保護性抗原；*抗幽門螺旋桿菌(/Ze/!'co6a"e/"矽/orz')的保護性抗原；*抗脊髓灰質炎的保護性抗原；和/或*抗乙型肝炎病毒的保護性抗原。與引發對腦膜炎奈瑟球菌B和C的免疫應答一樣，本發明的免疫原性組合物還引發對其它生物的免疫應答。成分(a)成分(a)寡糖宜為啟龍股份公司的寡糖，其表示較佳地約為12-22重復單位的NmC多糖片段。成分(a)NmC寡糖宜偶聯于載體。這種載體宜為蛋白質，但也可以是多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、氨基酸聚合物、氨基酸共聚物、脂類聚集體或失活病毒顆粒。更佳地，這種載體是蛋白質。更佳地，這種載體是CRM197，一種無毒白喉類毒素。各劑量宜為10pg寡糖對應于12.5-33pgCRM197(即，維持寡糖/蛋白質的比例約為0.3-0.8)。更佳地，可以使用約20pgCRM197。NmC偶聯物或多糖的劑量以pg唾液酸表示。還可以使用包含未偶聯多糖的NmC疫苗(這里也稱為"NmC多糖"或"MenCPs")。MenCPs是包含長度宜為'約60-80重復單元的多糖的粗分離物。NmC-CRM197偶聯物更詳盡的描述參見Costantino等人(1992)Vaccine10:691—698。成分(b)成分(b)NniB外膜蛋白宜包含菌株44/76部分純化的外膜蛋白(B15:P1.7,16:L3，7，9)。這種外膜蛋白宜作為蛋白脂質體小泡存在(如通過用脫氧膽酸鹽提取過程得到)。NmB的劑量以pg蛋白質表示。較佳地，可從挪威國家公共衛生研究所獲得NmB疫苗組合物/疫苗成分。NmB/明礬包含0.05mg/mlNmB蛋白質、3.33mg/mlAl(OH)3(明礬)和0.10mg/ml乙基汞硫代水楊酸鈉(thiomersalsodiutn)。成分(c)成分(C)宜包含以下一種或多種成分*含有選自以下的氨基酸序列的蛋白質如W099/24578所述的SEQID2,4,6,8,10,12,14，16,18,20,22,24,26,28，30,32，34，36,38,40,42，44,46，48,50，52,54,56,58，60,62，64，66,68，70，72，74,76,78,80,82,84,86，88，卯，92，94,96,98,100，102,104，106，108，110,112,114,116,118，120，122，124,126,128,130,132,134,136,138,140,142，144,146,148,150,152,154,156,158,160,162,164，166,168，170,172，174,176,178,180，182,184，186，188,l卯,192,194,196,198，200,202,204，206,208,210,212，214，216,218,220,222,224,226,228,230，232,234，236，238,240，242,244,246,248，250,252,254,256，258,260,262,264，266，268,270,272，274,276,278,280,282,284,286，288，290,292，294，296，298,300，302,304,306,308，310,312,314，316,318,320,322,324，326,328,330,332，334,336,338,340,342,344,346,348'350,352,354，356，358，360,362,364，366,368,370,372，374,376,378,380,382,384,386，388，390，392,394,396,398，400,402，404,406，408，410,412,414，416,418，420,422,424,426，428,430,432，434，436，438，440,442,444,446，448,450,452,454，456，458,460，462,464,466,468，470,472，474,476，478，480，482，484,486，488,490,492,494,496，498,500，502,504,506,508,510,512,514,516，518,520,522,524,526，528,530，532,534，536,538,540，542，544，546，548,550,552,554，556,558，560，562,564，566,568,570,572，574,576，578，580,582，584,586,588,590,592'594,596，598,600，602，604,606，608,610，612,614,616,618,620,622,624,626，628,630,632，634，636，638,640，642,644，646,648,650,652,654,656,658，660，662,664，666,668，670,672，674,676,678,680,682,684,686，688,690，692,694，696,698,700，702，704,706,708，710,712,714,716,718,720,722,724,726，728，730,732,734,736，738,740,742,744，746,748，750,752，754,756,758，760,762，764,766,768,770，772,774，776,778,780,782,784,786,788,790，792，794，796,798,800，802,804，806，808,810，812,814，816,818,820,m,824,826,828，830,832，834,836,838,840，842，844,846，848,850,852,854,856,858,860，862,864，866,868,870,872，874,876，878,880，882，884,886,888，890,和892(或含有一種或多種這些SEQID的免疫原性片段的蛋白質，或含有與這些SEQID之一有序列相同性(宜高于50%，如60%、70%、80%、90%、95%、99%或更高)的序列的蛋白質)；*含有選自以下氨基酸序列的蛋白質如W099/36544所述的SEQID2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24，26，28,30，32,34'36，38,40,42,44,46，48,50,52,54，56，58，60，62,64,66,68,70,72,74,76，78,80，82，84,86,88,和90(或含有一種或多種這些SEQID的免疫原性片段的蛋白質，或含有與這些SEQID之一有序列相同性(宜高于50%，如60%、70%、80%、90%、95%、99%或更高)的序列的蛋白質)；*含有選自以下氨基酸序列的蛋白質如W099/57280所述的2，4,6,8,]0，12,14,16,〗8,20,22,24,26'28,30,32，34，36,38，40,42,44,46,48,50,52,54,56，58,60,62,64,66，68,70,72,74,76，78，80,82，84，86,88,90，92，94，96,98,100,102，104,106，108,110，112，114,116，118，120,122,124,126,128，130,132,134,136，138，140,142,144，146,148，150,152，154,156,158,160,162,164，166，168,170,172,174，176,178,180，182,184，186,188，190,192,194,196,198，200,202，204,206,208，20,212，214,26,218,220,222,224，226，228,230,232,234，236,238,240,242,244，246,248,250,252,254,256,258,12260，262,264,266,268292,294,296,298,300324，326,328,330,332356,358,360,362,364388,3卯，392,394,396420,422,424,426,428452,454,456,458,460:484,486,488,柳，492516,518'520,522,524548，550，552,554,556580，582，584，586,588612，614,616,618，620644,646，648，650,652676，678,680,682,684708，710,712,714，716740，742,744,746,748772，774,776，778,780804,806,808，810,812836，838,840,842,844868'870，872,874，876900，902,卯4，卯6,908932，934,936,938,940964，966,968，970,972996'998,1000,1002,1022,1024,腿，畫薩，1050,1052，10541074,1076,1078，10801100，1102,1104，11061126,1128,1130,1132，270,272，274,276，278，280,,302,304,306,308,310,312,,334，336，338,340,342，344,,366,368,370,372,374,376,，398,400,402,404,406,408,,430,432,434,436，438,440,，462,464,466，468,470，472,,494,496,498,500,502,504,,526,528,530,532,534，536,，558，560,562,564，566,568,,590,592,594,596,598，600，,622,624,626,628,630,632,,654，656,658,660，662,664,，686,688,690,692，694，696,,718，720,722,724,726，728,,750，752，754，756'758，760,,782,784，786,788，790,792,，814,816,818,820'822，824,,846,848,850，852,854，856,,878,880,882,884,886，888,，910,912,914,916,918,920,,942，944，946,948，950,952,,974,976,978,■，982，984,藤，薩，畫，1010，1012,,1030,匿，,，1036,1038,，畫，翻，,，薩，1064,1082，1084,隨，1088,謂,畫，1110，1112,1114，1116.,1134，1136,1138，1140,1142282,284，286,288,2卯，314,316,318,320，322,346，348,350'352,354,378,380,382,384,386，410,412，414,416,418,442，444，446，448，450，474，476,478,480，482,506,508,510'512，514,538,540，542,544,546，570,572,574,576,578,602,604,606,608,610,634,636，638,640，642,666,668,670,672,674，698,700，702,704,706，730,732,734,736，738,762,764,766,768，770，794,796，798，800,802，826,828,830，832,834'858，860，862,864,線8卯，892,894，896,898,922，924，926,928，930,954，956,958,960，962,986，988,990,992,994,1014,1016,1018，簡,國，1042，1044,畫，1066,薩，畫，1072,1092，腦，腦，廳,1118,1120，1122,1124,，1144,1146，1148,1150，131152,1154,1156,1158，畫,1162，1164，1166,1168，1170,1172,1174,1176,1178,腦，1182，1184，1186，1188，謂，1192,1194,1196,1198,1200,匿；1204,1206，1208,1210，1212,1214,1216，1218,1220,1222,1224,1226,1228，1230,1232,1234,1236，1238,1240,1242,1244,1246,菌,1250，1252，1254,1256，1258，1260，1262，1264，1266,1268,1270，1272,1274,1276,1278,簡，1282,1284，1286,1288,園,1292,1294,1296,1298,1300,1302，1304,1306,畫,1310,1312,1314，1316,1318,1320，1322,1324，1326，328,1330,1332，1334,1336,1338,1340，1342,1344，線1348,1350,1352，354,356,1358,360,1362,1364,1366,1368,1370,1372,1374,1376，1378'1380,1382,1384，1386,1388,1390，1392，1394，1396，訓，1400,1402,隨，1406,剛,140,1412,1414,1416,1418，1420，1422，1424,1426,1428,1430,1432,1434,1436,1438,1440,1442，1444，1446,1448,1450,1452,1454,1456,1458，1460,1462,1464,畫，畫,1470，1472，1474,1476，1478,函,匿,1484,1486,1488，1490,492，1494,1496,1498,1500，1502,1504,1506,1508,1510,1512,1514,1516,1518,1520,1522,1524,1526，1528,1530,1532，1534,1536，1538，1540,1542，1544，1546，1548,1550，1552，1554,1556,1558，1560,1562,1564，1566,1568,1570，1572,1574,1576,1578,1580,1582，函,1586,1588,1590,1592,1594,1596,1598,,，薩,1604,畫'薩,1610,1612，1614，1616，1618，1620,1622,1624，1626，1628,1630,1632,1634,1636,1638,國:1642,1644,1646,薩,1650,1652,1654,1656,固，國,1662,1664，藤,1668,腦，1672,1674,1676,1678,腦,1682,1684,廳,1688,,,1692,腦,1696,1698,副,1702，1704，1706,腦,1710，1712,1714,1716，1718，1720,1722,1724,1726,1728,1730,1732，1734,1736,1738,1740,1742，1744，1746,1748,1750,1752,1754,1756,1758,1760,1762,1764,1766,1768,1770，1772,1774,1776,1778，畫,1782，1784，1786,簡,1790,1792，1794,1796,1798，畫，1802,腦,1806,1808，1810,1812,1814，1816,1818,1820,1822,1824,1826,圃,1830，1832,1834，1836,1838,畫,1842,1844,1846,1848,1850，1852，1854,1856,1858,I860,1862,1864,1866,畫,1870,1872，1874'1876,1878，麵,腦，藤,1886，腦,賤賤腦，脳，1898，畫,1902，簡，<image>imageseeoriginaldocumentpage15</image>2660，2662，2664,2666,2668,2670,2672,2674,2676，2678,2680，2682，2684,2686,2688，2690,2692,2694,26%,2698,2700,2702,2704,2706,2708，2710，2712，2714,2716,2718,2720,2722,2724，2726，2728,2730,2732,2734，2736，2738,2740,2742,2744，2746,2748，2750,2752,2754,2756,2758,2760,2762,2764,2766，2768,2770,2772，2774,2776,2778，2780,2782,2784，2786，2788,27卯,2792,2794，2796，2798,2800，2802,2804,2806,2808,2810,2812,2814,2816,2818，2820,2822,2824，2826，2828，2830，2832,2834,2836，2838，2840，2842'2844，2846,2848,2850，2852,2854,2856，2858,2860,2862,2864，2866，2868，2870，2872,2874,2876,2878，2咖,2882，2884,2886,2888,2890，2892，2894,2896，2898,2卿,2卯2,2904,2906,2908,2910，2912,2914,2916,2918，2920,2922,2924,2926,2928，2930,2932,2934,2936，2938,2940,2942,2944,2946,2948,2950,2952,2954,2956,2958，2960,2962,2964,2966,2968,2970,2972，2974,2976,2978,2卿,2982，2984,2986,2988，2990,2992,2994,29%,2998,3000，3002,3004，3006,3008,3010,3012,3014,3016,3018和3020(或含有一種或多種這些SEQID的免疫原性片段的蛋白質，或含有與這些SEQID之一有序列相同性(宜高于50%，如60%、70%、80%、90%、95%、99%或更高)的序列的蛋白質)；*W097/28273的圖4或圖13所公開的蛋白質；*含有選自如下氨基酸序列的蛋白質如W096/29412公開的SEQIDl-8(或含有一種或多種這些SEQID的免疫原性片段的蛋白質，或含有與這些SEQID之一有序列相同性(宜高于50%,如60%、70%、80%、90%、95%、99%或更高)的序列的蛋白質);*含有選自如下氨基酸序列的蛋白質如WO95/03413公開的SEQID1-23(或含有一種或多種這些SEQID的免疫原性片段的蛋白質，或含有與這些SEQID之一有序列相同性(宜高于50%，如60%、70%、80%、90%、95%、99%或更高)的序列的蛋白質)；含有選自如下氨基酸序列的蛋白質如W099/31132公開的SEQID2(或含有SEQID2的免疫原性片段的蛋白質，或含有與SEQID2序列相同(宜高于50%,如60%、70%、80%、90%、95%、99%或更高)的序列的16蛋白質)；參抗腦膜炎奈瑟球菌血清群A的多糖抗原；*抗腦膜炎奈瑟球菌血清群Y的多糖抗原；*抗腦膜炎奈瑟球菌血清群W的多糖抗原；參抗流感嗜血菌的多糖抗原；*抗肺炎球菌的多糖抗原；*抗白喉的保護性抗原，由白喉類毒素如CRM197突變體[如，DelGuidice等人(1998)MolecularAspectsofMedicine19:1-70]構成；*抗破傷風的保護性抗原，由破傷風毒素[如Wassilak&Orenstein，疫苗，第4章(Plotkin&Mortimer編輯)，1988]構成；參抗百日咳的保護性抗原，包含百日咳全毒素(PT)和絲狀凝血素(FHA)，還可任選地含有百日咳桿菌粘附素(pertactin)和/或凝集原2和3[如，Gustafsson等人(1996)N.Engl.J.Med.334:349-355;R印poli等人(1991)TIBTECH9:232-238];*抗幽門螺旋桿菌的保護性抗原，包含一種或多種CagA(如W093/]8150)、VacA(如，W093/18150)、NAP(如，W099/53310)、H叩X(如W098/04702)、HopY(如，W098/04702)、尿激酶；抗乙型肝炎病毒的保護性抗原，由冊V表面抗原和/或HBV核心抗原構成。當成分(c)含有抗白喉的抗原時，這種組合物宜含有抗破傷風和脊髓灰質炎的抗原。當成分(c)含有抗破傷風的抗原時，該組合物宜含有抗白喉和脊髓灰質炎的抗原。當成分(c)含有抗脊髓灰質炎的抗原時，該組合物宜含有抗白喉和破傷風的抗原。百曰咳毒素是毒素蛋白，當存在于成分(c)中時，宜將其去毒。去毒化可通過化學和/或遺傳方法進行。優選的去過毒的突變體是9K/129G雙突變體[如，Ra卯uoli(1997)NatureMedicine3:374-376]。當成分(c)含有以不同新生和成熟形式存在的蛋白質時，宜選用該蛋白質的成熟形式。例如，當含有NspA時，(W096/29412;還可參見Martin等人(1997)J.Exp.nied1851173-1183)宜選用沒有信號肽的蛋白質成熟形式。當成分(C)含有多糖抗原時，宜將多糖偶聯于載體蛋白。成分(c)宜不會消除對成分(a)和(b)應當引起的免疫應答。藥學上可接受的載體本發明的組合物還可包含藥學上可接受的載體。這種載體可以是有機的、無機的或這兩者。本領域技術人員熟知的適合的載體包括(但不限制于)大的、代謝緩慢的大分子，如蛋白質、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、氨基酸聚合物、氨基酸共聚物、脂類聚集體(如油滴或脂質體)以及無活性的病毒顆粒。可使用藥學上可接受的鹽，如無機酸鹽，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽等；以及有機酸鹽，如乙酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽等。在Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPub.Co.，N.J.1991)中可找到關于藥學上可接受的賦形劑的充分討論。組合物中藥學上可接受的載體可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，這些載體中還可能存在輔助性的物質，如潤濕劑或乳化劑、pH緩沖物質等。通常，可將治療性組合物制成可注射劑，例如液體溶液或懸浮液；還可制成在注射前適合配入溶液或懸液中、液體載體的固體形式。脂質體也包括在藥學上可接受的載體的定義中。這種載體還可作為免疫刺激劑，如佐劑。合適的佐劑是本領域技術人員所熟知的。優選的載體是氫氧化鋁(明鞏)和MF59。可以從Superfos(Bedbaek，Denmark)得到呈3%溶液的明礬。當組合物中存在明礬時，每份劑量明砜的量為lmg到1.67mg。當成分(c)包含乙型肝炎抗原時，不宜將氫氧化鋁用作載體(如EP-A-0642355)。類似地，當成分(c)中包含流感嗜血菌多糖偶聯物時，不宜將氫氧化鋁用作載體(如EP-A-0833662)。而可用磷酸鋁替代。MF59是一種鯊烯在水中的微流化乳劑，己顯示它是安全的且增強血清抗體對多種疫苗的應答。MF59包含約5。/。鯊烯、0.5。/。吐溫80和約0.5。/。Span85。對佐劑MF59的描述參見WO90/I4837。可以按如Ott等人，"疫苗設計亞基和佐劑方法"(1995，Powell和Newman編，PlenumPress,NewYork,第277-296頁)；Singh等人(1998)Vaccine16,1822-1827;Ott等人(1995)Vaccine13,1557-1562;Valensi等人(1994)J.Imtmmol.l53,4029-39中所述的方法制備MF59。其它可以使用的載體-佐劑包括水包油型乳劑配方(有或沒有其它特異性的免疫刺激劑，如胞壁酰肽或細菌細胞壁成分)，例如，(a)如上所述的MF59(任18選地含有不同量的MTP-PE,雖然并不需要)；(b)SAF,其含有10%鯊烯、0.4%吐溫80、5。/。普盧蘭尼克(pluronic)嵌段聚合物L121以及thr-MDP(見下文)，微量流化成亞微米級乳劑或渦流振蕩產生粒徑較大的乳劑，和(c)RibiTM佐劑系統(RAS)，(RibiImmunochem，Hamilton,MT)，其含有2%鯊烯、0.2%吐溫80以及取自單磷酰脂A(MPL)、二霉菌酸海藻糖酯(TDM)、和細胞壁骨架(CWS)的一種或多種細菌細胞壁組分，較佳的是MPL+CWS(DetoxT");(3)皂素佐劑，例如可采用StimulonTM(CambridgeBioscience,Worcester,MA)或從其產生的顆粒，如ISCOM(免疫刺激性復合物)；(4)弗氏完全佐劑(CFA)和弗氏不完全佐劑(IFA);(5)細胞因子，如白介素(如IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12等)、干擾素(如Y干擾素)、巨噬細胞集落刺激因子(M-CFS)、腫瘤壞死因子(TNF)等；以及(6)作為免疫刺激劑來增強組合物效果的其它物質。如上所述，胞壁酰肽包括但不局限于，N-乙酰-胞壁酰-L-蘇氨酰-D-異谷氨酰胺(thr-MDP)、N-乙酰-去甲基胞壁酰-L-丙氨酰-D-異谷氨酰胺(nor-MDP)、N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-異谷氨酰氨酰基-L-丙氨酸-2-(r-2'-二棕櫚酰-s"-甘油-3-羥基磷酰氧)-乙胺(MTP-PE)等。免疫原性本文所用的術語"免疫原性的"指施用于脊椎動物(包括人)以后能引發產生抗體的物質。本發明的組合物通常使用免疫學有效量的成分(a)、(b)和(c)。即，組合物中包含成分(a)、(b)或(c)的量與任何存在的佐劑聯合時，能使對象產生特異性和充足的免疫應答，尤其是T或B淋巴細胞應答，從而當對象隨后與奈瑟球菌接觸時提供保護。"免疫學有效量"指以單劑或連續劑一部分給予個體的量對治療或預防疾病而引發抗體產生是有效的。該用量取決于多種因素(包括所治療個體的健康狀況)，本領域技術人員易確定之。可以指定非單劑劑量標識，以提供對用于本發明的各種抗原的特定指導。抗原的有效量可以是它的固有活性和純度的函數，且可由本領域技術人員通過常規試驗經驗地確定。本發明的免疫原性組合物通常包含免疫刺激量的奈瑟球菌抗原。免疫剌激量就是足以引發可測量的體液免疫或細胞免疫的量。例如，本發明的免疫原性組合物包含約1毫微克到1000微克的抗原或約10毫微克到約800微克的抗原。在一些優選實施例中，免疫原性組合物包含約0.1到500微克抗原。在一些優選實施例中，免疫原性組合物包含約1到350微克抗原。在一些優選實施例中，免疫原性組合物包含約25到250微克抗原。在優選實施例中，免疫原性組合物包含約IOO微克抗原。本領域技術人員可輕易配制包含任何所需量抗原的免疫原性組合物，所用量可由本領域技術人員通過常規試驗經驗地確定。可以以單位劑量形式方便地使用免疫原性組合物，而且這種免疫原性組合物可以用制藥領域熟知的任何方法制備，如Remington'sPharmaceuticalScknces(MackPub.Co.,Easton,PA,1680)中所述的方法。疫苗本發明還涉及包含任何上述免疫原性組合物的疫苗。本文所用的術語"疫苗"指能引發殺菌免疫應答的免疫原性組合物。較佳地，本發明的疫苗引發殺菌抗體應答。本發明的疫苗可以是預防性的(即預防感染)或治療性的(即在感染后治療疾病)。本發明還提供了引發至少針對NmB和NmC的免疫應答或免疫接種的方法，該方法包括施用免疫學有效量的本發明的免疫原性組合物。可以將其給予人，而且可以采用本發明技術人員已知的任何方式(包括腸胃外、直腸、腹腔內、肌內或皮下途徑)。直接送遞通常由注射(皮下、腹腔內、靜脈內或肌內)實現，或送遞到組織間隙。可將組合物給予病變處。其它施用方式包括包括口服藥和肺制劑、栓劑和透皮或經皮施藥(如WO98/20734)、針和基因槍或無針注射。劑量治療可以是單劑量方案或多劑量方案。本發明還提供用作藥物的組合物。還提供了將本發明的組合物用于制備治療或預防奈瑟球菌感染的藥物的用途。作為以蛋白質為基礎的疫苗的一種替代方案是，可以采用DNA疫苗接種[例如，Robi訓n禾口Torres(1997)SeminarsinImmunology9:271-283;Donnelly等人(1997)AnnuRev.Immunol15:617-648]。因此本發明組合物中的一種或多種蛋白質成分可以用編碼該蛋白質的核酸(宜為DNA)替代。20制備方法
技術領域：
：本發明還提供了制備本發明的組合物的制備方法，該方法包括混合成分(a)、(b)和(c)。綜述除非另有描述，本發明的實施將采用分子生物學、微生物學、重組DNA和免疫學的常規技術，這些均是本領域技術人員所知的。這些技術在下列文獻中有全面的描述例如，Sambrook《分子克隆實驗手冊》第2版(1989);《DNA克隆》第I和II巻(D.N.Glover編1985);《寡核苷酸的合成》(M丄Gait編，1984);《核酸的雜交》(B.D.Hames和S丄Higgins編.1984);《轉錄和翻譯》(B.D.Hames和S.J.Higgins編，1984);《動物細胞培養》(R丄Freshney編，1986);《固定化細胞和酶》(1RLPress,1986):B.Perbal，《分子克隆實用指南》(1984);《酶學方法》系列叢書(AcademicPress,Inc.),尤其是154和155巻；《哺乳動物細胞的基因轉移載體》(J.H.Miller和M.P.Calos編，1987,ColdSpringHarborLaboratory);Mayer和Walker編(1987)，《細胞和分子生物學的免疫化學方法》(AcademicPress,London);Scopes，(1987)《蛋白質的純化原理和實踐》第2版(Springer-Verlag，N.Y.)，以及《實驗免疫學手冊》I-IV巻(D.MWeir和C.C.Blackwell編，1986)。定義在本說明書中采用了核苷酸和氨基酸的標準縮寫。術語"包含"指"含有"和"由......構成"，例如"包含"X的組合物可以完全由X構成，或者可以含有X之外的物質，例如X+Y。兩個序列之間的相同性宜用Smith-Waterman同源性搜尋算法確定，如在MPSRCH程序(QxfordMolecular)中，采用參數"缺口罰分(gappenalty)"為12,"缺口延伸罰分(gapextensionpenalty)"為1進行缺口仿射搜索。附圖簡述在所有圖中，A組是第1次注射后28天的數據，B組是第2次注射后18天的數據。圖1顯示了用ELISA測定的IgG抗體對(lA)NmB0MV和(lB)NmC莢膜滴定度的幾何平均數(KU/ml)。*表明(1A)第5組對第2和3組的P《0.03，(1B)第5組對第1和4組的P《0.02。圖2顯示了血清殺菌抗體對(2A)NmB和(2B)NmC的滴定度(l/滴定度的幾何平均數)。*表明第5組對第2組的P《0.003。本發明實施方式用以下說明本發明的實施例進一步描述本發明。以下實施例僅是用于說明本發明的，對本發明的范圍沒有任何限制。本領域技術人員應該可以識別在本發明精神和范圍內的改變。實施例1:ELISA結果豚鼠組(1!=15只)接受下表l所示的疫苗:表l組成分量/劑量第l組NraC偶聯物/明礬10pg/lmg第2組NmB/明砜25ng/lmg第3組NmC多糖/NmB/明礬10Hg/25ng/lrag第4組NmC偶聯物/NmB/明礬10Hg/25ng/lmg第5組NmC偶聯物/NmB/MF5910ng/25嗎/0.5ml第6組(r^5)包括僅接受明礬的對照動物將80只豚鼠隨機地分成以上各組，并接受六種疫苗組合物中的一種。對表2中的數據，每只動物接受2次注射，間隔28天。在每次注射之前和第2次注射后18天采集血清樣品。每只動物接受2次間隔為6周的免疫接種，獲得圖1A和圖1B的數據。每個劑量包括2次0.25mli.m.注射。在每次注射之前和第二次注射后14或18天，采集血清樣品。用ELISA分析血清樣品的針對NmC的IgG抗莢膜抗體濃度(表2和圖1A)和針對NmB的IgG抗外膜小泡(OMV)抗體的濃度(圖1B)。ELISA的數據是由各動物血清的典型分析產生的(表2)，并以多次分析的平均值表示(圖1A和1B)。因此，表2中的匯總數據以幾何平均值表示。22在ELISA中，將MCPS-ADH(NmC多糖-己二酸二酰肼)偶聯物或0MV成分包被在聚苯乙烯微量滴定板上4'C過夜，lp/ml,100pl/孔。在各包被過的平板上，用含有75nM硫代氰酸銨緩沖液2倍連續稀釋100nl/孔的參考標準品(g卩，合并的豚鼠血清)、陽性對照、陰性對照和血清樣品，并在室溫培育2小時。在這些孔中加入與過氧化物酶偶聯的兔-抗豚鼠IgG抗體aOOpl/孔)。2小時后，加入比色底物3，3'，5，5'-四甲基聯苯胺(TMB)(100pl/孔)，并顯色15分鐘。用參考標準(指定值為100ELISA單位/ml)，根據標準曲線讀取對照和樣品中存在的對MCPS和OMV的抗體水平。表2和圖1A和1B列出了結果。表2和圖1A和1B中所概括的結果表明，如分別用NmB和NmCIgG抗體滴定度測定所示聯合疫苗有免疫原性。表2:IgGNmC抗體應答(GMT)SCN分析疫苗佐劑第1次注射后第2次注射后NmC偶聯物明礬20.3155MenB明礬<1<1NmC多糖+MenB明礬<11.5Nmc偶聯物+MenB明礬9.571NraC偶聯物+MenBMF5915.2426無明礬<1<1圖1A顯示包含NmB的疫苗組合物引發特異性抗-腦膜炎球菌B抗體應答。圖1B顯示包含NmC的疫苗組合物引發特異性抗腦膜炎球菌C的抗體應答。特別地當存在MF59佐劑(第5組)時，由NmC偶聯物和NmB的組合所引發的抗體應答，比單NmC偶聯物(第1組)或存在明礬下的NmC偶聯物與NmB組合(第4組)所引發的應答明顯強許多。當存在佐劑MF59時，聯合疫苗的抗體滴定度約增加6倍。實施例2:殺菌滴定度測試血清樣品對MenC菌株60E和MenB菌株44/76的補體-介導的殺菌滴定度。用各組混合的血清進行殺菌滴定度試驗。用人補體產生殺菌數據。將試驗成分(即，緩沖液、抗體、補體和細菌)加到帶有蓋子的無菌96孔組織培養板(Nimcft167008)。在整個試驗中將這些平板保持于室溫。在每個孔中依次加入50^1Gey緩沖液(Gibco)(含有1%放射免疫分析級BSA(Sig隨))、25pl稀釋的測試抗體、25^1細菌(用Gey緩沖液/1XBSA以1:8000稀釋)。對照孔包括l)僅Gey緩沖液/l^BSA和細菌(用于確定在稀釋液中生物是否存活)..2)0時對照，含有75^1緩沖液、25^1熱滅活(56'C，30分鐘)人補體和25^1細菌；3)毒性對照，測試與緩沖液和細菌一起的20%和40%補體，以驗證補體源對測試菌株是無毒的。還用熱滅活的補體測試所有抗體樣品(用分析的最高濃度)，顯示存在抗體時集落形成單位(cfu)的減少是補體依賴性的。在加入所有試劑后，從各對照孔取22p1,通過讓樣品從平板的頂部流到底部，將其接種到Mueller-Hinton瓊脂平板上，來測定0分鐘時孔中的cfu。然后覆蓋此微量滴定板，用石蠟膜密封，并在37'C、4%0)2培養箱中緩慢地旋轉1小時。然后取出平板，將22^1各孔的樣品接種到Mueller-Hinton瓊脂上。37°C、4%。02培育這些培養板約18小時。計數集落數并確定各測試孔的％存活率％存活率-([第60分鐘時樣品孔的cfu]/[第0分鐘時熱滅活補體對照孔中的cfu]XIOO。記錄的殺菌滴定度是存活率為50%的那些。表3列出了單次試驗的結果。圖2A和2B也列出了結果，其中圖2B表示多次試驗的平均滴定度。表3總結的結果表明，聯合疫苗引發高滴定度的對NniB和NmC的血清殺菌抗體。用MF59作為載體的聯合疫苗的殺菌NmC抗體的滴定度略高，但使用MF59對殺菌NmB滴定度基本沒影響。有趣的是，聯合疫苗的NmB殺菌滴定度比單用NmB疫苗髙2到5倍。圖2A表明，由包含NmB的疫苗組合物引發的針對腦膜炎球菌B的抗體是殺菌的。圖2B表明，由包含NmC偶聯物的疫苗組合物引發的針對腦膜炎球菌C的抗體也是殺菌的。表3NmC(l/滴定度)NraB(l/滴定度)疫苗組注射前第l次注射后第2次注射后注射前第l次注射后第2次注射后NmC偶聯物+明礬<580>3375<5<5<5NraB+明fl<5<515<51580024<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>實施例3:明礬和MF59佐劑的比較如實施例1和2那樣，將如上圖1A和圖1B所述的動物血清進行比較，并測試在明礬或MF59佐劑中的NmB/NmC偶聯物產生的MenC和MenB抗體應答。表4列出了結果。表4:接受NmB0MV+NmC偶聯物和A1(0H)3或MF59佐劑的動物的抗體應答比例<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>這些數據表明，在包含MF59佐劑的疫苗中針對腦膜炎球菌C的抗體應答約高6倍。實施例4:聯合疫苗與單疫苗產生的應答的比較如實施例l和2那樣，比較如上圖1A和1B所述的動物的血清，并將NmB/NmC偶聯物產生的MenC和MenB抗體應答與明礬中的NmB單疫苗或NmC偶聯物單疫苗產生的抗體應答相比較。表5列出了結果表5:R接受聯合疫苗/Al(OH)3的動物與單疫苗/Al(OH)3的動物抗體應答的比例試驗GMT聯合GMT，比例第1次注射后28天第2次注射后18天NmCIgG0.50.5殺菌作用0.2*0.7*NmBIgG1.31.2殺菌作用1.62.9***僅測試混合血清氺氺p《0.05這些數據表明，與各單疫苗(NmB或NmC偶聯物)引發的應答相比，對NraB/NmC偶聯物疫苗各成分的抗體應答沒有明顯差異。實施例5:其它抗原的添加添加針對其它致病生物的抗原(如NspA、HBsAg)，進一步優化NmB/NmC聯合。觀察到針對NmB/NmC和針對其它抗原的良好免疫應答。實施例6:NmB和NmC抗原混合物將菌株2996MenB蛋白質(919，(如W099/57280圖23及其SEQID3069-3074)、'287'(如W099/57280的圖21及其SEQID3103-3108)和'0RF1'(如W099/24578的實施例77;和W099/55873)的三元混合物用于免疫接種小鼠。添加NmC偶聯物重復該試驗。將氫氧化鋁用作佐劑。在殺菌試驗中測定的針對同源性菌株和異源MenB菌株的滴定度如下:2996BZ133BZ2321000MC58NGH38三元混合物204820484<4644+NraC2048〉3200041281024128可以理解本發明僅以示例的方式進行了描述，在本發明的范圍和精神內還可進行許多改變。2權利要求1.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)WO99/57289中公開的蛋白質或其免疫原性片段。2.如權利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含一種或多種選自于由W099/57289中所公開的序列號如下的一組氨基酸序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>,1942,1944，1946,簡，1950，1952,1954，1956，1958,簡，1962，1964，1966,1968,1970,1972,1974，1976,1978，1980'1982，1984,1986，1988,1990,1992，1994，1996,1998,2000，2002,2004,2006,2008,2010,2012，2014,2016，2018,2020,2022，2024，2026,2028,2030,2032,2034,2036,2038，2040,2042，2044,2046，2048,2050,2052，2054，2056,2058,2060，2062,2064,2066，2068,2070,2072，2074，2076，2078,2080,2082，2084,2086,2088,2090,2092,2094,2096,2098,2100,2102,2104,2106，2108，2110,2112,2114，2116，2118,2120,2122,2124，2126，2128，2130，2132,2134,2136,2138,2140,2142,2144,2146,2148，2150,2152,2154,2156，2158，2160，2162，2164,2166，2168,2170,2172,2174，2176，2178,2180，2182,2184，2186,2188,21卯，2192,2194，2196,2198，2200,2202,2204,2206,2208，2210，2212,2214,2216,2218，2220，2222，2224,2226,2228,2230，2232,2234,2236,2238,2240，2242,2244,2246，2248，2250,2252，2254，2256，2258,2260，2262,2264，2266,2268,2270，2272，2274,2276，2278，2280，2282，2284,2286,2288,2290,2292，2294,2296,2298，2300，2302，2304,2306,2308，2310,2312,2314,2316,2318，2320，2322，2324，2326,2328,2330,2332，2334,2336,2338，2340,2342,2344,2346,2348,2350,2352,2354,2356,2358,2360，2362，2364,2366,2368,2370,2372，2374,2376，2378,2380，2382，2384，2386，2388'2390,2392，2394,2396，2398,2400,2402,2404,2406，2408,2410,2412,2414,2416，2418,2420，2422，2424，2426，2428,2430,2432,2434,2436，2438,2440,2442,2444，2446,2448,2450，2452，2454，2456，2458,2460,2462,2464,2466，2468,2470，2472，2474，2476，2478,2480,2482,2484,2486,2488,2490,2492'2494,2496，2498,2500，2502，2504,2506,2508,2510,2512,2514,2516，2518,2520，2522,2524,2526，2528,2530，2532,2534，2536,2538,2540,2542,2544,2546,2548,2550,2552,2554,2556,2558,2560,2562,2564，2566,2568,2570，2572，2574，2576，2578，2580,2582,2584,2586,2588,2590,2592'2594，2596,2598,2600:2602，2604,2606,2608，2610,2612，2614,2616,2618,2620,2622'2624，2626,2628，2630，2632,2634，2636，2638,2640,2642,2644,2646，2648,2650,2652，2654,2656,2658,2660，2662,2664，2666，2668，2670,2672，2674,2676，2678，2680，2682,2684,2686,2688，2690:2692,2694,2696,2698,2700，2702,2704，2706,2708，2710,2712，2714,2716，2718，2720,2722，2724,2726，2728，2730,2732，2734,2736,2738，2740，2742，2744，2746,2748,2750:2752,2754,2756,2758，2760,2762,2764,2766,2768,2770,2772，2774,2776，2778,2780,2782,2784,2786，2788,2790,2792,2794,2796,2798,2800,2802,2804,2806,2808,2810:2812，2814，2816,2818,2820，2822,2824，2826，2828，2830，2832,2834，2836，2838,2840:2842，2844,2846,2848，2850,2852,2854,2856,2858，2860,2862,2864,2866，2868,2870:2872,2874,2876,2878,2880,2882,2884,2886,2888，2890,2892,2894,2896,2898,2900,(2902,2卯4，2卯6,2908,2910,2912，2914，2916，2918,2920,2922,2924，2926,2928,2930,2932,2934，2936,2938,2940,2942,2944，2946，2948,2950,2952，2954，2956,2958,2960，2962,2964,2%6,2968,2970，2972,2974，2976，2978,2980,2982,2984,2986,2988,29卯,2992，2994，2996,2998,3000，3002,3004,3006，3008,3010,3012，3014,3016,3018和3020。3.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)W099/36544中公開的蛋白質或其免疫原性片段。4.如權利要求3所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含一種或多種選自以下的氨基酸序列如W099/36544所述的SEQID2,4,6，8,10,12,14,16，18，20，22，24,26,28,30,32,34，36,38,40,42,44，46,48,50，52,54，56,58,60,62,64,66，68,70,72,74，76,78,80，82,84,86,88,和卯。5.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)W099/24578中公開的蛋白質或其免疫原性片段。6.如權利要求5所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含一種或多種選自以下的氨基酸序列如W099/24578所述的SEQID2,4,6，8，10，12,14，16,18，20,22,24,26，28,30,32，34，36,38，40,42,44,46，48,50,52,54,56,58，60，62,64，66,68,70，72，74,76,78,80,82,84,86,88,90，92，94,96,98，100,102,104,106，108,110,m,114，116,118，120,122,124,126，128，B0，132,134,136,138，140，142,144，146,148,150,152,154,156,158,160,162,164,166,168,170,172,174,176,178,180,182,184,186,188,l卯，192,194，196,198,200，202，204,206，208，210,212，214,216，218,220，222，224,226,228，230，232，234，236，238，240,242,244，246,248，250，252,254，256,258，260,262,264:266,268，270,272，274，276,278,280,282,284,286,288,290,292，294，296,298,300,302,304,306,308,310，312，314,316,318，320,322，324，326,328,330,332,334,336,338,340,342,344,346,348,350,352，354,356,358,360,362,364，366,368，370,372,374，376,378，380，382,384,386,388，390,392,394,396,398，00，402，404,406,408，410,412,414,416,418，420,422,424，426,428,430，432，434，436，438，440,442，444，446，448,450，452,454,456,458，460,462,464,466,468,470,472，474，476,478,480，482，484,486,488,490，492,494，496,498,500,502,504,506,508,510，512,514,516,518，520,522,524，526,528,530'532,534，536,538,540,542,544，546，548，550,552,554，556,558，560，562,564，566，568，570，572,574,576，578，580，582，584,586，588,590,592,594,596,598，600,602,604,606,608,610,612,614,616,618,620,622,624,626,628,630,632，634，636,638,640,642,644，646，648，650,，652，654，656,658，660，662，664,666,668，670，672，674,676，678,680,682，684，686，688'690，692,694,696，698，700，702,704,706，708，710，712,714，716,718，720,722,724,726,728,730，732,734，736，738，740,742,744，746，748,750,752,754，756,758,760,762，764，766，768,770,772,774,776，778，780,782,784，786,788,790，792，794，796,798，800,802,804,806,808，810,812,814,816,818，820,822,824,826，828,830'832，834，836,838，840,842，844,846，848，850,852，854,856，858,歐862,864，866，868，870,872,874,876,878,880,882'884,886,888,890,和892。7.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于,所述的組合物還包含(c)W097/28273中公開的蛋白質或其免疫原性片段。8.如權利要求7所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含W097/28273的圖4或圖13所公開的蛋白質。9.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)W096/29412中公開的蛋白質或其免疫原性片段。10.如權利要求9所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含選自W096/29412中公開的SEQID1-8的氨基酸序列。11.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)W095/03413中公開的蛋白質或其免疫原性片段。12.如權利要求11所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含選自WO95/03413中公開的SEQID1-23的氨基酸序列。13.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)W099/31132中公開的蛋白質或其免疫原性片段。14.如權利要求13所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含W099/31132中公開的SEQID2的氨基酸序列。15.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗腦膜炎奈瑟球菌血清群A的保護性抗原。16.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗腦膜炎奈瑟球菌血清群W的保護性抗原。17.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗腦膜炎奈瑟球菌血清群Y的保護性抗原。18.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗流感嗜血菌的保護性抗原。19.一種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗肺炎球菌的保護性抗原。20.如權利要求15、16、17、18或19所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)是多糖抗原。21.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗白喉的保護性抗原。22.如權利要求21所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)是白喉類毒素。23.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗破傷風的保護性抗原。24.如權利要求23所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)是破傷風毒素。25.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗百日咳的保護性抗原。26.如權利要求25所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)包含百日咳全毒素(PT)和絲狀凝血素(FHA)，還可任選地含有百日咳桿菌粘附素和/或凝集原2和3。27.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗乙型肝炎病毒的保護性抗原。28.如權利要求27所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)是HBV表面抗原和/或HBV核心抗原。29.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗幽門螺旋桿菌的保護性抗原。30.如權利要求29所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的成分(c)是CagA、VacA、NAP、HopX、HopY和/或尿激酶。31.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB外膜蛋白的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含(c)抗腦膜炎奈瑟球菌血清群A的保護性抗原、抗腦膜炎奈瑟球菌血清群W的保護性抗原、抗腦膜炎奈瑟球菌血清群Y的保護性抗原、抗流感嗜血菌的保護性抗原、抗肺炎球菌的保護性抗原、抗白喉的保護性抗原、抗破傷風的保護性抗原、抗百日咳的保護性抗原、抗乙型肝炎病毒的保護性抗原、和/或抗幽門螺旋桿菌的保護性抗原。32.如以上任一權利要求所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的NmB外膜蛋白宜以蛋白脂質體小泡存在。33.—種包含(a)NmC寡糖和(b)NmB蛋白919、287和/或0RF1的免疫原性組合物。34.如以上任一權利要求所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的NmC寡糖偶聯于載休。35.如權利要求34所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的載體是蛋白質。36.如權利要求35所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的載體是C腿97。37.如以上任一權利要求所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述的組合物還包含選自氫氧化鋁或MF59的載體。38.—種包含以上任一權利要求所述的免疫原性組合物的疫苗。全文摘要本申請公開了一種免疫原性組合物，該免疫原性組合物包含(a)NmC寡糖；以及.和(b)NmB外膜蛋白；同時，該組合物還進一步包含(c)WO99/57289中所公開的蛋白質或其免疫原性片段。另外，本申請的免疫原性組合物可與其它奈瑟球菌蛋白和/或針對其它致病生物(如流感嗜血菌、DTP、HBV等)的保護性抗原進行組合。文檔編號A61P31/04GK101549154SQ20091000811公開日2009年10月7日申請日期2000年11月29日優先權日1999年11月29日發明者M·M·朱利亞尼,M·皮扎,R·拉普奧利申請人:啟龍股份公司