專利名稱：：使用純化的逆向熱敏聚合物的內鏡粘膜切除的制作方法使用純化的逆向熱敏聚合物的內鏡粘膜切除相關申請本申請要求2007年11月29日提交的美國臨時專利申請序列號60/991，049的優先權。
背景技術：
：內鏡粘膜切除(EMR)在治療早期胃腸癌中公認為是一種有療效的治療方式。迄今為止，與鹽水一起粘膜下注射用于在EMR過程中使并發癥程度最低。但是，在鹽水注射后組織隆凸的持續時間較短，且需要以較大的損害重復注射以進行EMR。雖然在EMR中使用了具有高粘度的溶液，例如羥丙基甲基纖維素(HPMC)，但是解決該問題的適當方案仍難以確定。發明概述本發明的一方面涉及包含純化的逆向熱敏聚合物的組合物在胃腸粘膜切除的內鏡程序中的用途。本發明的另一方面涉及一種胃腸粘膜切除的方法，所述方法包括粘膜下給予哺乳動物胃腸粘膜的區域有效量的包含純化的逆向熱敏聚合物的組合物；和手術切除胃腸粘膜的所述區域。本發明的又一方面涉及一種用于胃腸內鏡粘膜切除的試劑盒，所述試劑盒包括包含純化的逆向熱敏聚合物的組合物；注射器；及其使用說明。附圖簡述圖1圖示作為溫度的函數的LeGooEndo(純化的泊洛沙姆237的20_25%含水溶液)和未經純化的泊洛沙姆407的20%含水溶液的粘度。圖2圖示作為溫度的函數的LeGooEndo(純化的泊洛沙姆237的20_25%含水溶液)和未經純化的泊洛沙姆407的20%含水溶液的粘度。發明詳述內鏡粘膜切除術(EMR)代表在胃腸道的微創手術中的主要進步。EMR基于內鏡檢查法提供目測和接近粘膜的構思，粘膜是胃腸道的最內面的襯膜，是從食道癌至直腸癌的大多數胃腸癌起源的位點。該方法將內鏡手術的治療功能與切除的組織的病理學檢查的診斷功能相結合。EMR首先在日本流行，日本的內鏡檢查者面臨著非常高發病率的胃癌。這點區別于大多數西方國家，包括美國，這些國家中結腸癌為更常見的疾病。大多數結腸癌由粘膜息肉引起，粘膜息肉突出至結腸腔中，使得在使用金屬環來抓住息肉底部的內鏡檢查法中較容易被除去。隨后用電流切除息肉，同時產生切割作用和燒灼。與此相反，在胃中大多數癌癥不是起源于息肉，而是起源于僅輕微提高、持平、或輕微降低的粘膜發育異常損害。使用簡單的金屬絲勒除器非常難以抓住這種損害。日本內鏡檢查者致力于開發多種方法來使發病的粘膜區域隆起，使得勒除可能進行。這些技術的大多數使用流體注射入粘膜下層——緊緊位于粘膜之下的胃腸道層，以隆起粘膜并使其能被勒除器抓住。遺憾的是，迄今為止使用的流體對于EMR不是最優化的，例如，因為這些流體通常不夠粘稠以提供足夠持久、隆凸的區域。如果可得到能提供最優化的持久的、隆凸的粘膜表面的流體，EMR也可有效用于食道，食道的早期癌癥和惡變前的發育異常也往往是非息肉狀的和扁平的，且EMR也可有效用于結腸，EMR在結腸中可用于幫助除去小的和大的扁平或固著的息肉。因為上述啟示可考慮未經純化的逆向熱敏聚合物，但是，遺憾的是，這些聚合物在體溫下凝膠化，由于導管在結腸或胃內展開后很快升溫至體溫，因此這些聚合物在用于注射的導管中凝膠化。值得注意的，顯示快速可逆的液體至凝膠的轉變的純化的逆向熱敏聚合物(LeGoo-endo)已顯示在人內鏡胃腸粘膜切除(EMR)的體外和體內豬模式(porcinemodel)中用作粘膜下注射溶液是有效的。LeGoo-endod純化的性質導致快速可逆液體至凝膠的轉變，使其在室溫下為液體，且僅在EMR位點從導管涌出時凝膠化。用LeGoo-endo得到的粘膜隆凸比用其它常用物質得到的粘膜隆凸更持久。此外，用LeGoo-endo得到的粘膜隆凸的大小和稠度沒有顯著的變化。LeGoo-endo在體內結腸EMR中表現良好。這些結果表明，使用LeGoo-endo或其它純化的逆向熱敏聚合物可提高人EMR程序的安全性和效力。在某些實施方案中，由純化的逆向熱敏聚合物體內形成的皰(bleb)(即，提供粘膜隆凸的凝膠)保持約30-180分鐘、約45-150分鐘、約60-120分鐘、約75-100分鐘、約90分鐘、約80分鐘、約70分鐘、約60分鐘、約50分鐘、約40分鐘或約30分鐘。為了得到前述結果，需要開發一種將在體溫下轉變為凝膠的純化的逆向熱敏聚合物溶液通過導管注射至結腸或胃的方法。在所克服的困難中的情況是由于導管停留在體內時快速達到體溫，純化的逆向熱敏聚合物在達到EMR所需位點之前在導管內凝膠化。例如，由于在導管中形成凝膠，通過推與導管連接的注射器的柱塞的手動注射不可行，在低于1200psi的壓力下使用機械注射器輔助的注射也不可行；此外，排除高于1200psi的壓力，這是由于這樣的高壓足以破裂任何常規導管。換言之，如果純化的逆向熱敏聚合物在導管中凝膠化(即，在達到EMR位點之前凝膠化)，且常規導管可承受的壓力不足以將流體形式的純化的逆向熱敏聚合物遞送至EMR位點，則該方法不可行。值得注意的，使用包含連接至填充有純化的逆向熱敏聚合物的注射器的高壓針導管的系統可解決遞送問題，其中，所述高壓針導管包含在通過手動(例如，螺桿)、電氣或加壓氣體機構在注射器的柱塞上產生壓力的給藥裝置(例如，注射器泵)中。使用所述系統可使用和承受的較高壓力具有兩種功能(a)將粘稠的流體推送過導管；和(b)允許足夠快速的注射，其使得從室溫注射器進入導管的純化的逆向熱敏聚合物持續調節導管的溫度，使得聚合物在停留時間期間在導管中不凝膠化，且僅在從導管中出來以后凝膠化，并導致與EMR位點直接接觸。總之，LeGoo-Endo(在圖中表示為“PS137-25”)為純化的泊洛沙姆237的含水溶液，其在體溫下的粘度為未經純化的20%泊洛沙姆407的3.9倍，使得形成能經受得住彈性粘膜所施加壓力的持久的皰；此外，LeGoo-Endo于25°C和室溫下的粘度分別低于未經純化的20%泊洛沙姆407在這些溫度下的粘度的十分之一，從而防止在LeGoo-Endo給予的過程中在導管內形成凝膠，這是部分地由于當新的LeGoo-Endo在加壓下進入導管時連續冷卻導管。逆向熱敏聚合物通常，可將用于本發明方法的、在體溫下或大致體溫下變為凝膠的逆向熱敏聚合物以液體或軟凝膠形式注射到患者體內。一旦注射材料達到體溫，其經歷從液體或軟凝膠到硬凝膠的轉變。用于本發明方法的逆向熱敏聚合物可包括具有逆熱凝膠化特性的嵌段共聚物。通常，根據本發明，也可使用于體溫下以凝膠形式存在且在低于體溫下以液體形式存在的生物相容的、生物可降解的嵌段共聚物。同樣，所述逆向熱敏聚合物可包括治療劑，例如抗血管生成劑、激素、麻醉劑、抗微生物劑(抗菌劑、抗真菌劑、抗病毒劑)、抗炎劑、診斷試劑或傷口愈合試劑。類似地，可將低濃度的染料(例如亞甲基藍)或填料加入到逆向熱敏聚合物中。逆向熱敏聚合物的分子量可在1，000-50,000之間，或在5，000-35,000之間。通常所述聚合物在含水溶液中。例如，典型的含水溶液包含約5%-約30%聚合物，或約10%-約25%聚合物。合適的逆向熱敏聚合物(例如泊洛沙姆或泊洛沙胺)的分子量可例如在5，000-25,000之間，或在7，000-20,000之間。給予哺乳動物的逆向熱敏聚合物制劑的pH通常為約6.0至約7.8，該pH為用于注射進入哺乳動物體內的合適的PH水平。可通過任何合適的酸或堿，例如鹽酸或氫氧化鈉來調節PH水平。泊洛沙姆(Pluronic)值得注意的，Pluronic聚合物具有獨特的表面活性劑性能和極低的毒性和免疫原性應答。這些產品具有低的急性口腔和表皮毒性，以及導致刺激或致敏的低潛能，且全身性慢性和亞慢性毒性低。實際上，Pluronic:聚合物為經FDA批準可直接用于醫學應用和作為食品添加劑的少量表面活性劑之一(BASF(1990)Pluronic&TetronicSurfactants,BASFCo.，MountOlive,N.J.)最近，已發現幾種Pluronic聚合物增強藥物的治療效果和由腺病毒介導的基因轉移效力。(MarchKL,MadisonJΕ,TrapnellBC."Pharmacokineticsofadenoviralvector-mediatedgenedeliverytovascularsmoothmusclecells!modulationbypoloxamer407andimplicationforcardiovasculargenetherapy(腺病毒媒介介導的向脈管平滑肌細胞的基因遞送的藥代動力學泊洛沙姆407的調節和心血管基因治療的影響)”HumGeneTherapy1995,6,41-53)。泊洛沙姆(或Pluronic)，作為非離子表面活性劑，廣泛用于各種工業應用。NonionicSurfactants:polyoxyalkyleneblockcopolymers(非離子表面活性劑聚氧化烯嵌段共聚物)，第60卷。NaceVM,DekkerM(編輯)，紐約，1996，第280頁。其表面活性劑特性已經用于去垢、分散、穩定、起泡和乳化作用。CabanaA，AbdellatifAK,JuhaszJ."Studyofthegelationprocessofpolyethyleneoxide,polypropyleneoxide-polyethyleneoxidecopolymer(poloxamer407)aqueoussolutions(聚氧化乙烯、聚氧化丙烯-聚氧化乙烯共聚物(泊洛沙姆407)含水溶液的凝膠化過程的研究)”JournalofColloidandInterfaceScience。1997;190:307-312。某些泊洛沙胺(例如，泊洛沙胺1307和1107)也顯示逆向的感溫性。已經考慮將一些聚合物用于多種心血管應用以及鐮刀形紅細胞貧血病應用。MaynardC,SwensonR,ParisJA,MartinJS,HallstromAP,CerqueiraMD,WeaverWD.Randomized,controlledtrialofRheothRx(poloxamer188)inpatientswithsuspectedacutemyocardialinfarctionBWilIilSWB#ΦRheothRx(泊洛沙姆188)的受控試驗)·RheothRxinMyocardialInfarctionStudyGroup.AmHeartJ.1998年5月；135(5Pt1):797_804；0'KeefeJH,GrinesCL,DeffoodMA,SchaerGL,BrowneK,MagorienRD,KalbfleischJM,FletcherWOJr,BatemanTM,GibbonsRJ.Poloxamer—188asanadjuncttoprimarypercutaneoustransluminalcoronaryangioplastyforacutemyocardialinfarction(泊洛沙姆一188作為急性心肌梗塞的初級經皮穿刺冠狀動脈成形術).AmJCardiol.1996Oct1；78(7)747-750；禾口OrringerEP,CasellaJF,AtagaKI,KoshyM,Adams-GravesP,Luchtman-JonesL,WunΤ,WatanabeΜ,ShaferF,KutlarA,AbboudΜ,SteinbergΜ,AdlerB,SwerdlowP,TerreginoC,SaccenteS,FilesB,BallasS,BrownR,Wοjtowicζ-PragaS,GrindelJM.Purifiedpoloxamer188fortreatmentofacutevasoocclusivecrisisofsicklecelldisease:Arandomizedcontrolledtrial(用于治療鐮刀形紅細胞疾病的急性血管閉合危象的純化的泊洛沙姆188隨機受控試驗)。JAMA.2001年11月7日；286(17)2099-2106。重要的是，這類聚合物的多種成員，例如，泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、泊洛沙姆338、泊洛沙胺1107和1307，都在生理學溫度范圍內顯示逆向感溫性。QiuY，ParkK.Environment-sensitivehydrogelsfordrugdelivery(用于藥物遞送的環境-敏感性水凝膠)。AdvDrugDelivRev.，2001年12月31日；53(3):321_339；和RonES,BrombergLETemperature-responsivegelsandthermogellingpolymermatricesforproteinandpeptidedelivery(用于蛋白質和肽遞送的溫度-應答性凝膠和熱凝膠化聚合物基質)AdvDrugDelivRev.1998年5月4日；31(3):197_221。換言之，這些聚合物為在低溫下可溶于含水溶液，但在較高溫度下凝膠化的類別的成員。泊洛沙姆407為生物相容的聚氧化丙烯_聚氧化乙烯嵌段共聚物，其平均分子量為約12，500,且聚氧化丙烯部分為約30%；泊洛沙姆188的平均分子量為約8400，且聚氧化丙烯部分為約20%；泊洛沙姆338的平均分子量為約14，600，且聚氧化丙烯部分為約20%；泊洛沙胺1，107的平均分子量為約14，000，泊洛沙胺1307的平均分子量為約18，000。這種類型的聚合物也稱為可逆凝膠化的，因為其粘度隨著溫度的升高和下降而分別增加和降低。這種可逆凝膠化系統可用于以下情況需要處理處于流體狀態、但優選在凝膠化的或更粘稠狀態下實施的材料。如上所述，某些聚(氧化乙烯)/聚(氧化丙烯)嵌段共聚物具有這些特性；它們是市售可得的，例如Pluronic,泊洛沙姆和Tetronic泊洛沙胺(BASF，Ludwigshafen,德國)，且一般分別稱為泊洛沙姆和泊洛沙胺。參見美國專利4，188，373,4,478，822和4，474，751(這些專利均通過參考引入本文)。泊洛沙姆的平均分子量在約1，000至大于16，000道爾頓范圍內。由于泊洛沙姆為連續的系列反應的產物，單個泊洛沙姆分子的分子量在平均分子量周圍形成統計學分布。此外，市售可得的泊洛沙姆包含大量聚(氧乙烯)均聚物和聚(氧化乙烯)/聚(氧化丙烯)二嵌段聚合物。當泊洛沙姆組分嵌段的分子量增加時，這些副產物的相對量也增加。根據制造商，這些副產物可構成聚合物總質量的約15-約50%。逆向熱敏聚合物的純化可利用用于水溶性聚合物的分級分離的方法純化逆向熱敏聚合物，包括下列步驟在水中溶解已知量的聚合物，向聚合物溶液中加入可溶性萃取鹽，保持溶液在恒定的最佳溫度下一段時間以足夠使兩個不同的相顯現出來，并物理分離這兩相。此外，可將包含優選分子量的聚合物部分的相用水稀釋至初始的體積，可加入萃取鹽，以獲得初始的濃度，且按需重復分離過程，直至可回收比初始物質具有更窄的分子量分布和最佳物理特性的聚合物。在某些實施方案中，純化的泊洛沙姆或泊洛沙胺具有約1.5-約1.0的多分散性指數。在某些實施方案中，純化的泊洛沙姆或泊洛沙胺具有約1.2-約1.0的多分散性指數。上述過程由形成包含在水中的聚合物和適當鹽的含水兩相系統組成。在這種系統中，可向單相聚合物_水系統中加入可溶性鹽以誘導相分離而產生高鹽、低聚合物的底層相，和低鹽、高聚合物的上層相。較低分子量的聚合物優先分配進入高鹽、低聚合物的底層相。可利用該方法分級的聚合物包括聚醚、二醇類例如聚(乙二醇)和聚(氧化乙烯)、聚氧化烯嵌段共聚物，例如泊洛沙姆、泊洛沙胺、和聚氧化丙烯/聚氧化丁烯共聚物，和其它多元醇，例如聚乙烯醇。這些聚合物的平均分子量可在約800至大于100，000道爾頓范圍內。參見美國專利6，761，824(通過參考引入本文)。上述純化方法固有地利用了泊洛沙姆分子、聚(氧化乙烯)均聚物和聚(氧化乙烯)/聚(氧化丙烯)二嵌段副產物的大小和極性以及溶解度的差異。除去一般包括較低分子量級分和副產物的泊洛沙姆的極性部分，以容許回收泊洛沙姆的較高分子量級分。通過該方法回收的較大分子量的純化的泊洛沙姆(純化的逆向熱敏聚合物的實例)具有基本上不同于初始物質或市售可得的泊洛沙姆的物理特性，包括較高的平均分子量、較低的多分散性以及在水溶液中較高的粘度。其它純化方法可用于達到所需的結果。例如，WO92/16484(該專利通過參考引入本文)公開了使用凝膠滲透色譜法分離顯示有益生物效應而不產生潛在有害副作用的泊洛沙姆188的級分。這樣得到的共聚物具有1.07或更低的多分散性指數，且基本上是飽和的。已顯示潛在有害副作用與聚合物的低分子量、不飽和部分相關，而醫藥上有益的效果存在于均一的較高分子量物質中。通過純化在合成共聚物期間的聚氧化丙烯中心嵌段或共聚物產物本身來獲得其它類似的改良的共聚物(例如，美國專利5，523，492和美國專利5，696，298，這些專利均通過參考引入本文)。進一步地，如在美國專利5，567，859(該專利通過參考引入本文)中所公開的，超臨界流體萃取技術已被用于分級分離聚氧化烯嵌段共聚物。獲得由具有低于1.17的多分散性的相當均一的聚氧化烯嵌段共聚物組成的純化的餾分。根據該方法，在壓力保持在2200磅/平方英寸(psi)且溫度為40°C下的二氧化碳流中除去較低分子量餾分。此外，美國專利5，800，711(該專利通過參考弓|入本文)公開了一種通過利用鹽萃取和液相分離技術分批除去低分子量種類而用于分級分離聚氧化烯嵌段共聚物的方法。通過該方法分級分離泊洛沙姆407和泊洛沙姆188。在每一種情況下，獲得與初始物質相比具有較高平均分子量和較低多分散性指數的共聚物餾分。但是，多分散性指數的變化并不大，且通過凝膠滲透色譜法分析表明仍保留了一些低分子量物質。在10°C_37°C的溫度下，分級的聚合物的含水溶液的粘度顯著大于市售可得的聚合物的粘度，該特性對于一些醫學和藥物遞送應用很重要。盡管如此，當用于機體內部時，認為這些聚合物的一些低分子量污染物產生有害的副作用，而使得在分級分離方法中將所述低分子量污染物除去變得特別重要。因此，通過該方法分級分離的聚氧化烯嵌段共聚物不適用于所有的醫學用途。如上所述，在人體中使用較大濃度的這些聚合物需要除去存在于商品制劑中的較低分子量污染物。如美國專利5，567，859(該專利通過參考引入本文；實施例8和9)所說明的，較低分子量污染物最可能引起可見的毒性效果。在利用未經純化的泊洛沙姆188的臨床試驗中，發現不可接受水平的暫時性腎功能障礙，MaynardC，SwensonR，ParisJA,MartinJS,HallstromAP,CerqueiraMD,WeaverWD.Randomized,controlledtrialofRheothRx(poloxamer188)inpatientswithsuspectedacutemyocardialinfarCti0n(在疑似患有急性心肌梗塞的患者中RheothRx(泊洛沙姆188)的隨機、受控試驗)，RheothRxinMyocardialInfarctionStudyGroup。AmHeartJ.1998年5月；135(5Pt1)797-804；而利用純化的泊洛沙姆188的另一臨床試驗特別提到未發現腎功能障石導，OrringerEP,CasellaJF,AtagaKI,KoshyM,Adams-GravesP,Luchtman-JonesL,WunΤ,WatanabeΜ,ShaferF,KutlarA,AbboudΜ,SteinbergΜ,AdlerB,SwerdlowP,TerreginoC,SaccenteS,FilesB,BallasS,BrownR,Wοjtowicζ-PragaS,GrindelJM.Purifiedpoloxamer188fortreatmentofacutevasoocclusivecrisisofsicklecelldisease:Arandomizedcontrolledtrial(用于治療鐮刀形紅細胞疾病的急性血管閉合危象的純化的泊洛沙姆188隨機受控試驗)。JAMA.2001年11月7日；286(17)2099-2106。因此，看起來在EMR應用中急需僅利用經分級的泊洛沙姆和泊洛沙胺，正如本文所預期的。此外，這些熱敏聚合物的分級分離產生具有較強耐機械性的改進的凝膠，且由于改進的感溫性，需要較少的聚合物以實現凝膠化(例如參見美國專利6，761，824(該專利通過參考引入本文)，關于純化機理和所得到的粘度)。利用純化的逆向熱敏聚合物，在與EMR關聯中的藥物遞送僅僅由于不能獲得實現將治療有效量的生物學活性分子遞送至治療將提供治療益處的患者的特定細胞中的方法，因此尚未實現許多類型的生物學活性分子的治療有效應用。在適當的時候以受控的方式、以最小副作用和每劑量的更大效果遞送藥物的新方法是藥物遞送和制藥行業所尋找的。用于本發明的EMR方法的可逆凝膠化聚合物具有使其成為常規小分子藥物以及新的大分子(例如，肽)藥物或其它治療產品的合適遞送載體的物理化學特性。因此，包含純化的逆向熱敏聚合物的組合物可進一步包含所選擇的藥物試劑來提供預選擇的藥用效果。藥用效果為尋求治療疾病或身體紊亂的來源或癥狀的效果。藥物包括受到FDA藥物準則管理的產品以及消費品。重要的是，用于本發明的EMR方法的組合物能增溶和釋放生理活性物質。預期增溶作用作為在大量水相中的溶解的結果而發生，或通過在泊洛沙姆的疏水性結構域產生的膠束中的溶質摻入而發生。可通過擴散或網絡侵蝕機理發生藥物的釋放。本領域技術人員認識到，用于本發明的EMR方法的組合物可同時用于遞送多種藥物和個人護理應用。為了制備藥物組合物，將賦予期望的藥物效果的有效量的藥學活性劑摻入到用于本發明的EMR方法的可逆凝膠化組合物中。優選所選的試劑為水溶性的，這將容易地導致其本身在整個可逆凝膠化組合物中的均勻分散。還優選該試劑不與組合物起反應。對于非水溶性的物質，其也處于在整個組合物中分散或懸浮親脂性物質的本發明的EMR方法的范圍內。可利用本發明方法遞送許多生理活性物質；所遞送的生理活性物質包括麻醉劑、抗微生物劑(抗菌劑、抗真菌劑、抗病毒劑)、抗炎劑、診斷試劑和傷口愈合試劑。因為用于本發明方法的可逆凝膠化組合物適用于在多種生理學條件下的應用，可摻入多種藥學活性劑該組合物并通過該組合物施用。裝載入純化的逆向熱敏聚合物的聚合物網絡中的藥物試劑可為任何具有生物活性的物質，包括蛋白質、多肽、多核苷酸、核蛋白、多糖、糖蛋白、脂蛋白、及其合成的和生物工程化的類似物。可在用于本發明方法的聚合物中摻入多許多治療劑。通常可通過本發明方法給藥的治療劑包括，但不限于抗感染藥物，例如抗生素和抗病毒劑；鎮痛劑和鎮痛劑組合；減食欲劑；驅蠕蟲藥；抗關節炎藥；平喘藥；抗驚厥劑；抗抑郁劑；抗利尿劑；止瀉藥；抗組胺劑；抗炎癥試劑；抗偏頭痛制劑；止惡心藥；抗腫瘤藥；抗帕金森病藥物；止癢藥；抗精神病藥；退熱藥、抗痙攣藥；抗膽堿能藥；擬交感神經藥；黃嘌呤衍生物；心血管制劑，包括鈣離子通道阻斷劑和β“阻斷劑，例如心得靜和抗心律失常藥；抗高血壓藥；利尿劑；血管擴張劑，包括全身性冠狀動脈的、外周的和大腦的；中樞神經系統興奮劑；咳嗽和風寒制劑，包括減充血劑；激素，例如雌二醇和其它類固醇，包括皮質醇；安眠藥；免疫抑制劑；肌肉松弛藥；副交感神經阻滯藥；精神振奮藥；鎮靜劑；和安定藥；以及天然衍生或遺傳工程化的蛋白質、多糖、糖蛋白、或脂蛋白。用于胃腸外給藥的合適的藥品是眾所周知的，如在HandbookonInjectableDrugs(可注身寸藥物手冊)，第6版,LawrenceA.Trissel,AmericanSocietyofHospitalPharmacists,Bethesda,Md.，1990中所舉例說明的。藥學活性化合物可為任何具有生物活性的物質，包括蛋白質、多肽、多核苷酸、核蛋白、多糖、糖蛋白、脂蛋白、及其合成的和生物工程化的類似物。術語“蛋白質”為本領域公認的，且就本發明的目的而言，還包括肽。蛋白質或肽可為任何生物學的、天然存在的或合成的蛋白質或肽。蛋白質的實例包括抗體、酶、生長激素和生長激素釋放激素、促性腺激素釋放激素、及其激動劑和拮抗劑類似物、抑生長素及其類似物、促性腺激素例如促黃體激素和促卵泡激素、肽T、降鈣素、甲狀旁腺激素、胰高血糖素、加壓素、催產素、血管緊張素I和II、緩激肽、胰激肽、粗腎上腺皮質激素、促甲狀腺激素、胰島素、胰高血糖素以及上述分子的許多類似物和同源物。藥物試劑可選自胰島素，選自MMR(腮腺炎、麻疹和風疹)疫苗、傷寒疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、單純皰疹病毒、細菌類毒素、霍亂毒素B-亞基、流感疫苗病毒、博德特氏菌百日咳病毒、痘苗病毒、腺病毒、金絲雀痘、脊髓灰質炎疫苗病毒、惡性瘧原蟲、卡介苗(BCG)、肺炎克雷白桿菌、HIV外殼糖蛋白的抗原，和選自牛生長激素(有時稱為BST)、雌激素、雄激素、胰島素生長因子(有時稱為IGF)、白細胞介素I、白細胞介素II和細胞因子的細胞因子及其它試劑。三個這種細胞因子為干擾素-β、干擾素-Y和吞噬細胞增強激素。可摻入用于本發明的EMR方法的組合物的細菌類毒素的實例為破傷風、白喉、假單胞菌屬Α、結核分枝桿菌。可摻入用于本發明的EMR方法的組合物的抗原的實例為HIV外殼糖蛋白，例如，用于AIDS疫苗的gp120或gp160。可包括的抗潰瘍H2受體拮抗劑的實例為雷尼替丁、西咪替丁和法莫替丁，其它抗潰瘍藥物為omparazide、cesupride和米索前列醇。低血糖試劑的實例為格列吡嗪。可裝載入可摻入用于本發明的EMR方法的組合物的藥學活性化合物的種類包括，但不限于，抗AIDS物質、抗癌癥物質、抗生素、免疫抑制劑(例如，環孢菌素)、抗病毒物質、酶抑制劑、神經毒素、阿片樣物質、安眠藥、抗組胺藥、潤滑劑安定藥(lubricantstranquilizers)、抗驚厥劑、肌肉松弛劑和抗帕金森病物質、抗痙攣藥和肌肉收縮劑、縮瞳劑和抗膽堿能藥、抗青光眼化合物、抗寄生蟲和/或抗原生動物化合物、抗高血壓藥、鎮痛劑、退熱藥和抗炎劑例如NSAIDs、局部麻醉劑、眼藥、前列腺素、抗抑郁劑、抗精神病物質、抗催吐劑、成像試劑、特異的靶向試劑、神經傳遞物質、蛋白質、細胞應答修飾劑和疫苗。認為特別適用于摻入用于本發明的EMR方法的組合物的例證性藥物試劑包括但不限于咪唑類，例如咪康唑、益康唑、特康唑、沙康唑、伊曲康唑、甲硝唑、氟康唑、酮康唑、克霉唑、促黃體激素釋放激素(LHRH)及其類似物、壬苯醇醚_9、GnRH激動劑或拮抗劑；天然或合成的黃體酮，例如選擇的黃體酮、17-羥基黃體酮衍生物，例如乙酸甲羥孕酮，和19-去甲睪酮類似物，例如炔諾酮、天然或合成的雌激素、綴合的雌激素、雌二醇、哌嗪雌酮硫酯、和乙炔雌二醇；二膦酸鹽，包括ι-羥基-亞乙基-ι，ι-二膦酸、阿倫膦酸鹽、替魯膦酸鹽、利塞膦酸、氯膦酸鹽和帕米膦酸鹽、降血鈣素、甲狀旁腺激素、碳酸酐酶抑制劑，例如非爾氨酯和多佐胺；肥大細胞穩定劑，例如xesterbergsterol-A、lodoxamine、和色甘酸鈉；前列腺素抑制劑，例如雙氯芬酸和酮咯酸；類固醇，例如潑尼松龍、地塞米松、fluromethylone、利美索龍、和氯替潑諾；抗組胺劑，例如安他唑啉、非尼拉敏、和組胺酶、硝酸毛果蕓香堿；β_阻斷劑，例如佐布諾洛爾和馬來酸噻嗎洛爾。本領域技術人員將理解，可組合兩種或更多種藥物試劑達到特殊效果。可通過簡單的試驗測定活性成分的必需數量。僅以舉例的方式，可將任何數目的抗生素和抗微生物劑包括在用于本發明方法的純化的逆向熱敏聚合物中。優選包括在用于本發明的EMR方法的組合物中的抗微生物藥物包括內酰胺藥物的鹽、喹諾酮藥物、環丙沙星、諾氟沙星、四環素、紅霉素、阿米卡星、三氯生、多西環素、卷曲霉素、氯己定、金霉素、土霉素、克林霉素、乙胺丁醇、己脒定、羥乙基磺酸鹽、甲硝唑、噴他脒、慶大霉素、卡那霉素、lineomycin、甲烯土霉素、烏洛托品、二甲胺四環素、新霉素、奈替米星、巴龍霉素、鏈霉素、托普霉素、咪康唑和金剛烷胺，等等。例如僅僅就抗炎癥來說，可將非類固醇的抗炎藥試劑(NSAIDS)摻入用于本發明的EMR方法的組合物，例如丙酸衍生物、乙酸、滅酸衍生物、聯苯羧酸衍生物、苯并噻嗪類，包括但不限于阿司匹林、對乙酰氨基酚、布洛芬、萘普生、苯輕洛芬、氟比洛芬、芬布芬、酮洛芬、吲哚洛芬、吡洛芬、卡洛芬和布氯酸，等等。實施例現在大略地描述本發明，可通過參考以下實施例更容易地理解本發明，包括這些實施例只是為了例證性地說明本發明的某些方面和實施方案，而不是為了限制本發明。體外利用三種不同的溶液在新鮮的體外豬胃中進行胃內鏡粘膜切除術(120)標準鹽溶液(η=40)；HPMC(η=40)；和LeGoo-endo(n=40)。通過使用含有25-量規針(gaugeneedle)的10_mL注射器注射5mL溶液進行各粘膜下注射。產生視覺上足夠粘膜下隆凸后，將針在該位置中保持較短的時間，以阻塞穿刺位點以及防止溶液過早溢出。將胃放置在熱墊上以確保恒定的溫度(35-37°C)。在所有情況下，測量皰的高度和大小以及粘膜下隆凸的持續時間。當隆凸在原位持續120分鐘看得見時，完成試驗。比起鹽水(8.3士2.6mm，ρ<0.01)禾口HPMC(9.05士2.3mm，ρ=ns)，使用LeGOO-endOTM(10.3±2.2mm)的初始粘膜隆凸的高度較高。在隆凸的大直徑方面，未在LeGoo-endo(34.7士4.4mm)和鹽水(36.7士4讓)或HPMC(33.7士4讓)之間觀察到顯著的差異。使用LeGoo-endo的所有粘膜下隆凸持續超過120分鐘，且持續時間比使用鹽水(20.9士11分鐘，ρ<0.01)和HPMC(89士32分鐘，ρ<0.01)的長。原位120分鐘后，使用LeGoo-endo進行的隆凸在大小、形狀和稠度方面沒有顯示差異。體內使用含有5-mL注射器和氣球膨脹槍的23-量規硬化療法(scletotherapy)針，使用LeGoo-endo在2頭豬的結腸中進行5次EMR。在介入期間將LeGoo-endo保持在冰上。將裝有鹽水的注射器也保持在冰上，以在臨注射泊洛沙姆前冷卻導管。產生視覺上足夠粘膜下隆凸后，評價“小”、“中等”或“大”。接著，利用針刀或息肉切除術勒除器進行損害的“全體”切除術。記錄所有程序，并拍照。在所有情況下，測量切除的樣品的大小，并通過組織學評價來估計表面。5個EMR位于距肛門邊緣18-25cm之間的sigma中。初始粘膜隆凸的高度在兩種情況下大，在兩種情況下中等，在一種情況下小。注射聚合物后，無需再復位。注射的平均體積為6士2.5mL(范圍，3-10mL)，切除的樣品的平均大小為2.6士1.Icm(范圍，0.9_4cm)。切除術的平均時間為5士2分鐘(范圍，2-8分鐘)。在切除術期間，在粘膜下層與粘膜之間觀察到大量的凝膠。在漿膜表面未觀察到熱傷害，且未記錄穿孔。在電烙術(electrocautery)設定中無需變化。在一種情況下，觀察到從粘膜下脈管臨時性出血。組織學檢查表明，在所有樣品中存在粘膜下層。等價物本領域技術人員將認識到或能夠確定僅僅使用常規實驗方法就可以獲得在此所描述的本發明的具體實施方案的許多等價物。這種等價物也包括在所提交的權利要求中。權利要求一種包含純化的逆向熱敏聚合物的組合物在哺乳動物胃腸粘膜切除的內鏡程序中的用途。2.權利要求1的用途，其中所述純化的逆向熱敏聚合物為聚氧化烯嵌段共聚物。3.權利要求1的用途，其中所述純化的逆向熱敏聚合物選自泊洛沙姆和泊洛沙胺。4.權利要求1的用途，其中所述純化的逆向熱敏聚合物選自泊洛沙姆407、泊洛沙姆338、泊洛沙姆118、泊洛沙姆237、Tetronic1107和Tetronic1307。5.權利要求1的用途，其中所述純化的逆向熱敏聚合物為泊洛沙姆407。6.權利要求1的用途，其中所述純化的逆向熱敏聚合物為泊洛沙姆237。7.權利要求1的用途，其中所述組合物的轉變溫度在約10°C-約40°C之間。8.權利要求1的用途，其中所述組合物的轉變溫度在約15°C-約30°C之間。9.權利要求1的用途，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%。10.權利要求1的用途，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%；且所述組合物的轉變溫度在約10°C-約40°C之間。11.權利要求1的用途，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%；且所述組合物的轉變溫度在約15°C-約30°C之間。12.權利要求1的用途，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%；所述組合物的轉變溫度在約10°C-約40°C之間；且所述純化的逆向熱敏聚合物選自泊洛沙姆和泊洛沙胺。13.權利要求1的用途，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%；所述組合物的轉變溫度在約15°C-約30°C之間；且所述純化的逆向熱敏聚合物選自泊洛沙姆和泊洛沙胺。14.權利要求1的用途，其中所述組合物包含約5%-約35%的所述純化的逆向熱敏聚合物。15.權利要求1的用途，其中所述組合物包含約10%-約30%的所述純化的逆向熱敏聚合物。16.權利要求1的用途，其中所述純化的逆向熱敏聚合物具有約1.5-約1.0的多分散性指數。17.權利要求1的用途，其中所述純化的逆向熱敏聚合物具有約1.2-約1.0的多分散性指數。18.權利要求1的用途，其中所述組合物還包含對比-增強試劑。19.權利要求18的用途，其中所述對比-增強試劑選自不透射線的材料、順磁性物質、重原子、過渡金屬、鑭系元素、錒系元素、染料和包含放射性核素的材料。20.權利要求1-19中任一項的用途，其中所述哺乳動物為人。21.一種胃腸粘膜切除的方法，所述方法包括粘膜下給予哺乳動物胃腸粘膜的區域有效量的包含純化的逆向熱敏聚合物的組合物；和手術切除胃腸粘膜的所述區域。22.權利要求21的方法，其中所述純化的逆向熱敏聚合物為聚氧化烯嵌段共聚物。23.權利要求21的方法，其中所述純化的逆向熱敏聚合物選自泊洛沙姆和泊洛沙胺。24.權利要求21的方法，其中所述純化的逆向熱敏聚合物選自泊洛沙姆407、泊洛沙姆2[338、泊洛沙姆118、泊洛沙姆237、Tetronic1107和Tetronic1307。25.權利要求21的方法，其中所述純化的逆向熱敏聚合物為泊洛沙姆407。26.權利要求21的方法，其中所述純化的逆向熱敏聚合物為泊洛沙姆237。27.權利要求21的方法，其中所述組合物的轉變溫度在約10°C-約40°C之間。28.權利要求21的方法，其中所述組合物的轉變溫度在約15°C-約30°C之間。29.權利要求21的方法，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%。30.權利要求21的方法，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%；且所述組合物的轉變溫度在約10°C-約40°C之間。31.權利要求21的方法，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%；且所述組合物的轉變溫度在約15°C-約30°C之間。32.權利要求21的方法，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%；所述組合物的轉變溫度在約10°C-約40°C之間；且所述純化的逆向熱敏聚合物選自泊洛沙姆和泊洛沙胺。33.權利要求21的方法，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%；所述組合物的轉變溫度在約15°C-約30°C之間；且所述純化的逆向熱敏聚合物選自泊洛沙姆和泊洛沙胺。34.權利要求21的方法，其中所述組合物包含約5%-約35%的所述純化的逆向熱敏聚合物。35.權利要求21的方法，其中所述組合物包含約10%-約30%的所述純化的逆向熱敏聚合物。36.權利要求21的方法，其中所述純化的逆向熱敏聚合物具有約1.5-約1.0的多分散性指數。37.權利要求21的方法，其中所述純化的逆向熱敏聚合物具有約1.2-約1.0的多分散性指數。38.權利要求21的方法，其中所述組合物還包含對比-增強試劑。39.權利要求38的方法，其中所述對比-增強試劑選自不透射線的材料、順磁性物質、重原子、過渡金屬、鑭系元素、錒系元素、染料和包含放射性核素的材料。40.權利要21-39中任一項的方法，其中所述哺乳動物為人。41.一種用于哺乳動物胃腸內鏡粘膜切除的試劑盒，所述試劑盒包括包含純化的逆向熱敏聚合物的組合物；注射器；及其使用說明。42.權利要41的試劑盒，其中所述純化的逆向熱敏聚合物為聚氧化烯嵌段共聚物。43.權利要41的試劑盒，其中所述純化的逆向熱敏聚合物選自泊洛沙姆和泊洛沙胺。44.權利要41的試劑盒，其中所述純化的逆向熱敏聚合物選自泊洛沙姆407、泊洛沙姆338、泊洛沙姆118、泊洛沙姆237、Tetronic1107和Tetronic1307。45.權利要41的試劑盒，其中所述純化的逆向熱敏聚合物為泊洛沙姆407。46.權利要41的試劑盒，其中所述純化的逆向熱敏聚合物為泊洛沙姆237。47.權利要41的試劑盒，其中所述組合物的轉變溫度在約10°C-約40°C之間。48.權利要41的試劑盒，其中所述組合物的轉變溫度在約15°C-約30°C之間。49.權利要41的試劑盒，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下體積的約80%-約120%。50.權利要41的試劑盒，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%；且所述組合物的轉變溫度在約10°C-約40°C之間。51.權利要41的試劑盒，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%；且所述組合物的轉變溫度在約15°C-約30°C之間。52.權利要41的試劑盒，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%；所述組合物的轉變溫度在約10°C-約40°C之間；且所述純化的逆向熱敏聚合物選自泊洛沙姆和泊洛沙胺。53.權利要41的試劑盒，其中所述組合物在生理學溫度下的體積為在低于其轉變溫度下的體積的約80%-約120%；所述組合物的轉變溫度在約15°C-約30°C之間；且所述純化的逆向熱敏聚合物選自泊洛沙姆和泊洛沙胺。54.權利要41的試劑盒，其中所述組合物包含約5%-約35%的所述純化的逆向熱敏聚合物。55.權利要41的試劑盒，其中所述組合物包含約10%-約30%的所述純化的逆向熱敏聚合物。56.權利要41的試劑盒，其中所述純化的逆向熱敏聚合物具有約1.5-約1.0的多分散性指數。57.權利要41的試劑盒，其中所述純化的逆向熱敏聚合物具有約1.2-約1.0的多分散性指數。58.權利要41的試劑盒，其中所述組合物還包含對比-增強試劑。59.權利要58的試劑盒，其中所述對比_增強試劑選自不透射線的材料、順磁性物質、重原子、過渡金屬、鑭系元素、錒系元素、染料和包含放射性核素的材料。60.權利要41-59中任一項的試劑盒，其中所述哺乳動物為人。全文摘要本發明的一方面涉及包含純化的逆向熱敏聚合物的組合物在哺乳動物胃腸粘膜切除的內鏡程序中的用途。本發明的另一方面涉及一種胃腸粘膜切除的方法，所述方法包括粘膜下給予哺乳動物胃腸粘膜的區域有效量的包含純化的逆向熱敏聚合物的組合物；和手術切除胃腸粘膜的所述區域。本發明的另一方面涉及一種用于哺乳動物胃腸內鏡粘膜切除的試劑盒，所述試劑盒包括包含純化的逆向熱敏聚合物的組合物；注射器；及其使用說明。文檔編號A61B18/18GK101932287SQ200880126231公開日2010年12月29日申請日期2008年12月1日優先權日2007年11月29日發明者J-M·富格爾申請人:普拉羅美德公司