治療或預防腸道炎癥性疾病的方法

專利名稱：治療或預防腸道炎癥性疾病的方法
治療或預防腸道炎癥性疾病的方法本發明涉及葡聚糖治療或預防腸道炎癥性疾病的用途。本發明還涉及源自菊科(Asteraceae)的粕(meal)，特別是蛋白質，治療或預防腸道炎癥性疾病的用途。葡聚糖是在植物、細菌和真菌的細胞壁中發現的一組異質葡萄糖聚合物。本文所 述的β -葡聚糖基礎結構單元是包含β (1 — 3)連接的葡糖基單元或由β (1 — 3)連接的 葡糖基單元組成的主鏈和側鏈。取決于分離的來源和方法，β_葡聚糖在側鏈上具有各種 程度的分支和各種程度的連接。側鏈上連接的頻率和類型決定分子的生物活性。真菌和酵 母來源的β-葡聚糖通常不溶于水，但是可以通過酸水解或通過向分子導入像磷酸、硫酸、 胺、羧甲基等外來基團的衍生化作用變得可溶。在歐洲、亞洲和美國，β -葡聚糖，特別是來自面包酵母(Bakers’yeast)的β -葡 聚糖，已經長期用作動物的飼料添加劑，在創傷治療中用作人的膳食補充物，以及用作護膚 霜(skin cream)制劑的活性成分。而且，如在W002058711中其用于治療癌癥所示，葡聚糖 已經被用作功能性藥劑。在本文的語境中，葡聚糖被視為免疫刺激劑，其部分地通過誘 導被很好地調節的和局部的炎癥反應而增加白細胞的活性。潰瘍性結腸炎和克羅恩病(Crohn's disease)是難治愈的慢性腸道疾病。這兩種 疾病由于它們類似的癥狀而通常被共同歸為構成炎癥性腸疾病(在下文中稱為IBD)的兩 種主要狀況。假定全世界有多達4百萬的人患有一種形式的IBD。在挪威，每年有600和 300人分別被診斷為潰瘍性結腸炎和克羅恩病。IBD的原因目前還不得而知。現有技術將 環境、營養和遺傳因素以及甚至吸煙和細菌/病毒感染定義為該疾病的可能原因。該疾病 在高加索人種、婦女和較年幼的人中最常見。目前，IBD不能治愈，其通過小心地控制患者的環境，連續地控制腸功能以及通過 藥物來進行控制。常見的藥物包括抗炎癥藥物以及免疫抑制劑。在許多情況下，也用像除 去部分腸的手術方法對抗該疾病。最近的發現表明，IBD是由于缺乏諸如寄生蟲和蠕蟲的常規靶標而導致的。免疫 系統因而在腸中轉向其他靶標。這種假與廣泛應用于像哮喘和過敏的狀況的衛生學假說密 切相關。益生素和益生菌在治療IBD中也引起了日趨增加的興趣。本發明的另一方面是治療與諸如魚和哺乳動物的動物的消化道有關的疾病，特別 是異常腸功能或消化道的變化。目前主要的問題是不斷增加的將諸如大豆粕和向日葵粕 (sunflower meal)用作魚和諸如哺乳動物的其他動物的飼料中的營養成分。由于大豆產品 的價格低、可用蛋白的含量高且具有很好地平衡的氨基酸譜(profile)、組成恒定以及供應 穩定，而是食肉、雜食和食草的魚和其他動物的飼料中有價值的成分。最近年來，動物飼料中植物蛋白的濃度明顯地增加了，這導致了諸如炎癥和 其他狀況的不良副作用，因而降低了重量增長、飼料轉化和效率以及養殖動物的特性 (performance) 0植物蛋白含有像廣譜抗營養因子(ANF)的物質，其向魚的生理施加壓力并 導致動物消化系統的不良反應。如向魚飼喂大豆所觀察到的，植物蛋白粕還可以誘導動物腸的形態變化。對于魚而言，這種發病機理被歸類為非感染性亞急性炎癥，其特征為增殖增加、更新以及消化系統 粘膜中未成熟細胞的數目增加。這導致粘膜中內源化合物如消化酶的再吸收降低，以及腸 表面積減少。腸中細菌組成也發生改變。這種狀況可以減弱魚對疾病的抗性，并且似乎與 免疫機制有關，該免疫機制類似于和超敏反應類似的那些免疫機制。
對于大部分這些植物蛋白，如大豆和向日葵粕而言，作為實用的商業限制，向飼料 中添加的植物蛋白的通常水平為約10%。除了動物飼料中較高水平的植物蛋白以外，動物飼料中的其他成分可以在動物消 化系統中導致不良影響。這些成分的實例是環境毒素或通常較高濃度的其他存在的飼料成 分，如碳水化合物。盡管葡聚糖技術起源于上世紀中葉，但是不同葡聚糖在不同環境中的特定作用模 式和效果以及它們對于許多不同疾病和狀況的功能尚未得到完全充分的研究。本領域中唯 一確定的是，葡聚糖本身不能被視為一組分離的分子，因為具有不同分子結構和來源的葡 聚糖對于各種疾病和狀況具有非常不同的影響。作用的確切模式仍然不得而知。某些學說集中于被免疫系統認為是毒性病原體的 葡聚糖的來源，而其他學說集中在分子水平，如側鏈的數目、類型或空間位置。其他學說集 中于葡聚糖單元的三螺旋結構，而其他學說再次涉及像分子量和受體結合親和力等因素的 特征。之前的研究表明，不同葡聚糖的來源和常見的分子結構本身可能是它們對抗不同疾 病的功能的共同特性(denominator)。在這種活性的不確定性和可變性中，本發明的發明人發現IBD可以通過利用具有 特定分子結構的某些類型的葡聚糖來治療。本發明的葡聚糖具有β_1，3主鏈，S卩，主鏈由β _1，3連接的吡喃葡萄糖單元構 成。所述葡聚糖具有一個或多個β _1，3側鏈，S卩，側鏈通過β _1，6連接與主鏈相連，其中 所述側鏈由β-1，3連接的吡喃葡萄糖單元構成。所述側鏈包含2個或更多個，通常為3、4、 5、10個或更多個β-1，3連接的吡喃葡萄糖單元。本發明提供具有β -1，3主鏈的葡聚糖在治療IBD或異常腸功能的相關疾病中的 用途，所述β _1，3主鏈具有一個或多個與其相連的β_1，3側鏈。優選地，在人和非類人動 物腸疾病中治療IBD，或治療具有和人IBD—樣的要素的異常腸功能。在包括諸如狗和貓的 寵物在內的某些動物中，IBD本身已經被診斷，因此可以進行治療。在本發明中，通過任何可能的給藥模式向個體給予葡聚糖，但優選口服。藥物可以作為膳食方案的部分進行給藥。可以將藥物配制成營養品、動物飼料、食 品、營養品的一部分、動物飼料的一部分、食品的一部分和/或佐劑。可以向任何動物給予 含有葡聚糖的藥物，包括人、非人類靈長類和其他哺乳動物、馴養和家畜動物、鳥和魚，包括 養殖的鳥和伴生鳥(companion bird)如鸚鵡，以及養殖的魚和寵物魚在內。具體實例包括 犬、貓、馬、奶牛、豬、山羊、大鼠、小鼠以及綿羊。本發明清楚地表明，這些類型的葡聚糖可以 用于預防和/或治療如在本說明書中的下文中進一步示例的哺乳動物和魚的IBD和相關的 疾病。本發明中所用的酵母葡聚糖可以處于天然狀態，如在完整的酵母中，或者它們可 以以某種方式進行加工，即從其他細胞組分分離葡聚糖，將葡萄糖衍生化和/或與天然存 在的結構相比改變化學結構。衍生的葡聚糖優選地含有下述基團硫酸、胺、乙酸、磷酸、膦酸或羧甲基。葡聚糖化學結構的其他改變通常包括主鏈長度的減小和/或支鏈和/或側鏈 的長度或復雜性的降低。優選地，葡聚糖不處于其天然狀態，S卩，不以完整的細胞或甚至完整的細胞壁組分 存在，而是被加工成部分地分離自在自然界中發現的其他細胞壁組分，例如蛋白質和幾丁 質。酸或堿處理或者酶促處理獲得用于本發明的優選葡聚糖。這類葡聚糖的分子量在下文給出。 如通過釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)示例的，葡聚糖可以來自各種不同 的來源，但是優選來自酵母。本發明的葡聚糖包括可溶性和顆粒葡聚糖，這兩種葡聚糖都是有效的。在不限制于理論的情況下，可溶性和顆粒葡聚糖被認為利用相同的機制在治療腸 道的炎癥性疾病中發揮它們的功能。用于本發明的優選的含有葡聚糖的產品，含有作為總細胞組分百分比的至少 75%、優選至少80%的碳水化合物。在這類碳水化合物中，主要是葡聚糖。本發明有用的β -葡聚糖產品的實例包括但不限于如由Biothera生產的葡聚糖 產品Imucell和由CarePharma Co, Ltd.經銷的葡聚糖產品Immiflex(以前為Fluflex)。有用的β -葡聚糖包括但不限于如PCT/IB95/00265和EP 0759089所述的顆粒酵 母細胞壁葡聚糖和可溶性酵母細胞壁葡聚糖。取決于酵母的株系和類型，葡聚糖構成酵母細胞壁干重的高達25%。在從酵母分 離β-葡聚糖的過程中，除去了甘露糖蛋白以及大部分細胞的內容物，從而留下組成β-葡 聚糖層的“空殼”顆粒(“ghosfparticle)或完整的葡聚糖顆粒。這類β-葡聚糖的實例 包括但不限于β _1，3/1，6葡聚糖產品，其由Biothera公司以APG 3_6銷售。如果β -葡 聚糖分離自自溶的酵母，則細胞壁破壞的更厲害，從而獲得破裂的空殼顆粒。提供葡聚糖的來源的其他酵母包括啤酒酵母(Brewers yeast)；念珠菌(Candida sp·)，如白色念珠菌(Candida albicans)、陰溝念珠菌(Candidacloacae)、熱帶念珠菌 (Candida tropicalis)、產月元念珠菌(Candida utilis)；漢遜酵母(Hansenula sp.)，如溫 奇漢遜酵母(Hansenula wingei)、Hansenulaarni、Hansenula henricii 禾口美洲漢遜酵母 (Hansenula americana)；組織胞菜菌(Histoplasma sp.)；克勒克酵母(Kloeckera sp.)； 克魯維酵母(Kluyveromyces sp.)，如乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)、脆壁克 魯維酵母(Kluyveromyces fragilis)、多孢克魯維酵母(Kluyveromycespolysporus)； 畢赤酵母(Pichia sp.)；紅酵母(Rhodotorula sp.)；酵母(Saccharomyces sp.)， 如德氏酵母(Saccharomyces delbruekii)、羅氏酵母(Saccharomyces rosei)、微 球酵母(Saccharomyces microellipsodes)、卡爾斯伯根糖酵母(Saccharomyces carlsbergensis)或不同的酵母株，如釀酒酵母(Saccharomyce s cerevisiae) R4(NRRL Y-15903)禾Π R4Ad(ATCC No. 74181)；裂褶菌(Schizophyllum sp.)；裂殖酵母 (Schizosaccharomyces sp.),如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)；串酵母菌 (Torula sp.)以及球擬酵母(Torulopsis sp.)。葡聚糖的其他來源是具有如本發明中所定義的分子結構的蘑菇或其他真菌、藻 類、草或細菌，該分子結構是β-1，3連接的葡聚糖主鏈，該主鏈具有通過β-1，6連接與其 相連的一個或多個β_1，3側鏈。
在動物飼料和養殖工業中，使用有機體的細胞，最常見的是酵母細胞，并將該細胞 直接飼喂給動物。這些產品具有不同的形式和形狀，如壓縮、液態、破裂、干燥、活性細胞、無 活性細胞以及諸如活性干燥、瞬時活性干燥和無活性干燥的組合。這些產品最通常是用于 諸如釀造或烘焙的其他生產過程的細胞的殘留，并且被視為有價值的葡聚糖來源。本發明 的葡聚糖還可以以未純化的方式使用，意即作為完整的細胞、生產中間產物、用其他組分部 分處理的中間產物，或者用作完全或部分地分離自其他細胞組分的提取的葡聚糖產品。特 別是，更加加工的葡聚糖對于非人類用途是優選的。可方便地使用加工的產品或細胞提取物實現本發明的效果。這些產品可以是水解 或自溶的細胞、部分或完全純化的細胞壁。適合不同類型的用途的各種形式的所有的這些 產品都是可用的液態、半糊狀、糊狀、精細粉末、油包衣的粉末、微粒粉末，在此處僅描述了
一些形式。含有分離的碳水化合物組分的產品可以是兩種或更多種組分(如，來自酵母細胞 壁)的組合產品，例如葡聚糖和甘露聚糖的組合。甘露聚糖是含有高比例的甘露糖亞基的多糖。優選地，甘露聚糖由D-甘露糖、 D-葡萄糖和D-半乳糖以約3 1 1的比率組成。可以將葡聚糖與其他組分混合，例如細胞壁的其他部分，如甘露聚糖；或者與不是 細胞壁的一部分的組分，例如維生素或礦物質，以及在藥物、營養、食品、動物飼料以及獸醫 工業中經常使用的其他試劑。這組產品的實例是與礦物質和維生素組合的即用葡聚糖產 品，以及組合了葡聚糖與其他抗IBD試劑的營養品。除了 1，3連接的側鏈以外，葡聚糖還可以具有一個或多個1，6_連接的側鏈。然 而，優選的葡聚糖是用酸或酶或任何其他合適的方法處理以明顯降低或消除葡聚糖中重復 的(1，6)_連接的葡萄糖分子的數目的那些葡聚糖，或者以低水平的1，6_連接存成的那些 葡聚糖。這些(1，6)_連接的葡萄糖分子主要采用構象，并且通常見于葡聚糖分子 的側鏈中。取決于葡聚糖的來源，0-1，6_連接的葡萄糖部分可以從一個葡萄糖部分至大比 例的葡萄糖部分而發生變化。所得的優選葡聚糖具有3-1，3-主鏈和3-1，3側鏈，該側鏈 通過一個0-1，6_連接與主鏈相連，該0-1，6_連接不被消除處理所切割。這些產品可以 是顆粒、半可溶或可溶的。這些修飾的葡聚糖分子優選地源自釀酒酵母(S.cerevisiae)。優選的葡聚糖基本上不含重復的0 1，6_連接的葡糖基單元。因此，分支點的1， 6-連接不提供“重復的” 0 1,6-連接的葡糖基單元，但是可能與相鄰的殘基一起提供“重復 的”3 1，6-連接的葡糖基單元。“基本上不含”意即少于2%、優選少于1 %的總葡糖基單元。 這種產品的實例如

圖1所示，其是重復的0-1，6-連接的葡糖基單元少于的支鏈3-1， 3-葡聚糖的iH-NMR譜。因此，葡聚糖分子中優選少于10 %、更優選少于5 %、最優選少于3 %或2 %的糖苷 鍵是(1，6)連接。諸如酶處理的某些處理可以在側鏈中留下高達4個未被切割的0-1，6_連接的葡 糖基單元。這類分子也“基本上不含”重復的0 1，6_連接的葡糖基單元。本發明所用的葡聚糖可以是單一的提取組分或者具有不同分子量的兩種或更多 種不同組分的形式。本申請的葡聚糖最優選的來源是來自釀酒酵母的細胞壁。其中，用于本發明的優選來源是可溶性酵母產品SBG(可溶性β葡聚糖)，其是由總部位于挪威的公司Biotec Pharmacon ASA 生產的。該產品是未衍生化的(就化學修飾基團而言)水性可溶性β -1,3/1,6-葡聚糖， 其通過NMR和化學分析的特征是由β -1，3-連接的D-葡萄糖的聚合物組成，該聚合物含有 β-1，3和β-1，6-連接的D-葡萄糖的側鏈，其中側鏈中β_1，6部分的數目(不包括位于 主鏈/側鏈分支點的β_1，6部分)與酵母細胞壁中所述葡聚糖的結構相比明顯降低。這 種組成的實例如下所示 SBG的分子結構如下所示 η 彡 O ;R = H 或(C6H8^10O5)m ；m(Rl+R2) = 35 至 2000 個葡糖基單元可以通過下述方法之一實現β _(1，6)_連接的葡糖基殘基的降低以制備上文的 本發明的優選葡聚糖i)酶促處理，例如，如挪威專利300692中所述通過使用特異性地作用于聚葡萄糖鏈中的β-1，6-連接的酶進行酶處理來選擇 性地除去如美國專利5，401，727中制備的微粒產品中的β-1，6-連接的葡萄糖的側鏈。將 微粒產品(0. 2克)懸浮于40ml、50mM、pH為5. 0的乙酸銨緩沖液中，并與20單位的β -1， 6-葡聚糖酶混合。將混合物于37攝氏度下連續攪拌6小時，并通過煮沸5分鐘來終止酶的 作用。將殘留的酶處理的顆粒通過離心和重懸浮在無菌蒸餾水中反復洗滌。所得的產物是 分支的β-1，3葡聚糖，其具有在分支點通過β-1，6-連接相連的β-1，3-葡聚糖側鏈，并 且在從分支點延伸的側鏈中基本上不含β_1，6-連接的葡萄糖。關鍵步驟是用β-1，6-葡 聚糖酶于32°C -40°C下將顆粒葡聚糖孵育3-9小時。
ii)甲酸處理例如可以將美國專利5，401，727所制備的微粒產品懸浮在甲酸中 并加熱。將懸浮液冷卻并除去游離的甲酸。用于本發明的優選的含有葡聚糖的制劑是分子量(MW)大于6000道爾頓的可溶性 β-葡聚糖的混合物，其相互作用以獲得較高級別(order)的構象。例如，如上文所示的數 值MW大于6kDa、優選MW為6kDa-30kDa的直鏈β _1，3-葡聚糖鏈與具有從主鏈內部延伸的 β-1，3連接的側鏈的分支高分子量β-1，3-葡聚糖(例如，MW大于15kDa)的混合物。優選地，葡聚糖單鏈的平均分子量為約20kDa，并且范圍是約6kDa至約30kDa，優 選的范圍是15kDa-25kDa。在單鏈形式中，葡聚糖可以以構象的混合物存在，該構象包括隨 機卷曲、凝膠基質或聚集、三螺旋及單螺旋。當在水性溶液中時，分子可以參與鏈間相互作 用，從而通過高效凝膠色譜分析時產生高達5000kDa的高分子量形態。優選的組成是在水 溶液中形成凝膠樣形態的那些組成，從而證明了復雜的分子間相互作用。用于與本發明關聯的仍然另一優選的產品是NBG(挪威β葡聚糖)，其是由Biotec Pharmacon ASA生產的顆粒酵母產品。NBG是源自面包酵母(釀酒酵母)的產品。該產品 是天然未衍生化的(就化學修飾基團而言)顆粒β-1，3/1，6-葡聚糖，其通過NMR和化學 分析的特征是由β-1，3-連接的D-葡萄糖的聚合物組成，該聚合物含有β-1，3和β-1， 6-連接的D-葡萄糖的側鏈。NBG的化學組成的通常值如下所示 用于本發明的優選β -葡聚糖，SBG和NBG的基本共有分子結構如下所示 R = H 或(C6H8^10O5) ^50 ；η = 35-2000 ；SBG和NBG特別適合向人給藥。用于本發明，特別是用于向非人類接受者給藥的另一優選葡聚糖來源是 PatoGard ，其是由總部位于挪威的公司Immimocorp銷售的。所述產品的組成如下所示
碳水化合物組分的通常值如下所示 通常，PatoGard 含有約20% -30%重量比的蛋白質、20% -35%的β -葡聚糖和 20% -35%的甘露糖。仍然特別用于非人類接受者的另一優選來源是水解的酵母產品即MacroGard 飼料配料(MacroGard Feed Ingredient)，其是由總部位于挪威的公司Immunocorp銷 售的。所述產品的組成如下所示 替代選擇是MacroGard Pet，其具有如下組成 另一優選的葡聚糖來源是MacroGard AquaSol，其具有如下組成 其他MacroGard 產品包括浸漬級MacroGard (MacroGard I讓ersion Grade)、MacroGard 佐劑(MacroGard Adjuvant)禾Π MacroGard Fl 懸浮液 (MacroGard FI Suspension) 0 MacroGard 飼料配料是優選的。PatoGard 和MacroGard 都適合于本文所述的全部方法和用途。在某些情況下，其中葡聚糖基本上被純化的酵母葡聚糖產品，如由Immunocorp銷 售的MacroGard ，以及類似的產品，是優選的。可以根據這些產品的源自酵母細胞壁的葡 聚糖和甘露聚糖總含量的比率來定義這些產品，即基本上它們的總碳水化合物含量比它們 的源自酵母細胞壁的總蛋白質含量。通常，這類產品的源自酵母細胞壁的總碳水化合物含 量與源自酵母細胞壁的總蛋白質含量的比為至少7 1，優選為至少10 1或12 1，如 約 15 1。對于其他應用，酵母葡聚糖產品，其中的葡聚糖被純化較低程度的葡聚糖產品，如 由Immunocorp銷售的PatoGard ，以及類似的產品，是優選的。通常，這類產品的源自酵母細胞壁的總碳水化合物含量比源自酵母細胞壁的總蛋白質含量為1 1至7 1，優選為 1 1 至 5 1。本發明的優選顆粒0 -葡聚糖可以通過下述方法制備通過在堿和酸中重復提取干釀酒酵母，例如根據美國專利5，401，727 (通過引用 并入本文)所述的方法。所述的提取過程除去酵母細胞中的胞質組分以及位于細胞表面的 含有甘露糖的多糖和蛋白聚糖。根據這種方法制備的產品由0-1，30-1，6_葡聚糖組成， 并且粒徑為2-5微米。這種微粒0-1，30-1，6_葡聚糖的化學結構的特征是83%的3-1， 3連接的葡萄糖、6%的0_1，6連接的葡萄糖和5%的0_1，3，6連接的葡萄糖，并且該微粒 3-1，3 3-1，6-葡聚糖是以3-1，3，6-連接的葡萄糖作為分支點的3-1，3-葡聚糖鏈。本發明的顆粒葡聚糖的分子量為5000Da_l，000, OOODa，優選為25kDa_500kDa，更 優選為150kDa-300kDa，并且最優選為約250kDa。可以如W0/2001/062283(通過引用并入本文)所述，使上文所述的顆粒葡聚糖增 溶。因此，甲酸既既可以用于降低葡聚糖中0-(1，6)_連接的葡糖基殘基數目，也可以用于 使葡聚糖增溶。本領域技術人員在本發明的教導下可以容易地鑒定或分離0-1，3_葡聚糖家族 中的其他結構和/或結構構象。因此，上文是實現高效產品的指導，但并非是對甚至更高效 產品的限制。當被給予時，相對于目前示例的制劑，復雜混合物的分離結構元素可以具有改 善的效果。用于配制用于本發明的含有葡聚糖的組合物的合適載體或輔助劑，包括碳酸鎂、 二氧化鈦、乳糖、甘露糖醇及其他糖、滑石、乳蛋白、明膠、淀粉、維生素、纖維素及其衍生物、 動物和植物油、聚乙二醇以及諸如無菌水、醇、甘油和多元醇的溶劑。所述組合物的PH和各 種組分的確切濃度根據常規技術來調整。優選地制備醫藥和獸醫用途的組合物，并以劑量單位給藥。本文所用的術語“劑量 單位”及其語法等同物是指適合作為用于人或非人類個體的單一劑量的物理上離散單位， 每個單位含有經計算與所需的諸如稀釋劑或媒介物的生理耐受載體聯合產生期望的治療 效果的預定有效量的葡聚糖。所述組合物可以包含適合向個體給藥的形式的單獨活性成分，或者所述組合物通 常包含葡聚糖和一種或多種生理可接受的載體、一種或多種其他活性成分或者上述的某些組合。本文所述的制劑可以通過任何已知的方法或今后在藥學、獸醫學、動物和人類營 養等領域發展的方法來制備。通常，這類制備方法包括下述步驟使活性成分與載體或者一 種或多種其他附屬成分聯合，然后，如果需要或期望，將產品成型或包裝成期望的單個或多 個劑量單位。本發明的組合物的控釋或緩釋制劑可以利用常規技術來制備。包含在用于本發明的組合物中的活性化合物的劑量水平可以變化。葡聚糖的功能 性劑量范圍可以由本領域普通技術人員容易地確定。例如，當口服給藥時，用于人的功能 性劑量范圍和有效量為0. l-500mg/kg b. w. /天，優選為l-100mg/kg b. w. /天，最優選為 5-30mg/kg b. w. /天。當胃腸外給藥時，合適的功能性劑量范圍時0. l-10mg/kg b. w. /天。本發明的組合物可以以物品(article)或載體的形式呈現，例如片劑、包衣片劑、 錠劑、藥片、糖漿或酏劑、脂質體、粉末/滑石或者其他固體、溶液、乳液、懸浮液、液體、噴霧齊IJ、凝膠、滴劑、氣霧劑、灌注液、軟膏、泡沫、乳劑、凝膠、貼劑(paste)、微膠囊、控釋制劑、緩 釋制劑或者任何其他物品或載體，所述任何其他物品或載體在任何給定和預期的時間點， 根據給藥的優選模式是可能或有用的。給藥途徑對熟練的技術人員是顯而易見的，并且取決于包括被治療的疾病的類型 和嚴重性、被治療的個體的類型和年齡等在內的任何數目的因素。最優選的給藥途徑是口 月艮，任選地通過管飼法給藥。
適合葡聚糖(優選可溶性葡聚糖)口服給藥的制劑包括但不限于水性或油性懸浮 液、水性或油性溶液或者乳液。這類制劑可以通過任何方式來給藥，所述方式包括但不限于 軟明膠膠囊。可以通過液體形式或者意圖在使用前用水或其他合適媒介物還原的干產品形 式來制備、包裝和銷售適合口服給藥的本發明的藥物組合物的液體制劑。對于顆粒產品而 言，可能使用其他給藥方式，其包括但不限于膠囊、片劑、粉劑、粒劑、錠劑、滴劑、栓劑或適 合顆粒產品的任何其他給藥方式。當癥狀出現時或甚至癥狀沒有出現時，可以間歇地重復治療。其可能與在預期激 發之前的兩周和/或激發后的幾周，給予組分有關。對于慢性狀況的治療，連續使用也是可 能的。可以單獨提供葡聚糖或與其它藥劑組合提供，以提供有效組合。因此，在另一實施 方案中提供含有(a)如上文所述的葡聚糖和(b)用于治療IBD或異常腸功能的相關疾病的 第二活性劑的產品，作為在治療IBD或異常腸功能的相關疾病中同時、單獨或依次使用的 組合制劑。優選地，第二活性劑源于菊科植物，并且優選為源自菊科植物的含有蛋白質的組 分，即粕，例如向日葵粕，源自其中的油已經被大部分除去的產品。因此，可能采用單獨的葡聚糖，兩種或更多種的葡聚糖的組合，或者如果合適的 話，采用葡聚糖和另一種醫藥物質的組合。對于包含兩種或更多種葡聚糖的組合物而言，可 能采用源自相同或不同種類或者源自相同種類但是通過不同方法制備的的不同的葡聚糖。熟練的技術人員/醫師能夠選擇可與葡聚糖一起使用的醫藥物質，用于治療相 關疾病狀況。合適的其他醫藥物質的實例為，但不限于，免疫抑制劑例如硫唑嘌呤(咪唑 硫嘌呤(Imuran))，氨甲蝶呤(重氮片(Folex)、甲氨蝶呤膠囊(Rheumatrex))或6_巰基 嘌呤(硫基嘌呤(Purinethol)、6-MP)，和環孢霉素A(山地明(Sandimmune)，新山地明 (Neoral))；柳氮磺吡啶(Azulfadine)，氨水楊酸(mesalamine，美沙拉嗪(Asacol)、頗得斯 安(Pentasa))和奧沙拉嗪(地泊坦(Dipentum))；類固醇例如以強的松，甲基強的松龍或 布地奈德(Entocort EC)為實例的類固醇，抗生素例如甲硝唑或泰樂菌素；生物制劑例如 靜脈內給藥的英利昔單抗(Remicade)；以及在補充醫學中使用的可選擇和不同的藥劑，例 如魚油和包括但不限于蘆薈制品(aloe vera)、丁酸鹽、乳香(boswellia)、益生菌和煙堿的 其它試劑。通常，β -葡聚糖能夠每天數次對動物進行給藥，或者可以不那么頻繁給藥，例如 一天一次。例如該治療取決于IBD或相關疾病的類型，狀況的嚴重程度和每個患者的狀況。 葡聚糖治療可以與任何其它治療方案緊密相互關聯，并能夠處于任何其它藥劑的給藥之 前、與其同時存在或在其之后。可以將本發明所述的葡聚糖或兩種或多種葡聚糖的組合物用作預防，用于在IBD 疾病條件爆發之前預防該疾病，或者用作IBD被診斷后的治療。因此本文所用的“治療(treatment) ”或“治療(treating) ”包括但不限于預防治療，即預防，并且也包括穩定，例如如果不治療將會惡化的疾病的治療，但是該治療不會導致疾病的治愈。對于IBD或異常 腸功能的相關疾病來說，“治療(treatment) ”包括在一種或多種、優選多于一種的癥狀或風 險因素中可測量的和有益的改善。優選地，在一種或多種癥狀中，并且更優選地由患者和/ 或治療醫師根據該疾病的歷史表現或其預期(例如在預防治療的情況下)得出改善了 IBD 或相關疾病的結論。術語“IBD”是指炎癥性腸疾病(下文稱為IBD)，該炎癥性腸疾病主要包括引起腸 炎癥的兩種慢性疾病潰瘍性結腸炎和克羅恩病。盡管這兩種疾病具有一些共同的特征， 但是具有主要關于炎癥性變化的性質和位置的某些重要的差異。潰瘍性結腸炎為主要限 于大腸，也稱作結腸的炎癥性疾病。在潰瘍性結腸炎中，腸道內壁或粘膜變得發炎并發展 成潰瘍。克羅恩病在其涉及的腸區域與潰瘍性結腸炎不同-最常見的是其影響小腸的最后 部分、末端回腸和部分大腸。然而，克羅恩病也可攻擊胃腸道的任何部分。通常，克羅恩病 趨于牽連整個腸壁，而潰瘍性結腸炎僅影響腸的內壁。占很少的病例是其它形式的IBD，例 如膠原性結腸炎、淋巴細胞性結腸炎、缺血性結腸炎、導流結腸炎、白塞綜合征(Behget' s syndrome)、感染性腸炎和未確定型結腸炎。“異常腸功能的相關疾病”包括患者表現出連續或零星的腸功能受損的疾病或狀 況，其通常與腸道蠕動和/或腸炎的改變有關。此類相關疾病或狀況包括便秘、腹瀉和大便 失禁，以及由于腸切除手術或類似情況而導致的狀況或疾病。本發明還提供包含本文所述葡聚糖和信息材料的試劑盒或給藥裝置，該信息材料 描述了將葡聚糖給予人或其它動物用于治療IBD或異常腸功能的相關疾病。該試劑盒或給 藥裝置可具有含有葡聚糖的隔間(compartment)。如本文所述的“信息材料”包括但不限于 對于本發明組合物的指定用途，能夠用來傳達其用途的出版物、錄音、圖表或任何其他表達 媒介。本文所述的菊科蛋白質本身(獨立于葡聚糖的存在)可用于治療腹瀉。與用不符 合本發明的可比較的類似的飼料所看到的情況相比，這樣的治療包括腹瀉的相對降低。基 于糞便中干物質的量，能夠評估腹瀉。治療還包括預防，即飼料預防其他預期水平的腹瀉。本文所述的菊科蛋白質也可以用于治療腸疾病和改善腸健康狀況中。相關的腸病 通常是炎性的，并且包括炎癥性腸疾病或炎癥性腸綜合征。菊科優選源自向日葵屬，最優選地其為向日葵(Helianthus annus)(向日葵)。如果將菊科蛋白質作為動物飼料制劑的一部分進行給予的情況下，菊科粕通常會 占總飼料制劑的2% -50%，優選5% -40%，更優選8% -30%。因此，在另一方面中，本發明提供了菊科蛋白質，用于治療或預防動物中的腸疾 病。如果本文引用了菊科或其它植物蛋白質，除非上下文另有明確，應理解的是可以 使用菊科或其它植物粕。在另一方面中，在本文所述的各種不同的制劑和方法中，除了菊科 粕的蛋白質部分外，菊科粕的其它組分也可以用來代替菊科蛋白質。術語“粕，，是本領域公知的術語，用來指例如在壓榨和溶劑提取方法中，將一些或 大多數油從植物、種子或豆子等中除去之后的殘余物。因此，通常被定義成油籽蛋白質的這 些植物蛋白質來源也可以整體供給，但是更通常將它們作為除去油后的副產物供給。
向日葵粕包括蛋白質、纖維、灰分、脂肪和油殘余物。除其它變量外，向日葵粕的組 成取決于種子的油含量、去殼的程度、油提取的效率和除去油的溫度。
因此，在另一方面，本發明提供了菊科粕或源自菊科粕的任何因子如蛋白質，用于 治療IBD或異常腸功能的相關疾病。上述關于用于葡聚糖制劑和治療的靶種類的討論，已 做必要修正，適用于源于菊科的產物的用途。人、魚和牲畜哺乳動物是優選的。“有效量”是指有效改善疾病的癥狀或改善、治療、預防、延遲疾病發作或抑制疾病 的進展的化合物的量。最終，主治醫師或獸醫將決定合適的量和劑量治療方案。可以與載 體材料組合來制備單一劑量的活性成分的“有效量”將根據治療的個體和給藥的具體模式 而變化。在本公開中引用了各種不同的文獻，包括如出版物和專利。在其相關部分中，所有 此類文獻通過引用在此并入。引用任何給定的文獻不應解釋為承認其是關于本發明的現有 技術。如果本書面文件中術語的任何意義或定義與通過引用而并入的文獻中該術語的任何 意義或定義在某種程度上沖突，以指定給本書面文件中術語的意義或定義為準。對于包括在本發明中使用的各種成分在內的組分，本文引用的是商品名。在此本 發明人并非意圖受限于某些商品名下的材料。與通過商品名引用的材料等同的材料(例如 從使用不同名稱或引用編號的不同來源獲得的材料)可以在本文的描述中被代替或使用。本文所描述的組合物可包含本文所描述的任意成分，基本上由其組成或由其組 成。對于本說明書的目的，應清楚理解的是單詞“包含(comprising)”是指“包括但不 限于”，并且單詞“包含(comprises)”具有相應的意思。因此，單詞“包含(comprise) ”、“包 含(comprises)”和“包含(comprising) ”要理解成包括在內，而不是排斥在外。除非上下文另有明確的說明，否則本文和權利要求中所用單數形式“一個(a)”、 “一個(an)”和“這個(the)”包括復數涵義。除非另有定義，否則在本發明領域中，本文所用的所有的技術和科學術語以及任 何縮略語都具有與本領域普通技術人員通常所理解的具有相同的意思。下述實施例旨在說明本發明，并教導本領域普通技術人員執行并使用本發明。這 些實施例并非意圖以任何方式限制本發明。在下述實施例和附圖中進一步描述本發明。其 中圖1為具有小于的重復的β-1，6-連接的葡萄糖基單元的支鏈β-1，3_葡聚 糖的IH-NMR光譜。所觀察到的不同的化學位移顯示在下述表1中表1 圖2顯示在按照下文實施例1的限定處理的動物中，體重變化的對比。圖3顯示按照下文實施例1的限定處理的動物的存活率。圖4顯示根據下文實施例1限定的實驗設計，在急性結腸炎中，(A)代表性的結腸 部分和(B)結腸炎和組織損傷的分級比較。圖5顯示根據下文實施例1所限定的模型處理的小鼠的㈧代表性的結腸長度圖 示和(B)結腸長度的分布。圖6顯示根據下文實施例1所限定的模型處理的小鼠的(A)脾臟重量分布和(B)
胸腺重量。
圖7為顯示大西洋鮭魚糞便中干物質的百分比的圖，這是腹瀉的良好指標。圖8為顯示在按照下文實施例1的限定處理的動物中的急性結腸炎中，一系列與全身炎癥有關的所選擇介質的水平的圖。圖9顯示按照下文實施例4的限定處理的小鼠的㈧體重和⑶平均流體消耗。圖10顯示按照下文實施例4的限定處理的小鼠的㈧宏觀可見的淋巴集結 (Peyer' s patch)的數量和(B)福爾馬林固定的腸系膜淋巴結的橫截面面積。圖11顯示按照下文實施例4的限定處理的小鼠的㈧淋巴集結和⑶腸系膜淋 巴結的主要淋巴細胞亞群的組成。圖12顯示在按照下文實施例4的限定處理的小鼠的遠側結腸中，Ki67陽性細胞、 增生的腸上皮細胞的(A)數量和(B)分布；(C)代表性染色圖。圖13顯示在按照下文實施例4的限定處理的小鼠中，AB/PAS陽性杯狀細胞的(A) 數量和分布，以及(B)代表性染色圖。
實施例實施例1.可溶性β -葡聚糖對實驗性結腸炎的影響1. 1.實驗設計建立模型來評估可溶性葡聚糖(在此其是從Biotec Pharmacon ASA公司購買的 產品SBG)對治療炎癥性腸疾病的影響，在此以潰瘍性結腸炎作為示例。通過與飲用水中溶解的右旋葡聚糖硫酸鈉(DSS)接觸7天，誘導實驗性結腸炎。在 誘導結腸炎之前，如下所述將動物預處理7天。在經歷4天的急性/恢復階段后處死小鼠。將動物分成四個實驗組1.整個實驗過程中，對對照動物(η = 12)提供一般的飲用水。2.整個實驗過程中，對SBG處理的動物(η = 12)提供飲用水中的SBG(100mg/L)。3.在誘導期(7天)中，對DSS處理的動物(η = 16)提供DSS(1. 5% w/v)。在預 處理期(7天)和急性/恢復期(4天)中給予一般的飲用水。4.在誘導階段(7天)中，對SBG+DSS處理的動物(η = 15)提供溶解在含有 SBG(100mg/L)的水中的DSS (1. 5% w/v)。在預處理階段(7天)和急性/恢復階段(4天) 中，給予飲用水中的SBG (100mg/L)。1.2實驗詳述每天監測動物的發病率和體重的一般體征，并記錄流體消耗。人道終點的主要標 準是降低的體重大于基準體重的20%。由于動物福利的原因，對沒有滿足體重標準的估計 明顯垂死的小鼠實施安樂死。在心臟穿刺之前，通過皮下注射Hypnorm 和咪達唑侖(50-75 μ L/lOg體重)將 動物麻醉。死后，切除結腸、脾臟和胸腺。在固定之前，將結腸用冷的PBS沖洗并分成近側 結腸段、中間結腸段和遠側結腸段。將所有的樣品置于冰上并在福爾馬林中固定，用于隨后 的制備和分析。通過研究體重變化、存活率、結腸炎和組織損傷、疾病相關的結腸變短及脾臟和胸 腺重量的變化，以及循環中炎癥性介質的水平變化來評估結果。由不了解樣品特性和研究組的受過培訓的病理學者來評估結腸炎和組織損傷。以炎癥性細胞浸潤(評分0-3)、組織損傷(評分0-3)、淋巴聚集的不存在或存在(評分0或1) 和上皮再生的不存在或存在(評分0或1)的組合來表示組織病理學評分。通過將評分與 形成潰瘍的面積的比例相乘來校正組織損傷評分(0-25%= XU25-50%= X2,50-75% =X3和75-100%= X4)(表2)。將從近側結腸段、中間結腸段和遠側結腸段獲得的評分
相加來計算總評分。表2.組織病理學評分標準炎癥件細胞浸潤評分0-3固有層中偶爾存在炎癥性細胞0固有層中炎癥性細胞數目增加1擴展進入粘膜下層的炎癥性細胞匯合2炎癥性浸潤液跨壁擴展3組織損傷評分0-3無粘膜損傷0淋巴上皮病變1表面粘膜糜爛或病灶性潰瘍2大面積的粘膜損傷和擴展進入腸壁的更深結構3上皮表面的潰瘍面積因子1-40-25%125-50%250-75%375-100%4淋巴聚集評分0-1不存在0存在1上皮再生評分0-1不存在0存在1注意表2:在源自近側結腸部分、中間結腸部分和遠側結腸部分的活組織檢查中，建立組織 學評分以使結腸炎和損傷的程度量化，并將其結合至總評分。當記錄的組織損傷評分> 2 時，將該評分乘以對應于受影響的面積的因子。1.3 結果口服SBG給藥降低結腸炎相關的體重減輕監測體重減輕即關鍵的臨床癥狀，來評價SBG對實驗性IBD的保護作用。在通過 將DSS給予雄性BALB/c小鼠7天來誘導急性結腸炎之前，用SBG或一般的飲用水將雄性 BALB/c小鼠預處理7天。在實驗期間，對對照(Ctr)動物[基線重量22. 7 (21. 4-24. 0) g ； 平均及(范圍)，n = 12]提供一般的飲用水。在實驗期間，對SBG處理的動物[基線重量22. 2(20. 3-24. 9)g ；平均及(范圍)， n= 12]提供飲用水中的SBG(100mg/L)。在誘導期中，對DSS處理的動物[基線重量22.3(20. 6-23. 4)g ；平均及(范圍)，n = 16]提供DSS(1. 5% w/v)。在預處理階段和急性 /恢復階段給予一般的飲用水。在誘導期中，對SBG+DSS處理的動物[基線重量22. 1 (19. 4-24. 0)g ；平均及(范 圍)，n = 15]提供溶解在含有SBG(100mg/L)的水中的DSS(1. 5% w/v)。在預處理階段和 急性/恢復階段，給予飲用水中的SBG (100mg/L)。在預處理、誘導結腸炎期間和DSS終止后 的四天中，每天記錄體重和流體消耗。在DSS處理的動物中，我們觀察到在第14天至第17天之間重量顯著減輕約15%。 盡管在結腸炎誘導之前、在結腸炎誘導的過程中以及在結腸炎誘導之后，用SBG處理的動 物經歷了中度的重量減輕，但與只有DSS的組相比，DSS+SBG組相對防止了結腸炎相關的重 量減輕(在第16天和第17天P < 0. 05，在第18天P < 0. 01以及在第19天P < 0. 001， DSS+SBG 對比 DSS)(圖 2)。此外，與DSS組相比，在SBG+DSS組中重量降低的起始被稍稍延遲。在實驗期間， 無結腸炎對照動物的重量穩定增加。我們沒有觀察到SBG動物和接受一般的飲用水的小鼠 之間體重動力學的任何差異(圖2)。為了估計SBG日劑量和DSS接觸，監測流體消耗。記錄的平均值約為5_7mL/小鼠 /天(沒有顯示數據)，對應于20-30mg/kg的SBG日劑量。口服SBG給藥降低結腸炎相關的死亡率DSS接觸誘導的臨床癥狀包括便血、腹瀉、直腸出血、不活潑、不能梳毛，以及在嚴 重的情況下彎腰駝背的姿勢和渾身發抖。由于動物健康福利的原因，對明顯垂死的小鼠實 施安樂死。嚴重的結腸炎相關的體重減輕與死亡率有關，因此，由于人道因素，處死經歷重 量減輕超過基線重量的20%的小鼠。DSS終止后四天，口服SBG處理增加了存活至計劃終點的小鼠的比例(P = 0.041， DSS+SBG對比DSS)(圖3)。在DSS+SBG組中，在計劃終點之前，15只動物中僅有1只不得不 被處死，相比之下，在DSS組中16只小鼠中有6只被處死。并且，與DSS+SBG組(圖3)相 比，其需要處死的動物出現的更早。口服SBG給藥降低DSS誘導的結腸炎和組織損傷為了研究SBG給藥是否能夠防止DSS誘導的炎癥和潰瘍，檢查近側結腸、中間結腸 和遠側結腸的組織切片。專注于炎癥性細胞浸潤和組織損傷的存在和程度及淋巴聚集的存 在和不存在以及上皮再生的體征，并確定組織病理學評分(參見表2)。在對照組或SBG組中沒有觀察到明顯的病理學。另一方面，在DSS組中，觀察到擴 展進入粘膜下層相當大的炎癥性細胞浸潤和涉及透壁的嚴重情況。透露出粘膜微體系結構 的嚴重畸變，該嚴重畸變包括缺少清晰隱窩及杯狀細胞，中度至重度的潰瘍，和一些情況下 帶有上皮細胞的完全缺失。還辨別出粘膜水腫腸壁變厚的體征(圖4a)。盡管在來自DSS+SBG處理的小鼠的切片中，結腸炎的明顯組織學體征是顯而易見 的，但是在該組中獲得了明顯更低的組織病理學評分(P = 0. 027，DSS+SBG對比DSS)(圖4b 和表3)。在結腸遠側部分中，炎癥和組織損傷出現的更顯著(沒有顯示數據)。口服SBG給藥降低結腸炎相關的結腸縮短結腸縮短是確立已久的DSS誘導的結腸炎的疾病相關的特征。為了進一步評估 SBG對實驗性結腸炎的保護能力，切除結腸并測量其長度。
在沒有炎癥性狀況下，口服SBG給藥沒有顯示出對結腸長度具有影響。在DSS組 中，結腸比對照動物的結腸大約短了 30%。盡管DSS+SBG組中的結腸長度明顯受到與DSS 接觸的影響，但是該結腸明顯比DSS組中的結腸更長(P = 0. 005，DSS+SBG對比DSS)(圖 5a、b 禾口表 3)。因為DSS組中6個最短的結腸都來源于由于疾病發展而過早被實施安樂死的動 物，所以結腸縮短與疾病的嚴重程度具有良好的相關性。我們還觀察到與DSS+SBG組和對 照組中的糞便顆粒相比，來自DSS的結腸含有大量未成形的糞便。遠端宏觀壁增厚和腸透 明度的損失在DSS和DSS+SBG組中明顯可見，盡管其在DSS組中顯現的更顯著。在急性結腸炎中口服SBG給藥調節脾臟和胸腺的重量為了研究在急性結腸炎中，口服SBG給藥是否能夠對淋巴組織具有影響，死后收 集脾臟和胸腺。與對照動物相比，由于結腸炎的嚴重程度而過早被實施安樂死的小鼠的脾 臟和胸腺的質量降低，這表明重量降低與結腸炎相關的發病率有關(圖6，空心符號)。識別出對照組與DSS組之間的脾臟重量沒有總體差異。然而，在DSS+SBG組中，脾 臟重量明顯高于在DSS組中所觀察到的脾臟重量(P = 0. 046，DSS+SBG對比DSS)(圖6a和 表3)。盡管沒有統計上的意義，但是與對照小鼠相比，SBG組顯現出具有稍稍更高的脾臟重 量。此外，口服SBG給藥顯現出限制結腸炎相關的胸腺退化(P = 0. 042，DSS+SBG對比 DSS)(圖 6b 和表 3)。表3.數據匯總 口服SBG給藥限制了急性結腸炎中的全身炎癥為了研究口服SBG給藥是否能夠對全身炎癥具有影響，在四個處死后的小鼠實驗 組中，確定各種不同的炎癥性介質的水平。
由圖8可以看出，與對照組相比，在DSS小鼠中，TNFa、IFN Y、IL-1 a、IL-1 3、 IL-2、IL-3、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、IL-17、GM-CSF、MCP-1 和 MIP-1 ^ 的水平均都增加 了。然而，與DSS組相比，在DSS+SBG組中這些炎癥性介質的水平都降低了，這表明在急性 結腸炎中，SBG能夠通過降低這些炎癥性介質的水平來降低全身炎癥，該炎癥性介質的水平 的增加與該疾病有關。在DSS 組與 DSS+SBG 組之間，觀察到 IL-4、IL-9、IL-12p40、IL_12p70、嗜酸細胞活 化趨化因子(Eotaxin)、受激活調節正常T細胞表達和分泌因子(Rantes)、KC、MIP-1 a和 G-CSF的水平沒有總體差異1.4 結論實施例1明顯表明口服SBG給藥對DSS誘導的實驗性IBD具有有利效果。1)在實驗動物中，口服SBG處理降低結腸炎相關的重量減輕。2)在實驗性IBD中，口服SBG處理降低結腸炎相關的死亡率。3)在實驗性結腸炎中，口服SBG處理降低結腸炎和組織損傷。4)在實驗性結腸炎中，口服SBG處理降低結腸炎相關的結腸縮短。5) 口服SBG處理限制結腸炎相關的胸腺退化。6)在急性結腸炎中，口服SBG處理限制全身炎癥。1. 5其他實驗細節口服SBG給藥對急性結腸炎中重量減輕的影響在通過口服接觸DSS 7天誘導急性結腸炎之前，用SBG或一般的飲用水對小鼠進 行了 7天的預處理。在預處理、結腸炎誘導期間以及急性-和最初恢復期(Acu/rec)的隨 后的4天期間，每日記錄體重，然后將動物處死。在整個實驗中，對照動物(Ctr，n= 12)接 受了一般的飲用水。SBG處理的動物(SBG，n = 12)接受了補充SBG的飲用水(100mg/mL)。 DSS處理的動物(DSS，n = 16)在預處理階段接受了一般的飲用水，在誘導階段接受了補充 DSS的飲用水(1. 5% w/v)，并在急性_/恢復階段接受了一般的飲用水。DSS和SBG的組合 處理的動物(DSS+SBG，n= 15)在預處理階段接受了補充SBG的飲用水，在誘導階段接受了 補充了組合的DSS/SBG的飲用水，并在急性_/恢復階段接受了補充了 SBG的飲用水。體重 表達為基線(BL)值的百分比，平均值士SEM。E =安樂死小鼠體重降低> 20%或垂死。*P < 0. 05，**P < 0. 01，***P < 0. 001，DSS 對比 DSS+SBG，通過用 Bonferroni posttest 進行 雙因素方差分析來確定。給出的數據自兩個獨立的實驗收集。口服SBG給藥對急性結腸炎中存活的影響在通過如上所述口服接觸DSS誘導急性結腸炎之前，用SBG或一般的飲用水對小 鼠進行預處理。在除去DSS后的4天的急性_/恢復階段記錄死亡/強迫安樂死并表達為 最初組規模的百分比。人道的終點標準為體重減輕大于基線體重的20%。不符合體重減輕 標準的確實垂死的動物也被實施安樂死。給出的數據自兩個獨立的實驗收集。口服給予SBG對急性結腸炎中結腸發炎和組織損傷的影響在通過如上所述口服接觸DSS誘導急性結腸炎之前，用SBG或一般的飲用水對小 鼠進行預處理。死后，切除結腸，用PBS沖洗并準備進行組織學分析。檢查福爾馬林固定、 石蠟包埋及H&E染色的切片的炎癥細胞浸潤、組織損傷、淋巴聚集和表皮再生的存在和不 存在(表2)。A)來自對照動物(Ctr，上左)、SBG處理的動物(SBG，上右)、DSS處理的動物(DSS，下左)以及DSS和SBG的組合處理的動物(DSS+SBG，下右)的代表性遠端結腸H&E切 片，原物放大100X。B)評估了近端、中端和遠端結腸段并計算了每只小鼠的總體組織病理 學分數。空心符號表示在預定的終點前由于動物福利的原因而被實施安樂死的動物。條代 表中間值。給出的數據自兩個獨立的實驗收集。口服SBG給藥對結腸炎相關的結腸縮短的影響在通過如上所述口服接觸DSS誘導急性結腸炎之前，用SBG或一般的飲用水對小 鼠進行預處理。死后，切除結腸并測量了結腸長度。A)從對照動物(Ctr)、SBG處理的動物 (SBG)、DSS處理的動物(DSS)以及DSS和SBG的組合處理的動物(DSS+SBG)切除的結腸的 代表性照片。圖片已經被數字化增強(Adobe Photoshop CS 8.0,Adobe Systemslnc.，San Jose, CA, USA) B)結腸長度，單位mm。空心符號表示在預定的終點前由于動物福利的原因 而被實施安樂死的動物。條代表中間值。給出的數據自兩個獨立的實驗收集。口服SBG給藥對急性結腸炎中脾臟和胸腺重量的影響在通過如上所述口服接觸DSS誘導急性結腸炎之前，用SBG或一般的飲用水對小 鼠進行預處理。死后，切除脾臟(A)和胸腺(B)。用福爾馬林固定后，記錄器官重量(mg)。 空心符號表示在預定的終點前由于動物福利的原因而被實施安樂死的動物。條代表中間 值。給出的數據自兩個獨立的實驗收集。實施例22.1實驗設計用具有異常高濃度的植物蛋白的動物飼料產品測試了飼料0-1，3/1，6_葡聚糖 產品MacroGard 和水解的酵母細胞/完整酵母細胞產品PatoGard 的效果。高蛋白飼 料的目的是在腸內產生疾病狀態并評價產品MaeroGard 和PatoGard 在預防和治療這 樣的疾病狀況中的作用。在這些試驗中使用的魚是大西洋鮭魚(Salmo salar) 0植物蛋白的含量大于15%通常導致魚的結腸健康下降，因為魚不習慣這種高蛋 白飲食。在該試驗中，將總蛋白含量增加至32%從而導致對魚結腸的有害影響。為了研 究不同植物蛋白的影響的目的，使用了大豆蛋白和向日葵蛋白兩者并與金牌標準(golden standard)進行了比較，所述金牌標準易于消化魚粕產品。該試驗共包括九個不同的組。用PatoGard 和MacroGard (65%，3-1，3/1， 6-葡聚糖)喂食不同的組。對照組僅接受了所制備的含有高植物蛋白的動物飼料。從下文 的表4中能夠看出分布。 飼料1FM 僅含魚粕的飼料飼料2 :FMS 含魚粕和32%的大豆的飼料飼料3 :FMSPG 含 2000mg PatoGard 的組 2 飼料飼料4 :FMSMG 含 lOOOmg MacroGard 的組 2 飼料飼料5 :FMSS 含魚粕、15%的大豆和15%的向日葵粕的飼料飼料6 :FMSSPG 含 2000mg PatoGard 的組 5 飼料飼料7 :FMSSMG 含 lOOOmg MacroGard 的組 5 飼料這七組由150條魚組成，飼養在海中的5X5X5米小徑盆地(trailbasin)中。用 各自的飼料喂養各組71天。這段時期之后對魚進行測量并稱體重，并自27條隨機挑選的魚的腸提取組織樣品。用標準方法登記組織變化并在Urdn-評分后分類。評分集中于(1) 核上泡的存在和大小(2)簡單皺襞(simple fold)的固有層的擴展程度(3)基礎皺襞與致 密層之間的結締組織的量以及(4)粘膜皺襞的增厚程度。每一檢測點按照1-5的等級進行 分類，其中1表示未損傷且5為致命損傷。2. 2結果與討論表4 用Uran評分測量組1_7飼料的腸健康 通過向飼料中添加Patogard 和MacroGard (組3、4、6和7)，大大降低了組2 和組5魚飼料中的有害腸健康。相對于僅包含大豆或包含大豆與向日葵的組合的飼料，添 加Patogard 導致了明顯的降低。這些結果清楚地表明，Patogard 和MaeroGard 均消 除飼料中植物蛋白的有害影響并因此導致腸健康獲得改善。實施例33. 1成分和飲食飲食的配方和組成分別在表5和表6中給出。通過用Skretting( Aver0y， Norway)進行高壓濕法擠壓，生產基于標準魚粕的對照飲食(FM)，含13. 2 %的提取并烘 烤的大豆粕[SBM]和13. 5%的提取的向日葵粕[SFM] (FM+SS)的高蔬菜飲食，以及含 29. 9%的大豆粕(FM+S)的高蔬菜飲食。顆粒大小為6mm，并在涂敷魚油前，將所有的飲 食干燥。在涂敷油之前，首先用每kg飲食lOOOmg的MacroGard (fm+ss+iooomg)或 2000mg的PatoGard (FM+SS+2000PG)，涂敷批量基礎fm+ss飲食。同樣，對用每kg飲 食 500 (FM+S+500MG)或 looo (FM+s+ioooMG)mg MacroGard 或者 1000 (FM+S+1000PG)或 2000 (FM+S+2000PG) PatoGard ,預涂敷批量基礎fm+s飲食。這給出一系列九種實驗性飲 表5.實驗性飲食的配方
*磷酸二氫鈣表6.實驗性飲食的組成 *CP;NX6. 253. 2魚、培養條件和取樣給大西洋鮭魚喂食實驗性飲食，共69-71個飼養日。實驗前，給魚喂食商購的飲食 (Skretting AS, Stavanger, Norway)。實驗在2006年的第25周開始并在第36周結束。實 驗過程中的水溫為12. 3°C -17. 4°C，平均為15. 3°C。實驗開始時，27組鮭魚(679g，每組150條魚)被隨機分配至5X5X5m3的海圍欄 中。然后在三個隨機實驗性設計中，將每種飲食分配給三組魚。通過電驅動喂食器，對魚連 續喂食，如Einen(1999)所述，自圍欄的下方收集未被吃掉的飼料并向上泵入金屬網過濾器。計劃喂料速率為過量15%，并如Helland et al. (1996)所述，每三天根據所記錄的過
量喂食進行調整。在試驗開始時和第70個飼養日對魚整批稱重。在最后稱重時，將相當數量的魚用 三卡因甲基磺酸鹽(MS 222,Argent ChemicalLaboratories Inc.，Redmont，Wa，USA)麻醉， 并如AuStreng(1978)所述進行擠壓以收集糞便，用于可消化性評估。收集每一圍欄的糞便 樣品并立即在-20°C下冷凍。3. 3化學分析和組織學檢查分析前將糞便冷凍干燥。分析了飲食和冷凍干燥的糞便的干物質、灰分、氮、脂 質、淀粉(作為a-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶水解后的葡萄糖進行測定，隨后通過“G0DP0D 法”(Megazyme，Bray, Ireland)測定葡萄糖)、總能量(Parr 1271彈式熱量計，Parr, Moline，IL，USA)和釔(在Jordforsk，人s，Norway，通過電感耦合等離子體(ICP)質譜法， 如之前 Refstie et al. (1997)所述)。3. 4統計學分析通過SAS計算機軟件(SAS，1985)中的一般的線性模型(GeneralLinear Model) 程序分析結果。對每個圍欄的平均結果進行單因素方差分析(AN0VA)，以飲食作為獨立的因 素。鄧肯法多重比較檢驗顯示出顯著差異。顯著水平為0.05，且結果被表示為平均值 士 s. e.m.(平均值的標準誤差)。3. 5結果與討論與喂食FM飲食時相比，喂食FM+S和FM+SS飲食通常導致糞便中的干物質含量較 低(即，水較多)，這表示腹瀉(下文的表7)。表7.喂食實驗飲食70天后魚對營養物的表觀消化率及魚對氮和能量的表觀保留 (n = 3)。
欄中不同的上標―表示通過鄧肯法多重比較檢驗所顯示的顯著差異(P < 0. 05)。 當比較FM+SS飲食時，在添加2000mg kg-1的PG時，這獲得明顯改善，并且當添加 lOOOmg kg-1的MG時，腹瀉疾狀況也傾向于改善。當添加至FM+S基礎飲食中時，未觀察到MG和PG的此類作用。實施例4.可溶性0 -葡聚糖對小鼠的腸和與腸相關的淋巴組織的影響4. 1實驗設計建立了模型以評估可溶性葡聚糖(在這里是來自Biotec PharmaconASA公司的產 品SBG)對健康小鼠的腸和與腸相關的淋巴組織(GALT)以及腸上皮的影響。通過研究體 重變化、流體消耗、淋巴集結(Peyer' spatch, PP)的數量和淋巴細胞組成、腸系膜淋巴結 (MLN)的橫截面面積和淋巴細胞組成以及Ki67-陽性細胞和杯狀細胞的數量和分布，對結 果進行了評估。通過肉眼觀察切除的腸，確定了肉眼可見的PP的數量。通過分析蘇木精和 伊紅(H&E)染色的切片，確定福爾馬林固定的MLN的橫截面面積。通過流式細胞儀檢查PP 和MLN中主要的淋巴細胞亞群的組成。通過免疫組織化學鑒別增殖的細胞、Ki67-陽性細 胞、腸上皮細胞。在進入實驗前，將雄性BALB/c 小鼠在 Rikshospitalet UniversityHospital, Oslo, Norway 的 Centre for Comparative Medicine 的最小疾病單兀(minimal disease unit)中維持至少一周。將動物飼養在籠中，每籠2只小鼠，供應水并照慣例隨意喂食。將 籠保持在21 士 1°C和55+10%的相對濕度下。光照條件由具有一小時的黃昏和黎明的交替 的12h光/暗循環構成。將小鼠隨機分配成兩個實驗組；分別接受補充SBG的水(100mg/L)或一般的飲用 水的SBG處理的小鼠和對照(Ctr)小鼠，隨意喂食20天(0-19)。在整個實驗中記錄了體重 和流體消耗并監測了小鼠發病的臨床體征。進行了三次相同但獨立的實驗。在頭兩次實驗中，收集用于隨后的組織學研究而 保藏的組織樣品，而在第三次實驗中收集用于流式細胞儀分析的新鮮材料。在心臟穿刺之前，通過皮下注射Hypnorm 和咪達唑侖(50-75 u L/l0g體重)將
動物麻醉。將死后的小鼠浸泡在70%的乙醇中并固定至解剖板。將腹腔打開并將MLN、腹 股溝淋巴結(ILN)、脾臟和腸切除。檢查小腸的肉眼可見的PP并切除了鑒別出的PP。用 冷PBS沖洗結腸以在固定之前除去所含的糞便。將所收集的用于隨后的組織學分析的組織 樣品保存在冰上，并在10%的福爾馬林中、于4°C下固定24h。將固定的組織樣品轉移至含 0. 福爾馬林的PBS中，并在4°C下儲存，用于隨后的制備和分析。將所分離的用于隨后的 流式細胞儀分析的PP、MLN、ILN和脾臟轉移至冰冷的FM中。將通過心臟穿刺收集于鋰肝素 真空管中的血保存在冰上直至隨后的分析。組織化學和免疫組織化學用自動組織處理器處理福爾馬林固定的活組織并隨后包埋在石蠟中。將切片切至 4 ym并放在被多聚賴氨酸涂敷的載玻片上。由不清楚樣品身份的測試者進行顯微鏡和圖像 分析。MLN橫截面面積用蘇木精和伊紅(H&E)將MLN切片手工染色，并在配備有數碼相機和成像軟件的 光學顯微鏡中檢查。通過用顯微鏡成像軟件中的特征模塊(build in feature)分析顯微 照片來計算MLN橫截面面積。簡言之，使用內插的繪圖工具標記MLN切片的周圍，并基于所 包括的像素數量來計算面積。杯狀細胞計數
使來自遠端結腸的切片在二甲苯和乙醇中脫去石蠟，并在蒸餾水中再水化，然后 在自動組織染色器中用蘇木精、阿爾新藍和高碘酸_希夫試劑染色。在光學顯微鏡中檢測 結腸切片。通過對顯示完整隱窩(crypt)高度的20個取向較好的隱窩中的AB/PAS陽性細 胞進行計數來確定杯狀細胞的數量，并表達為每隱窩中陽性細胞的平均數量。杯狀細胞的 隱窩間分布表示為隱窩的底部、中部和上部1/3中陽性細胞的數量。用配備有相機的光學 顯微鏡獲取說明性顯微照片。免疫組織化學使來自遠端結腸活組織的福爾馬林固定的切片在二甲苯和乙醇中脫去石蠟，在 PBS中再水化；并使其在CA抗原修復緩沖液中沸騰20分鐘。在4°C下用一抗或者濃度和同 種型匹配的對照抗體孵育切片過夜。在PBS中洗滌之后，在室溫下用熒光燃料綴合的二抗 孵育切片3h (小時)。用Hoechst染色法將核染色。在配備有數碼相機和成像軟件的熒光 顯微鏡中檢測切片。通過分析數碼照片，確定增殖的Ki67陽性上皮細胞的數量和增殖區的大小。選擇 了顯示完整隱窩高度的切片的區域，用于分析。細胞計數表達為每一隱窩中陽性細胞的平 均數，對至少8個隱窩進行計數，并且增殖區表達為總隱窩高度的百分比。通過對明確位于上皮中的⑶3陽性細胞進行計數，確定IEL數量。直接在熒光顯 微鏡中拍攝結腸切片的整個周邊。流式細胞儀破壞脾臟、MLN、ILN和PP，并用尖端為扁平鏟狀的鑷子在FM緩沖液中的尼龍網 的兩個外殼之間研磨。用新鮮的尼龍網過濾勻漿，離心(1400rpm/410g，4°C下4分鐘)并 在FM中洗滌，以產生單細胞懸浮液。于黑暗中在冰上，用100 iiL染色混合物，將1百萬個 MLN-、ILN-和PP細胞及300 u L全血孵育30min，該混合物在FM緩沖液中由抗體和每100 y L 0. lmg大鼠IgG構成。在FM中洗滌細胞，如上所述進行離心，并于黑暗中在冰上用APC-Cy7 綴合的鏈霉抗生物素孵育20min，以標記所用的生物素化的抗體。在FM中洗滌后，將源自組 織的單細胞重懸浮于低聚甲醛(1 %，于PBS中)，并于黑暗中在冰上孵育5min，進行固定。除 去固定劑并將細胞重懸浮于FM中，并于4°C下避光儲存，用于隨后的流式細胞儀分析。通過 按照廠家的說明書使紅細胞在OptiLyse B中裂解，準備分析來自全血染色反應的白細胞。 通過離心除去裂解液，將細胞固定，重懸浮于FM中，并儲存，用于如上所述的分析。將未染 色的脾臟、MLN、ILN、PP和OptiLyse B處理的全血細胞作為對照。在流式細胞儀上分析細 胞懸浮液。統計學分析體重和流體消耗數據表達為帶有平均值的標準偏差(SD)的平均值，并用雙因 素方差分析(AN0VA)和修正差別后檢驗(Bonferroni posttest)進行分析。PP數量、 MLN橫截面面積、杯狀細胞數量、上皮增殖和IEL數量表達為中間值并用曼-懷二氏檢驗 (Mann-Whitney test)進行分析。淋巴細胞組成的流式細胞儀數據表達為帶有標準偏差 (SD)的平均值，并用曼-懷二氏檢驗進行分析。通過Grubb’ s離群檢測檢驗(Grubb’ s outlier diction test)來鑒別高度可疑的離群值，其不可能代表來自高斯群體的隨機取 樣，并自以后的分析中排除。用 GraphPad Prism，版本 4(GraphPad Sofeware, San Diego, CA, USA)進行所有的統計學分析。P < 0. 05的差異被認為是統計學顯著的。
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4. 2 結果SBG補充對體重和流體消耗的影響將雄性BALB/c小鼠隨機分配成兩個實驗組接受補充SBG的飲用水的組(SBG)和 接受純飲用水的對照組(Ctr)。為了監測響應口服SBG給藥的實驗動物的總體健康狀況，記 錄體重。小鼠的體重穩定地增加，且Ctr與SBG處理的動物之間沒有觀察到體重動力學差 異(圖9)。SBG似乎耐受良好并且沒有注意到發病的臨床體征。為了進一步研究SBG補充對食欲和總體活動的影響，并且重要的是為了評估所攝 取的SBG每日劑量及總劑量，計算了每只小鼠的平均流體消耗。流體消耗大約為4-7ml/小 鼠/天，相當于SBG組中15-30mg/kg體重的每日葡聚糖劑量。沒有記錄到實驗組之間 的流體消耗差異(圖9)。口服SBG給藥影響粘膜誘導部位為了研究口服SBG給藥對GALT、PP和MLN的影響，檢查了基本粘膜誘導部位和調 整部位。在SBG組中，小腸中的肉眼可觀察到的PP的中間數量，比我們在Ctr組中觀察到的 中間數量高大約40% (P< 0. 01)(圖10A)。此外，我們識別出SBG處理的小鼠中MLN大小 顯著增加。在SBG組中，分離的MLN的中間橫截面面積比我們在Ctr組中觀察到的中間橫截 面面積大約35% (P < 0. 05)(圖10B)。假定LN為球形，這相當于估計體積增加50-60%o盡管口服SBG給藥后GALT有明顯變化，實驗組之間主要的淋巴細胞群的特征 (CD4P。S、CD8P。S、CD19P。S細胞)沒有顯示出差異，無論是PP還是MLN(圖11)。同樣，口服SBG 給藥未改變代表全身隔間(systemic compartment)的血液白細胞、脾臟和ILN單一細胞懸 浮液中的淋巴細胞組成(數據未顯示)。流式細胞儀分析表明，在檢測的所有細胞制劑中， 存在DeCtin-lp°s細胞、主要的MHC II類p°s、⑶llbp°s或⑶llcp°s細胞，即巨噬細胞和樹突細 胞(DC)。然而，口服SBG給藥似乎沒有改變該0 -葡聚糖受體的表達模式。在自SBG處理的 小鼠中分離的MLN單一細胞中，3. 5士 1. 8%為Dectin-1陽性，而Ctr動物中3. 3士 1. 2%為 陽性(平均值士 SD)。PP的相應數值為0. 22 士0. 04%對0. 23 士0. 05%，ILN的為3. 2 士 1. 2% 對3. 4士0.7%，脾臟的為6. 5士 1.6%對7. 1 士 1.2%，以及血液白細胞的為7. 9士 1.6%對 8. 0士 1. 9%。口服SBG給藥增加上皮增殖為了檢查不同的腸上皮細胞類型所介導的天然防御功能，我們首先分析了產粘液 的杯狀細胞的數量和分布。口服SBG給藥沒有影響遠端結腸中杯狀細胞的數量或隱窩內分 布。SBG處理的小鼠中每個隱窩內AB/PAS陽性杯狀細胞的數量為6.6[3. 1-8.8]，相比之下 Ctr組中為7. 6 [5. 4-10. 3](平均值和[范圍])(圖13)。我們還對IEL的切片進行了染色， 但是在遠端結腸切片中鑒別出很少的IEL，并且SBG處理的小鼠與對照之間在IEL數量上沒 有顯示出差異。在SBG處理的小鼠中，每一切片中CD3P°SIEL的數量為12. 4[5. 0-21. 0]，相 比之下Ctr組中為12. 3[6. 5-21. 5](平均值和[范圍])。接下來，我們研究了 口服SBG給藥對腸上皮粘膜效應物部位的影響。在用SBG處 理的小鼠中，遠端結腸中增殖的上皮細胞的數量明顯高于我們在對照動物中觀察到的數量 (圖12)。在SBG組中，每個隱窩的Ki67p°s細胞的中間數量比Ctr組高37% (P < 0. 01)。 另外，在SBG組中，增殖區的中間大小比對照大25% (P < 0. 001)。4. 3 結論
該實施例清楚地表明，SBG給藥影響重要的粘膜誘導部位PP和MLN。PP和MLN在 誘導和保持口服耐受和對腸微生物群的全身忽略中起重要作用。本文首次證實，口服給予的SBG刺激GALT和上皮，它們分別為粘膜免疫系統的誘 導部位和效應物部位。證實了 口服給予可溶性β -葡聚糖對GALT (PP和MLN)大小有影響。 盡管是推測，但是似乎負載β “葡聚糖的細胞自腸上皮遷移至GALT可能是觀察到的MLN和 PP擴展的原因。已經通過流式細胞儀表征了 MLN和PP中⑶4P°S和⑶8P°ST細胞和⑶19P°S B細胞即 主要的淋巴細胞群的相對含量，并且在SBG處理的小鼠與對照之間沒有發現顯著差異。我 們沒有觀察到與口服給予SBG相應的Dectin-I表達的改變。口服SBG給藥沒有改變結腸 中杯狀細胞的數量和分布。在此我們報告，口服給予時，SBG增加了結腸中增殖的上 皮細胞的數量以及增殖區 的大小。本文給出的數據表明，實驗性結腸炎中SBG的保護性作用部分是由于對上皮增殖 以及因此可以想象地對上皮屏障恢復和功能的刺激作用。因此，我們報告，口服葡聚糖 給藥刺激腸上皮增殖。我們證實，源自釀酒酵母的水溶性β -葡聚糖SBG的口服給藥刺激了 PP和MLN的 形成和/或擴展。此外，SBG刺激了粘膜上皮細胞的增殖，這表明SBG還影響腸屏障功能。 數據表明葡聚糖部分通過影響粘膜免疫系統增強了宿主保護。刺激作用可能在免疫應 答的粘膜誘導部位以及免疫防御的效應物部位兩者處都受到介導。
權利要求
源自酵母的具有β-(1，3)-主鏈的葡聚糖，所述β-(1，3)-主鏈具有一個或多個與其相連的β-(1，3)-側鏈，所述葡聚糖用于治療或預防動物的炎癥性腸疾病和異常腸功能的相關疾病。
2.如權利要求1所述的葡聚糖，其中所述酵母是釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)0
3.如權利要求1或2所述的葡聚糖，其中所述葡聚糖至少部分分離自其它細胞壁組分。
4.如權利要求1-3中任一項所述的葡聚糖，其中所述葡聚糖具有與其天然存在的結構 相比改變的化學結構。
5.如權利要求1-4中任一項所述的葡聚糖，其中所述葡聚糖未被化學基團衍生化。
6.如權利要求1-5中任一項所述的葡聚糖，其中所述葡聚糖基本上不含重復的β-(1， 6)_連接的葡糖基單元。
7.如權利要求1-6中任一項所述的葡聚糖，其中所述葡聚糖為顆粒形式。
8.如權利要求1-6中任一項所述的葡聚糖，其中所述葡聚糖是可溶性的。
9.如權利要求7所述的葡聚糖，其中所述葡聚糖的分子量為150kDa-300kDa。
10.如權利要求8所述的葡聚糖，其中所述葡聚糖的分子量為約6kDa至30kDa。
11.如權利要求1-10中任一項所述的葡聚糖，其中所述葡聚糖為口服給藥。
12.如權利要求11所述的葡聚糖，其中所述葡聚糖的給藥劑量為0.Img每kg體重每天 至500mg每kg體重每天。
13.源自菊科(Asteraceae)的粕，其用于治療或預防動物的炎癥性腸疾病和異常腸功 能的相關疾病。
14.源自菊科(Asteraceae)的蛋白，其用于治療或預防動物的炎癥性腸疾病和異常腸 功能的相關疾病。
15.如權利要求13所述的粕或如權利要求14所述的蛋白，其中所述菊科 (Asteraceae)來自向日葵屬(Helianthus)0
16.如權利要求15所述的粕或蛋白，其中所述菊科為向日葵(Helianthusannus).
17.如權利要求1-12中任一項所述的葡聚糖，如權利要求13、15和16中任一項所述的 粕或如權利要求14-16中任一項所述的蛋白，其中所述炎癥性腸疾病是潰瘍性結腸炎或克 羅恩病。
18.如權利要求1-12中任一項所述的葡聚糖，如權利要求13、15和16中任一項所述的 粕或如權利要求14-16中任一項所述的蛋白，其中所述異常腸功能的相關疾病選自便秘、 腹瀉、大便失禁以及手術引起的狀況和疾病。
19.治療動物的炎癥性腸疾病和異常腸功能的相關疾病的方法，其包括對所述動物給 予治療有效量的前述權利要求中任一項所述的葡聚糖、粕或蛋白。
20.試劑盒或給藥裝置，所述試劑盒或給藥裝置包括前述權利要求中任一項所述的葡 聚糖、粕或蛋白和信息材料，所述信息材料描述對人或其它動物給予所述葡聚糖、粕或蛋 白。
21.產品，其包含(a)前述權利要求中任一項所述的葡聚糖、粕或蛋白和(b)用于治療 炎癥性腸疾病和異常腸功能的相關疾病的第二活性劑，作為同時、單獨或相繼用于治療炎 癥性腸疾病和異常腸功能的相關疾病的組合制劑。
全文摘要
本發明涉及源自酵母的葡聚糖在治療或預防動物的炎癥性腸疾病和異常腸功能的相關疾病中的用途，所述葡聚糖具有β-(1，3)-主鏈，該β-(1，3)-主鏈具有一個或多個與其相連的β-(1，3)-側鏈，本發明特別地涉及使用諸如來自釀酒酵母的可溶性葡聚糖在優選口服給藥時的用途。本發明還涉及利用源自菊科的粕或蛋白質的炎癥性腸疾病和異常腸功能的相關疾病的替代治療。
文檔編號A61P31/00GK101878033SQ200880115913
公開日2010年11月3日 申請日期2008年11月13日 優先權日2007年11月13日
發明者安德斯·桑德維克, 羅爾夫·艾娜爾·英格斯塔德, 芬恩·埃里卡·約翰森 申請人:生物科技醫藥公司