糖原磷酸化酶抑制劑化合物和其藥物組合物的制作方法

專利名稱：糖原磷酸化酶抑制劑化合物和其藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及糖原磷酸化酶抑制劑化合物，該化合物的藥物組合物，該化合物或包 含其的藥物組合物在治療糖尿病、與糖尿病相關的病癥、和/或組織缺血(包括心肌缺血) 中的用途，和制備該化合物的方法。
背景技術：
糖尿病的治療仍然是世界許多地方關注的健康問題。與自我注射胰島素相比，具 有最小不良副作用的口服攝取的藥物是所需要的。因此對藥物具有持續的需要，要求該藥 物效果更好、副作用更小、作用時間更長或通過不同的機理起作用。許多藥物適合治療糖尿病。這些包括注射胰島素和口服攝取的藥物例如磺酰脲、 格列甲嗪、甲苯磺丁脲(Tobutamide)、醋酸己脲、tolazimide、雙縮胍和二甲雙胍(格華 止)。在口服攝取藥物沒有效果的糖尿病患者中，需要自我注射胰島素。患有I型糖尿病的 患者(還稱為胰島素依賴型糖尿病)通常用自我注射胰島素的方式治療。患有II型糖尿 病的患者(還稱為非胰島素依賴型糖尿病)通常用飲食、鍛煉和口服藥劑的組合方式進行 治療。當口服藥劑失敗時，可以使用胰島素。當口服糖尿病藥物時，通常需要多個日劑量。胰島素的合適劑量的測定需要頻繁測試患者尿和/或血液中的糖水平。給予過度 劑量胰島素通常導致血糖過低癥，其具有范圍從血液葡萄糖輕微異常至昏迷或甚至死亡的 癥狀。同樣，口服攝取藥物并不是沒有不良的副作用。例如，這種藥物可能在一些患者中無 效，并且在其它個體中引起胃腸紊亂或削弱正常肝功能。因此，始終需要改進的藥物，要求 其具有更小的副作用，和/或，在其它藥物無效的情況下，改進的藥物可以取得成功。在II型或非胰島素依賴型糖尿病中，肝臟的葡萄糖產物(production)是重要的 目標。在禁食狀態下，肝是血漿葡萄糖水平的主要調節劑。當與非糖尿病個體相比時，在II 型患者中，肝臟的葡萄糖產物的比例典型地顯著升高。對于II型糖尿病，在進餐或餐后狀 態下，肝臟在全部血漿葡萄糖提供方面的作用成比例地減小，并且肝臟的葡萄糖產物異常 地高。肝臟通過糖原分解(葡萄糖聚合物糖原的分解)和糖原異生(用2-和3-碳前體 物合成葡萄糖)來產生葡萄糖。因此，糖原分解是中斷肝臟葡萄糖產物的重要靶向。在II 型糖尿病患者中，一些證據表明，糖原分解有助于不合適的肝葡萄糖輸出。患有肝臟糖原儲 存疾病例如赫斯氏癥或糖原磷酸化酶缺乏的個體常常表現出陣發性血糖過低癥。進一步 的，在達到正常吸收后狀態的人中，估計高達大約75%的肝臟葡萄糖產物是由糖原分解引 起的。通過糖原磷酸化酶的組織特異性異構型，糖原分解在肝臟、肌肉和腦中進行。這種 酶將糖原大分子斷裂，釋放葡糖-1-磷酸，并且縮短糖原大分子。糖原磷酸化酶抑制劑包括葡萄糖和它的類似物，咖啡因及其它嘌呤類似物，帶有 各種取代基的環胺，酰基脲和吲哚類化合物。通常，已經假定這些化合物和糖原磷酸化酶抑 制劑可以通過減少肝臟葡萄糖產物和降低血糖而具有治療II型糖尿病的應用遠景。此外， 認為糖原磷酸化酶抑制劑對血液中的葡萄糖濃度敏感是合乎需要的。
相應地，所需要的是新化合物和包含其的藥物組合物，其用于治療糖尿病和/或 與糖尿病相關的病癥。本發明概述本發明提供了式I的化合物， 其鹽、溶劑化物或生理學的功能化衍生物。還提供了包含式I化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物的藥物組合物。進一步的，提供了包含式I化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物和一或 多種賦形劑的藥物組合物。本發明更進一步提供了一種治療方法，該治療方法包括給予哺乳動物(尤其是 人)包含式I化合物、其可藥用鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物和至少一種賦形劑的藥 物組合物，其中所述治療用于選自下列的疾病或病癥糖尿病、與糖尿病相關的病癥和組織 缺血，包括心肌缺血。另外，提供了式I化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物作為活性治療物 質的用途(在治療中)。還提供了式I化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物在治 療哺乳動物(尤其是人)的糖尿病、與糖尿病相關病癥和/或組織缺血(包括心肌缺血) 中的用途。還提供了式I化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物的制備方法。本發明的詳細說明在肌肉組織中，糖原磷酸化酶的活性對于葡萄糖的產生和隨后的能量需要是重要 的。在鍛煉的時候，抑制肌糖原磷酸化酶可以導致肌無力和肌肉組織損傷。因此，合乎需 要的是擁有本發明的化合物，當口服給予哺乳動物時，與肌肉相比較，其對肝臟中的糖原磷 酸化酶顯示了更大的效果。口服給藥之后，本發明的化合物對肝臟糖原含量顯示了強烈的 效果，而對肌糖原含量與功能只有很少的效果。因此，鑒于本發明化合物對肝臟組織的選擇 性，其顯示出有效的體內活性，具有可接受的溶解性和生物利用率特性，以及具有改善的安 全/毒性特性。本發明提供了式I的化合物 其鹽、溶劑化物或生理學的功能化衍生物。式I化合物的化學名稱是0_(1， 1-二甲基乙基)-N-({2-{[({2，6-二甲基-4-[(甲氧基)甲基]苯基}氨基)羰基]氨 基}-4-[6-(甲氧基)-3_吡啶基]苯基}羰基)蘇氨酸。式I的化合物或其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物可以立體異構形式存在 (例如，它包含一個或多個不對稱碳原子)。各別立體異構體(對映體和非對映體)和這些 的混合物包括在本發明范圍內。本發明還包括式I所代表化合物(鹽、溶劑化物或生理學 功能化衍生物)的各別異構體與其異構體的混合物形式，在異構體中，一個或多個手性中 心是翻轉的。同樣，可以理解，式I的化合物(鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物)可以 不同于該式所示的互變異構形式存在，并且這些也包括在本發明范圍內。應該理解，本發明 包括上文所定義的具體組別的所有組合和亞組。本發明的范圍包括立體異構體的混合物以 及純對映體或對映體/非對映體富集的混合物。還包括在本發明范圍內的是式I所代表化 合物的各別的異構體以及其任何完全或部分平衡的混合物。本發明還包括該式所代表的化 合物、鹽、溶劑化物或衍生物的各別異構體以及其與異構體的混合物，在異構體中，一個或 多個手性中心是翻轉的。應該理解，本發明包括上文所定義的具體組別的所有組合和亞組。化合物的優選立體化學示于下面的式IA中 本領域技術人員可以理解，還可以使用本發明化合物的可藥用鹽、溶劑化物或生 理學功能化衍生物形式。典型地(但不是絕對地)，本發明的鹽是可藥用鹽。包括在術語“可藥用鹽”內的 鹽指的是本發明化合物的無毒鹽。本發明化合物的鹽可以包括由可藥用無機或有機酸或堿 形成的常規鹽以及季銨鹽。這些鹽可以包括酸加成鹽。通常，鹽由可藥用無機和有機酸形 成。合適酸式鹽的更具體例子包括鹽酸鹽，氫溴酸鹽，硫酸鹽，磷酸鹽，硝酸鹽，高氯酸鹽，富 馬酸鹽，乙酸鹽，丙酸鹽，琥珀酸鹽，乙二醇酸鹽，甲酸鹽，乳酸鹽，油酸(aleic)鹽，酒石酸鹽，檸檬酸鹽，棕櫚酸鹽，丙二酸鹽，羥基馬來酸鹽，苯乙酸鹽，谷胺酸鹽，苯甲酸鹽，水楊酸鹽，腐殖酸(fumic)鹽，甲苯磺酸鹽，甲磺酸鹽，萘-2-磺酸鹽，苯磺酸鹽，羥基萘酸鹽，氫碘 酸鹽，蘋果酸鹽，蝶酸(teroic)鹽，鞣酸鹽，硬脂酸(steroic)鹽，等等。其它酸例如草酸和三氟乙酸鹽，盡管本身不是可藥用的，但可以用于制備用作中 間體的鹽，由此中間體獲得本發明的化合物和它的可藥用鹽。合適堿式鹽的更具體例子包 括鈉鹽，鋰鹽，鉀鹽，鎂鹽，鋁鹽，鈣鹽，鋅鹽，N, N' -二芐基乙二胺鹽，氯普魯卡因鹽，膽堿 鹽，二乙醇胺鹽，乙二胺鹽，N-甲葡糖胺鹽和普魯卡因鹽。其它代表性的鹽包括乙酸鹽，苯磺酸鹽，苯甲酸鹽，酒石酸氫鹽，硼酸鹽，乙二胺四 乙酸鈣，右旋樟腦磺酸鹽，碳酸鹽，克拉維酸鹽，檸檬酸鹽，乙二磺酸鹽，丙酸酯十二烷基硫 酸鹽，乙磺酸鹽，富馬酸鹽，葡庚糖酸鹽，葡糖酸鹽，谷氨酸鹽，對α -羥乙酰氨基苯砷酸鹽， 己基間苯二酚鹽，氫溴酸鹽，鹽酸鹽，羥基萘酸鹽，碘化物，羥乙基磺酸鹽，乳酸鹽，乳糖酸 鹽，月桂酸鹽，蘋果酸鹽，馬來酸鹽，苦杏仁酸鹽，甲磺酸鹽，甲基硫酸鹽，單鉀馬來酸鹽，粘 酸鹽，萘磺酸鹽，硝酸鹽，草酸鹽，雙羥萘酸鹽，棕櫚酸鹽，泛酸鹽，磷酸鹽/磷酸氫鹽，多聚 半乳糖醛酸鹽，水楊酸鹽，硬脂酸鹽，堿式乙酸鹽，琥珀酸鹽，硫酸鹽，丹寧酸鹽，酒石酸鹽， 茶氯酸鹽，甲苯磺酸鹽，三乙基碘化物和戊酸鹽。本文使用的術語“溶劑化物”是指由溶質(在本發明中是指式I的化合物、其鹽或 生理學功能化衍生物)和溶劑形成的化學計量的復合物。對本發明目的來說，這種溶劑不 能妨礙溶質的生物活性。合適溶劑的非限制性例子包括但不局限于水、甲醇、乙醇和乙酸。 優選，使用的溶劑是可藥用溶劑。最優選，使用的溶劑是水，和溶劑化物是水合物。本文使用的術語“生理學功能化衍生物”是指本發明化合物的任何可藥用衍生 物，當給予哺乳動物時，其能夠提供(直接或間接)本發明的化合物或其活性代謝物。這 種衍生物，例如酯和酰胺，不用過度實驗，本領域技術人員就很清楚。可以參照Burger的 Medicinal Chemistry andDrug Discovery，第五片反，第 1 卷Principles and Practice 的 教導，將其教導的生理學功能化衍生物與本文結合作為參考。制備式I化合物的可藥用鹽、溶劑化物和生理學功能化衍生物的方法在本領域通 常是己知的。參見例如，Burger' s Medicinal Chemistry andDrug Discovery，第五版， 第一卷Principles and Practice。式I化合物(鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物)可以方便地通過下面列出的 方法制備。先前的步驟的順序對本發明的實踐不是關鍵性的，并且該方法可以基于本領域 技術人員的認識，以任何合適順序進行各個步驟。另外，一些描述的步驟可以合并，不用分 離所有的中間體化合物。合成式I化合物的一種一般方法列在下面的反應路線1中。在標準條件下，使用 催化劑例如但不局限于二氯雙(三環己基膦)鈀(II)或二氯雙(三苯基膦)鈀(II)或四 (三苯基膦)鈀，在溶劑例如乙腈或DME和水中，在堿例如氟化銫或碳酸鈉的存在下，可商購 的起始原料4-氯-2-硝基苯甲酸甲酯⑵和[6-(甲氧基)-3_吡啶基]硼酸(3)可以偶 合，得到中間體4。在堿性條件下(例如氫氧化鋰或氫氧化鈉)，在包含四氫呋喃(THF)和 /或甲醇(MeOH)和/或水和/或1，4_ 二噁烷的溶劑中，中間體4的酯進行水解，得到相應 的羧酸(5)。中間體7是如下形成的在標準偶合條件下，羧酸(5)與0-(1，1_ 二甲基乙基)-L-蘇氨酸甲酯(6)或它的鹽酸鹽混合。這些條件包括但不局限于在室溫下，使用 EDC(1-乙基-3_(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽)，PyBop(苯并三唑-1-基-氧 基-三-吡咯烷基_磷鐺六氟磷酸鹽)，PyBrOP (溴-三-吡咯烷基磷鐺六氟磷酸鹽)， HOBT (N-羥基苯并三唑)，HOAT (N-羥基-9-氮雜苯并三唑)，或DIC (N，N' -二異丙基碳二亞 胺)，或HATU (2- (1H-9-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽)和DIEA (N， N-二異丙基乙胺)或三乙胺。可以使用的溶劑包括DMS0、NMP或優選DMF。在優選方法中， 在1-丙烷膦酸環酐和有機堿例如DIEA或三乙胺的存在下，中間體5和6與乙酸乙酯混合， 得到中間體7。 在標準條件下，例如但不局限于用鈀/碳處理，在氫氣氛圍下，在溶劑例如乙酸 乙酯或甲醇中，將7的硝基還原，得到中間體8。中間體10如下形成在溶劑例如DMF中，中間體8與異氰酸酯(中間體9 (下面列 出的合成方法，參見反應路線2))和二異丙基乙胺(DIEA)或三乙胺混合。優選，中間體8 和9在吡啶中混合，得到中間體10。最終產物如下形成在堿性條件(例如氫氧化鋰或氫氧化鈉)下，在溶劑(包括四 氫呋喃(THF)和/或甲醇(MeOH)和/或水和/或1，4-二噁烷)中，中間體10的酯進行裂解。反應路線1 式I化合物的合成 式I的其它異構體的合成可以通過使用相應的式6的異構體(包括外消旋體)來 實現。合成中間體9的一種一般方法列在下面的反應路線2中。在三氟化硼_乙醚絡合 物的存在下，用硼氫化鈉將11還原，得到中間體12。中間體12的甲基化可以通過(在溶 劑例如DMF或NMP中，用堿例如氫化鈉處理，而后用甲基化劑例如碘甲烷或硫酸二甲酯處 理)來進行，得到中間體13。同樣，在氫氧化鈉水溶液和芐基三乙基氯化銨的存在下，在甲苯(兩相系統)中，使12與硫酸二甲酯反應，得到中間體13。在另一種方法中，使用標準條 件，例如在二氯甲烷中用三溴化磷處理，中間體12可以轉變為相應的溴化物。通過在甲醇 中用甲醇鈉處理，得到的溴化物可以轉變為中間體13。中間體13的還原可以通過(在溶劑 例如乙醇和/或水中，用鋅和堿例如氫氧化鈉處理)來進行，得到中間體14。在另一個方法 中，中間體13的還原可以在溶劑例如乙醇中通過用PtO2和氫處理來進行。然后，在溶劑例 如二氯甲烷中，用光氣或三光氣和堿例如DIEA處理中間體14，獲得中間體9。反應路線2 中間體9的合成 本發明進一步提供了包含式I化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物和 一或多種賦形劑(在藥學領域還稱為載體和/或稀釋劑)的藥物組合物(還稱為藥物制 齊U)。賦形劑是可接受的，即與制劑的其它組分不矛盾，并且對其接受者(即，患者)無害。按照本發明的另一個方面，提供了制備藥物組合物的方法，該藥物組合物包含式I 化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物與至少一種賦形劑的混合物(或摻和物)。藥物組合物可以是單位劑量形式，每單位劑量含有預先確定數量的活性組分。這 種單位可以包含治療有效量的式I化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物，或治療 有效量的一部分，這樣的話，可以在指定時刻給予多個單位劑型，從而獲得所需要的治療有 效劑量。優選的單位劑量制劑是含有本文上面列舉的活性組分的日劑量或亞劑量、或其合 適部分的那些制劑。此外，這種藥物組合物可以利用藥學領域眾所周知的任何方法制備。藥物組合物可以適合于通過任何合適的途徑來給予，例如，口服(包括口腔或舌 下)、直腸、鼻部、局部(包括口腔、舌下或透皮)、陰道或腸胃外(包括皮下，肌注，靜脈內或 真皮內)途徑。這種組合物可以通過藥學領域已知的任何方法制備，例如使活性組分與賦 形劑結合。適合于口服的藥物組合物可以是離散的單元劑型，例如膠囊或片劑；粉劑或顆粒 劑；在水或非水液體中的溶液劑或混懸劑；食用泡沫體或whips ；水包油型液體乳劑或油包 水液體乳劑。本發明的化合物(鹽、溶劑化物或衍生物)或本發明的藥物組合物還可以結 合進糖果、餅干和/或舌用條形制劑中，以“快速溶解”藥物形式給予。例如，用于口服形式的片劑或膠囊，活性藥物組份可以與口服無毒的可藥用惰性 載體例如乙醇、丙三醇、水等等結合。粉劑或顆粒劑可以如下制備將化合物粉碎為合適細 粒，并與類似粉碎的藥學載體例如食用碳水化合物例如淀粉或甘露糖醇混合。還可以存在 調味劑、防腐劑、分散劑和著色劑。
膠囊可以如下制備制備如上所述的粉末混合物，并填充到成形的凝膠或非凝膠 的殼中。可以將助流劑和潤滑劑例如膠態硅石、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二 醇加入到粉末混合物中，而后進行填充。當攝取膠囊時，還可以加入崩解或增溶劑例如瓊 月旨、碳酸鈣或碳酸鈉，以提高藥物的利用率。此外，當要求或需要時，還可以將合適粘合劑、潤滑劑、崩解劑和著色劑結合進混 合物中。合適的粘合劑包括淀粉，凝膠，天然糖例如葡糖或乳糖，玉米甜味劑，天然和合 成膠例如阿拉伯膠、黃芪膠、海藻酸鈉、羧甲纖維素、聚乙二醇、石蠟等等。用于這些劑型中 的潤滑劑形式包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等等。崩解劑包 括但不限于淀粉、 甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠等等。如下配制片劑例如制備粉末混合物，造粒或制成棒條，加入潤滑劑和崩解劑，并 擠壓成為片劑。如下制備粉劑混合物將合適粉碎的化合物與如上所述的稀釋劑或基質混 合，任選與下列混合粘合劑例如羧甲纖維素、和藻酸鹽、凝膠或聚乙烯吡咯烷酮，溶液阻滯 劑例如石蠟烴、再吸收促進劑例如季鹽和/或吸收劑例如膨潤土、高嶺土或磷酸二鈣。可以 將粉末混合物用如下方式進行造粒用粘合劑例如糖漿、淀粉糊、acadia膠漿或纖維素或 聚合物質的溶液濕潤，并迫使其通過篩。作為造粒的替代性方法，可以使粉末混合物流過壓 片機，結果是，不完全成形的棒條被破裂成顆粒。借助于加入硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石粉或礦 物油，可以將顆粒潤滑，以防止粘住片劑胎模。然后將潤滑的混合物壓縮成片劑。還可以將 本發明的化合物(鹽、溶劑化物或衍生物)與自由流動的惰性載體結合，并直接壓縮成片 齊U，不用經歷造粒或形成棒條步驟。可以提供清潔的或不透明防護包衣(由密封的片膠包 衣、糖包衣或聚合材料包衣和石蠟的拋光包衣組成)。可以將染料加入到這些包衣中，以區 別不同的劑型。可以制備劑量單位形式的口服液體，例如溶液、糖漿和酏劑，以使給定數量包含預 定數量活性組分。可以通過將本發明的化合物(鹽、溶劑化物或衍生物)溶解在合適調味的水溶液 中來制備糖漿劑，而酏劑是通過使用無毒的醇賦形劑來制備的。可以通過將本發明的化合 物(鹽、溶劑化物或衍生物)分散在無毒的賦形劑中來制備混懸劑。還可以加入增溶劑和乳化劑(例如乙氧基化異十八烷醇和聚氧乙烯山梨糖醇 醚)、防腐劑、調味添加劑(例如薄荷油、天然甜味料、糖精或其它人工甜味料)，等等。如果合適的話，口服劑量單位制劑可以是微囊密封的。還可以制備延長釋放或持 續釋放的制劑，例如，用聚合物、石蠟等等將顆粒性物質包衣或使顆粒性物質嵌入。在本發明中，優選，遞送的藥物組合物是片劑和膠囊。本文使用的術語“治療”包括預防，并且是指在先前患病的或確診的患者或受試 者中，減輕具體病癥、消除或減輕病癥的一或多種癥狀、減緩或消除病癥的發展、和防止或 延遲癥狀的復發。預防(或預防或延遲疾病發作)典型地是通過給予藥物來實現的，給藥方式與形 成疾病或癥狀的患者的給藥方式相同或類似。本發明提供了治療患有糖尿病或相關病癥的哺乳動物(尤其是人)的方法，相關 病癥例如肥胖癥，綜合癥X，胰島素抗性，糖尿病性腎病，糖尿病性神經病變，糖尿病性視網 膜病，高血糖癥，高膽固醇血癥，高胰島素血癥，高脂質血癥，心血管疾病，中風，動脈粥樣硬化，脂蛋白障礙，高血壓癥，組織缺血，心肌缺血和憂郁癥。這種治療包括給予所述哺乳動物 (尤其是人)治療有效量的式I化合物、其鹽、其溶劑化物或其生理學功能化衍生物的步驟。 治療還可以包括給予所述哺乳動物(尤其是人)治療有效量的藥物組合物，該藥物組合物 包含式I化合物、其鹽、其溶劑化物或其生理學功能化衍生物。本文使用的術語“有效量”是指藥物或藥學試劑的數量，該數量可以引起例如研究 人員或臨床醫師所探求的組織、系統、動物或人的生物學或醫學響應。術語“治療有效量”是指任何數量，其與沒有接受這種數量的相應患者相比較，可 導致疾病、病癥或副作用的改進的治療、醫治、預防或改善，或降低疾病或病癥的發展速度。 該術語也包括在其有效增強正常生理功能的范圍數量之內。當用于治療時，可以以原料化學品形式給予治療有效量的式I化合物以及其鹽、 溶劑化物和生理學功能化衍生物。另外，活性組分可以以藥物組合物形式提供。用于治療時，盡管可以以原料化學品形式給予治療有效量的式I的化合物(其鹽、 溶劑化物或生理學功能化衍生物)，但典型地以藥物組合物或制劑的活性組分形式提供。本發明化合物(鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物)的確切治療有效量取決于 許多因素，包括但不限于所治療目標(患者)的年齡和重量，需要治療的確切病癥和它的 嚴重程度，藥學制劑/組合物的性質和給藥途徑，并且最終按照主治醫師或獸醫的判斷。典 型地，用于治療的式I化合物(其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物)的給藥范圍為每 天大約0. 1至100mg/kg接受者(患者，哺乳動物)體重，且更通常在每天0. 1至10mg/kg 體重范圍內。可接受的日劑量可以從大約1至大約IOOOmg/天，優選大約1至大約IOOmg/ 天。可以以每天單一劑量形式給予該數量，或每天給予一定數目(例如兩個、三個、四個、五 個或更多)的亞劑量，以使總的日劑量是相同的。其鹽、溶劑化物或生理學地功能化衍生物 的有效量可以按照式I化合物本身的有效量比例來確定。類似的劑量應該能夠適合于治療 (包括預防)本文關于治療中所提及的其它病癥。通常，藥物或藥學領域技術人員可以容易 地決定合適的劑量。另外，本發明包括式I化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物或其與至少 一種其它抗糖尿病藥物的藥物組合物。這種抗糖尿病藥物可以包括，例如，注射的胰島素和 藥物例如磺酰脲，噻唑烷二酮，格列甲嗪，格列美脲，甲苯磺丁脲(Tobutamide)，醋酸己脲， 要拉磺脲(tolazimide)，雙縮胍，羅格列酮，二甲雙胍(格華止)，西他列汀(sitagliptin) (Januvia)鹽或其組合，等等，它們是口服攝取的藥物。當本發明的化合物與另一種抗糖尿 病藥物組合使用時，本領域技術人員可以理解，組合中的每個化合物或藥物的劑量可以不 同于該藥物或化合物單獨使用時的劑量。本領域技術人員可以容易地理解和確定合適的劑 量。為了獲得所需要的組合治療效果，應該選擇式I化合物(其鹽、溶劑化物、生理學功能 化衍生物)和其它治療活性劑的合適劑量和給藥的相對時機，并且在主治醫師或臨床醫師 的專業知識和判斷力范圍 內。實驗下列實施例僅供說明之用，不以任何方式限制本發明的范圍，本發明由權利要求 書進行定義。除非另作說明，試劑可以商購或可按照文獻中的方法制備。實施例1 式IA化合物的制備0-(1，1_ 二甲基乙基)-N-({2-|Tl2，6-二甲基-4-[(甲氧基)甲基]苯基}氨基)羰基]氨基}-4-[6-(甲氧基)-3-吡啶基]苯基} 羰基)-L-蘇氨酸步驟1.4-「6-(甲氧基)-3_吡啶基]-2-硝基苯甲酸甲酯將兩個微波管瓶中的每個中裝入4-氯-2-硝基苯甲酸甲酯(0.5g，2.32mmol)、 [6-(甲氧基)-3-吡啶基]硼酸(0. 51g，3. 48mmol)、二氯雙(三環己基膦)鈀(II) (0. 137g， 0.186mmol)和氟化銫(1. 76g，11. 6mmol)。向每個管瓶中加入乙腈(9mL)和水(1. 5mL)。在 150°C將每個管瓶加熱6分鐘。冷卻至室溫后，將管瓶的內含物合并，用乙酸乙酯(IOOmL)稀 釋，用50%鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，減壓濃縮。將該物質與另一個0. 5g規模(4-氯-2-硝 基苯甲酸酯)反應物合并，在硅膠上進行色譜(己烷/乙酸乙酯)，得到2. Og產物黃色油。 1H NMR (400MHz, CDCI3) δ ppm :8· 44 (s，1H)，8. 01 (s，1H)，7. 87-7. 80 (m，3H)，6. 88 (d，J = 8. 7Hz, 1H)，4. 01 (s，3H)，3. 94 (s, 3H)。步驟2. 4-[6-(甲氧基)-3-吡啶基]-2-硝基苯甲酸將氫氧化鋰一水合物(1.748g，41.6mmol)在水(15mL)中加入到4-[6-(甲氧 基)-3_吡啶基]-2-硝基苯甲酸甲酯(2. Og,6. 94mmol)的THF(50mL)和甲醇(20mL)溶液 中。將混合物在室溫下攪拌大約4. 5小時。用INHCl水溶液(IOOmL)酸化反應混合物，用 乙酸乙酯提取。用硫酸鈉干燥有機相，過濾，減壓濃縮，得到1.9g(100%產率)灰白色固 體。1H NMR(400MHz, DMS0_d6) δ ppm 13. 9(brs, 1H)，8· 65 (d, J = 2. 7Hz, 1Η)，8· 27 (d, J =
1.6Hz, 1Η)，8· 18 (dd, J = 2. 6,8. 7，1Η)，8· 08 (dd, J = 1. 9. 8. OHz, 1Η)，7. 94 (d, J = 8. IHz, 1Η)，6. 97 (d, J = 8. 6Ηζ，1Η)，3. 91(s，3H)。步驟3. 0-(1，1- 二甲基乙基)-N-({4-[6_(甲氧基)_3_吡啶基]_2_硝基苯基} 羰基)-L-蘇氨酸甲酯將HATU(3.95g，10.4mmol)加入到4_[6_(甲氧基)_3_吡啶基]_2_硝基苯甲酸 (1.90g,6. 93謹ol)、0-(l，l-二甲基乙基)-L-蘇氨酸甲酯鹽酸鹽(1. 72g,7. 6mmol)和二異 丙基乙胺(1. 79g，13. 86mmol)的DMF(IOOmL)溶液中。將混合物在室溫下攪拌大約24小 時。減壓除去大部分DMF，并將殘余物溶于乙酸乙酯(IOOmL)中，用IN HCl (50mL)、飽和碳酸 氫鈉(50mL)和鹽水(50mL)洗滌。用硫酸鈉干燥乙酸乙酯相，過濾，減壓濃縮。在硅膠上進 行色譜(己烷/乙酸乙酯)，得到2. 9g(94%產率)產物淡黃色油。1H NMR (400MHz,⑶Cl3) δ ppm 8. 44 (d, J = 2. 6Hz，1H)，8. 21 (d，J = 1. 9Hz，1H)，7. 85-7. 81 (m，2H)，7. 73 (d，J = 7. 8Hz, 1H)，6· 89(d, J = 8. 7Hz, 1H)，6. 66(d, J = 9. 5Hz, 1H)，4. 76(dd, J = 1. 7,9. 3Hz, 1H)， 4. 36(m，lH)，4.01(s，3H)，3. 79 (s，3H)，1. 36 (d，J = 6. 3Hz，3H)，l. 13(s，9H)。步驟4. N- ({2-氨基-4- [6-(甲氧基)_3_吡啶基]苯基}羰基)_0_ (1，1_ 二甲基 乙基)-L-蘇氨酸甲酯在氮氣氛圍下，將鈀(10 %，在碳上，2. Og)加入到0-(1，1_ 二甲基乙 基)-N-({4-[6-(甲氧基)-3_吡啶基]-2-硝基苯基}羰基)-L-蘇氨酸甲酯(2.90g， 6. 51mmol)的甲醇(125mL)溶液中。將反應排氣，并用氫氣吹掃。然后在氫氣氛圍下攪拌混 合物大約18小時。用氮氣吹掃之后，過濾混合物，減壓蒸發溶劑，得到2. 45g(91%產率)產 物泡沫體。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ ppm :8· 39(d, J = 2. 7Hz, 1H)，7. 78(dd, J = 2. 5,8. 6Hz, 1H)，7. 55 (d, J = 8. 0Hz，lH)，6. 88-6. 81(m，4H)，5. 61(brs，2H)，4. 68(dd，J = 1.9，9. 3Hz, 1H)，4. 33-4. 31 (m, 1H)，3. 98 (s, 3H)，3. 75 (s, 3H)，1. 27 (d, J = 6. 4Hz,3H)，1. 16 (s,9H)。
步驟5. (3，5- 二甲基-4-硝基苯基)甲醇向硼氫化鈉(2. 91g，76. 7謹ol)的THF(IOOmL)懸浮液中加入3，5_ 二甲基-4-硝 基苯甲酸(8. 5g，43. 55mmol)，攪拌大約5分鐘之后，逐滴加入三氟化硼二乙醚絡合物 (14 . 53g，102. 4mmol)。在室溫下攪拌反應大約16小時。將反應物慢慢地傾倒在水(150mL) 中，用乙酸乙酯(2X300mL)提取，用鹽水洗滌有機相，用硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到 8. 05g(102% 產率)產物灰白色固體。1H NMR (400MHz, DMS0-d6) δ ppm :7· 19(s，2H)，4· 48 (s, 2Η)，2· 23(s，6H)。步驟6. 1,3-二甲基-5_「(甲氧基}甲基]-2-硝基苯向(3，5-二甲基-4-硝基苯基)甲醇(7. Og, 38. 68mmol)的 DMF(150mL)溶液中 加入氫化鈉(1.85g，60%油分散體，46. 36mmol)。攪拌大約40分鐘之后，加入甲基碘，在室 溫攪拌反應3天。通過緩慢加入水(500mL)將反應猝滅，用乙酸乙酯(2X500mL)提取。用 鹽水洗滌有機相，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。將殘余物在硅膠上進行色譜(乙酸乙酯 / 己燒)，得到 5. 3g(70% )產物。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm :7· 09 (s，2H)，4. 42 (s，2H)， 3.41(s，3H)，2.31(s，6H)。步驟7. 2,6-二甲基-4-「(甲氧基)甲基1苯胺將1，3_ 二甲基_5-[(甲氧基)甲基]-2_硝基苯(5.0g，25.6mmol)溶于 Et0H(120mL)中，并加熱至80°C。加入Na0H(5. 9g，128mmol)的水(IOmL)溶液，而后加入 5g份額的鋅(15g，230mmOl)。一旦加入結束，將溶液回流大約4小時，然后冷卻，并在室溫 攪拌3天。然后過濾混合物，濃縮濾液，并在乙酸乙酯和鹽水之間分配殘余物。用乙酸乙酯 提取鹽水層，并用硫酸鈉干燥合并的有機物，過濾，減壓濃縮。將殘余物在硅膠上進行色譜 (乙酸乙酯 / 己烷)，得到 4. 5g(106% )產物油。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ ppm :6· 93 (s，2H)， 4. 31 (s，2H)，3. 58 (brs, 2H)，3. 34 (s, 3H)，2. 18 (s,6H)。步驟8. 2-異氰酸根(is0Cyanat0)-l，3-二甲基_5-[(甲氧基)甲基]苯用大約2-3分鐘向2，6-二甲基-4-[(甲氧基)甲基]苯胺(3. 45g，20. 88mmol) 和 N，N-(二異丙基)氨甲基聚苯乙烯(PS-DIEA，Argonaut, 17. 6g，裝填 3. 56mmol/g)在二 氯甲烷(200mL)中的混合物中加入光氣(5. 17g，25%甲苯溶液，52. 2mmol)。將混合物在室 溫下攪拌大約24小時，然后過濾除去PS-DIEA。減壓濃縮，得到4. 0g(100% )產物褐色油。 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm :7· 02(s，2H)，4· 36(s，2H)，3· 38(s，3H)，2· 32(s，6H)。 Μ ·0-(1，1-二甲基乙基)-N-({2-{[({2，6-二甲基-4-[(甲氧基)甲基]苯 基}氨基)羰基]氨基}-4_[6-(甲氧基)-3_吡啶基]苯基}羰基)-L-蘇氨酸甲酯將N-({2-氨基-4-[6-(甲氧基)-3_吡啶基]苯基}羰基)_0_(1，1_ 二甲基乙 基)-L-蘇氨酸甲酯(2. 45g，5. 89mmol)和 2-異氰酸根(isocyanato)-1，3-二甲基-5-[(甲 氧基)甲基]苯(2.25g，11.79mm0l)溶于吡啶(SOmL)中，并攪拌大約24小時。減壓濃縮 反應，并將殘余物溶于乙酸乙酯中，過濾。用碳酸氫鈉和鹽水洗滌乙酸乙酯相。用硫酸鈉干 燥之后，過濾，減壓濃縮，將殘余物在硅膠上進行色譜(乙酸乙酯/己烷)，得到3. 2g(89% ) 產物。1HnmrGoomHz, CDCl3) δ ppm 10. 20 (brs, m), 8. 80 (s, m), 8. 46 (d, J = 2. 5Hz, ih), 7. 89 (dd, J = 2. 7,8. 5Ηζ，1Η)，7· 59 (d, J = 8. 1Hz，1H)，7. 21 (d，J = 8. 3Ηζ，1Η)，7· 10 (s， 2H)，6. 82 (m, 2H)，5. 97 (brs, 1H)，4. 51 (m, 1H)，4. 43 (s,2H)，4. 29 (m, 1H)，3. 98 (s,3H)， 3. 78 (s，3H)，3. 39 (s, 3H)，2. 31 (s，6H)，1. 20 (d，J = 5. 6，3H)，1. 14 (s,9H)。
步驟10. 0-(1,1-二甲基乙基)4-({2-丨「({2,6-二甲基-4-「(甲氧基)甲基]苯 基}氨基)羰基]氨基}-4-[6-(甲氧基)-3_吡啶基]苯基}羰基)-L-蘇氨酸將0-(1，1_ 二甲基乙基)-N-({2_{[({2，6-二甲基-4-[(甲氧基)甲基]苯 基}氨基)羰基]氨基}-4_[6-(甲氧基)-3_吡啶基]苯基}羰基)_L-蘇氨酸甲酯 (3. 2g,5. 27mmol)溶于THF(150mL)和甲醇(50mL)中。向其中加入氫氧化鋰一水合物 (1.328g,31.6mmol)在水(50mL)中。將混合物在室溫下攪拌大約24小時。向混合物中 加入IN HCl(200mL)，并用乙酸乙酯(2X300mL)提取。用硫酸鈉干燥有機相，過濾，減壓濃 縮，得到 3. 16g(100% )產物白色泡沫體。1H NMR(400MHz, DMS0_d6) δ ppm 12. 84(brs, 1H)，10. 12(brs, 1H)，8. 77(brs, 1H)，8. 56 (s, 1H)，8. 46 (d, J = 2. 5Hz, 1H)，8. 10(brs, 1H)， 7. 95 (dd, J = 2. 4,8. 5Hz, 1H)，7. 76(brs, 1H)，7. 33 (dd, J=L 7,8. 3Hz, 1H)，7. 00(s，2H)， 6. 92 (d, J = 8. 8Hz, 1H), 4. 44 (m, 1H), 4. 32(s，2H)，4. 18 (m, 1H)，3.89(s，3H)，3. 26(s，3H)， 2. 17 (s，6H)，1. 18-1. 13 (m, 12H)。ES MS m/z593 (M+H)。實施例2 制備式IA化合物的鉀鹽0-(1，1-二甲基乙基)-N-({2_{[({2，6-二甲基-4_[(甲氧基)甲基]苯基}氨 基)羰基]氨基}-4-[6-(甲氧基)-3_吡啶基]苯基}羰基)-L-蘇氨酸鉀向0-(1，1_ 二甲基乙基)-N-({2_{[({2，6-二甲基-4-[(甲氧基)甲基]苯基}氨 基)羰基]氨基} -4- [6-(甲氧基)-3-吡啶基]苯基}羰基)-L-蘇氨酸(1. 0g，1. 69mmol) 的乙腈(IOOmL)溶液中加入叔丁醇鉀(1. 0M，在THF中，1. 69mL)。將混合物攪拌大約15分 鐘，然后減壓除去溶劑，得到產物。生物學方案式I化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物在治療或預防動物(尤其是哺 乳動物，例如，人)疾病(例如本文詳述的那些疾病)方面的應用性可以通過相關領域普通 技術人員已知的常規試驗(包括如下所述的體外和體內試驗)中的活性而得到證明。可以按照下列方法獲得純化的糖原磷酸化酶(GP)，其中糖原磷酸化酶處于活化的 “a”狀態，稱為人肝臟糖原磷酸化酶a(HLGPa)。人肝臟糖原磷酸化酶的合適克隆和表達通過聚合酶鏈式反應(PCR)，由可商購的人肝臟cDNA庫(BDBiosciences) 擴增人肝臟糖原磷酸化酶cDNA。使用下列引物將cDNA擴增為兩個重疊片段 5， GGCGAAGCCCCTGACAGACCAGGAGAAG3，與 5， CGATGTCTGAGTGGATTTTAGCCACGCC3，禾口 5' GGATATAGAAGAGTTAGAAGAAATTG3‘與 5' GGAAGCTTATCAATTTCCATTGACTTTGTTAGATT CATTGG3，。PCR 條件是94 V (1 分鐘)，55 V (1 分鐘)，72 V (2 分鐘)，40 個循環， 使用酶PfuTurbo (Stratagene) ,0.5% DMSO,每個核苷酸三磷酸鹽250uM，每個引物 0.4uM，加上聚合酶生產商建議的緩沖液。將每個PCR片段進行分子克隆，并測定每 個嵌入物的DNA序列。然后將兩個糖原磷酸化酶cDNA的DNA片段在細菌表達質粒 pTXK1007LTev (GlaxoSmithKline)中連接在一起，產生在甲硫氨酸_甘氨酸_丙氨酸_組 氨酸_組氨酸_組氨酸_組氨酸_組氨酸_組氨酸_甘氨酸_甘氨酸_谷氨酸鹽_天冬酰 胺_亮氨酸_酪氨酸_苯丙氨酸_谷氨酰胺_甘氨酸_甘氨酸_的密碼子的5'端稠合的 全長cDNA。蛋白產物具有6X組氨酸標記，后面是Tev蛋白酶分裂位點。測定pTXK1007LTev 中的cDNA的兩個鏈的DNA序列。
人肝臟糖原磷酸化酶的純化將冷凍的細胞膏體(IOOg)解凍，并懸浮在1200ml 50mM Tris、IOOmMNaCl、15mM咪 唑(pH8. 0)中。將細胞輕輕地用Polytron(Brinkman，PT10-35)輕輕地破裂，并兩次通過 AVP均化器。將大腸桿菌細胞溶解產物通過離心(27，500xg，45分鐘)而進行澄清，并通 過0.8微孔過濾器過濾。將溶液加入到21ml Ni-NTA Superflow(Qiagen)柱(ID 26mm X H4. Ocm)上，預先用50mM TrisUOOm M NaCl和15mM咪唑(pH8. 0)將柱進行平衡。將柱用 平衡緩沖液洗滌，直到A280回到基線為止。用10個床柱體積的50mM咪唑(在相同緩沖液 中)從柱中洗脫弱結合的蛋白。用IOOmM和250mM咪唑逐步洗脫糖原磷酸化酶。收集IOOmM 和250mM兩個餾分，然后用50mM Tris (pH8. 0)緩沖液稀釋5倍。將此溶液裝填在用50mM Tris (pH8. 0)預先平衡的 21ml Q 快速流柱(AmershamPharmacia Biotech AB, ID 2.6cm X H 4. 0cm)上。用0-30% IM NaCl (在50mM Tris中，pH8. 0，緩沖液B)的連續梯度洗脫糖原 磷酸化酶。收集15%和20%緩沖液B之間的純化糖原磷酸化酶的餾分，將等分樣品加入到 微量離心管中，并在-80°C保存。純化餾分在SDS-PAGE凝膠上形成單一 IOOkd譜帶。人肝臟糖原磷酸化酶的活化通過具有固定磷酸化酶激酶的磷酸化HLGPb，獲得人肝臟糖原磷酸化酶的活化 (即，非活性的HLGPb形式轉化為活化的HLGPa形式)。將IOmg 磷酸化酶激酶(Sigma, P-2014)溶于 2. 5mll00mM HEPES、80mM CaCl2 (pH7. 4)中，并溫和地與Iml Aff i_Gel (活性酯瓊脂糖，BioRad#153_6099)珠粒(預先 在相同緩沖液中平衡)混合。將混合物在4°C搖動4小時。用相同緩沖液洗滌珠粒一次，并 在室溫下用50mM HEPESUM甘氨酸甲基酯溶液(pH8. 0)封閉1小時。然后用50mM HEPES, ImM β-巰基乙醇(ρΗ7. 4)洗滌珠粒，并在4°C保存。將冷凍的純化糖原磷酸化酶(HLGPb)在4°C解凍，然后過夜滲析到50mM HEPES, IOOmM NaCl (ρΗ7· 4)中。將 15mg 滲析的 HLGPb、3mM ATP 和 5mM MgCl2 用 500ul 制備的 Affi-Gel固定的磷酸化酶激酶珠粒(用50mM HEPESUOOmM NaCl (pH 7. 4)平衡)培養。使 用下面列出的試驗系統，以10分鐘間隔跟蹤活性增加以檢測磷酸化度。簡要地說，該試驗 包含 0. IuM人肝臟糖原磷酸化酶、50mM HEPESUOOmM KCl,2. 5mMEGTA、MgCl2、3. 5mM KH2PO4, 0. 5mM DTT、0. 4mg/mL糖原、7. 5mM葡萄糖、0. 50mM β -煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(β -NAD)、 3U/mL葡糖磷酸變位酶和5U/mL葡萄糖-6-磷酸脫氫酶。通過在340nm跟蹤NAD+降低情 況，以檢測活性。當觀察到活性不再進一步增加時(30-60分鐘)，通過從混合物中除去珠粒 來中止反應。通過分析樣品(利用質譜)進一步測定磷酸化。使包含活化樣品的上清液在 50mM HEPESUOOmM NaCl (pH7. 4)中滲析過夜。將最終樣品與相等體積的丙三醇混合，并等 分樣品到微量離心管中，在_20°C保存。人肝臟糖原磷酸化酶的酶活性試驗進行酶催試驗，以便測定糖原磷酸化酶HLGPa)的活化形式對小分子(< IOOODa.) 化合物的反應。對該試驗進行設定，通過將葡糖-ι-磷酸(來源于糖原)和無機磷酸鹽的 產物與葡糖磷酸變位酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、NADH氧化酶和辣根過氧化物酶偶合，產 生熒光產物試鹵靈，以檢測藥理學相關的糖原分解反應。試劑組分的濃度如下15nM人肝 臟糖原磷酸化酶a，lmg/mL糖原，5mM K2HPO4,40U/mL葡糖磷酸變位酶(Sigma，20U/mL葡萄 糖-6-磷酸脫氫酶(Sigma)，200nM嗜熱棲熱菌NADH氧化酶(如下所述進行制備Park，H. J. ；Kreutzer, R. ；Reiser, C. OA ；Sprinz1, Μ. Eur. J. Biochem. 1992,205,875-879.), 2U/ mL 辣根過氧化物酶(Sigma)，30uM FAD，250uM NAD+, 50uM amp lex red，+/-IOmM 葡萄糖。使 用的基礎試驗緩沖液是50mM HEPESUOOmM NaCl (pH7. 6)。為了幫助鑒別糖原磷酸化酶的 葡萄糖-敏感抑制劑，在有和沒有IOmM葡萄糖的條件下進行試驗。為了去除污染組份(其 有助于非HLGPa特異性試鹵靈生成)的試驗，將試劑制備為兩個2x濃縮的混合物。制備催 化酶涂漬的瓊脂糖珠粒在基礎試驗緩沖液中的溶液。第一個混合物(混合物#1)由下列組 成嗜熱棲熱菌NADH氧化酶，NAD+,糖原，葡糖磷酸變位酶，葡萄糖_6_磷酸脫氫酶，K2HPO4, FAD和50U/mL催化酶涂漬的瓊脂糖珠粒+/-IOmM葡萄糖。在25°C培養30分鐘之后，將 Amplexred加入到此溶液中，通過離心和保留上清液，除去催化酶涂漬的瓊脂糖珠粒。第二 個混合物(混合物#2)包含人肝臟糖原磷酸化酶_a和辣根過氧化物酶+/-IOmM葡萄糖。如 下進行試驗用混合物#2預先培養本發明的化合物15分鐘，而后加入混合物#1，以便引發 反應。在96 (黑色1/2體積Costar#3694)或384孔微孔板(小體積黑色Greiner)中進行 試驗。在熒光平板讀數器(Molecular Devices SpectraMax M2，560nm 激發，590nm 發射) 上測定由于形成產物造成的熒光變化。實施例化合物1的活性示于下面表1中。表1 在人肝臟糖原磷酸化酶a的酶催試驗中的化合物的活性 體內胰高血糖素刺激模型套管插入術之后1-2天，將頸靜脈插入導管的雄性⑶大鼠(220_260g) (Charles Rivers, Raleigh, NC)接受，單獨放置在 Alpha-dri 床(Sh印herd Specialty Papers, Inc.，Kalamazoo, MI)上，可自由接角蟲食品(Lab Diet 5001，PMI Nutrition International, Brentwood, M0)和水，并在21°C和50%相對濕度下保持在12小時照明/ 黑暗循環中3-4天，而后進行胰高血糖素刺激研究。研究的當天，按照體重將大鼠分類到 治療組(N = 4-5)里，并單獨地放在鞋盒籠中，籠中具有干凈的Alpha-dri床。通過除去 0. 2ml血液而將管道打開，并用0. 2ml無菌鹽水沖洗。適應一小時之后，收集血樣，測定基 礎葡萄糖，并給大鼠口服賦形劑(5% DMSO Solutol HS15 20% PEG400 45% 25mM N-葡甲胺)或藥物(5ml/kg)。給藥兩個小時之后，收集時間零點血樣(0.4ml)，用于測定 葡萄糖，通過頸靜脈給予大鼠 Sandostatin 0. 5mg/kg(Novartis Pharmaceuticals Corp., EastHanover, NJ)禾口姨高血糖素 10ug/kg (Bedford Laboratories, Bedford, OH)。 10 禾口 20 分鐘之后，收集血樣，測定葡萄糖。將全血放置在Terumo Capi ject血液接收管(TerumoMedical Corp.，Elkton，MD)中，在室溫下靜置20-30分鐘，然后離心(3，000X G)，獲得血 清。使用Olympus AU640 臨床化學免疫分析器，測定葡萄糖的血清水平(Olympus America Inc. ,Melville,NY)。使用下式計算每個藥物治療的賦形劑葡萄糖AUC的％降低(％ R) % 降低=100*1-(AUC藥物/AUC賦形劑)，其中AUC使用下面的方程式、由血清葡萄糖值計算 AUC = (T0+T10)/2*10+(T10+T20)/2*10-(T0*20)。實施例化合物1的活性示于下面表2中。表2 在體內胰高血糖素刺激模型中的化合物的活性
權利要求
式I的化合物其鹽、溶劑化物或生理學的功能化衍生物。FPA00001138951300011.tif
2.權利要求1的化合物，其中立體化學如式IA所示。
3.藥物組合物，其包含權利要求1或2的化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物。
4.藥物組合物，其包含權利要求1或2的化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生 物和一或多種賦形劑。
5.權利要求1或2的藥物組合物，其是片劑或膠囊形式。
6.一種治療方法，包括給予哺乳動物藥物組合物，該藥物組合物包含權利要求1或2的 化合物、其可藥用鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物和至少一種賦形劑，其中所述治療用 于選自下列的疾病或病癥糖尿病和與糖尿病相關的病癥。
7.權利要求5的方法，其中所述與糖尿病相關的病癥選自下列肥胖癥，綜合癥X，胰島 素抗性，糖尿病性腎病，糖尿病性神經病變，糖尿病性視網膜病，高血糖癥，高膽固醇血癥， 高胰島素血癥，高脂質血癥，心血管疾病，中風，動脈粥樣硬化，脂蛋白病癥，高血壓癥，組織 缺血，心肌缺血和憂郁癥。
8.權利要求6的方法，所述治療用于糖尿病治療。
9.權利要求6的方法，其中所述哺乳動物是人。
10.權利要求1或2的化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物用作活性治療物質。
11.權利要求1或2的化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物用于治療。
12.權利要求1或2的化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物在哺乳動物中用于治療選自下列的疾病或病癥糖尿病，肥胖癥，綜合癥X，胰島素耐受性，糖尿病性腎病， 糖尿病性神經病變，糖尿病性視網膜病，高血糖癥，高膽固醇血癥，高胰島素血癥，高脂質血 癥，心血管疾病，中風，動脈粥樣硬化，脂蛋白病癥，高血壓癥，組織缺血，心肌缺血和憂郁癥。
13.權利要求12的化合物用于治療糖尿病。
14.權利要求12的化合物，其中所述哺乳動物是人。
15.制備權利要求1或2的化合物、其鹽、溶劑化物或生理學功能化衍生物的方法，包括 下列步驟a.將4-氯-2-硝基苯甲酸酯和[6-(甲氧基)_3_吡啶基]硼酸轉化為4-[6-(甲氧 基)_3_吡啶基]-2-硝基苯甲酸甲酯；b.將4-[6-(甲氧基)_3_吡啶基]-2-硝基苯甲酸甲酯轉化為4-[6-(甲氧基)_3_吡 啶基]-2-硝基苯甲酸；c.將4-[6-(甲氧基)_3_吡啶基]-2-硝基苯甲酸轉化為0-(1，1_二甲基乙 基)-N- ({4- [6-(甲氧基)-3-吡啶基]-2-硝基苯基}羰基)-L-蘇氨酸甲酯；d.將0-(1，1_二甲基乙基)-N-({4-[6-(甲氧基)_3_吡啶基]-2-硝基苯基}羰 基)-L"蘇氨酸甲酯轉化為N- ({2-氨基-4- [6-(甲氧基)-3-吡啶基]苯基}羰基)-0- (1， 1-二甲基乙基)-L-蘇氨酸甲酯；e.將3，5-二甲基-4-硝基苯甲酸轉化為(3，5-二甲基-4-硝基苯基)甲醇；f.將(3，5_二甲基-4-硝基苯基)甲醇轉化為1，3_二甲基-5-[(甲氧基)甲基]-2-硝 基苯；g.將1，3_二甲基-5-[(甲氧基)甲基]-2-硝基苯轉化為2，6_ 二甲基-4-[(甲氧基) 甲基]苯胺；h.將2，6_二甲基-4-[(甲氧基)甲基]苯胺轉化為2-異氰酸根(iS0Cyanat0)-l， 3-二甲基-5-[(甲氧基)甲基]苯；i.將N-({2-氨基-4-[6-(甲氧基)_3_吡啶基]苯基}羰基)-0-(1，1_二甲基乙 基)-L-蘇氨酸甲酯和2-異氰酸根(iS0Cyanat0)-l，3-二甲基-5-[(甲氧基)甲基]苯轉 化為0-(1，1_ 二甲基乙基)-N-({2-{[({2，6-二甲基-4-[(甲氧基)甲基]苯基}氨基) 羰基]氨基}-4_[6-(甲氧基)_3_吡啶基]苯基}羰基)-L-蘇氨酸甲酯；和j.將0-(1，1_ 二甲基乙基)-N-({2-{[({2，6-二甲基-4-[(甲氧基)甲基]苯基}氨 基)羰基]氨基}-4-[6-(甲氧基)-3-吡啶基]苯基}羰基)-L-蘇氨酸甲酯轉化為0-(1， 1-二甲基乙基)-N-({2-{[({2，6-二甲基-4-[(甲氧基)甲基]苯基}氨基)羰基]氨 基}-4-[6-(甲氧基)_3_吡啶基]苯基}羰基)-L-蘇氨酸。
全文摘要
本發明涉及作為糖原磷酸化酶抑制劑的新化合物和其在治療糖尿病及其它與此相關病癥中的用途。本發明進一步涉及包含該化合物的藥物組合物和制備該化合物和藥物組合物的方法。
文檔編號A61K31/4418GK101861303SQ200880116662
公開日2010年10月13日 申請日期2008年9月25日 優先權日2007年9月28日
發明者D·M·加里多, F·X·塔瓦爾斯, P·班克, S·A·湯遜, S·H·迪克遜, S·M·斯帕克斯 申請人:葛蘭素史密絲克萊恩有限責任公司