專利名稱：類固醇類的高分子結合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及具有聚乙二醇結構部分和琥珀酸單酰胺結構部分的聚合物的羧基與 類固醇類的羥基形成酯鍵的類固醇類的高分子結合物、其制造方法及其用途。
背景技術：
類固醇類藥物作為針對包括風濕病、膠原病等在內的各種炎癥性疾病、變應性疾 病、重癥感染癥、癌癥等各種疾病的治療藥具有良好的作用。但是，針對某一疾病使用時，類 固醇類所具有的各種作用可能會作用于其他正常部位而出現副作用，因此有時給藥量受到 限制。此外，可以容易地推測，通過使類固醇的效力長時間作用于患部，可發揮出更高的價 值，但可能會出現如前所述的副作用，因此有時反復給藥的次數也受到限制。即，盡管類固 醇類是對各種疾病顯示出效果的非常優秀的藥物，但由于副作用而在臨床實踐中通常避免 使用。目前，作為解決該問題的嘗試，進行著使類固醇類選擇性地聚集于患部并使其在患部 長時間緩慢釋放等的研究。其中之一是藥物遞送系統，已知例如使地塞米松的棕櫚酸酯內包于脂質體中而得 的利美達松(三菱制藥株式會社(三菱々工> 7 7 — 社)制)(Adv. Drug Delivery Rev.， 第 20 卷，第 195 頁(1996))。此外，專利文獻1中記載了使倍他米松的磷酸酯與鋅、聚乳酸、聚乙二醇-聚乳酸 一起形成納米粒子而得的制劑。另一方面，專利文獻2中記載了使藥劑與形成膠束且呈水溶性的聚乙二醇與聚天 冬氨酸的嵌段共聚物結合而得的高分子化合物，專利文獻3中記載了使聚乙二醇類和聚谷 氨酸的嵌段共聚物的側鏈羧基與喜樹堿類的酚性羥基結合而得的喜樹堿類的高分子衍生 物。已知這些高分子化合物因Era效應而聚集于腫瘤。然而，專利文獻2和3中沒有關于 結合有類固醇類的高分子化合物的記載。專利文獻1 日本專利特表2006-521367號公報專利文獻2 日本專利特許第2694923號公報專利文獻3 國際公開第2004/39869號文本非專利文獻1 :Adv. Drug Delivery Rev.，第 20 卷，第 195 頁(1996)發明的揭示對于上述的利美達松，首先地塞米松的棕櫚酸酯被從脂質體釋放，然后酯鍵被機 體的酶水解，所生成的類固醇類發揮活性。同樣地，對于專利文獻1記載的納米粒子，將倍 他米松的磷酸酯從粒子釋放，然后酯鍵被機體的酶水解，發揮類固醇類的活性。然而，已知 機體的水解酶的活性不僅存在種間差異，即使是同一種中也存在較大的個體差異，因而依 賴水解酶來切斷與藥劑的結合的藥劑的效果可能會產生個體差異。此外，對于專利文獻2中所記載的阿霉素的高分子結合物，雖然嵌段共聚物與阿 霉素通過酰胺鍵結合，但由于酰胺鍵是化學上穩定的結合形式，因此基于水解的藥劑釋放 慢，其藥效存在疑問。
潑尼松龍、甲潑尼龍、地塞米松、倍他米松、氯倍他索、二氟拉松、二氟可龍、氟輕 松、氫化可的松、二氟潑尼酯、倍氯米松、曲安西龍、阿氯米松等類固醇類是在風濕病、哮喘、 腎炎、潰瘍性結腸炎、自體免疫疾病、過敏癥、牛皮癬、濕疹、口腔炎、肉芽腫病、惡性淋巴瘤 等疾病的治療中有用的藥物，但因為副作用的發生幾率也高，所以需要將類固醇類僅遞送 至所需部位、副作用少且在不依賴機體的水解酶的情況下釋放類固醇類的新的藥劑。本發明人等關注于癌癥病灶和炎癥部位的血管具有高透過性的現象，為了解決所 述的課題而認真研究后，認為如果注射至血管，則在體內循環，容易聚集于血管的透過性高 的癌癥病灶和炎癥部位，設計了將類固醇類化學鍵合于含聚乙二醇的嵌段共聚物的高分子 載體而得的類固醇類的高分子結合物。該類固醇類的高分子結合物可用作前藥。以往的前藥在藥劑釋放時利用患者的水解酶，效果容易產生個體差異，但本發明 試圖通過在聚合物中引入與類固醇類結合的琥珀酸單酰胺結構部分來實現在生理條件下 以化學方式使其水解。即，在含聚乙二醇的嵌段共聚物中試驗的如下的現象如果使具有羥 基的化合物與琥珀酸單酰胺結構的游離的羧酸形成酯鍵，則隨著琥珀酸單酰胺結構變化為 環化結構、即琥珀酰亞胺，容易使具有羥基的化合物游離。其結果是，發現本發明的使具有 聚乙二醇結構部分和琥珀酸單酰胺結構部分的聚合物與具有羥基的類固醇類的羥基形成 酯鍵而得的類固醇類的高分子衍生物中，酯鍵如所設想的那樣在不依賴水解酶的情況下被 切斷，釋放出作為發揮藥效的活性主體的類固醇類，從而完成了本發明。即，本發明涉及以下的(1) (14)。(1) 一種類固醇類的高分子結合物，其特征在于，具有聚乙二醇結構部分和包括2 個以上的琥珀酸單酰胺結構單元的琥珀酸單酰胺結構部分的聚合物的羧基與類固醇類的 羥基形成酯鍵。(2)如上述(1)所述的類固醇類的高分子結合物，其中，具有聚乙二醇結構部分和 琥珀酸單酰胺結構部分的聚合物是嵌段共聚物。(3)如上述(1)或(2)所述的類固醇類的高分子結合物，其中，琥珀酸單酰胺結構 部分是聚天冬氨酸。(4)如上述⑴ ⑶中的任一項所述的類固醇類的高分子結合物，其中，所述高 分子結合物以通式(I)
<formula>formula see original document page 5</formula> 表示；式中，R1表示氫原子或(C1 C6)烷基，R2表示結合基團，R3表示氫原子或 (C1 C6)酰基，R4表示類固醇類的羥基的殘基，R5表示選自(C1 C30)烷氧基、(C7 C30)芳烷基氧基、(C1 C30)烷基氨基、二(C1 C30)烷基氨基、羧基被保護的氨基酸 和-N(R6)C0NH(R7)的基團，R6、R7可相同或不同，表示(C3 C6)環烷基或可被叔氨基取 代的(C1 C5)烷基，t表示5 11500的整數，d、e、f、g、h、i或j分別表示0 200的 整數，其中d+e為1 200的整數，且d+e+f+g+h+i+j為3 200的整數，聚天冬氨酸的各 構成單元的結合順序任意。(5)如上述⑷所述的類固醇類的高分子結合物，其中，R1為(C1 C6)烷基，R2 為(C2 C6)亞烷基，R3為(C1 C6)酰基，t為100 300的整數，d、e、f、g、h、i或j分 別為0 100的整數，其中d+e為1 100的整數，且d+e+f+g+h+i+j為6 100的整數。(6)如上述(5)所述的類固醇類的高分子結合物，其中，R1為(C1 C3)烷基，R2 為(C2 C4)亞烷基，R3為(C1 C3)酰基，t為100 300的整數，d、e、f、g、h、i或j分 別為0 90的整數，其中d+e為1 90的整數，且d+e+f+g+h+i+j為15 90的整數。(7)如上述(1) (6)中的任一項所述的類固醇類的高分子結合物，其中，類固醇 類是潑尼松龍、甲潑尼龍、地塞米松、倍他米松、氯倍他索、二氟拉松、二氟可龍、氟輕松、氫 化可的松、二氟潑尼酯、倍氯米松、曲安西龍或阿氯米松。(8) 一種類固醇類的高分子結合物，該高分子結合物通過下述方法獲得在有機 溶劑中，使用脫水縮合劑使具有聚乙二醇結構部分和包括2個以上的琥珀酸單酰胺結構單 元的琥珀酸單酰胺結構部分的聚合物的羧基與具有羥基的類固醇類的羥基形成酯鍵。(9) 一種上述(1) (7)中的任一項所述的類固醇類的高分子結合物的制造方法， 其特征在于，在有機溶劑中，使用脫水縮合劑使具有聚乙二醇結構部分和包括2個以上的 琥珀酸單酰胺結構單元的琥珀酸單酰胺結構部分的聚合物的羧基與具有羥基的類固醇類 的羥基形成酯鍵。(10) 一種醫藥組合物，其中，包含上述⑴ ⑶中的任一項所述的類固醇類的高 分子結合物作為有效成分。(11) 一種抗炎癥劑，其中，包含上述⑴ ⑶中的任一項所述的類固醇類的高分 子結合物作為有效成分。(12) 一種抗風濕病藥，其中，包含上述⑴ ⑶中的任一項所述的類固醇類的高 分子結合物作為有效成分。(13) 一種抗膠原病藥，其中，包含上述⑴ ⑶中的任一項所述的類固醇類的高 分子結合物作為有效成分。(14) 一種抗變應性疾病藥，其中，包含上述(1) (8)中的任一項所述的類固醇類 的高分子結合物作為有效成分。本發明的類固醇類的高分子結合物可以將類固醇類僅遞送至所需部位，在不依賴 機體的水解酶的情況下在機體中釋放類固醇類，不受個體差異的影響，能夠期待基于類固 醇類的有效的治療效果。實施發明的最佳方式本發明的類固醇類的高分子結合物的特征在于，具有聚乙二醇結構部分和包括2 個以上的琥珀酸單酰胺結構單元的琥珀酸單酰胺結構部分的聚合物的羧基與類固醇類的 羥基形成酯鍵。本發明中，琥珀酸單酰胺結構部分是指-HNC0-C-C-C02H的結構，可以例舉例如琥珀酸單酰胺(-HNCO-CH2-CH2-CO2H)、天冬氨酸的2個羧酸中的1個被酰胺化的結構 (-HNC0-CH (-NH-) -CH2-C02H 或-HNC0_CH2_CH (-NH-) -C02H)等。這些琥珀酸單酰胺結構部分 例如可以像聚天冬氨酸這樣構成聚合物的主鏈，或者可以是與由葡聚糖等多元醇、聚賴氨 酸等多元胺、聚天冬氨酸以外的多元羧酸(例如聚乳酸等)形成的主鏈聚合物的官能團結 合的結構部分。作為具有聚乙二醇結構部分和包括2個以上的琥珀酸單酰胺結構單元的琥珀酸 單酰胺結構部分的聚合物，可以例舉聚乙二醇結構部分和琥珀酸單酰胺結構部分自主鏈聚 合物呈梳狀排列的接枝型聚合物、具有聚乙二醇結構部分和琥珀酸單酰胺結構部分的聚合 物串聯結合的嵌段型聚合物(嵌段共聚物)等。琥珀酸單酰胺結構部分為聚天冬氨酸的情況下，接枝型聚合物還包括聚乙二醇結 構部分部分結合于聚天冬氨酸的主鏈的聚合物等，嵌段型聚合物還包括聚乙二醇結構部分 的末端結合有聚天冬氨酸的末端的聚合物等。作為構成本發明的類固醇類的高分子結合物的聚合物中的聚乙二醇結構部分，可 以例舉兩末端或一末端經修飾的聚乙二醇，兩末端經修飾的情況下，該修飾基團可以相同 或不同。作為該修飾基團，可以例舉可具有取代基的(C1 C6)烷基等。作為可具有取代基 的(C1 C6)烷基的烷基，可以例舉下文中作為通式⑴的R1記載的烷基，較好是(C1 C4)烷基，例如甲基、乙基、正丙基、正丁基等。作為可具有取代基的(C1 C6)烷基的取代 基，可以例舉例如氨基、甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基等。作為聚乙二醇結構部分的分子量，為300 500000左右，較好是500 100000左 右，更好是1000 50000左右。本發明中的具有聚乙二醇結構部分和琥珀酸單酰胺結構部分的聚合物的分子量 為500 600000左右，較好是600 110000左右，更好是800 80000左右。還有，本發明中的分子量是指通過GPC法測得的重均分子量。本發明的類固醇類的高分子結合物中，與具有聚乙二醇結構部分和2個以上的琥 珀酸單酰胺結構部分的聚合物結合的類固醇類的結合量為總羧基數的1 100%，較好是 1 90%，更好是2 60%。本發明中的類固醇類只要是具有醇羥基的類固醇類即可，沒有特別限定，可以例 舉例如以下述式(II)表示的潑尼松龍、以下述式(III)表示的甲潑尼龍、以下述式(IV)表 示的地塞米松、以下述式(V)表示的倍他米松、以下述式(VI)表示的氯倍他索、以下述式 (VII)表示的二氟拉松、以下述式(VIII)表示的二氟可龍、以下述式(IX)表示的氟輕松、 以下述式(X)表示的氫化可的松、以下述式(XI)表示的二氟潑尼酯的脫酰基化物、以下述 式(XII)表示的倍氯米松、以下述式(XIII)表示的曲安西龍、以下述式(XIV)表示的阿氯 米松等。作為類固醇類的羥基，可以優選例舉例如以下述式(II)表示的潑尼松龍等的伯羥 基或以下述式(VI)表示的氯倍他索等的仲羥基，但并不局限于這些取代位置。
7<formula>formula see original document page 8</formula>(III )<formula>formula see original document page 9</formula><formula>formula see original document page 10</formula><formula>formula see original document page 11</formula><formula>formula see original document page 12</formula>上述類固醇類或其衍生物作為抗變應性劑、抗炎癥劑、自體免疫疾病治療劑、抗腫 瘤劑等在市場上銷售。本發明中，作為包括2個以上的琥珀酸單酰胺結構單元的琥珀酸單酰胺結構部 分，較好是聚天冬氨酸。作為本發明的類固醇類的高分子結合物，可以例舉以上述通式(I)表示的化合 物；式中，Rl表示氫原子或(Cl C6)烷基，R2表示結合基團，R3表示氫原子或(Cl C6) 酰基，R4表示類固醇類的羥基的殘基，R5表示選自(Cl C30)烷氧基、(C7 C30)芳烷 基氧基、(Cl C30)烷基氨基、二(Cl C30)烷基氨基、羧基被保護的氨基酸和_N(R6) CONH(R7)的基團，R6、R7可相同或不同，表示(C3 C6)環烷基或可被叔氨基取代的(Cl C5)烷基，t表示5 11500的整數，d、e、f、g、h、i或j分別表示0 200的整數，其中d+e 為1 200的整數，且d+e+f+g+h+i+j為3 200的整數。作為通式(I)的Rl中的(Cl C6)烷基，可以例舉直鏈或支鏈的(Cl C6)烷基， 可以例舉例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基等，較好是直鏈或支鏈的(Cl C4)烷基，特別好是直鏈或支鏈的(Cl C3)烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基，最好是 甲基。作為通式⑴的以R2表示的結合基團，沒有特別限定，可以例舉(C2 C6)亞烷 基，較好是(C2 C4)亞烷基，可以例舉例如亞乙基、1，3-亞丙基、1，4-亞丁基等，特別好是 1,3-亞丙基。作為通式(I)的R3中的(Cl C6)酰基，沒有特別限定，可以例舉例如甲酰基、乙 酰基、丙酰基、新戊酰基等，較好是(Cl C3)酰基，特別好是乙酰基。
作為通式(I)的R4的類固醇類的羥基的殘基中，類固醇類可以例舉上述的類固醇類。通式⑴的R5表示選自(Cl C30)烷氧基、(C7 C30)芳烷基氧基、(Cl C30) 烷基氨基、二(Cl C30)烷基氨基、羧基被保護的氨基酸和-N(R6)C0NH(R7)的基團，R6、R7 可相同或不同，是(C3 C6)環烷基或可被叔氨基取代的(Cl C5)烷基。通式(I)的R5 在一分子的聚合物中可以相同或不同，而類固醇類的高分子結合物所用的聚合物可以是單 一物質或混合物。R5的取代基根據需要引入即可，可以藉此調節類固醇類的高分子結合物的物性， 例如可以自由地控制類固醇類的釋放速度。作為該(Cl C30)烷氧基，可以例舉直鏈或支鏈的(Cl C30)烷氧基，較好是直 鏈或支鏈的(Cl C10)烷氧基，可以例舉例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧 基、叔丁氧基等；作為(C7 C30)芳烷基氧基，可以例舉直鏈或支鏈的(C7 C30)芳烷基 氧基，較好是直鏈或支鏈的(C7 C12)芳烷基氧基，可以例舉例如4-苯基丁氧基等。作為該(Cl C30)烷基氨基或二(Cl C30)烷基氨基，可以例舉直鏈或支鏈的 (Cl C30)烷基氨基或二(Cl C30)烷基氨基，較好是直鏈或支鏈的(Cl C20)烷基氨 基或二(Cl C20)烷基氨基，可以例舉例如甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、異丙基氨基、 正丁基氨基、叔丁基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、二丁基氨基等。作為該羧基被保護的氨基酸，可以例舉通常的肽合成中所用的羧基被保護的氨基 酸，可以例舉例如苯丙氨酸芐酯等。作為通式(I)的R5中的_N(R6)C0NH(R7)，沒有特別限定，可以例舉例如環己基氨 基羰基環己基氨基、異丙基氨基羰基異丙基氨基等；R6、R7可相同或不同，是(C3 C6)環 烷基或可被叔氨基取代的(Cl C5)烷基。本發明的以上述通式(I)表示的類固醇類的高分子結合物中的琥珀酸單酰胺結 構部分、即聚天冬氨酸有α-氨基酸型、β-氨基酸型等，還有環化的基團等構成單元。此 夕卜，各構成單元上結合有各取代基，但對包括這些取代基的構成單元的結合順序沒有限定， 可以是嵌段型或無規型。以上述通式(I)表示的類固醇類的高分子結合物中的天冬氨酸總數以 d+e+f+g+h+i+j表示，為3 200個左右，較好是6 100個左右，特別好是15 90個左右ο結合有類固醇類的天冬氨酸數(d+e)相對于天冬氨酸總數(d+e+f+g+h+i+j)的比 例為1 100%，較好是3 90%，更好是4 60%。此外，作為天冬氨酸數(d+e)，為1 200個左右，較好是1 100個左右，特別好是1 90個左右。α -氨基酸型(d+f+h)相對于天冬氨酸總數(d+e+f+g+h+i+j)的比例為10 100%，較好是20 100%。該比例例如可以通過選擇使用保護基制成的聚天冬氨酸的保護 基的脫保護條件等來適當改變。作為上述通式(I)的t，為5 11500左右的整數，較好是8 2300左右的整數， 更好是100 300左右的整數。以上述通式(I)表示的類固醇類的高分子結合物可以在水中形成以聚乙二醇結 構部分為外殼的膠束。
本發明的類固醇類的高分子結合物可以通過下述方法獲得在有機溶劑中，使用脫水縮合劑使具有聚乙二醇結構部分和包括2個以上的琥珀酸單酰胺結構單元的琥珀酸 單酰胺結構部分的聚合物的羧基與類固醇類的羥基形成酯鍵；本制造方法也包含在本發明 中。即，例如下述制造方法使基于日本專利特開平6-206815號公報中記載的方法制成的 聚乙二醇結構部分-聚天冬氨酸的嵌段共聚物與根據需要采用的保護了除要反應的基團 以外的官能團的類固醇類，在溶解兩者的有機溶劑中，較好是在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、 1，3_ 二甲基-2-咪唑啉酮(DMI)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)等非質子性極性溶劑中，于0 180°C、較好是5 50°C，進行采用二環己基碳二亞胺(DCC)、二異丙基碳二亞胺(DIPC)、 1-乙基-3- (3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(wSC)、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1，2- 二 羥基喹啉酮(EEDQ)等脫水縮合劑的反應。此外，縮合反應時可以使用N，N-二甲基氨基吡 啶(DMAP)等反應助劑。縮合反應后，根據需要進行脫保護，通過通常的分離純化等操作制 成類固醇類的高分子結合物。此外，R5為_N(R6)C0NH(R7)基團的類固醇類的高分子結合物也可以通過將上述 的碳二亞胺類用作縮合劑的反應來獲得；R6、R7可相同或不同，是(C3 C6)環烷基或可被 叔氨基取代的(Cl C5)烷基。作為在通式(I)的化合物的R5中引入(Cl C30)烷氧基、(C7 C30)芳烷基氧 基、(Cl C30)烷基氨基、二(Cl C30)烷基氨基或羧基被保護的氨基酸的方法，有通過 如上所述的方法將聚合物的羧基活化后使需添加量的對應的醇、對應的胺或羧基被保護的 氨基酸等在堿性條件下與之反應的方法，還可以采用使對應的醇、對應的胺或羧基被保護 的氨基酸等活化后使之與聚合物反應的方法等。在純化聚合物后，可通過同樣的反應使聚 合物中的未反應的羧基再次活化，可以使類固醇類的羥基與之縮合，或者也可以反復使不 同的醇、胺等與之反應，合成R5的各種取代基的混合體，再使類固醇類的羥基與之縮合。此 夕卜，可以在使類固醇類縮合后引入(Cl C30)烷氧基、(C7 C30)芳烷基氧基、(Cl C30) 烷基氨基、二(Cl C30)烷基氨基或羧基被保護的氨基酸等。但是，本發明的類固醇類的高分子結合物的制造方法并不局限于上述的方法。本發明的類固醇類的高分子結合物在機體中的條件下游離類固醇類并顯示出類 固醇類的藥理作用而成為藥物，可以用作抗炎癥劑、抗風濕病藥，抗膠原病藥、抗變應性疾 病藥或抗癌劑等。本發明的類固醇類的高分子結合物能夠以注射劑、片劑、散劑等通常采 用的劑型使用。可以使用制劑化時通常采用的藥學上允許的載體，例如粘結劑、潤滑劑、 崩解劑、溶劑、賦形劑、增溶劑、分散劑、穩定劑、懸浮劑、保存劑、止痛劑、色素、香料等。較 好是制成注射劑使用，該情況下，作為載體，采用例如水、生理鹽水、5%葡萄糖或甘露糖醇 溶液、水溶性有機溶劑(例如甘油、乙醇、二甲亞砜、N-甲基吡咯烷酮、聚乙二醇、克列莫佛 (cremophor)等或它們的混合液)或水與該水溶性有機溶劑的混合液等。本發明的類固醇類的高分子結合物的給藥量當然可以根據患者的性別、年齡、生 理狀態、病情等改變，非口服時，通常成人每天以活性成分計給藥0.01 500mg/m2，較好是 0. 1 250mg/m2。通過注射給藥時，可以通過靜脈、動脈、患部(炎癥部)等的注射進行。
實施例以下，以潑尼松龍或地塞米松為例通過實施例對本發明進行更具體的說明，但本發明并不局限于這些實施例。采用HPLC(高效液相色譜法)的分析使用以下的條件柱0DS(inertsil0DS-3 4. 6X 150mm)；檢測UV254nm ；洗脫A)0. 磷酸水溶液，B)乙腈/1%磷酸水溶液(9/1)；B%=30%。實施例1化合物1 (分子量12000的由甲氧基聚乙二醇部分和聚合數為33的聚天冬氨酸部分形成的嵌段共聚物與潑尼松龍的結合物通式(I)的Rl = Me (甲基)，R2 = 1，3-亞丙基，R3 = Ac(乙酰基)，R4 =潑尼松龍殘基，R5 =異丙基氨基羰基異丙基氨基， d+e+f+g+h+i+j = 33，t = 273)的合成將按照日本專利特開平6-206815號公報中記載的制造方法制成的單末端甲氧基 聚乙二醇-聚天冬氨酸共聚物N-乙酰化物(分子量12000的由甲氧基聚乙二醇部分和聚合 數為33的聚天冬氨酸部分形成的嵌段共聚物，通式(I)的Rl = Me (甲基)，R2 = 1，3-亞丙 基，R3 = Ac (乙酰基)，d = e = f = g = j = 0，265mg)和市售的潑尼松龍(東京化成工業 株式會社(東京化成(株))制，IOOmg)溶解于DMF(3. 7ml)，加入DMAP(7mg)、DIPC(0. 2ml)， 在15°C攪拌40小時。向反應液中加入乙醇(5. 6ml)、乙酸乙酯(5. 6ml)和異丙醚(45ml)， 在室溫下攪拌3小時后濾取沉淀析出物，用乙醇/異丙醚(l/4(v/v)，10ml)清洗。將所得的 沉淀析出物溶解于乙腈/水(1/1 (ν/ν)，20ml)后，通過離子交換樹脂(陶氏化學公司(夕· 々夕笑力義社)制DOffEX 50 (H+)，3ml)，用乙腈/水(1/1 (ν/ν)，6ml)洗脫。向所得的洗脫 部分中加入水(20ml)后減壓下餾去乙腈，然后進行冷凍干燥，從而獲得化合物l(340mg)。根據采用HPLC(高效液相色譜法)的反應液中的未反應潑尼松龍量的計量，化合 物1中的潑尼松龍含量為25. 4% (w/w)，d+e相對于d+e+f+g+h+i+j的比例為44%。分離 得到的化合物1中未檢出游離的潑尼松龍。通過本方法，可以附加作為R5的異丙基氨基羰基異丙基氨基，其存在比由將化 合物1溶解于氘氧化鈉/重水/氘代乙腈而得的溶液的1H-NMIU氫核磁共振譜)求得， 化合物1中的異丙基氨基羰基異丙基氨基在聚天冬氨酸中所占的比例、即f+g相對于 d+e+f+g+h+i+j的比例為9%。其他的天冬氨酸為游離羧酸(相當于h+i)或環狀結構(相 當于j)。實施例2化合物2 (分子量12000的由甲氧基聚乙二醇部分和聚合數為35的聚 天冬氨酸部分形成的嵌段共聚物與地塞米松的結合物通式(I)的Rl = Me (甲基)，R2 = 1,3-亞丙基，R3 = Ac (乙酰基)，R4 =地塞米松殘基，R5 =異丙基氨基羰基異丙基氨基， d+e+f+g+h+i+j = 35，t = 273)的合成將按照日本專利特開平6-206815號公報中記載的制造方法制成的單末端甲 氧基聚乙二醇-聚天冬氨酸共聚物N-乙酰化物(天冬氨酸的聚合數為35，IOOmg)和 市售的地塞米松(東京化成工業株式會社制，42mg)溶解于DMF(2.0ml)，加入DMAP的 DMF 溶液(0. 773mmol/ml 溶液，27. 7 μ 1)、DIPC (67. 0 μ 1)，在 15 °C 攪拌 43 小時，再加入 DIPC(17.0y 1)并在30°C攪拌4小時。向反應液中加入乙酸乙酯(4. Oml)和異丙醚(16ml)， 在室溫下攪拌3小時后濾取沉淀析出物，用乙酸乙酯/異丙醚(1/4(ν/ν)，IOml)清洗。將 所得的沉淀析出物溶解于乙腈/水(1/1 (ν/ν)，12ml)后，通過離子交換樹脂(陶氏化學公 司制DOffEX 50 (H+)，IOml)，用乙腈/水(1/1 (ν/ν)，20ml)洗脫。減壓下餾去所得的洗脫部分的乙腈，然后進行冷凍干燥，從而獲得化合物2(108mg)。采集化合物2，通過進行堿處理而切下結合地塞米松，根據HPLC (高效液相色譜 法)，化合物2中的地塞米松含量為20. 7 % (w/w)，d+e相對于d+e+f+g+h+i+j的比例為 31%。分離得到的化合物2中，游離的地塞米松為0.3% (w/w) 0
實施例3化合物3 (在分子量12000的由甲氧基聚乙二醇部分和聚合數為35的聚 天冬氨酸部分形成的嵌段共聚物上進一步結合苯丙氨酸芐酯而得的嵌段共聚物與地塞米 松的結合物通式(I)的Rl = Me (甲基)，R2 = 1，3-亞丙基，R3 = Ac (乙酰基)，R4 =地 塞米松殘基，R5 =苯丙氨酸芐酯和異丙基氨基羰基異丙基氨基，d+e+f+g+h+i+j = 35，t = 273)的合成將按照日本專利特開平6-206815號公報中記載的制造方法制成的單末端甲氧基 聚乙二醇-聚天冬氨酸共聚物N-乙酰化物(天冬氨酸的聚合數為35，IOOmg)和市售的 地塞米松(東京化成工業株式會社制，42mg)溶解于DMF(2. 0ml)，加入DMAP的DMF溶液 (0. 773mmol/ml溶液，27. 7 μ 1)、DIPC(33. 5 μ 1)，在15°C攪拌20小時，再加入苯丙氨酸芐 酯的 DMF 溶液(0. 612mmol/ml 溶液，140. 0 μ 1)和 DIPC(33. 5 μ 1)并在 30°C攪拌 23 小時。 然后，再加入DIPC (17.0 μ 1)并在30°C攪拌4小時。向反應液中加入乙酸乙酯(4.0ml)和 異丙醚(16ml)，在室溫下攪拌3小時后濾取沉淀析出物，用乙酸乙酯/異丙醚(1/4 (ν/ν)， IOml)清洗。將所得的沉淀析出物溶解于乙腈/水(1/1 (ν/ν)，12ml)后，通過離子交換樹 月旨(陶氏化學公司制DOWEX 50 (H+)，10ml)，用乙腈/水(1/1 (ν/ν)，20ml)洗脫。減壓下餾 去所得的洗脫部分的乙腈，然后進行冷凍干燥，從而獲得化合物3(112mg)。采集化合物3，通過進行堿處理而切下結合地塞米松，根據HPLC (高效液相色譜 法)，化合物3中的地塞米松含量為20. 5% (w/w) 0分離得到的化合物3中，游離的地塞米 松為 0. 2% (w/w)。比較例1比較化合物1 (分子量12000的由甲氧基聚乙二醇部分和聚合數為23的 聚谷氨酸部分形成的嵌段共聚物與潑尼松龍的結合物)的合成將按照日本專利特開平5-955號公報中記載的方法制成的單末端甲氧基聚乙 二醇_聚谷氨酸嵌段共聚物N-乙酰化物(分子量12000的由甲氧基聚乙二醇部分和聚 合數為23的聚谷氨酸部分形成的嵌段共聚物，128mg)和市售的潑尼松龍(50mg)溶解于 DMF (1. 3ml)，加入DMAP (2. 4mg) ,DIPC (0. 06ml)，在25°C攪拌20小時。向反應液中加入乙醇 (2ml)、乙酸乙酯(2ml)和異丙醚(12ml)，在室溫下攪拌30分鐘后濾取沉淀析出物，用乙醇 /異丙醚(1/4 (ν/ν)，2ml)清洗。將所得的沉淀析出物溶解于乙腈/水(1/1 (ν/ν)，7ml)后， 通過離子交換樹脂(陶氏化學公司制DOWEX 50 (H+)，lml)，用乙腈/水(1/1 (ν/ν), 2ml)洗 脫。向所得的洗脫部分中加入水(IOml)后減壓下餾去乙腈，然后進行冷凍干燥，從而獲得 比較化合物1 (160mg)。根據采用HPLC的反應液中的未反應潑尼松龍量的計量，比較化合物1中的潑尼松 龍含量為25. 8% (w/w)。比較化合物1中，未檢出游離的潑尼松龍。試驗例不存在酶時的藥劑釋放將化合物1或比較化合物1、化合物2或化合物3以lmg/ml的聚合物濃度溶解于 PBS (磷酸緩沖生理鹽水，pH7. 1)，在37°C孵育。通過HPLC將從化合物1、化合物2、化合物 3或比較化合物1釋放的潑尼松龍或地塞米松分離，用標準曲線定量。定量值與根據高分子結合物的藥劑含量求得的藥劑總量的比值示于
圖1、圖2。如圖1所示，可知即使沒有水解酶，本發明的高分子結合物(化合物1)也在24小時內釋放出98%左右的潑尼松龍。另一方面，不具有琥珀酸單酰胺結構部分的比較化合物 1經過24小時也幾乎未釋放潑尼松龍。如圖2所示，可知即使沒有水解酶，本發明的高分子結合物(化合物2和化合物3) 也可在24小時內釋放出60 90%左右的地塞米松。此外，顯示通過結合苯丙氨酸芐酯，可 以控制地塞米松的釋放速度。該結果顯示，本發明的類固醇類的高分子結合物在中性條件下即使不存在酶也具 有良好的藥劑釋放性能，是在血液或體液中等機體內條件下也可釋放類固醇類的類固醇類 的高分子結合物。另外，顯示通過適當結合苯丙氨酸芐酯等取代基，還可以自由地控制其釋 放速度。附圖的簡單說明圖1表示本發明的化合物1 (聚天冬氨酸結構部分結合潑尼松龍而得的高分子結 合物)和比較化合物1(聚谷氨酸結構部分結合潑尼松龍而得的高分子結合物)在PBS溶液 (pH7. 1，37°C)中的潑尼松龍的釋放量相對于潑尼松龍的結合總量的比例。圖1中，-·_表 示本發明的化合物1的釋放量的比例，-〇_表示比較化合物1的釋放量的比例。圖2表示本發明的化合物2(聚天冬氨酸結構部分結合地塞米松而得的高分子結 合物)和化合物3 (聚天冬氨酸結構部分結合苯丙氨酸芐酯和地塞米松而得的高分子結合 物)在PBS溶液(pH7. 1，37°C)中的地塞米松的釋放量相對于地塞米松的結合總量的比例。 圖2中，-▲-表示本發明的化合物2的釋放量的比例，-■-表示化合物3的釋放量的比 例。
權利要求
一種類固醇類的高分子結合物，其特征在于，具有聚乙二醇結構部分和包括2個以上的琥珀酸單酰胺結構單元的琥珀酸單酰胺結構部分的聚合物的羧基與類固醇類的羥基形成酯鍵。
2.如權利要求1所述的類固醇類的高分子結合物，其特征在于，具有聚乙二醇結構部 分和琥珀酸單酰胺結構部分的聚合物是嵌段共聚物。
3.如權利要求1或2所述的類固醇類的高分子結合物，其特征在于，琥珀酸單酰胺結構 部分是聚天冬氨酸。
4.如權利要求1 3中的任一項所述的類固醇類的高分子結合物，其特征在于，所述高 分子結合物以通式(I)<formula>formula see original document page 2</formula>表示；式中，R1表示氫原子或(C1 C6)烷基，R2表示結合基團，R3表示氫原子或 (C1 C6)酰基，R4表示類固醇類的羥基的殘基，R5表示選自(C1 C30)烷氧基、(C7 C30)芳烷基氧基、(C1 C30)烷基氨基、二(C1 C30)烷基氨基、羧基被保護的氨基酸 和-N(R6)C0NH(R7)的基團，R6、R7可相同或不同，表示(C3 C6)環烷基或可被叔氨基取 代的(C1 C5)烷基，t表示5 11500的整數，d、e、f、g、h、i或j分別表示0 200的 整數，其中d+e為1 200的整數，且d+e+f+g+h+i+j為3 200的整數，聚天冬氨酸的各 構成單元的結合順序任意。
5.如權利要求4所述的類固醇類的高分子結合物，其特征在于，R1為(C1 C6)烷基， R2為(C2 C6)亞烷基，R3為(C1 C6)酰基，t為100 300的整數，d、e、f、g、h、i或 j分別為0 100的整數，其中d+e為1 100的整數，且d+e+f+g+h+i+j為6 100的整 數。
6.如權利要求5所述的類固醇類的高分子結合物，其特征在于，R1為(C1 C3)烷基， R2為(C2 C4)亞烷基，R3為(C1 C3)酰基，t為100 300的整數，d、e、f、g、h、i或j 分別為0 90的整數，其中d+e為1 90的整數，且d+e+f+g+h+i+j為15 90的整數。
7.如權利要求1 6中的任一項所述的類固醇類的高分子結合物，其特征在于，類固醇 類是潑尼松龍、甲潑尼龍、地塞米松、倍他米松、氯倍他索、二氟拉松、二氟可龍、氟輕松、氫 化可的松、二氟潑尼酯、倍氯米松、曲安西龍或阿氯米松。
8.一種類固醇類的高分子結合物，其特征在于，通過下述方法獲得在有機溶劑中，使 用脫水縮合劑使具有聚乙二醇結構部分和包括2個以上的琥珀酸單酰胺結構單元的琥珀 酸單酰胺結構部分的聚合物的羧基與具有羥基的類固醇類的羥基形成酯鍵。
9.一種權利要求1 7中的任一項所述的類固醇類的高分子結合物的制造方法，其特征在于，在有機溶劑中，使用脫水縮合劑使具有聚乙二醇結構部分和包括2個以上的琥珀 酸單酰胺結構單元的琥珀酸單酰胺結構部分的聚合物的羧基與具有羥基的類固醇類的羥 基形成酯鍵。
10.一種醫藥組合物，其特征在于，包含權利要求1 8中的任一項所述的類固醇類的 高分子結合物作為有效成分。
11.一種抗炎癥劑，其特征在于，包含權利要求1 8中的任一項所述的類固醇類的高 分子結合物作為有效成分。
12.一種抗風濕病藥，其特征在于，包含權利要求1 8中的任一項所述的類固醇類的 高分子結合物作為有效成分。
13.—種抗膠原病藥，其特征在于，包含權利要求1 8中的任一項所述的類固醇類的 高分子結合物作為有效成分。
14.一種抗變應性疾病藥，其特征在于，包含權利要求1 8中的任一項所述的類固醇 類的高分子結合物作為有效成分。
全文摘要
由于機體的酶不僅存在種間差異，即使是同一種中也存在較大的個體差異，因此需要可在不依賴機體的酶的情況下釋放藥劑且可期待有效的治療效果的新的類固醇類藥物制劑。本發明提供一種類固醇類的高分子結合物，其特征在于，具有聚乙二醇結構部分和包括2個以上的琥珀酸單酰胺結構單元的琥珀酸單酰胺結構部分的聚合物的羧基與類固醇類的羥基形成酯鍵。
文檔編號A61P43/00GK101808651SQ20088010940
公開日2010年8月18日 申請日期2008年9月26日 優先權日2007年9月28日
發明者北川正行, 村田俊隆 申請人:日本化藥株式會社