減輕抗癌藥副作用的藥劑的制作方法

專利名稱：減輕抗癌藥副作用的藥劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有類凝血酶的、減輕抗癌藥副作用的藥劑，其包括凝血酶樣酶。
背景技術(shù)：
近年來，通過定期的體格檢查使癌的早期診斷和發(fā)現(xiàn)成為可能，通過外科手術(shù)取 得的原發(fā)癌的成功切除率已有穩(wěn)定的改善。然而，多藥化療以及化療與放療的聯(lián)合治療仍 被用于治療晚期癌或并發(fā)轉(zhuǎn)移病灶的癌。特別是，因為惡性程度高的惡性腫瘤諸如黑素瘤、肺癌、肝癌和胰腺癌的早期診斷 是困難的，當被診斷為惡性腫瘤時，原發(fā)瘤和轉(zhuǎn)移瘤可能已經(jīng)同時存在，并且在很多情況下 不可能進行外科手術(shù)。在這些情況下，采用多種抗癌藥的聯(lián)合化療被廣泛用于治療這些惡 性腫瘤。目前，已知細胞毒類抗癌藥諸如烷化劑、抗代謝物、抗癌抗生素、植物生物堿、鉬基 藥物是被廣泛用于臨床的抗癌藥。然而，細胞毒類抗癌藥不僅對癌細胞造成損傷，而且對具 有活躍的細胞分裂的正常細胞也造成損傷。由于細胞毒類抗癌藥所引起的副作用，諸如骨 髓抑制、心毒性、造血功能障礙、消化紊亂、脫發(fā)等，導(dǎo)致不能給予癌治療所需的有效量的藥 物，這是細胞毒類抗癌藥的致命缺陷。環(huán)磷酰胺(一種烷基化藥物)，被廣泛用于臨床，因為它對急性白血病、惡性淋巴 瘤、多發(fā)性骨髓瘤等是有效的。環(huán)磷酰胺是通過使DNA烷基化而阻斷細胞增殖并從而抑制 DNA功能的藥物。因為該藥物不僅阻斷癌細胞的增殖，而且還阻斷正常細胞的增殖，可以發(fā) 生副作用。已知的副作用是嘔吐、腹瀉、脫發(fā)、骨髓抑制等。阿霉素(多柔比星)，作為抗癌抗生素，被廣泛用于臨床，對包括血癌諸如急性白 血病和惡性淋巴瘤，以及實體瘤諸如肺癌、乳腺癌和骨肉瘤在內(nèi)的多種癌有效。然而，已知 阿霉素可引起諸如骨髓抑制、心毒性、口腔炎、消化紊亂和脫發(fā)的副作用。特別是，阿霉素 引起的心毒性是嚴重的副作用，其造成臨床問題并導(dǎo)致劑量受限。(William Lown J等人 Strand scission of DNA by bound adriamycin and daunorubicin in thepresence of reducing agents. Biochem. Biophys. Res. Commun.，76(3) :705_710，1977)。順鉬(鉬基藥物)是廣譜抗癌藥。然而，由于諸如消化紊亂(主要包括惡心或嘔 吐)、全身不適、腎衰竭和造血功能障礙的副作用使得臨床劑量受到限制。另外，為了減輕這 些副作用，合成了被稱作卡鉬的順鉬衍生物。雖然卡鉬引起的副作用低于順鉬引起的副作 用，但是卡鉬的問題在于其抗癌活性弱。在這樣的情況下，迫切地需要開發(fā)減輕抗癌藥副作用的藥物用于臨床應(yīng)用。迄今 為止，報導(dǎo)了減輕抗癌藥副作用的一種試劑。這種試劑的特征在于包含用于減輕細胞毒類 抗癌藥的副作用的硝基三唑衍生物(日本專利No. 3482418)。該文獻報道說硝基三唑衍生 物抑制體重減輕，體重減輕是許多抗癌藥的副作用。另外，蝶呤衍生物或新蝶呤衍生物據(jù)報導(dǎo)是癌轉(zhuǎn)移抑制劑的活性組分和用于抗癌 藥的副作用治療劑(日本專利No. 3156112)。該文獻解釋說蝶呤和新蝶呤衍生物可以抑制
3癌轉(zhuǎn)移，給存活帶來益處；并減輕蒽醌類抗癌藥的副作用諸如心毒性。E ffi Bl (batroxobin), i * iH f 1 ■ ^gmoojeni M 禾中(Bothrops atroxmoojeni)的毒液中的類凝血酶，據(jù)報道在抑制惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和增殖方面是有效 的(Chmielewska J 等人Effect of defibrination with batroxobinon growth and metastasis of JW sarcoma in mice. Europ. J. Cancer, 16 :919_923，1980)。在該文獻中所 公開的技術(shù)基于這樣的假設(shè)，即纖維蛋白原作為障礙物起保護惡性腫瘤細胞免受免疫系統(tǒng) 攻擊的作用。在該技術(shù)中，類凝血酶降低纖維蛋白原水平，從而使得免疫系統(tǒng)更容易攻擊惡 性腫瘤細胞，導(dǎo)致巴曲酶阻斷腫瘤細胞的增殖和轉(zhuǎn)移。但是不存在有關(guān)巴曲酶與抗癌藥副 作用的減輕之間的聯(lián)系的報導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
在上述專利文件中的硝基三唑衍生物、蝶呤衍生物和新蝶呤衍生物目前未在臨床 中作為藥物被使用。因此，迫切地需要開發(fā)有效減輕抗癌藥副作用、特別是諸如骨髓抑制和 心毒性的嚴重副作用的藥物。本申請的發(fā)明人經(jīng)過對由諸如環(huán)磷酰胺、阿霉素和順鉬的抗癌藥所引起的副作用 如骨髓抑制和心毒性的抑制主題的詳盡研究后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，巴曲酶，一種類凝血酶可減輕這 些副作用。本發(fā)明基于這些發(fā)現(xiàn)。也就是說，本發(fā)明涉及含有類凝血酶的、減輕抗癌藥副作用的藥劑。具體地，本發(fā) 明如下(1)減輕抗癌藥副作用的藥劑，其中所述藥劑含有類凝血酶。(2)根據(jù)(1)的減輕副作用的藥劑，其中所述類凝血酶是從纖維蛋白原生成纖維 蛋白I的蛋白酶。(3)根據(jù)(1)的減輕副作用的藥劑，其中所述類凝血酶選自巴曲酶、安克洛酶 (ancrod)禾口克洛他酶(crotalase)。(4)根據(jù)⑴的減輕副作用的藥劑，其中所述類凝血酶是巴曲酶。(5)根據(jù)⑴的減輕副作用的藥劑，其中所述抗癌藥是細胞毒類抗癌藥。(6)根據(jù)(5)的減輕副作用的藥劑，其中所述細胞毒類抗癌藥選自烷基化藥物、抗 癌抗生素和鉬基藥物。(7)根據(jù)(5)的減輕副作用的藥劑，其中所述細胞毒類抗癌藥選自環(huán)磷酰胺、阿霉 素和順鉬。(8)根據(jù)⑴的減輕副作用的藥劑，其中所述副作用是由抗癌藥所引起的骨髓抑 制或心毒性。(9)根據(jù)⑴的減輕副作用的藥劑，其中所述副作用是由細胞毒類抗癌藥所引起 的骨髓抑制。(10)根據(jù)(9)的減輕副作用的藥劑，其中所述細胞毒類抗癌藥選自烷基化藥物、 抗癌抗生素和鉬基藥物。(11)根據(jù)(9)的減輕副作用的藥劑，其中所述細胞毒類抗癌藥選自環(huán)磷酰胺、阿 霉素和順鉬。(12)根據(jù)⑴的減輕副作用的藥劑，其中所述副作用是由抗癌抗生素所引起的心毒性。(13)根據(jù)(12)的減輕副作用的藥劑，其中所述抗癌抗生素是阿霉素。(14) 一種用于受試者的、減輕抗癌藥副作用的方法，包括對該受試者給予有效量 的類凝血酶。(15)類凝血酶用于制備減輕抗癌藥副作用的藥劑的應(yīng)用。本發(fā)明的減輕抗癌藥副作用的藥劑可以有效地減輕抗癌藥的副作用；特別是嚴重 副作用，諸如骨髓抑制和心毒性，如以下實施例所示。也就是說，在給予抗癌藥的同時或在 給予抗癌藥之后給予本發(fā)明的減輕抗癌藥副作用的藥劑，每天一次或兩次，本發(fā)明的減輕 抗癌藥副作用的藥劑可以顯著地減輕抗癌藥的副作用。因此，本發(fā)明對抗癌藥治療作出了 巨大貢獻。


圖1是對照組的左心室心肌組織的光學顯微鏡照片(H&E染色，X400)；圖2是巴曲酶組的左心室心肌組織的光學顯微鏡照片(H&E染色，X400)；圖3是阿霉素組的左心室心肌組織的光學顯微鏡照片(H&E染色，X200)；和圖4是巴曲酶+阿霉素組的左心室心肌組織的光學顯微鏡照片(H&E染色，X200)。實施本發(fā)明的最佳方式以下提供了本發(fā)明的詳細說明?？衫斫獾氖?，除非另有說明，否則用于本說明書中的術(shù)語具有本領(lǐng)域常用的含義。 因此，除非另有定義，否則在本說明書中使用的全部技術(shù)術(shù)語和科學名詞具有本發(fā)明所屬 領(lǐng)域的技術(shù)人員通常所理解的相同含義。如果在本說明書中定義的術(shù)語的含義與本領(lǐng)域的 常用含義不同的話，則相對于本領(lǐng)域的常用含義應(yīng)當優(yōu)先使用在本說明書中定義的含義。本說明書中使用術(shù)語的含義列舉如下。在本說明書中使用的術(shù)語“類凝血酶”是指與具有凝固纖維蛋白原特征的凝血 酶以外的蛋白酶。類凝血酶的具體實例包括巴曲酶、安克洛酶、克洛他酶、flavoxobin, asperase、acutin、botropase、clotase、gabonase、venzyme 等。類凝血酶根據(jù)其底物、纖維蛋白原的作用部位而被分成三類(i)蛋白酶(諸如巴 曲酶、安克洛酶和克洛他酶)，其從纖維蛋白原中只分離纖維蛋白肽A以生成纖維蛋白I ； ( )蛋白酶(諸如gabonase)，其從纖維蛋白原中分離纖維蛋白肽A和血纖維蛋白肽B以 生成纖維蛋白11(即，纖維蛋白)；和(iii)蛋白酶(諸如venzyme)，其從纖維蛋白原中主 要分離血纖維蛋白肽B。在本說明書中，術(shù)語“纖維蛋白I”是指當從纖維蛋白原只分離纖維蛋白肽A時生 成的單體。該纖維蛋白I還被稱作Des A纖維蛋白。另外，術(shù)語“纖維蛋白肽A”是對應(yīng)于 纖維蛋白原的Aa鏈的NH2末端處的16個氨基酸的肽。另外，在本說明書中，巴曲酶、安克洛酶、克洛他酶、flavoxobin、asperase、acutin 等作為從纖維蛋白原生成纖維蛋白I的蛋白酶的實例被提及。本發(fā)明優(yōu)選的類凝血酶包含巴曲酶、安克洛酶、克洛他酶(StockerKF=Snake venom proteins affecting hemostasis and fibrinolysis, in MedicalUse of Snake Venom Proteins, Stocker KF, ed.，CRC Press, Boston, pl30-131 ； 1990)。在上述的這些類凝血酶中，特別優(yōu)選巴曲酶。巴曲酶是來源于矛頭蝮蛇moo jeni亞種的毒液中的類凝血酶，是具有36，OOODa分
子量的糖蛋白。凝血酶是具有糖蛋白結(jié)構(gòu)的酶，是存在于機體內(nèi)的凝血酶原被激活得到的。就糖 蛋白結(jié)構(gòu)的而言，凝血酶和巴曲酶是類似的酶。然而，凝血酶與巴曲酶的不同點在于凝血酶 不僅從纖維蛋白原分離纖維蛋白肽A而且從纖維蛋白原分離纖維蛋白肽B，并生成纖維蛋 白。另外，盡管巴曲酶不作用于除了纖維蛋白原以外的任何凝血因子，但是凝血酶與巴曲酶 的不同點在于凝血酶作用于除了纖維蛋白原以外的其它凝血因子。巴曲酶是已知物質(zhì)，并且可以根據(jù)被審查的日本專利申請No. S57-10718 (日本專 利No. 1118129)公報中所述的方法來制備?；蛘?，其可容易地得自東菱藥品工業(yè)株式會社 (Tobishi Pharmaceuticals Co.，Ltd.)(東京，日本)及其子公司北京托畢西藥業(yè)有限公 司(Beijing TobishiPharmaceuticals, Co. , Ltd. ) ( ；|匕京，中國)。安克洛酶是馬來亞蝮蛇(Agkistrodon rhodostoma)的毒液由來的類凝血酶，是分 子量約為35，400 Da的糖蛋白。安克洛酶與巴曲酶的類似之處在于它們都是從纖維蛋白原 只分離纖維蛋白肽A以生成纖維蛋白I的類凝血酶(Stocker KF Snake venom proteins affecting hemostasis andfibrinolysis, in Medical Use of Snake Venom Proteins, Stocker KF, ed.，CRC Press, Boston,pl34_135 ； 1990)?？寺逅甘菛|部菱背響尾蛇(Crotalus adamanteus)的毒液由來的類凝血酶，是 分子量約為32，700Da的糖蛋白?？寺逅概c巴曲酶的類似之處在于它們都是從纖維蛋白 原只分離纖維蛋白肽A以生成纖維蛋白I的類凝血酶(Stocker KF Snake venom proteins affecting hemostasis andfibrinolysis, in Medical Use of Snake Venom Proteins, Stocker KF, ed.，CRC Press, Boston,pl40_141 ； 1990)。上述的類凝血酶諸如巴曲酶、安克洛酶和克洛他酶在本發(fā)明中可以是天然產(chǎn)物或
基因重組產(chǎn)品。本發(fā)明的術(shù)語“抗癌藥”是指在癌癥治療中使用的藥物。抗癌藥的具體實例包括 細胞毒類抗癌藥、基于分子靶向的藥物、激素等。術(shù)語“細胞毒類抗癌藥”是指對細胞核的DNA或細胞周期表現(xiàn)出任何影響以發(fā)揮 抗癌效果的抗癌藥。細胞毒類抗癌藥的具體實例包括烷化劑、抗代謝物、抗癌抗生素、鉬基 藥物和植物堿等。烷化劑包括氮芥N-氧化物鹽酸鹽、美法侖、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺和其它的氮芥； 卡波醌、塞替派和其它的乙撐亞胺類；鹽酸尼莫司汀、雷莫司汀和其它的亞硝基脲類等?？勾x物包括甲氨蝶呤和其它的葉酸拮抗劑；氟尿嘧啶、替加氟、卡莫氟和其它的 抗嘧啶類；阿糖胞苷、安西他濱、依諾他濱和其它的阿糖胞苷；巰嘌呤、硫肌苷和其它的嘌 呤拮抗劑等。抗癌抗生素包括阿霉素、多柔比星、柔紅霉素、阿柔比星、吡柔比星和其它的小紅 莓類；博來霉素、培洛霉素和其它的博來霉素類；絲裂霉素C和其它的絲裂霉素放線菌素D 和其它的放線菌素類；新制癌菌素和其它的多肽等。鉬基藥物包括順鉬、卡鉬、奈達鉬、奧沙利鉬等。植物堿包括長春堿、長春新堿、長春地辛、紫杉醇、多西他賽、依托泊苷、喜樹堿、伊
6立替康等。本發(fā)明的減輕副作用的藥劑可以表現(xiàn)出在減輕環(huán)磷酰胺、阿霉素和順鉬的副作用 方面特別有效。另外，本發(fā)明的減輕副作用的藥劑可以表現(xiàn)出不僅減輕給予單獨的抗癌藥時發(fā)生 的副作用的作用，而且也減輕同時給予多種抗癌藥時發(fā)生的副作用。術(shù)語“抗癌藥的副作用”是指在抗癌藥給藥時所見到的治療上不必要的作用，或者 是可能引起臨床紊亂的作用?？拱┧幍母弊饔玫膶嵗ü撬枰种?、心毒性、脫發(fā)、消化紊亂(包括惡心、嘔吐、 腹瀉)、腎機能障礙、全身不適、口腔炎等。在這些提到的副作用中，本發(fā)明在減輕嚴重的副 作用諸如骨髓抑制和心毒性方面可顯示巨大的能力。術(shù)語“骨髓抑制”是指抗癌藥損傷正常的造血干細胞所引起的紅細胞(RBCs)、白細 胞(WBCs)和血小板(Pits)減少。骨髓抑制由來的癥狀包括由于造血障礙所導(dǎo)致的貧血， 由于白細胞減少所導(dǎo)致的感染，由于血小板減少所導(dǎo)致的出血等等。當使用細胞毒類抗癌 藥(特別是烷基化藥物、抗癌抗生素和鉬基藥物)時，骨髓抑制是容易發(fā)生的副作用。當骨 髓抑制的嚴重程度最壞時，分化WBCs、RBCs和Pits的造血干細胞被破壞。這種破壞有時導(dǎo) 致嚴重的貧血、致命性傳染病、出血(顱內(nèi)出血、胃腸出血、肺出血)，并且最終可導(dǎo)致死亡。 因此，骨髓抑制是嚴重性較高的副作用。術(shù)語“心毒性”是指由抗癌藥所引起的心肌組織或心肌細胞的紊亂。據(jù)說諸如充 血性心力衰竭和心律不齊等癥狀是由心毒性來的。當使用抗癌抗生素(尤其是包括阿霉素 在內(nèi)的小紅莓類)時，心毒性是容易發(fā)生的副作用。在組織病理學研究中，心肌組織內(nèi)出現(xiàn) 明顯的收縮帶是心毒性的評價標準。心毒性的程度根據(jù)抗癌藥的使用量而定。當心毒性的 嚴重程度高時，其引起充血性心力衰竭，最終可導(dǎo)致死亡。因此，心毒性是嚴重性較高的副 作用。本發(fā)明可非常有效地減輕由環(huán)磷酰胺、順鉬和阿霉素引起的副作用。由環(huán)磷酰胺、 順鉬和阿霉素引起的典型的副作用如下環(huán)磷酰胺骨髓抑制、嘔吐、腹瀉、脫發(fā)等。阿霉素心毒性、骨髓抑制、口腔炎、消化紊亂、脫發(fā)等。順鉬消化紊亂、全身不適、骨髓抑制、造血功能障礙、腎病等。術(shù)語“減輕”是指在缺乏本發(fā)明的藥劑的條件下由抗癌藥所引起的副作用通過給 予本發(fā)明的藥劑得以緩解。術(shù)語“減輕”是指所述副作用不僅通過本發(fā)明的藥劑而得以緩 解，而且本發(fā)明的藥劑本身不發(fā)生副作用。在日本藥典的制劑總則中的任何制劑可適用于本發(fā)明的藥劑的制劑。實例包括用 于直接在體內(nèi)施用的注射劑(包括懸浮劑和乳劑)；膏劑(包括脂膏劑、乳膏劑(霜劑)，水 溶性膏劑等)，吸入劑，液體劑(包括眼用溶液劑，洗鼻劑等)，栓劑，貼劑，泥敷劑，洗劑和其 它的外用制劑；和內(nèi)用制劑，包括片劑(包括糖包衣片劑、薄膜包衣片劑和明膠包衣片劑)， 液體劑，膠囊，顆粒，粉劑(包括粒劑)，丸劑，糖漿劑，含片等。這些制劑可以通過日本藥典的制劑總則中所述的方法制備。 另外，本發(fā)明的藥劑根據(jù)其劑型可包含藥理學可接受的固體或液體載體或常規(guī)的 介入治療基質(zhì)。藥理學可接受的固體或液體載體的實例包括溶劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、增溶劑、 乳化劑、助懸劑、緩沖劑、等滲劑、著色劑、增稠劑、賦形劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑、包衣劑、 矯正劑等。載體的具體實例包括水，乳糖，蔗糖，果糖，葡萄糖，甘露醇，山梨醇和其它的糖和 糖醇，結(jié)晶纖維素，甲基纖維素，乙基纖維素，羥丙基纖維素，低取代羥丙基纖維素，羥丙基 甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯，乙酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯，羧甲基纖 維素，羧甲基纖維素鈣，羧甲基纖維素鈉，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，羧甲基乙基纖維素，乙酸鄰 苯二酸纖維素和其它纖維素及相關(guān)衍生物；玉米淀粉，小麥淀粉，米淀粉，馬鈴薯淀粉，糊 精，預(yù)膠化淀粉，部分預(yù)膠化淀粉，羥丙基淀粉，羧甲基淀粉鈉，環(huán)糊精，支鏈淀粉和其它淀 粉及相關(guān)衍生物；瓊脂，海藻酸鈉，阿拉伯膠，明膠，膠原，蟲膠，黃蓍膠，黃原膠(天然)和其 它的天然高分子(海藻、植物粘液、蛋白等)；聚乙烯吡咯烷酮，氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚 物，甲基丙烯酸共聚物，羧乙烯基聚合物，聚乙烯醇，二甲聚硅氧烷和其它的合成高分子，； 橄欖油，可可脂，巴西棕櫚蠟，牛脂，氫化油，大豆油，芝麻油，山茶油，石蠟，液體狀石蠟，黃 蜂賭，白礦色凡士林脂，椰子油，微晶蠟和其它的油脂；硬脂酸，硬脂酸鋁，硬脂酸鈣，硬脂酸 鎂，檸檬酸三乙酯，三醋酸甘油酯，中鏈脂肪酸三酸甘油酯，硬脂，十四烷酸異丙酯，和其它 脂肪酸及其衍生物；甘油，十八醇，鯨蠟醇，丙二醇，聚乙二醇和其它醇和多元醇；氧化鋅， 磷酸氫鈣，沉淀碳酸鈣，合成硅酸鋁，二氧化硅無水物，高嶺土，無水氫氧化鋁凝膠，合成鋁 碳酸鎂，二氧化鈦，滑石，膨潤土，硅酸鋁鎂，硫酸鋁鉀，次沒食子酸鉍，次水楊酸鉍，乳酸鈣， 碳酸氫鈉和其它的無機物質(zhì)和金屬鹽化合物；蔗糖脂肪酸的蔗糖酯，硬脂酸聚烴氧酯，氫化 蓖麻油聚氧化乙烯醚，聚氧化乙烯聚丙烯二醇，倍半油酸山梨坦，三油酸山梨坦，單硬脂酸 山梨坦，單棕櫚酸山梨糖醇酐酯，單月桂酸山梨醇酐酯，聚山梨酯，單硬脂酸甘油酯，十二烷 基硫酸鈉，聚桂醇和其它表面活性劑；色素；香料等。介入治療基質(zhì)的實例包括支架、人造血管、導(dǎo)管、球囊等。本發(fā)明的藥劑可被投予接受抗癌藥治療的受試者。所述受試者的實例包括哺乳動 物諸如人、狗和貓。本發(fā)明的藥劑可適合于人用。本發(fā)明的藥劑的給藥時間可以根據(jù)抗癌藥的類型、劑量來確定。優(yōu)選在給予抗癌 藥的同時或給予抗癌藥之后給予本發(fā)明的藥劑。本發(fā)明的藥劑的給藥量根據(jù)患者體重、疾病性質(zhì)和狀況而變，例如應(yīng)為0. 1-50巴 曲酶單位(以下簡稱BU)的巴曲酶，作為類凝血酶，在成年人類的情況下可以每天給予一 次。成年人類用的優(yōu)選劑量是隔天一次(一個劑量是1-20BU)。在外用制劑的情況下，所述 劑量是 0.01-500mg/g。巴曲酶單位是表示巴曲酶酶活性的單位；2BU是當將0. Iml的巴曲酶溶液加入到 在37°C下的0. 3ml的包含檸檬酸的標準人血漿中時，在19. 0士0. 2秒內(nèi)實現(xiàn)凝血的活性。例如，本發(fā)明的藥劑可以通過以下方式被給予至受試者靜脈滴注，靜脈注射，動 脈內(nèi)注射，肌肉內(nèi)注射，皮下注射，皮內(nèi)注射，心內(nèi)注射，腹腔注射，鞘內(nèi)注射，直腸內(nèi)給藥， 舌下給藥，經(jīng)鼻給藥，經(jīng)皮給藥，將通過用生理鹽水稀釋類凝血酶制備的制劑吸入或局部給 藥到受損的器官和/或組織內(nèi)。通常，優(yōu)選用IOOml或更多的生理鹽水稀釋類凝血酶，并在1小時或更長時間，將其滴注投予受試者。本發(fā)明使用的藥劑為類凝血酶的巴曲酶。巴曲酶對小鼠、大鼠、兔和狗的急性毒性 (LD50(BUAg))如下表1所示。通過靜脈內(nèi)給予巴曲酶評價急性毒性試驗。表1.巴曲酶的急性毒性(i. v.)
動物物種LD50 值(BU/kg)小鼠(ddy)192 210大鼠(Wistar)105 110兔(NW)> 300狗(mongrel)190 208盡管以下通過簡要說明制劑及其實施例而提供了本發(fā)明的詳細說明，但是本發(fā)明 不限于這些制劑和實施例。制劑1使用巴曲酶作為類凝血酶，制備了具有以下組成的減輕抗癌藥的副作用的藥劑。巴曲酶(活性成分)IOBU氯丁醇(防腐劑)3mg明膠水解產(chǎn)物(穩(wěn)定劑) 0. Img氯化鈉(等滲劑)9mg鹽酸(pH調(diào)節(jié)劑)適量注射用蒸餾水調(diào)節(jié)到 Iml總體積Iml實施例1
_3] R ft _ _聽· _命謝牛使用巴曲酶(以下簡稱DF-521)作為類凝血酶，其由北京托畢西藥業(yè)有限公司 (Beijing Tobishi Pharmaceutical Co.，Ltd.)(北京，中國)以東菱迪芙(Dong Ling Di Fu)商品名制備。使用抗癌藥阿霉素(以下簡稱ADM)，其由上海醫(yī)藥(集團)有限公司華聯(lián)制藥廠 (Hualian Pharmaceutical Factory of ShanghaiPharmaceutical (Group) Co. , Ltd)制備。將實驗動物雄性C57BL/6小鼠(體重19_22g)分成三組對照組，阿霉素組(ADM 組)和阿霉素+巴曲酶組(ADM+DF-521組)，每組10只小鼠。對對照組給予生理鹽水。阿霉素組腹腔給予劑量為3mg/kg的阿霉素，隔天一次。對阿霉素+巴曲酶組同時 腹腔給予劑量為3mg/kg的阿霉素和30BU/kg的巴曲酶，隔天一次。給藥共進行18次。在 第一次給予劑量后第41天終止實驗。對死亡數(shù)進行總計，并且從死亡率計算存活率。結(jié)果 如表2所示。表 2
9 *p < 0. 05，與對照組比較。#p < 0.05，與 ADM 組比較。如表2所示，在阿霉素組中有六只小鼠死亡。認為小鼠死亡應(yīng)歸于由阿霉素引起 的諸如骨髓抑制、心毒性等的總體副作用。另一方面，在阿霉素+巴曲酶組中的全部小鼠存 活。該結(jié)果表示阿霉素+巴曲酶組的存活率顯著高于(ρ < 0. 05)阿霉素組的存活率。表 明巴曲酶可以減輕由阿霉素引起的副作用。實施例2■■謝_丨_■果使用巴曲酶(以下簡稱DF-521)作為類凝血酶，其由北京托畢西藥業(yè)有限公司 (北京，中國)以東菱迪芙(Dong Ling Di Fu)商品名制備。使用抗癌藥環(huán)磷酰胺(以下簡稱CPA)，其由山西普德藥業(yè)有限公司(Shanxi Powerdone Pharmaceutical Co.，Ltd.)制備。將實驗動物雄性C57BL/6小鼠(體重20_24g)分成三組對照組，環(huán)磷酰胺組 (CPA組)和環(huán)磷酰胺+巴曲酶組(CPA+DF-521組)，每組5只小鼠。對對照組給予生理鹽 水，隔天一次。對環(huán)磷酰胺組腹腔給予劑量為100mg/kg的環(huán)磷酰胺，隔天一次。對環(huán)磷酰胺 +巴曲酶組同時腹腔給予劑量為100mg/kg的環(huán)磷酰胺和30BU/kg的巴曲酶，隔天一次。在 第四次給藥后(在首次給藥后第7天)，在乙醚麻醉條件下使用EDTA抗凝血劑從股動脈收 集血液，并測量白細胞數(shù)(WBC)、紅細胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白值(Hb)和血小板計數(shù)(Pit)。通過以下過程測量了小鼠的骨髓有核細胞計數(shù)(BMNC)/股骨。從小鼠的2個股骨 取得骨髓樣品，將該骨髓用2ml生理鹽水沖洗，并制備骨髓細胞懸浮液。將20微升的骨髓 細胞懸浮液置于380微升的3%的乙酸溶液中。在破壞紅血細胞后，使用血細胞計數(shù)板在顯 微鏡下進行BMNC計數(shù)。然后計算BMNC計數(shù)/股。將上述BMNC、WBC、RBC、Plt計數(shù)和Hb值作為由環(huán)磷酰胺引起的骨髓抑制的評價 指標。結(jié)果見表3。表3 *p < 0. 05，與對照組比較。 < 0.01，與對照組比較。##p < 0.01，與 CPA 組比較。環(huán)磷酰胺組的BMNC、WBC、RBC計數(shù)顯著低于對照組(ρ < 0. 05或ρ < 0. 01)。另 一方面，環(huán)磷酰胺+巴曲酶組的BMNC和WBC計數(shù)顯著高于環(huán)磷酰胺組的BMNC和WBC計數(shù) (P < 0. 01)。另外，當環(huán)磷酰胺+巴曲酶組的RBC和Plt計數(shù)以及Hb值與環(huán)磷酰胺組的相 應(yīng)指標比較時，沒有觀察到變化。在本實施例中，證實了巴曲酶可以減輕由環(huán)磷酰胺引起的BMNC計數(shù)和WBC計數(shù)的 降低。因此，可以理解，巴曲酶可以減輕由環(huán)磷酰胺引起的骨髓抑制。實施例3Eftilx寸由阿g素弓丨走a的骨 抑泡丨的減輕效果使用巴曲酶(以下簡稱DF-521)作為類凝血酶，其由北京托畢西藥業(yè)有限公司 (北京，中國)以東菱迪芙(Dong Ling Di Fu)商品名制備。使用抗癌藥阿霉素(以下簡稱ADM)，其由上海制藥集團有限公司華聯(lián)制藥廠 (Hualian Pharmaceutical Factory of Shanghai Pharmaceutical (Group) Co. , Ltd)制備。
將實驗動物，雄性C57BL/6小鼠(體重19_22g)分成三組對照組，阿霉素組(ADM 組)和阿霉素+巴曲酶組(ADM+DF-521組)，每組5_10只小鼠(η = 5或10)。對對照組給 予生理鹽水，隔天一次。對阿霉素組腹腔給予劑量為3mg/kg的阿霉素，隔天一次。對阿霉 素+巴曲酶組同時腹腔給予劑量為3mg/kg的阿霉素和30BU/kg的巴曲酶，隔天一次。在第 九次給藥后，終止實驗，在乙醚麻醉條件下使用EDTA抗凝血劑從股動脈收集血液。然后測 量WBC、RBC計數(shù)和Hb值。另外，通過以下過程測量了小鼠的骨髓有核細胞(BMNC)計數(shù)/股骨。從小鼠的2 個股骨取得骨髓樣品，將該骨髓用2ml生理鹽水沖洗，并制備骨髓細胞懸浮液。將20微升 的骨髓細胞懸浮液置于380微升的3%的乙酸溶液中。在破壞紅血細胞后，使用血細胞計數(shù) 板在顯微鏡下進行BMNC計數(shù)。然后計算BMNC計數(shù)/股骨。將上述BMNC、RBC、WBC計數(shù)和Hb值作為由阿霉素引起的骨髓抑制的評價指標。結(jié) 果見表4。表 4
組別ηBMNC (ΧΙΟ6/骨)WBC (X109/L)RBC (XlO1VL)Hb (g/L)對照組511. 4±1. 45. 4±0. 79. 6±0. 2148. 6±2. 2ADM組106. 9 ±1.6**3. 4±0. 7**6. 6±1. 5**94. 9 ±30.ADM+DF-521 組108. 6±1. 9**#3. 5±0. 6"7. 5±0. 5"116. 5 ±7. 9**#
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**p < 0. 01，與對照組比較。#p < 0.05，與 ADM 組比較。在阿霉素組中，BMNC、WBC、RBC計數(shù)和Hb值全部顯著低于對照組(ρ < 0. 01)。另 一方面，阿霉素+巴曲酶組的BMNC計數(shù)和Hb值顯著高于阿霉素組(ρ<0.05)。另外，在阿 霉素+巴曲酶組中的WBC計數(shù)與阿霉素組相比時沒有改變。然而，雖然阿霉素+巴曲酶組 的RBC計數(shù)與阿霉素組相比顯示向上趨勢，但是在這兩組之間沒有統(tǒng)計學顯著差異。在本實施例中，證實了巴曲酶可以減輕由阿霉素引起的BMNC計數(shù)和Hb值的降低。 因此，可以理解，巴曲酶可以減輕由阿霉素引起的骨髓抑制。實施例4巴曲酶對由順鉑引起的骨髓抑制的減輕效果使用巴曲酶(以下簡稱DF-521)作為類凝血酶，其由北京托畢西藥業(yè)有限公司 (北京，中國)以東菱迪芙(Dong Ling Di Fu)商品名制備。使用抗癌藥順鉬(以下簡稱DDP)，其由云南個舊生物化學醫(yī)藥有限公司制備。將實驗動物雄性C57BL/6小鼠(體重20_22g)分成三組對照組，順鉬組(DDP 組)和順鉬+巴曲酶組(DDP+DF-521組)，每組10只小鼠。對對照組給予生理鹽水，隔天一 次。對順鉬組腹腔給予劑量為0.8mg/kg的順鉬，隔天一次。對順鉬+巴曲酶組同時腹腔給 予劑量為0. 8mg/kg的順鉬和30BU/kg的巴曲酶，隔天一次。在第17次給藥后(在首次給 藥后第33天)，終止實驗。在乙醚麻醉條件下使用抗凝血劑EDTA從股動脈收集血液，并測 量WBC、RBC、Plt計數(shù)和Hb值。另外，通過以下過程測量了小鼠的骨髓有核細胞(BMNC)計數(shù)/股骨。從小鼠的2 個股骨取得骨髓樣品，將該骨髓用2ml生理鹽水沖洗，并制備骨髓細胞懸浮液。將20微升 的骨髓細胞懸浮液置于380微升的3%的乙酸溶液中。在破壞紅血細胞后，使用血細胞計數(shù) 板在顯微鏡下進行BMNC計數(shù)。然后計算BMNC計數(shù)/股骨。將上述BMNC、WBC、RBC、Plt計數(shù)和Hb值作為由順鉬引起的骨髓抑制的評價指標。 結(jié)果見表5。表 5 *p < 0. 05，與對照組比較。**p < 0. 01，與對照組比較。#p < 0.05，與 DDP 組比較。##p < 0.01，與 DDP 組比較。順鉬組的BMNC和Plt計數(shù)顯著低于對照組(ρ < 0. 01)。但是，順鉬組的WBC、RBC計數(shù)和Hb值與對照組相比沒有改變。另一方面，順鉬+巴曲酶組的BMNC和Plt計數(shù)顯著 高于順鉬組的BMNC和Plt計數(shù)(ρ < 0. 05)。另外，雖然順鉬+巴曲酶組的RBC計數(shù)和Hb 值顯著高于順鉬組的相應(yīng)指標(P < 0. 05和ρ < 0. 01)，但是在順鉬+巴曲酶組與順鉬組之 間的WBC計數(shù)方面沒有差異。在本實施例中，證實了巴曲酶可以減輕由順鉬引起的BMNC和Plt計數(shù)的降低。因 此，可以理解，巴曲酶可以減輕由順鉬引起的骨髓抑制。實施例5聽弓細心謝牛_■果使用巴曲酶(以下簡稱DF-521)作為類凝血酶，其由北京托畢西藥業(yè)有限公司 (北京，中國)以東菱迪芙(Dong Ling Di Fu)商品名制備。使用抗癌藥阿霉素(以下簡稱ADM)，其由深圳萬樂藥業(yè)有限公司(Main Luck Pharmaceuticals Inc. )將實驗動物C57BL/6雄性小鼠(體重16_18g)分成四組對照組(10只小鼠)，巴 曲酶組(7只小鼠)，阿霉素組(7只小鼠)，和阿霉素+巴曲酶組(7只小鼠)。對每組小鼠 進行脊背右側(cè)皮下注射在0. 3ml的腫瘤細胞懸浮液中的3 X IO6個B16-BL6鼠惡性黑色素 瘤細胞的接種。在腫瘤細胞接種一天后，對對照組腹腔注射生理鹽水，一天一次；對巴曲酶 組腹腔注射巴曲酶(20BU/kg)，一天一次；對阿霉素組腹腔注射阿霉素(3mg/kg)，間隔兩天 一次；對阿霉素+巴曲酶組腹腔注射阿霉素(3mg/kg)，間隔兩天一次，和在給予阿霉素之后 腹腔注射20BU/kg巴曲酶，一天一次。在20天連續(xù)給藥后，在乙醚麻醉條件下摘除每組的 心臟。在心臟組織用福爾馬林固定后，制備用石蠟包埋的切片，并進行蘇木精-曙紅(H&E) 染色。在光學顯微鏡下對經(jīng)過染色的心臟組織切片進行病理學檢查。在巴曲酶組的左心室心肌組織中(圖2)，與對照組的左心室心肌組織比較時未發(fā) 現(xiàn)異常。另一方面，在阿霉素組的左心室心肌組織中(圖3)，與對照組相比觀察到異常。特 別是心肌細胞排列雜亂，并且觀察到被稱作收縮帶(箭頭A)的病理組織。在收縮帶中，一 些心肌細胞強烈收縮，導(dǎo)致凝集變成波浪排列，以及心肌纖維的常規(guī)條紋狀結(jié)構(gòu)消失，而是 形成了嗜酸性增厚帶，其具有心肌細胞無規(guī)則間隔的結(jié)構(gòu)。另外，在許多心肌細胞中發(fā)生肌 漿裂解或喪失，并且細胞漿染色變薄。而且，在心肌細胞中，發(fā)生了細胞浮腫或嗜酸變性和 壞死(箭頭B)，胞間隙變寬，在心肌細胞基質(zhì)中出現(xiàn)浮腫(箭頭C)。這些異常導(dǎo)致心肌病， 引起充血性心力衰竭，并從而充當心毒性的指示指標。相比之下，阿霉素+巴曲酶組的左心室心肌組織(圖4)沒有在阿霉素組中所見 到的心肌間質(zhì)性水腫或收縮帶形成。另外，雖然在少量心肌細胞中看到了細胞漿溶出(箭 頭)，但是很少看見嗜酸變性。在本實施例中證實了，在阿霉素+巴曲酶組的心肌組織中的異常程度低于阿霉素 組。因此，可以理解，巴曲酶可以減輕由阿霉素引起的心毒性。工業(yè)實用性本發(fā)明可以顯著減輕抗癌藥的副作用。因此，本發(fā)明可被用于使用抗癌藥進行的 癌癥治療中。
權(quán)利要求
減輕抗癌藥副作用的藥劑，其中所述藥劑含有類凝血酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的減輕副作用的藥劑，其中所述類凝血酶是從纖維蛋白原生成纖維 蛋白I的蛋白酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的減輕副作用的藥劑，其中所述類凝血酶選自巴曲酶、安克洛酶和 克洛他酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的減輕副作用的藥劑，其中所述類凝血酶是巴曲酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的減輕副作用的藥劑，其中所述抗癌藥是細胞毒類抗癌藥。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的減輕副作用的藥劑，其中所述細胞毒類抗癌藥選自烷基化藥物、 抗癌抗生素和鉬基藥物。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的減輕副作用的藥劑，其中所述細胞毒類抗癌藥選自環(huán)磷酰胺、阿 霉素和順鉬。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的減輕副作用的藥劑，其中所述副作用是由抗癌藥所引起的骨髓抑 制或心毒性。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的減輕副作用的藥劑，其中所述副作用是由細胞毒類抗癌藥所引起 的骨髓抑制。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的減輕副作用的藥劑，其中所述細胞毒類抗癌藥選自烷基化藥物、 抗癌抗生素和鉬基藥物。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的減輕副作用的藥劑，其中所述細胞毒類抗癌藥選自環(huán)磷酰胺、阿 霉素和順鉬。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的減輕副作用的藥劑，其中所述副作用是由抗癌抗生素所引起的 心毒性。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的減輕副作用的藥劑，其中所述抗癌抗生素是阿霉素。
14.一種用于受試者的、減輕抗癌藥副作用的方法，包括對該受試者給予有效量的類凝 血酶。
15.類凝血酶用于制備減輕抗癌藥副作用的藥劑的應(yīng)用。全文摘要
本發(fā)明提供了含有類凝血酶的、減輕抗癌藥副作用的藥劑。
文檔編號A61K31/675GK101896193SQ200880120378
公開日2010年11月24日 申請日期2008年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月14日
發(fā)明者萬永玲, 千賀博文 申請人:東菱藥品工業(yè)株式會社